O PAPEL DAS ENZIMAS CICLOOXIGENASE 1 E 2 NA NEUROINFLAMAO

Nomia Pereira Mestrado em Neurocincias Disciplina de Farmacologia 28 de Fevereiro de 2012

NDICE

RESUMO .......................................................................................................... 5 INTRODUO ................................................................................................ 7 NEUROINFLAMAO .................................................................................. 9 1. 2. 3. CREBRO E BARREIRA HEMATO-ENCEFLICA ........................ 9 MICROGLIA, AS CLULAS IMUNOCOMPETENTES DO SNC.. 10 CICLOOXIGENASES NO SNC ........................................................ 13 3.1 ACTIVIDADE DA COX-2 NA NEUROINFLAMAO ............. 14 3.2 ACTIVIDADE DA COX-1 NA NEUROINFLAMAO ............. 15 4. IMPLICAES TERAPUTICAS NO CONTROLO DE DOENAS

NEUROLGICAS E NEURODEGENERATIVAS ........................................ 16 CONCLUSO ................................................................................................ 19 BIBLIOGRAFIA ............................................................................................ 21

SIGLAS

15sPGJ2 - 15-desoxi-Delta-12 ,14-prostaglandina J2 AA cido Araquidnico AINE Anti-inflamatrios no-esterides AVC Acidente Vascular Cerebral A Amilide BHE Barreira Hemato-Enceflica C/EBP - CCAAT-enhancer-binding proteins CD Tirosina fosfatase COX Ciclooxigenases CREB - cAMP response element-binding DA Doena de Alzheimer DH Doena de Huntington DP Doena de Parkinson EM Esclerose Mltipla HIV Vrus da Imunodeficincia Humana IL Interleucina iNOS xido ntrico sintase JAK-STAT - Janus kinase-signal transducer and activator of transcription LPS Lipopolissacardeos MAPKs Mitogen-activated protein kinases MCP-1 - Monocyte chemotactic protein-1 MHC Complexo principal de histocompatibilidade MMPs Matrix metalloproteinases mPGES-1 Prostaglandina E sintase-1 microssomal MPTP 1metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina NADPH oxidase Nicotinamida-adenina-dinucletido fosfato oxidase NF-kB Factor nuclear kappa B PG Prostaglandinas PGJ2 Prostaglandina J2 PPAR- - Peroxisome proliferator-activated receptor gamma ROS - Reactive oxigen species SNC Sistema Nervoso Central Sp1 Protena de especificidade 1 TLR Receptores Toll-like TNF- Factor de necrose tumoral TX Tromboxano

RESUMO
O presente trabalho consiste numa monografia e constitui um dos elementos de avaliao da disciplina de farmacologia, integrada como cadeira opcional do Mestrado em Neurocincias. Esta dissertao tem como objectivo o estudo detalhado sobre o papel das enzimas ciclooxigenases (COX-1 e COX-2) nos processos inflamatrios do Sistema Nervoso Central (SNC), atravs de uma reviso minuciosa dos mltiplos estudos cientficos realizados nesta rea. A microglia compe o sistema imune inato do SNC e constitui o elemento chave nos processos neuroinflamatrios. A neuroinflamao tem sido envolvida na patognese ou progresso de uma variedade de doenas neurolgicas e neurodegenerativas agudas e crnicas, incluindo a doena de Alzheimer (Ad & Bosetti, 2011). A procura de um melhor entendimento sobre os mecanismos subjacentes neuroinflamao crnica e o interesse teraputico em modular o incio e a progresso dessas doenas, ganha actualmente maior interesse e representa o foco deste trabalho. As enzimas ciclooxigenases, constitutivamente expressas na microglia, exercem um papel preponderante na converso do cido araquidnico (AA) em prostanides bioactivos, os quais medeiam os processos inflamatrios. Apesar destas enzimas possurem a mesma funo na cascata da inflamao, diferem nos mecanismos de regulao e na distribuio pelos tecidos no SNC (Ad & Bosetti, 2011). Diversos estudos em modelos animais, atravs da utilizao de anti-inflamatrios selectivos e deleo gentica, sugerem que a enzima COX-2 encontra-se expressa predominantemente nos neurnios e pode envolver actividades neurotxica ou antiinflamatria com aces neuroprotectoras. A COX-1, por seu turno, parece ser expressa predominantemente nas clulas da microglia e nas clulas perivasculares. A sua aco evidencia estar envolvida nas leses cerebrais induzidas por estmulos prinflamatrios, nomeadamente pelas protenas amilide- (A) (Choi, Aid, & Bosetti, 2009). Desta forma, a identificao das caractersticas especficas da COX-1 e COX-2 podem sugerir novas abordagens teraputicas no tratamento de diversas condies neuroinflamatrias.

Palavras-chave: Neuroinflamao, Ciclooxigenases, Microglia, Anti-inflamatrios.

INTRODUO
O crebro considerado um rgo imuno-privilegiado devido presena da barreira hemato-enceflica (BHE), a qual permite restringir e controlar o acesso imune. No entanto, o crebro capaz de dar respostas imunes e inflamatrias de uma forma dinmica a uma variedade de insultos (Rivest, 2009). Infeces, traumas, acidente vascular cerebral (AVC), toxinas e outros estmulos, so capazes de produzir a activao imediata e de curta durao do sistema imune inato do SNC (Nimmerjahn, et al., 2005). A resposta neuroinflamatria aguda corresponde, essencialmente, activao de clulas da microglia. A microglia activada emerge num fentipo fagoctico com a libertao de mediadores inflamatrios, tais como as citocinas e as quimiocinas. Uma leso aguda pode desencadear stress oxidativo e nitrosativo, sendo tipicamente de curta durao e pouco provvel que prejudique a sobrevivncia neuronal a longo prazo. Portanto, acredita-se que a resposta neuroinflamatria aguda seja geralmente benfica para o SNC, uma vez que tende a minimizar a leso adicional e contribui para a reparao do tecido lesionado (Frank-Cannon, et al., 2009). Por outro lado, a neuroinflamao crnica longa e muitas vezes tende a perpetuar-se. A libertao de mediadores pr-inflamatrios, tais como as citocinas, quimiocinas, protenas do complemento, cido araquidnico e os seus metablitos lipdicos, obtida de uma forma sustentada que obriga activao prolongada das clulas da glia. Alm disso, resulta tambm no aumento do stress oxidativo e nitrosativo, comprometendo a permeabilidade da BHE que, consequentemente, permite a infiltrao de macrfagos perifricos no parnquima cerebral (Frank-Cannon, et al., 2009). A inflamao crnica est relacionada com vrias doenas neurolgicas e neurodegenerativas, incluindo a esclerose mltipla (EM), doena de Alzheimer (DA), doena de Parkinson (DP), doena de Huntington (DH), esclerose lateral amiotrfica (ELA), leses cerebrais traumticas, demncia associada ao HIV, doenas dos pries e degenerao macular relacionada com a idade, as quais apresentam produo de elevados nveis de diversos mediadores pr-inflamatrias (Mrak & Griffin, 2005). As ciclooxigenases (COX-1 e COX-2) exercem um papel central na cascata inflamatria pela converso do AA em prostaglandinas (PGs), metabolitos lipdicos que

se encontram envolvidos quer em processos fisiolgicos como patolgicos, com especial relevncia nos processos inflamatrios. As duas isoformas, COX-1 e COX-2, diferem nos mecanismos de regulao e na distribuio pelos tecidos no SNC (Choi, et al., 2009). A utilizao de modelos animais geneticamente modificados em combinao com inibidores farmacolgicos selectivos, permitiu caracterizar com maior rigor as funes especficas da COX-1 e da COX-2 na neuroinflamao e alterar a viso clssica de que apenas a COX-2 intervm nos processos inflamatrios (Ad & Bosetti, 2011). Esses estudos permitiram conjecturar que a COX-1, localizada predominantemente na microglia, exerce um papel preponderante na neuroinflamao, uma vez que a sua inibio atenua a resposta inflamatria (Teeling, et al., 2010). Por outro lado, a COX-2 encontra-se principalmente localizada nos neurnios piramidais e a sua inibio parece aumentar a leso neuronal. Contudo, a COX-2 aparenta ser necessria no processo de resoluo da inflamao, atravs dos seus derivados endgenos, nomeadamente os ecosanides (e.g. lipoxina A4), resolvinas e protectinas (Ad & Bosetti, 2011). O interesse cientfico em modular o incio e a progresso das doenas neurodegenerativas, particularmente na DA, atravs da utilizao de anti-inflamatrios no-esterides (AINEs), tem estado sobre escrutnio desde que diversos ensaios clnicos que utilizaram inibidores selectivos da COX-2 mostraram resultados decepcionantes e falharam em demonstrar benefcios clnicos (Teeling, et al., 2010). Um relatrio recente comparou o tratamento a longo prazo de uma vasta gama de AINEs e concluiu que os inibidores da COX-1 (ibuprofeno, indometacina, piroxicam) mostraram efeitos protectores sobre o incio ou progresso da doena de Alzheimer. No mesmo estudo, os inibidores selectivos da COX-2 e os AINEs no acetilados (salicilatos), no tiveram qualquer efeito benfico (Vlad, et al., 2008). Posto isto, este estudo visa compreender os mecanismos intervenientes na neuroinflamao, com especial foco para a interposio das enzimas ciclooxigenases e as suas implicaes nas doenas neurolgicas e neurodegenerativas.

NEUROINFLAMAO
1. CREBRO E BARREIRA HEMATO-ENCEFLICA O SNC composto por dois tipos de clulas principais, as clulas nervosas e as clulas da glia. As clulas nervosas compreendem os neurnios e as clulas da glia, os astrcitos, os oligodendrcitos e a microglia (Kim & Vellis, 2005). Essas clulas esto circundadas por clulas endoteliais microvasculares da BHE e por clulas ependimrias das superfcies ventriculares (Snell, 2003). A BHE composta por clulas endoteliais rigorosamente unidas que revestem os vasos sanguneos do crebro, sendo responsveis por funes biolgicas essenciais, incluindo o transporte de micronutrientes e macronutrientes, movimento de leuccitos, sinalizao mediada por receptores e osmoregulao. volta das clulas endoteliais encontra-se uma fina membrana basal contnua de suporte, constituda essencialmente por protenas de laminina, fibronectina, entre outras protenas que contribuem para o isolamento entre o crebro e sangue. Os astrcitos, pericitos e neurnios que esto em proximidade fsica com o endotlio, constituem outros componentes celulares da BHE (Persidsky, et al., 2006). Sob condies fisiolgicas, este sistema contnuo especializado de capilares apenas permite a passagem de pequenas molculas altamente lipoflicas, tais como o oxignio e o dixido de carbono. Molculas maiores como a insulina, leptina e transferina, atravessam a barreira por endocitose mediada por receptores, ou atravs de transportadores selectivos da membrana, os quais medeiam tambm o transporte de glicose ou aminocidos. Contudo, sob a condio de doenas neurolgicas severas como hipxia por isquemia, demncia induzida por HIV, EM, DA, entre outras, pode ocorrer o comprometimento da permeabilidade da unidade neurovascular, atravs da difuso 2006). Desta forma, os mecanismos imunolgicos do SNC parecem diferir das respostas imunolgicas do sistema perifrico devido impermeabilidade da BHE, a qual impede a entrada de imunoglobulinas e a invaso dos leuccitos do sangue. A delicada rede neuronal parece ser sensvel longa exposio de muitas das molculas libertadas pelos 9 passiva sustentada de substncias sanguneas pelas tight junction (permeabilidade aumentada) ou atravs da infiltrao celular massiva (Persidsky, et al.,

leuccitos circundantes. Por essa razo, o SNC detm clulas imunocompetentes, as clulas da microglia, que permitem responder a alteraes do meio ambiente local (Nakamura, 2002). 2. MICROGLIA, AS CLULAS IMUNOCOMPETENTES DO SNC A microglia deriva de moncitos ou de clulas percursoras da linhagem moncitomacrfago originadas na medula ssea a partir das clulas progenitoras hematopoiticas. Durante a hematopoiese, em fases embrionrias, alguns dos moncitos percorrem at ao crebro onde se instalam para se diferenciarem na microglia. Estas clulas consistem em macrfagos residentes do parnquima do SNC com actividade fagocitria (Ransohoff & Perry, 2009). A microglia pode assumir trs tipos de morfologia de acordo com o seu estado de activao: forma ramificada, durante a fase de repouso; forma intermdia, quando activada; ou forma amebide, quando activada e com actividade fagoctica. No SNC, a microglia ramificada no estado de repouso constitui cerca de 5-20% da populao da neuroglia, em menor nmero na substncia branca do que na substncia cinzenta. A sua morfologia e a expresso de antignios de superfcie so modificadas com alteraes do microambiente (Kim & Vellis, 2005). Durante o estado de repouso a microglia expressa receptores de superfcie, tirosina fosfatase (CD) 45, CD14, CD11b/CD18 e os pares receptor-ligando CD200R/CD200 a baixos nveis para manter a comunicao glia-neurnio no SNC, sendo esta uma via de sinalizao constitutiva com influncia homeosttica (Frank-Cannon, et al., 2009). Porm, na presena de estmulos que constituam uma ameaa integridade funcional e estrutural do SNC (e.g. estruturas microbianas, componentes do srum), as clulas da microglia reagem atravs da sua activao e alterao gradual da morfologia, passando de um estado ramificado para um estado amebide activado (Figura 1). Elas passam a expressar molculas de superfcie do complexo principal de histocompatibilidade (MHC), que actuam no reconhecimento e na apresentao de constituintes dos agentes estranhos. A resposta activada bem como a sua orientao direccional dependem, aparentemente, da estimulao dos purinoreceptores envolvidos na secreo de citocinas, e pode tambm requerer o auxlio dos astrcitos (Nimmerjahn, et al., 2005). Contudo, a versatilidade das respostas da microglia que acompanham a libertao de

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diversos factores e a actividade fagoctica, dependem essencialmente do tecido atingido, dos receptores envolvidos e do contexto (Hanisch & Kettenmann, 2007).

Figura 1- Actividade da microglia. A Condies fisiolgicas, microglia no estado de repouso e morfologia ramificada (1). Os astrcitos mantm a BHE impermevel e executam outras funes como o transporte de neurotransmissores e metabolismo, volta dos locais sinpticos. Os neurnios emitem sinais que mantm a microglia num estado de vigilncia permanente (2). H tambm macrfagos perivasculares em estreita associao com os vasos sanguneos (3). Subconjuntos de moncitos circulantes podem reabastecer as clulas perivasculares e, em grau menor, reconstituir a microglia parenquimatosa. B Aps leso, a microglia responde rapidamente com alterao da morfologia para intermediria e alterao no perfil de actividade (4). A resposta provavelmente suportada por astrcitos vizinhos que libertam ligandos dos purinoreceptores (5). A microglia pode produzir factores neurotrficos para defesa dos neurnios (6,7). Os neurnios podem tambm emitir sinais indicativos das suas funes perturbadas (8). As clulas da microglia so capazes de limitar os danos adicionais e restaurar a homeostase normal. C Leses mais pronunciadas do SNC podem desencadear alteraes drsticas no fentipo funcional da microglia. Dependendo da natureza dos estmulos, as clulas da microglia necessitam de adquirir e adaptar o comportamento reactivo. A reactivao crnica ou mal adaptada da microglia pode levar a uma diminuio substancial de neurnios e glia (9). (Hanisch & Kettenmann, 2007)

As propriedades das clulas da microglia e da sua activao tm sido estudadas principalmente em modelos animais e em cultura. Estes paradigmas experimentais so obtidos a partir da estimulao com uma endotoxina bacteriana, os lipopolissacardeos (LPS), da qual resulta habitualmente uma forte resposta inflamatria. Os LPS ligam-se especificamente s protenas CD14 e activam os receptores Toll-like 4 (TLR4), expressos exclusivamente nas clulas da microglia A interaco entre os LPS com os receptores TLR4-CD14, pode desencadear cascatas de sinalizao intracelulares (e.g. NF-kB, MAPKs e JAK-STAT) que conduzem transcrio nuclear de mediadores prinflamatrios tais como, xido ntrico sintase induzvel (iNOS), NADPH oxidase e COX-2, bem como a subsequente libertao de citocinas (e.g. IL-1b, IL-6 e TNF-), quimiocinas (e.g. MCP-1), xido ntrico e PGs, estas ltimas bastante associadas com a neuroinflamao. No obstante, a via de sinalizao mediada pelas enzimas COX (COX-1 e COX-2), constitui uma fonte primria na produo de PGs durante a fase inicial da inflamao, sendo constitutivamente expressas na microglia. Os LPS e outros estmulos inflamatrios podem tambm activar as matrix metalloproteinases (MMPs),

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responsveis por regular a permeabilidade da BHE e, consequentemente causar infiltrao de leuccitos perifricos no SNC (Figura 2). O recrutamento de leuccitos perifricos agrava a resposta inflamatria e aumenta a probabilidade de causar dano neuronal (Nakamura, 2002). Desta forma, a reactivao microglial excessiva e prolongada pode conduzir inflamao crnica e neurodegenerao (Nimmerjahn, et al., 2005).

Figura 2 Mecanismos de leso neuronal por activao da microglia (In:Trends in Pharmacological Sciences).

Estudos com a utilizao de modelos complexos de doenas desmielinizantes em ratos, durante os quais a activao da microglia foi reduzida, o desenvolvimento da doena mostrou ser atenuado. Os autores concluram que paralisando a microglia pode ser benfico, reduz as leses inflamatrias e limita a desmielinizao. Contudo, a supresso dos macrfagos e da microglia pode prejudicar o processo de remielinizao, observado em modelos de induo de toxinas na desmielinizao e remielinizao (Kotter, et al., 2005). A microglia e os macrfagos libertam factores trficos de suporte regenerao da mielina. Alm disso, a remoo fagoctica dos fragmentos de mielina constitui um pr-requisito na tentativa de reparao na esclerose mltipla ou no sndrome de Guillain-Barr, uma vez que o material obstrui a remielinizao e o crescimento do axnio (Hanisch & Kettenmann, 2007).

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3. CICLOOXIGENASES NO SNC As ciclooxigenases (COX) existem em duas isoformas, COX-1 e COX-2, e so codificadas por diferentes genes. Ambas as isoformas so constitutivamente expressas no crebro e exercem um papel central na cascata inflamatria pela converso do AA, libertado das membranas de fosfolpidos pela fosfolipase A2 (PLA2). A partir do AA livre, as COX catalisam uma reaco de dioxigenao, para a obteno de PGG2. As PGG2 so ento convertidas a PGH2, atravs de uma reaco de peroxidase. Por fim, as PGH2
Figura 3 - Via metablica do AA (Ad & Bosetti, 2011)

so convertidas a PGE2, PGF2, PGD2, PGI2 e tromboxano B2 (TXB2), por sintetases terminais especficas (Figura 3). Os eicosanides sintetizados pelas COX constituem potentes mediadores lipdicos, os quais exercem uma variedade de efeitos biolgicos atravs da ligao a receptores acoplados a protenas G (Ad & Bosetti, 2011). As duas isoformas COX partilham 60% de homologia na sequncia de aminocidos e so ambas protenas homodimricas da membrana integral do retculo endoplasmtico e do ncleo. Contudo, diferem nos mecanismos de regulao e na localizao celular. A COX-2 foi primariamente identificada como um elemento chave na resposta inflamatria aguda, uma vez que rapidamente induzida por substncias exgenas, como por exemplo os PLS. De facto, o gene da COX-2 regulado por vrios elementos transcripcionais, incluindo o NF-kB, Sp1, TATA box, CAAT Enhancer Binding Protein Beta (C/EBP ) e cAMP response element-binding (CREB), que interagem com factores trans-acting, gerados por mltiplas vias de sinalizao. A COX1, por sua vez, no possui promotor TATA ou CAAT box, contendo elevado teor de guanina-citosina e de vrios elementos SP1. Alm disso, a COX-2, mas no a COX-1, contm uma nica sequncia de 27 aminocidos perto da extremidade C-terminal que corresponde a um elemento de instabilidade envolvido na degradao de protenas COX-2 (Ad & Bosetti, 2011). Em condies fisiolgicas, a COX-1 expressa principalmente na microglia e em clulas perivasculares (tipo de clulas vasculares derivadas de macrfagos) (Garcia-Bueno, et al., 2009), ao passo que a COX-2

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encontrada em dendrites ps-sinpticas e terminais excitatrios de neurnios, particularmente no crtex, hipocampo e amgdala (Wang, et al., 2005). 3.1 ACTIVIDADE DA COX-2 NA NEUROINFLAMAO Diversos estudos em que utilizaram o modelo dos PLS na activao da neuroinflamao demonstraram que a deleo gentica da COX-2 ou a inibio farmacolgica selectiva com celecoxib aumentou o dano neuronal, bem como a activao glial e a expresso de citocinas e de enzimas ROS, tais como, as citocinas proinflamatrias IL-1b e a subunidade p67phox da oxidase NADPH, uma fonte importante de superxido durante a neuroinflamao. Observaram tambm que a deleo gentica aumentou a permeabilidade da BHE e a infiltrao leucocitria (Ad & Bosetti, 2011). Consistentemente com estes resultados, outros estudos demonstraram que a deleo da COX-2 exacerbou a inflamao ocular induzida por endotoxinas, e a inibio farmacolgica selectiva com NS-398 aumentou a transcrio de genes inflamatrios (mPGES-1, TLR2, CD14, MCP-1) em clulas vasculares cerebrais e em clulas parenquimatosas da microglia, aps a injeco de LPS (Blais, et al., 2005). Estes achados divergiram com outros estudos em modelos primrios de neuroinflamao, os quais podem ser explicados dependendo do tipo de clulas envolvidas e do modelo de leso especfico. Por exemplo, a COX-2 expressa em neurnios piramidais e, como tal, pode mediar a leso em modelos que envolvam directamente os neurnios (Ad & Bosetti, 2011). Esta hiptese foi apoiada por Teismann, et al. (2003), num estudo em que os autores utilizaram o modelo 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP) que atinge selectivamente os neurnios, no qual demonstraram que a deleo da COX-2 no afectou os marcadores da inflamao e o stress oxidativo (Teismann, et al., 2003). Alm disso, ratos transgnicos com sobreexpresso da COX-2 e atravs do promotor Thy-1 especfico dos neurnios, aps a activao directa da imunidade inata da glia, observaram-se elevados nveis de PGs, assim como uma resposta inflamatria exacerbada e dano neuronal (Aid, Parikh, et al., 2010). Estes achados sugerem que na induo da imunidade inata atravs de endotoxinas, os produtos derivados da COX-2 podem mediar um efeito protector na progresso e/ou resoluo da inflamao no crebro (Ad & Bosetti, 2011).

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Estudos recentes sugerem que na fase de converso da inflamao, que se segue aps o estmulo inflamatrio e permite retomar ao estado de homeostasia, vrios mediadores com propriedade imunomoduladoras so necessrios. Desses mediadores fazem parte as lipoxinas que so prostaglandinas ciclopentnicas, resolvins e protectins. As PGs ciclopentnicas como a PGJ2 e a 15dPGJ2so produtos no enzimticos das PGD2, derivado da COX-2. A 15dPGJ2 tem mostrado suprimir a actividade da iNOS e a expresso de citocinas pr-inflamatrias (TNF-, IL-1, IL-6), diminuir a migrao de moncitos, bem como causar moncitos polimorfonucleares e apoptose de macrfagos. (Ad & Bosetti, 2011). Alm disso, as PGE2 resultantes da COX-2 so importantes na desactivao da microglia, actuando como substncia endgena que se liga aos receptores de membrana e activam a via de sinalizao atravs do cAMP (Figura 2) (Nakamura, 2002). Considerando a implicao da COX-2 no processo de resoluo da inflamao, ratos com deficincia na COX-2 mostraram um aumento da infiltrao de leuccitos no crebro, aps o estmulo por endotoxinas (Choi, et al., 2009). 3.2 ACTIVIDADE DA COX-1 NA NEUROINFLAMAO A COX-1 tem vindo a receber destaque como um interveniente proeminente na neuroinflamao, visto facilitar o aumento da regulao de PGs pr-inflamatrias. Em ratos idosos, observou-se que a expresso da COX-1, bem como os nveis do seu derivado TXB2, se encontravam elevados no hipocampo. Este aumento poder contribuir para o aumento da susceptibilidade de inflamao e de doenas neurodegenerativas. A COX-1 localiza-se predominantemente na microglia e, como tal, os seus produtos parecem ser particularmente importantes na modulao da fase aguda da inflamao (Ad & Bosetti, 2011). Num estudo recente, utilizando o modelo de injeco de PLS a nvel sistmico para activar os processos de inflamao, os autores identificaram um aumento da expresso da COX-1 tambm em clulas perivasculares, sugerindo que a COX-1 exerce um papel na mediao da sinalizao imune do crebro (Garcia-Bueno, et al., 2009). Outro grupo observou que a induo da inflamao com PLS e A1-42 em ratos aumenta os nveis de PGE2, PGF2 e TXB2, ao passo que essa mesma injeco em ratos com deleo gentica da COX-1 ou pela utilizao de um inibidor selectivo SC-560 diminui esses nveis. Constataram tambm uma diminuio da resposta inflamatria, da infiltrao leucocitria, do stress oxidativo e do dano

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neuronal. Desta forma, as respostas neuroinflamatrias crnicas podem estar associadas ao aumento das PGs, as quais, por seu turno, causam maior permeabilidade capilar e aumentam os processos de fagocitose (Choi, et al., 2008). procura de melhor entendimento em relao ao papel da COX-1 na neuroinflamao crnica, Gu et al. (2010) utilizaram um modelo animal de Parkinson, associado com astrogliose, activao da microglia, inflamao e neurodegenerao. Observaram um aumento da expresso da COX-1 e, atravs da sua inibio, observaram uma melhoria na sobrevivncia dos ratos (Gu, et al., 2010). Alm disso, noutro estudo, a inibio e deleo gentica da COX-1 atenuou a disrupo da BHE, durante a neuroinflamao induzida por PLS e TNF- (Ad & Bosetti, 2011). Posto isto, sugere-se que a COX-1 poder desempenhar um papel crtico nos processos de neuroinflamao e neurodegenerao, e que a COX-2 pode mediar tanto um papel neurotxico como anti-inflamatrio, dependendo concretamente do estmulo e do tipo de clulas envolvidas na leso, bem como do substrato subjacente sntese de ecosanides (Ad & Bosetti, 2011). 4. IMPLICAES TERAPUTICAS NO CONTROLO DE

DOENAS NEUROLGICAS E NEURODEGENERATIVAS A neuroinflamao associada com activao da microglia representa um importante componente de vrias doenas neurodegenerativas e pode contribuir para a perda das capacidades cognitivas nos idosos. Suportando este conceito, vrios estudos observacionais tm demonstrado que o uso de AINEs a longo prazo reduz a incidncia de DA e demncia associada com a idade (Vlad, et al., 2008). No entanto, os vrios ensaios clnicos de tratamento ou de preveno secundria, usando principalmente inibidores selectivos da COX-2, em pacientes com DA com disfuno cognitiva leve a moderada, falharam em demostrar qualquer benefcio, excepto num pequeno ensaio com a utilizao de indometacina, um inibidor preferencial da COX-1. A discrepncia nos resultados obtidos entre os estudos epidemiolgicos e os ensaios clnicos podem dever-se a diversas razes, incluindo o tempo de administrao, efeitos fora do alvo e a selectividade dos AINEs utilizados. Uma possvel explicao para a falha nos ensaios clnicos que actuando sobre a COX-2 depois do incio da demncia, e quando a cascata da inflamao j se encontra activa, o tratamento poder no ser eficaz. Por 16

outro lado, devido ao risco cardiovascular associado utilizao destes frmacos, alguns estudos foram interrompidos. O grupo de indivduos que continuaram o estudo por mais dois anos e com naproxen obtiveram uma reduo no rcio tau/A em mais de 40%. Esses efeitos mantiveram-se inabalveis 41 meses mais tarde, aps cessar o tratamento. Porm, estes resultados no foram observados no grupo em que foi atribudo o frmaco celecoxib (Ad & Bosetti, 2011). Os diferentes padres de expresso das enzimas COX-1 e COX-2 no crebro de pacientes com DA, podem fazer supor que essas enzimas esto envolvidas em processos celulares diferentes na patognese da DA. Com efeito, a expresso da COX-1 pela microglia volta das placas amilides apresentou um aumento na DA. Pelo contrrio, a expresso da COX-2 no foi detectada na microglia ou em astrcitos na DA. Assim, os efeitos benficos dos AINEs na DA podem dever-se inibio da COX-1, e no da COX-2 (Ad & Bosetti, 2011). A expresso aumentada da COX-1 foi tambm observada em doenas neurolgicas com um componente inflamatrio marcado, tais como leses traumticas cerebrais, doena de Creutzfeld-Jacob, demncia relacionada com a idade e DP (Choi, et al., 2009). No obstante dos benefcios relacionados com a inibio da COX-1 na neuroinflamao, Teeling et al. (2010) investigaram o mecanismo subjacente na comunicao imune cerebral, aps a provocao de inflamao sistmica e usando vrios agentes anti-inflamatrios. A comunicao entre o sistema imune perifrico e o crebro um fenmeno bem descrito e sustenta as consequncias metablicas e comportamentais de infeces sistmicas e doenas inflamatrias. Os autores mostraram que as alteraes do comportamento dos animais, nomeadamente nas funes de cavar e nas actividades de campo aberto, aps a induo da inflamao sistmica por LPS, foram dependentes das PGs e no das citocinas do sangue (IL-1, IL-6 e TNF-). De seguida, na tentativa de compreender os mecanismos subjacentes a essas observaes, os autores pr-trataram os ratos com uma ampla seleco de anti-inflamatrios e analisaram as alteraes dos comportamentos, bem como a produo de mediadores inflamatrios que se seguiu s alteraes sistmicas com PLS. Os inibidores das enzimas COX-1 e COX-2, indometacina e ibuprofeno, efectivamente atenuaram as respostas alteradas do comportamento dos ratos, nas funes de cavar e nas actividades de campo aberto, enquanto o acetaminofeno (paracetamol) e a dexametasona no

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tiveram efeito. A inibio selectiva da COX-1 com piroxicam ou sulindac mostrou efeitos semelhantes indometacina e ao ibuprofeno. Esse efeito foi independente das IL-1, IL-6 e TNF-, produzidas tanto periferia como no crebro. Estes achados sugerem que a COX-1, mas no a COX-2, exerce um papel predominante na alterao do comportamento induzido pela PLS em animais saudveis (Teeling, et al., 2010). As alteraes sistmicas da LPS no resultam apenas na produo de citocinas, mas tambm no aumento de protenas lipoflicas tal como as prostaglandinas (PGE2), leucotrienos e tromboxanos. A indometacina e o ibuprofeno so potentes inibidores do tromboxano, ao contrrio do parecetamol e da dexametasona, e actuam preferencialmente sobre a COX-1. Alm disso, podem ligar-se e activar directamente o factor de transcrio PPAR-, importante no metalolismo dos lpidos. A utilizao de um inibidor selectivo do tromboxano e de um agonista PPAR-, permitiu observar que a PGE2 o principal interveniente na comunicao entre a periferia e o crebro. Desta forma, os autores concluram que as alteraes no comportamento dos ratos, aps a induo da inflamao sistmica com PLS, dependem da actividade da COX-1 e esto correlacionados com a produo de PGE2 e no de citocinas. Observaram tambm que todos os anti-inflamatrios testados reduziram a hipotermia, inibiram a expresso da COX-2 no hipocampo e inibiram os nveis de PGE2 no hipotlamo. Alm disso, os inibidores selectivos da COX-2 potencialmente inibiram os nveis de IL-1, IL-6 e TNF- no crebro, induzidos por PLS. Estes achados sugerem que as citocinas e as PGE2 possuem efeitos diferentes sobre as funes no crebro e/ou actuam em regies diferentes no crebro (Teeling, et al., 2010). Em ltima anlise, a descoberta de novos mediadores lipdicos derivados da COX-2, com propriedades de pr-resoluo, sugerem que a inibio da COX-2 pode ser prejudicial em certas condies neuroinflamatrias. Vrios inibidores selectivos da COX-2 como os coxibs foram desenvolvidos e preferidos aos clssicos, apesar de terem vindo a perder viabilidade devido aos efeitos adversos gastrointestinais. No entanto, estudos em animais mostraram que a inibio da COX-1 por si s no altera a integridade da mucosa gstrica e intestinal, e que a gastrotoxicidade observada quando so inibidas ambas as enzimas COX-1 e COX-2 (Ad & Bosetti, 2011).

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CONCLUSO
Os diversos estudos descritos na literatura evidenciam que a COX-1, tradicionalmente considerada como uma mera interveniente na homeostasia, possui um envolvimento activo nas leses cerebrais induzida por estmulos pr-inflamatrios. A utilizao de inibidores farmacolgicos e deleo gentica da COX-1 mostraram atenuar as respostas inflamatrias, o que indica que a utilizao de AINEs com maior selectividade para a COX-1, em vez da COX-2, so mais provveis de reduzir a neuroinflamao e podero constituir novas abordagens teraputicas no tratamento de doenas neurodegenerativas e outras condies que estejam associadas com a neuroinflamao. A COX-1 parece localiza-se preferencialmente na microglia e, por isso, ser de esperar que seja capaz de responder de imediato activao da microglia com a libertao de PGs, antes da activao da COX-2. A COX-2, por seu turno, localizada predominantemente nos neurnios piramidais, espera-se que contribua para a libertao de PGs em resposta a leses que atinjam directamente os neurnios, como por exemplo isquemia ou excitotoxicidade. Sob estas condies a inibio da COX-2 poder ser benfica mas sem alterar a resposta inflamatria. Desta forma, o tipo de leso, a clula alvo estimulada e se a resposta inflamatria primria ou secundria, pode determinar a neuroproteco ou neurotoxicidade da COX-2. A descoberta dos novos mediadores lipdicos derivados da COX-2 com propriedade de pro-resoluo e anti-inflamatrias, tais como as lipoxinas, resolvins e protectins, sugerem uma maior importncia desta enzima na resoluo da inflamao. Posto isto, a identificao dos papis especficos da COX-1 e da COX-2 nos processos de inflamao do SNC necessita de melhor entendimento e poder contribuir para novas intervenes teraputicas.

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