LIPOSSOMOS E NANOPARTCULAS: VECULOS NANOMTRICOS PARA O TRANSPORTE DE DROGAS/FRMACOS NO CANCER.

Sistemas de transporte em nanoescala de drogas/frmacos utilizando lipossomos nanopartculas esto surgindo como tecnologias para o uso racional administrao de frmacos quimioteraputicos no tratamento do cancer. A sua utilizao oferece melhores propriedades farmacocinticas, liberao controlada e sustentada de drogas/frmacos e, o mais importante, rdeduz a toxicidade sistmica. A disonibilidade comercial de DoxilW lipossomal e AbraxaneW baseado albuminananopartculas chamou a ateno para esta rea inovadora e emocionante. Recentes avanos em tecnologia de lipossomos oferecem um melhor tratamento de multi-cnceres resistentes e de menor cardiotoxicidade. Nanopartculas oferecem maior preciso no direcionamento quimioterpico de cncer de prstata e novos caminhos para o tratamento do cncer de mama. Aqui ns revemos os atuais conhecimentos sobre as duas tecnologias e seu potencial aplicaes para o tratamento do cncer.

INTRODUO: A aplicao da inovadora nanotecnologia na medicina -nanomedicina tem o potencial de beneficiar significativamente a prtica clnica, oferecendo solues para muitas das atuais limitaes no diagnstico, tratamento e gesto de doenas humanas. Os diversos ramos da nanomedicina incluem regenerao de tecidos [1], a entrega da droga [2] e imagiologia [3]. Esta anlise se foca em dois mtodos nanotecnolgicos de entrega da droga, lipossomos e drogas conjugadas de nanopartculas. Os lipossomos so vesculas esfricas fechadas consistindo de uma bicamada lipdica que encapsula uma fase aquosa em que drogas podem ser armazenadas. O dimetro dos lipossomos varia de 400 nm a 2,5 mm. Nanopartculas (NPS), que so partculas que variam em tamanho desde 1 a 100 nm, exibem nicas propriedades qumicas e fsica que podem ser exploradas para o transporte de drogas/frmacos por conjugao com drogas/frmacos. Ambos estes sistemas de entrega de drogas em nanoescala emergentes

podem ser usados para melhorar os regimes de tratamento atuais (Box 1). Alta toxicidade de drogas uma barreira para o tratamento porque os efeitos colaterais limitam a dose da droga/frmaco que pode ser administrada. Isso melhor exemplificado por medicamentos contra o cncer citotxicos. Embora muito eficazes in vitro, quando em utilizao clnica em seres humanos as drogas agem indiscriminadamente em ambos os tecidos cancerosos e saudveis. Os efeitos secundrios podem ser graves e desagradveis e variam de nuseas e perda de cabelo at neuropatias, neutropenia e insuficincia renal. Portanto, droga limites no especificidade eficcia [4]. Caixa 2 ltimos detalhes drogas e doenas em investigao para o uso de administrao de frmaco em nanoescala. Esta reviso descreve a evoluo recente do uso de lipossomas e NPs no campo da entrega de drogas para o tratamento do cncer. A compreenso dessas novas tecnologias necessrio para o avano da quimioterapia com maior eficcia e menor toxicidade.

AS VANTAGENS DOS SISTEMAS DE DISTRIBUIO DE DROGAS EM NANOESCALA O sistema de entrega de droga em nanoescala ideal assegura que ocomplexo de droga-transportador conjugado ou ligado chegue e aga preferencialmente no destino selecionado. A Segmentao do complexo droga-nanotraspostador pode estar ativa, em que o complexo incorpora um ligando especfico para o receptor ou de epitopo o tecido alvo (Tabela 1). Na segmentao passiva, complexos se difundem e se acumulam em locais com excesso de vasamento microvascular, tais como tumores e tecidos inflamados, ja que o endotlio normal muito menos permevel. O Extravasamento posterior dos complexos ocorre tanto atravs de transcitose, em que macromolculas so internalizadas a partir do sangue em pontos de invaginao da membrana celular, ou paracelularmente, via difuso atravs das apertadas junes das clulas endoteliais. Particularmente no cncer, um desequilbrio nos fatores que regulam a angiognese, tais como sobre-expresso de factor de crescimento endotelial vascular (VEGF), resulta no aumento da permeabilidade vascular, e catica arquitetura do tumor nos vasos. Em combinao, estes efeitos causam melhorada permeao e reteno (EPR) [5], o que resulta em elevadas concentraes locais da droga.

Propriedades-chave de qualquer nanomaterial usado na entrega da droga so a sua biocompatibilidade e biodegradabilidade, de modo que o trasnportador descarregado degradado ou metabolizado em componentes atxicos e apurados atravs da circulao. Os materiais so apurados de acordo com o tamanho. As partculas pequenas (0-30 nm) so rapidamente eliminadas por excreo renal. Nanotrasportadores > 30 nm so apurados pelo sistema mononuclear de fagocitose (MPS), que consiste em macrfagos localizados no fgado (clulas de Kupffer) e do bao [6], que atuam como fagocitcitos catadores. A Liquidao tambm dependente do tamanho fenestral do endotlio [6]. Fenestrae so altamente variveis, de modo difcil determinar a eficcia e toxicidade dos nanofrmacos em indivduos diferentes porque a idade, o sexo e gentica influenciam a sua taxa de depurao [4]. Se os nanotrasportadores so tomados por macrfagos depende da opsonizao pelo sistema imune inato [7]. Opsoninas, molculas que se ligam a materiais estranhos e melhoram a fagocitose, incluem anticorpos IgG e IgA, o complemento sistema de cascata e lectina manose-binding [8]. Portanto, as propriedades de superfcie das nanopartculas podem afetar significativamente a taxa de depurao pelas MPS. Um mtodo til para fugir opsonizao de grandes trasnportadores estreitos foi desenvolvido na Universidade de Rutgers em 1960 [9]: em um processo denominado PEGylation, um polmero, poli (etileno-glicol) (PEG; [CH2CH2O] n), conjugado com o transportador de droga/frmaco. Em geral, a utilizao de complexos ligantes de dogras nanotrasportadoras melhora o ndice teraputico da droga de acordo com a eq. (1). A elevada selectividade e especificidade do complexo, aumenta a quantidade de droga entregue ao tecido alvo e diminui a quantidade em locais indesejados. Portanto, menos droga sistmica deve ser administrada para assegurar uma suficiente concentrao no local de ao e a mnimo dose eficaz tambm inferior. Alm disso, porque menos droga est presente em locais no desejados, o valor mximo no txico maior. O efeito geral uma diminuio drstica na toxicidade e efeitos colaterais adversos. [10] ndice teraputico = Dose no txica mxima Dose efetiva mnina

SISTEMAS EM NANOESCALA DE ENTREGA DE DROGAS LIPOSSOMAS

As bicamadas de lipossomos podem ser compostas por sintticos ou fosfolipdios naturais. As propriedades qumicas e fsica predominantes de um lipossomo so baseadas na rede propriedades dos fosfolipdios constituintes [11], incluindo permeabilidade, densidade de carga e impedimento estrico. A bicamada lipdica fecha em si mesma, devido s interaes entre as molculas de gua e os grupos hidrfobos de fosfato os fosfolipdios. Este processo de formao de lipossomos espontneo, porque os fosfolipidos anfiflicos se autoassociam em bicamadas. Carga de frmaco em lipossomas pode ser conseguida atravs da (i) formao de lipossomos num meio aquoso soluo saturada com droga solvel, (ii) a utilizao de compostos orgnicos os solventes e os mecanismos de troca de solvente, (iii) o uso de frmacos lipoflicos, e (iv) mtodos de gradiente de pH [12] (Figura 1). Lipossomos geralmente atingem o seu local de ao por extravasamento para o espao intersticial da corrente sangunea. Os lipossomas podem atingir tecidos especficos, tanto ativamente quanto em estratgias passivas dirigidas (Figura 2). Isto porque os lipossomos podem ser facilmente manipulados atravs da adio de molculas para a superfcie externa da bicamada lipdica. Porque lipossomos so da ordem de 400 nmn tamanho, eles so rapidamente apuradas pelo sistema de MPS. Reduzindo a opsonizao dos lipossomas por PEGylation, portanto, reduz alvio da MPS, o aumento da meia-vida de circulao. Opsonizao apresenta-se como um problema para o desenvolvimento de lipossomos teis terapeuticamente, em quase todas as pesquisas relatadas no literatura que envolve PEG-coated ou lipossomos PEGylation. As formulaes lipossmicas de drogas anticancer j foram aprovadas para uso humano. Doxil uma formulao lipossomal da droga de antraciclina doxorrubicina utilizada para tratar cncer em sarcoma de Kaposi relacionado com a SIDA e mieloma mltiplo [13]. Suas vantagens sobre a doxorrubicina livre so a maior eficcia e menor cardiotoxicidade. Estas vantagens so atribudas a segmentao passiva de tumores, devido ao vazamento vasculatur tumoral [14] e o efeito EPR, e para diminuir concentraes de doxorrubicina livre em locais do tecido saudvel. H evidncias de que Doxil lipossomal metabolizado pela clulas de leucemia atravs de um mecanismo diferente livre de doxorrubicina, o que pode explicar a eficcia melhorada e menor toxicidade. Alm disso, Doxil est sob julgamento clnico para o tratamento de cncer de mama. Um dos desenvolvimentos mais interessantes neste campo o potencial dos lipossomos para combater o problema crescente de resistncia a

mltiplas drogas (MDR) adquirido por cncer, o que reduz drasticamente a eficcia quimioteraputica. Proposto mecanismos subjacentes MDR ao nvel celular incluem: (i) aumento do metabolismo da droga devido ao aumento a expresso da enzima, especialmente da glutationa-S-transferase; (ii) transportadores de frmacos e protenas de efluxo de [15], e (iii) mutaes pontuais nas protenas que so teraputico ou frmaco alvos. Ogawara et ai. Recentemente, investigou o efeito de PEG doxorrubicina lipossomal (Doxil1) em um rato macho modelo de tumor inoculado com cncer de clon (C26) ou clulas resistentes a doxorrubicina (MDR) subclone, que overexpresses P-gp bombas de efluxo [16]. Os resultados mostraram doxorrubicina lipossomal que o PEG tinha efeitos anti-tumorais tanto em doxorrubicina-resistente quanto em no resistente a doxorrubicina C26 clulas. Com o aumento da incidncia de resistncia quimioterapia, a utilizao de lipossomos oferece um tratamento eficaz , sem a necessidade dispendiosa da descoberta de novas drogas quimioteraputicas porque as drogas atuais podem ser reformuladas. At o momento, nenhum estudo especfico in vivo comparou a eficcia dos lipossomos para outros sistemas de entrega de nanopartculas e, portanto, no podemos comentar sobre a relao de eficcia dos lipossomos. Os lipossomos so firmemente estabelecidos com o sucesso do DOXIL, e novas formulaes lipossomais de outras drogas anticancergenas que esto agora a ser intensamente exploradas para melhorar resultados da quimioterapia e reduzir a toxicidade. PN lipdicas slidas PN lipdicas slidas (NLS), tambm conhecidas como lipoesferas ou nanoesferas de lpidos slidas, so lpidos slidos da fisiolgica humana temperatura (37 8C) e tm um dimetro de 50-1000 nm. Elass podem ser formadas a partir de uma variedade de lpidos, incluindo mono-, di-e triglicridos, cidos gordos, ceras e suas combinaes. SLNs so produzidas substituindo o lpido lquido (leo) de uma emulso de leo em gua por um slido mtodos comercialmente viveis de lipdios e muitos esto disponveis para a produo em larga escala. SLNs so biodegradveis e biocompatveis e podem ser usadas em humanos devido sua baixa toxicidade [17]. SLNs devem ser estabilizadas por tensioactivos para formar emulses administrveis [18]. SLNs formam uma matriz fortemente lipoflica em que as drogas pode ser carregadas para posterior liberao. Os principais fatores que afetam carga de frmaco na matriz do LS so: (i) a solubilidade do frmaco no lpido (a droga deve ser lipoflica); (ii) as propriedades fsicas e qumicas do lpido ou mistura de lpidos, (iii) as caractersticas cristalinas do lpido

(s) na temperatura do biolgica, e (iv) a polimrfica forma do lpido (s) utilizado. A utilizao de uma mistura de lpidios heterognea promove uma estrutura cristalina imperfeita com espaos maiores para carregamento superior de drogas. SLNs tm sido investigadas para o trasporte de uma variedade de drogas anticncer, com resultados promissores em ensaios pr-clnicos em ratos especificamente mostrando que SLNs podem ajudar asuperar a MDR em canceres [17]. Serpe et ai., Utilizando clon clulas cancerosas in vitro, demonstrou os benefcios do SLNs em a entrega de doxorrubicina (Figura 3), o butirato de colesterilo e paclitaxel [19]. Em um desenvolvimento interessante, mitoxantrona, a topoisomerase inibidora que bloqueia a replicao do ADN, foi trasportada em NLS e utilizada in vivo como um local de injeco para o tratamento da mama cncer e metstases linfonodais em ratos [20]. O resultados revelaram uma reduo de quase trs vezes do tamanho no nodulo da linfa em comparao com mitoxantrona livre, que uma importante melhoria no tratamento existente. SLNs oferecem uma plataforma alternativa para o trasnporte da droga no cancer. No entanto, mais estudos in vivo so necessrios antes que se possa ser traduzida para o tratamento humano. Polmeros base de NPs Polimeros NPs tm sido extensivamente investigados como frmacos nanotrasnportadores . Como uma classe de molculas , sua estrutura muito semelhante a uma estrutura polimrica - geralmente formados a partir de um monmero biodegradvel com base numa simples molcula orgnica, que biocompatvel - e com pores e funcionais para segmentao ativa intercalados na estrutura [21]. O trasnporte da droga conseguida por meio de (i) a ligao de uma soluo aquosa fase de frmaco utilizando o polmero para formar estruturas em nanoescala tais como gaiolas e cpsulas [21,22], ou (ii) a ligao qumica das molculas de frmaco para a estrutura do polmero por meio de um ster ou amida de ligao simples que pode ser hidrolisada in vivo. Nanopartculas polimricas mais complexas utilizam grupos polares na criao de regies hidrofbicas e hidroflicas, permitindo ao frmaco adsorver a NP e facilitam a entrega ao local alvo. Os polmeros sintticos mais amplamente pesquisados incluem polilactido (PLA), [23], o poli (D, L-lactido-co-glicolido) (PLGA) [24] e PEG [25]. Todos os trs polmeros so hidrolisados in vivo e so biodegradveis. Outros polmeros baseados em polissacridos biolgicos tm sido investigados extensivamente, incluindo quitosano, ciclodextrina

e dextranos [26]. Polmeros diferentes podem ser combinados para formar copolmeros. Co-polmeros PLA-block-PEG aproveitando as propriedades de ambos polmeros, especialmente a anti-opsonizao de PEG [24]. Ligantes podem ser anexados ao NP para facilitar ativamente a segmentao. As ligaes podem ser intercaladas dentro da estrutura , quer por ligao covalente directa estrutura polimrica ou atravs da utilizao de grupos espaadores biologicamente inertes [27]. Ligantes para segmentao ativa de cncer so usadas para explorar quaisquer antgenos especficos expressos pelas clulas cancerosas. RNA A10 aptmeros especficos para o antgeno de membrana especfico de prstata ter sido conjugados com sucesso para PLA-blockPEG co-polmeros, que exibiram um aumento do trasnporte de drogas a clulas tumorais da prstata em comparao aos no-alvo NPs [27]. Este um desenvolvimento promissor e pode oferecer um melhor tratamento no-cirrgico para pacientes com cncer de prstata. Formulaes de paclitaxel atuais (Taxol1), um medicamento para quimioterapia de cncer de mama, utiliza o Cremofor solvente orgnico EL1, o que pode provocar reaes graves de hipersensibilidade. PEGylated copolmero de PLGA mostraram uma NPs eficincia de encapsulao de 70% para o paclitaxel e induzem um nvel semelhante de morte celular por apoptose como a observada para Taxol quando testado em clulas cancerosas HeLa [28]. Significativamente, os copolmeros de PLGA tratados com PEG mostraram nenhuma toxicidade e, por conseguinte, uma formulao eficaz de paclitaxel pode ser produzida sem os efeitos adversos associados com o Cremophor EL1 [28]. Isto oferece uma alternativa de tratamento para aqueles que so sensveis ao Cremophor EL1 sem comprometer a potncia do quimioterpico. A cisplatina, um outro agente anticancer, foi trasnportado em um copolmero de PLGA-PEG-metoxi (PLGA-PEG) NPs [29]. Os testes in vitro revelaram que a cisplatina-trasnportada PLGA- mPEG PN passivamente alvo LNCaP das clulas do cancer da prstata. NPs cisplatina-trasportada evoca menos citotoxicidade de soluo de cisplatina livre, mas a sua segmentao passiva reduz a toxicidade sistmica. A microscopia de fluorescncia revelou que a absoro cisplatina trasportada NP ocorreu atravs de interiorizao. Um camundongo como modelo vivo revelou que os nveis sanguneos cisplatina foram prolongados e sustentados em concentraes teraputicas aps a administrao intravenosa. A Tabela 2 apresenta outros estudos relevantes neste domnio.

Nanopartculas polimricas esto ainda em fase pr-clnica de desenvolvimento mas tm potencial alvo para o trasporte de frmacos anti-cancergenos, devido facilidade com que podem ser ligandas. Gold NPs Gold NPs consistem num ncleo de tomos de ouro que pode ser funcionalizados por adio de uma monocamada de pores que contm um grupo tiol (SH) [30]. Exemplos desses radicais incluem ligantes para ativo de segmentao do Gold NP, como mascarado phosphonioalkyl selenoates [31], peptdeos e glyconanoparticles. Gold NPs podem ser sintetizados usando NaBH4 para reduzir AuCl4 sais, na presena de thiolcontaining pores que subsequentemente formam uma monocamada em torno do tomo de ouro do ncleo, dependendo da estequiomtrica ouro / tiol proporo (Figura 4) [32]. PN ter um Sintetizado dimetro de 1-150 nm. Alm disso modificao NP pode ser realizada utilizando uma reao de permuta lugar, em que tiol que contm so trocados. Desta forma, uma nica ncleo NP ouro pode ser funcionalizada com muitos diferentes grupos de focalizao, a estabilidade, a evaso de defesas do hospedeiro e entrega da droga [32]. Estudos confirmaram que NPs de ouro so no-txicos em ao nvel celular, em um certo nmero de linhas de clulas humanas [33]. Estudos em ratos usando nanopartculas de ouro como um agente de imagiologia no revelaram qualquer evidncia de toxicidade superior a 30 dias [34]. Um estudo pioneiro demonstrou que o NPS ouro PEGilados (10 - 30 nm) no so capazes de atravessar a placenta humana dentro de 6 h, o que poderia ser utilizada para restringir a libertao do frmaco para apenas o me, evitando efeitos teratognicos no feto [35]. O trasporte da droga usando nanopartculas de ouro ainda est em sua infncia no incio de seus estudos), embora muito mais progresso tenha sido feito no trasporte de DNA para terapia gnica [36] e na imagiologia [37]. Ouro PN podem ser sintetizados e funcionalizados como drogas anticancergenas, tais como paclitaxel e 6-mercaptopurina (6-MP) [38]. Ouro PN co-administrado com paclitaxel mostra reforados efeitos antiproliferao de tumoresestuda-se se o ouro PN poderia perturbar a adeso celular [39]. O anti-leucemia droga 6-MP obrigado a ouro PN apresenta maior in vitro toxicidade contra a leucemia que livre 6 MP, apesar de ouro PN teve nenhuma atividade anti-leucemia em estudos de controle. O mais novo desenvolvimento para o ouro PN o uso de glutationa intracelular como um gatilho para a liberao da droga [40]. Os nveis mais elevados de glutationa encontrados em cancerosos e prcancerosos as clulas podem, assim, ser explorada em alvejar liberao intracelular de drogas quimioterpicas [41].

Embora o trasporte da droga usando nanopartculas de ouro ainda est evoluindo, h potencial para o desenvolvimento de partculas multifuncionais para os sistemas de trasporte de imagem, de drogas e do gene para aplicao em cncer. Uma protena de albumina plasmtica, com um peso molecular de 66 kDa, tem sido extensivamente investigada como um transportador de droga, com resultados promissores. solvel em gua e etanol, dois solventes viveis para administrao intravenosa. Como a albumina encontrada na circulao plasmtica do corpo humano, em concentraes de 50 g / L de soro, no-txica e bem tolerada pelo sistema imune. A albumina tem uma farmacocintica favorvel devido a sua longa meia-vida no plasma em circulao, o que torna particularmente atraente como um portador de droga para segmentao passiva [42]. A albumina pode ser derivada a partir de plasma humano e produtos sanguneos. Alternativamente, o soro humano recombinante albumina pode ser produzido em levedura geneticamente clulas [42]. NPs de albumina so preparados por dessolvatao ou coacervao. Abraxane, tambm conhecido como nab-paclitaxel, a primeira droga baseada em um NP albumina aprovado para utilizao humana pela os EUA Food and Drug Administration. A quimioterapia paclitaxel drogas est ligado a 130 nm NPs de albumina humana. Abraxane tem vantagens sobre paclitaxel livre em termos de sua maior semi-vida de circulao e a falta de hipersensibilidade induzindo solvente EL Cremofor [43]. Ensaios clnicos confirmaram a eficcia no tratamento Abraxane do cancer da mama metasttico, para o qual utilizado rotineiramente [44]. Alm disso, Abraxane est sendo investigado com outros taxanos no tratamento da hormona cancro da prstata refratrio [44].A Albumina transportada atravs do endotlio para o espao extravascular pela transcitose atravs caveolae, iniciada pelo receptor de albumina GP60 [45]. Tecidos tumorais tm uma alta demanda metablica e activamente transportam protenas do plasma nas suas clulas para processos anablicos. Tem sido proposto que esse mecanismo explicaria por que Abraxane se dirige e acumula preferencialmente nos tecidos de cancer in vivo [46] via a rede vascular excessiva associada com cncer [44]. H tambm especulaes de que Abraxane transportado em clulas tumorais por secreo de protena cida rica em cistena (SPARC) ou osteonectina [44]. Albumina-PEG-PLA PN atravessa a barreira sangue-crebro [47] e de conjugao de apolipoproteinas podem facilitar transcitose [48]. Estes resultados abrem novos caminhos para o uso de NPs de albumina como um transportador para a entrega da droga para o crebro no apenas

para o tratamento do cancer, mas tambm para uma vasta variedade de doenas do sistema nervoso central.

CONCLUSES E DIREO FUTURA Lipossomas e NPs so candidatos promissores para o desenvolvimento de sistemas de trasnporte de drogas. Evidncias experimentais recentes ,clnica e pr-clnica, mostram grande potencial para a adoo generalizada de lipossomas e NPs no tratamento do cncer. Suas propriedades incluem atrativos como biocompatibilidade, baixa toxicidade, as taxas de desembarao mais baixos, a capacidade de atingir tecidos especficos e liberao controlada de drogas. Elas oferecem inmeras vantagens sobre a convencional quimioterapia com tratamento livre de drogas, como evidenciado pela aprovao do Abraxane e Doxil. Ambas essas formulaes base de nanomaterial de drogas existentes oferecem melhores propriedades farmacocinticas e menor toxicidade sistmica dos medicamentos quimioterpicos que eles proporcionam. No entanto, o potencial dessas tecnologias emergentes ainda no foi plenamente realizado. A toxicologia de nanomateriais em humanos ainda precisa ser totalmente estudada e avaliada. Os estudos at agora tm sido pequenos e limitados a exposio a curto prazo, mas poucos tm olhado para o maior impacto. Investigao sobre a chamada nanotoxicidade deve concentrar em exposio a longo prazo em seres humanos, os animais e os ambiente. Alm disso, estudos in vivo so necessrios para determinar a eficcia destas novas formulaes de frmacos, culminando na fase I de ensaios. A reprodutibilidade dos lotes de formulaes farmacuticas, tais como lipossomas e NPs tambm precisa ser refinada. Lipossomos e NPs esto apenas comeando a fazer um impacto na quimioterapia devido a dupla conduo para reduzir os efeitos dos tratamentos existentes de toxicidade e de lado e aumentar a eficcia, visando seletividade de tumores.