Determinao de Protenas Metodologia: Determinao de protenas pela tcnica de Kjeldahl, por meio de digesto, destilao e titulao da matria orgnica.

Introduo O mtodo laboratorial proposto por Kjeldahl em 1883 considerado mtodo de referncia para a determinao do teor de nitrognio de origem orgnica. realizado por meio de tcnica simples e confivel, com rotinas bem estabelecidas e com poucas alteraes em sua realizao (Vogel, 1992) Utilizado como sendo o padro oficial em todo o mundo para a determinao de nitrognio em todos os tipos de amostras de alimentos tambm empregado no ambiente de anlise e na indstria agrcola para a determinao de nitratos e amnio. A tcnica de Kjeldahl, ou teste de Kjeldahl, tem como objetivo a determinao de protenas, assim como o nitrognio. O metodo se baseia na decomposio da matria orgnica. Para a determinao do nitrognio, utilizase a tcnica de arraste de vapor seguida por titulao com cido. A matria organica passa por decomposio da matria orgnica atravs da digesto da amostra a 400C com cido sulfrico concentrado, em presena de sulfato de cobre como catalisador que acelera a oxidao da matria orgnica. Materiais Amostra: Protena da soja
Vidrarias e equipamentos:

Balo de Kjedahl; Frascos de 500 ml ou 1 litro de boca estreita, com tampa plstica Frascos erlenmeyer de 250 ml
Reagentes

Buretas com suportes Pipeta de 20 ou de 25 ml e pra (para H 2 SO 4) Pipeta volumtrica de 25 ml

Balo volumtrico de 100 ml Bquer de 250 ml.

Digestores

Catalisador: 96% K 2 SO 4 , 4% CuSo 4 . 5 H 2 O bem modo e misturado Ftalato de cido de potssio - padro slido Fenolftaleina (indicador)

cido sulfrico concentrado - baixo teor de nitrognio NaOH, 0,1N (aproximadamente) HCl concentrado p. a.

Procedimentos 1. Ocorre incinerao da amostra por via mida - digesto 2. Adio de hidrxido de sdio para a liberao de amnia 3. Titulao

Mtodo de digesto No balo de Kjedahl colocar a amostra previamente pesada, 10 gramas do catalisador e 20 ml de cido sulfrico concentrado. Ao colocar os materiais no balo, deve-se ter cuidado para que o contedo caia diretamente no fundo, sem tocar as paredes do balo. Passar a parte superior pelo buraco do tubo (para a exausto dos gases) do digestor e colocar o balo no aquecedor e ligar.

No incio do processo necessrio ter cuidado para que no haja mais formao de espuma e o contedo esteja lquido. Caso ocorra a carbonizao de resduos na parede do balo, agitar e retirar estes resduos com o prprio material. Digerir at o lquido ficar translcido, dando um tempo total de 1 ou 3 horas ou mais. Aps o trmino da digesto, desligar o aquecedor e deixar esfriar a temperatura ambiente.

Mtodo de Destilao Realizar a diluio da mistura obtida aps a digesto e passar para balo volumtrico de 100 ml completando at o volume de 100 ml. Misturar bem. Colocar aproximadamente 10 ml de cido brico e uma gota de vermelho de metila e 3 gotas de verde de bromocresol. Agitar para dissolver num frasco de Erlenmeyer de 250 ml. Colocar este frasco em baixo do condensador com a extremidade final deste completamente mergulhada na soluo. Verificar se a gua da fonte de vapor (V) est em ebulio e a gua de refrigerao est ligada. Abrir a vlvula de sada (V) para retirar alguma poro de gua que possa haver. Transferir uma pequena quantidade de 10 ml para o recipiente da reao atravs do funil, lavar o funil quatro vezes com pouca gua. Usando a piceta. Cuidado para no deixar ocorrer refluxo da soluo de cido brico, segurando o frasco Erlenmeyer. Adicionar vagarosamente

aproximadamente 15 ml de NaOH 40% para alcalinizar a amostra, que deve ficar escura. Destilar at obter 100 ml.

Mtodo de Titulao Realizar a titulao do produto da destilao com soluo padronizada de HCl 0,02 N. Com auxlio de bureta e erlenmeyer. Verificar o volume gasto de HCl para realizar o clculo para determinao da porcentagem de protena presente na amostra.