07 GPC 2013

INSTITUTO DE MACROMOLCULAS PROFESSORA ELOISA MANO UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO IMA - UFRJ
CROMATOGRAFIA DE PERMEAO EM GEL

Ricardo Cunha Michel LAFIQ
sala J-210 2562-7228 rmichel@ima.ufrj.br
IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013
ou CROMATOGRAFIA DE EXCLUSO POR TAMANHO

O experimento de GPC / SEC O princpio da tcnica Determinao relativa de Massa Molar Preciso e Exatido da tcnica O problema da relao entre massa molar e volume hidrodinmico
Cromatografia
Separar Reduzir a entropia Mtodos cromatogrficos, de uma forma geral,
- permitem a separao, quantificao e identificao de espcies qumicas; - separam os componentes de uma mistura pela distribuio destes componentes em duas fases que se encontram em contato, uma fase mvel e outra fase estacionria; - durante a passagem da fase mvel pela estacionria, os componentes da mistura so seletivamente retidos pela fase estacionria, o que resulta em migraes diferenciais destes componentes. - a reteno seletiva pode operar por mecanismos entrpicos ou entlpicos.
Cromatografia
Permeao em Gel ou Excluso por Tamanho
A Cromatografia de Permeao em Gel uma tcnica na qual existe um suporte fixo, um gel, que NO a fase estacionria, mas que a contm. Alm disto, espera-se que no haja interaes entre os componentes da amostra a separar e o suporte fixo, de modo que todo o processo cromatogrfico deve se dar apenas devido ao tamanho dos componentes da mistura. Este aspecto desta tcnica cromatogrfica justifica seu outro nome: Cromatografia de Excluso por Tamanho
Cromatografia de Excluso por Tamanho SEC

Tambm conhecida por GPC, cromatografia de permeao em gel, ou GFC, cromatografia de filtrao em gel, ou cromatografia em peneira molecular de difuso restrita. Permite obter a distribuio de Massa Molar, bem como os valores relativos de Massa Molar Numrica Mdia (Mn) e de Massa Molar Ponderal Mdia (Mw).
Cromatografia de Excluso por Tamanho

Esquema Bsico do Aparelho
IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013 Esta imagem pode ter Direitos Autorais

processamento de dados seringa garrafa contendo a fase mvel
'loop' coluna detector
bomba isocrtica ou de gradiente

IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013 Estas imagens podem ter Direitos Autorais
injetor
descarte ou reuso

processamento de dados seringa garrafa contendo a fase mvel
'loop' coluna detector
bomba isocrtica ou de gradiente

injetor
descarte ou reuso

Como a Coluna de Separao? A coluna consiste de um tubo metlico recheado de pequenas esferas de polmero reticulado.
Obs.: esta foto apenas representa os poros das partculas que recheiam a coluna, sendo, de fato, imensamente maiores do que os poros reais.

Ao da Coluna de Separao

Qual o princpio desta cromatografia?

Descries do Princpio de Funcionamento
Um dos modos de descrever como a separao ocorre: as molculas pequenas o bastante para entrarem nos poros da resina, ao longo da coluna, so momentaneamente removidas do fluxo principal de solvente (excluso), necessitando de mais tempo para atravessar a coluna.
Outro modo de descrever este processo : as molculas que so pequenas o bastante para entrar nos poros da coluna tm acesso a um volume maior da mesma.
Como Calcular Massa Molar?

Massa Molar e sua Distribuio
Mx =
i
Ci Mi
n=0 : Mn n=1 : Mw n=2 : Mz n=3 : Mz+1
Concentrao (g/mL)
C i M i n 1
PD = Mw/Mn Massa Molar (g/mol)

Como a curva obtida no experimento de GPC?
tenso eltrica (volts)
tempo (minutos) ou volume (mL)

Precisamos obter da curva: valores relativos a Massa Molar e valores relativos a concentrao, para cada frao eluda atravs da coluna.

Mx =
Concentrao (g/mL)
C i M in i C i M i n1
i
n=0 : Mn n=1 : Mw n=2 : Mz n=3 : Mz+1
PD = Mw/Mn Massa Molar (g/mol)
Precisamos obter da curva: valores relativos a Massa Molar e valores relativos a concentrao, para cada frao eluda atravs da coluna.
volume de eluio massa molar (curva de calibrao) concentrao em cada volume de eluio (detectores de concentrao)
Curva de Calibrao
Injeo de padres M1, V1
volume de eluio em ml
Padres para GPC so amostras polimricas com distribuio estreita e conhecida de massa molar. As diferentes amostras de padro, cada qual com um diferente valor de massa molar, possuem a mesma relao entre massa molar e volume hidrodinmico. Assim, quanto maior a massa molar, maior o volume hidrodinmico e mais cedo esta amostra deixa a coluna. Os padres de M.M. conhecida so injetados para que se obtenha o volume de eluio de cada um deles neste equipamento, coluna, solvente e temperatura.
M2, V2
M3, V3
M4, V4
Curva de Calibrao
Bsica: volume de eluio versus massa M1, V1
Com os pares de pontos log(Mi) e Vi traa-se um grfico e calcula-se a melhor reta, cujos parmetros so a e b. Isto , y = a + b.x
log M i = a b.V e
log (Mw)
M2, V2
M3, V3
M4, V4
A massa molar de qualquer amostra que tenha a mesma relao entre massa e volume hidrodinmico que os padres e que deixe a coluna aps Ve dada por:
M i =10
a b.V e
Curva de Calibrao
Tempo de Eluio versus Volume de Eluio
Se medimos, de fato, o TEMPO de eluio, por qu fazemos as contas usando o VOLUME de eluio? Porque a curva passa a ser independente da vazo empregada!
Vei = vazo. t ei
Clculo de Massa Molar

O que falta?
Concentrao (g/mL)
Falta obter Ci
Volume de reteno massa molar
OK!

Sensores de Concentrao Os dois sensores principais utilizados para a medida da concentrao das alquotas fracionadas da amostra principal so: Detector de ndice de Refrao (RI) Detecta a diferena de ndice de refrao entre a soluo e o solvente empregado. Esta diferena funo da concentrao da amostra. Detector de UltraVioleta (UV) (Photodiode Array Detector - Matriz de Foto-diodos) Detecta a quantidade de luz ultra violeta absorvida em um ou vrios comprimentos de onda. Sendo conhecida a absorvncia e os parmetros da clula, esta quantidade proporcional a concentrao da amostra.
Sensores de Concentrao
Matriz de Foto-diodos alquota proveniente da coluna Clula de fluxo Fonte de UV O sinal em cada foto-diodo funo da absoro da amostra na faixa de Matriz de Foto-diodos comprimentos de onda detectados por este foto-diodo especfico. PC ADC
Grade de difrao
Sensores de Concentrao
Refratmetro Diferencial
A deflexo do feixe de luz funo da diferena entre o ndice de refrao da amostra e o ndice de refrao do solvente empregado.
Detectores
alquota proveniente da coluna Fonte de luz de comprimento de onda conhecido (branca, em alguns modelos)
Concentrao necessria
ou um valor proporcional a concentrao Estes sensores de concentrao geram um sinal eltrico, em Volts, cujo valor proporcional concentrao da alquota: Sinal (V) C ou seja: C = k.Sinal (V)
Ci = .si
Assim, as equaes para clculo de massa molar mdia podem ser descritas em termos do sinal eltrico gerado, sem a necessidade de se calibrar os sensores de concentrao para obter os valores das constantes .
Mx =
n C M i i
Ci M
n 1 i
n n . s M . s M i i = i i = Mx = n 1 n 1 . s M . s M i i i i
n 1 s M i i
n s M i i
Medida em SEC
Resumo
1) As colunas separam a amostra de acordo com os volumes hidrodinmicos das molculas presentes; 2) A amostra separada passa pelo detector de concentrao, o qual gera um sinal de tenso proporcional a concentrao da amostra; 3) Da curva obtida de sinal proporcional concentrao versus volume de eluio converte-se os valores de volume de eluio em valores de Massa Molar, utilizando a curva de calibrao previamente obtida; 4) Com a nova curva de sinal proporcional concentrao versus massa molar so calculados os valores de Massa Molar Mdia Numrica, Massa Molar Mdia Ponderal e polidisperso de acordo com as equaes mostradas.
Clculo dos Valores de Massa Molar

Preparao da curva obtida
Tipicamente, utiliza-se uma reta para fazer este ajuste.

Agora a curva est pronta para ser analisada, gerando os valores de Massa Molar.
massa molar
Clculo da Massa Molar e Polidisperso
Mx =
Concentrao (g/mL)
C i M in i C i M i n 1
i
n=0 : Mn n=1 : Mw n=2 : Mz n=3 : Mz+1
PD = Mw/Mn
Massa Molar (g/mol)

Clculo Automatizado
Exemplo em BASIC - primeira parte
INI: DEFDBL A-Z CLS rem A curva de calibracao INPUT "Entre com a inclinacao (b) ";R8 PRINT INPUT "Entre com a intersecao (a) ";R9 PRINT INPUT "Entre com intervalo de volume ";nit rem nit eh constante para simplificar o trabalho do usuario - os valores de volume de eluicao nao precisariam ser igualmente espacados PRINT PRINT
VE: rem os valores da rotina estatistica sao calculados durante a leitura dos dados a partir do teclado Q=0:R3=0#:R5=0#:R6=0#:R7=0#:N=0 PRINT"Press. <ENTER>":LINE INPUT S$:CLS INPUT "Entre com o volume de eluicao Ve para o primeiro valor de intensidade Hi <-1 p/ novas incl e interc> ", R7 IF R7=-1 then GOTO INI PRINT : PRINT PRINT "Entre com os valores de Hi, seguidos de <RETURN>.<-1 indica fim dos dados>" rem os valores de hi ja tiveram a linha de base subtraida PRINT
Clculo Automatizado
Exemplo em BASIC - segunda parte
entr: N = N + 1: INPUT X: PRINT " IF X = -1 THEN goto RES 'rotina estatistica Q = R7 * R8 + R9 R3 = R3 + X R5 = R5 + X * EXP(Q) R6 = R6 + X / EXP(Q) R7 = R7 + nit goto entr RES: PRINT : PRINT "Mw = "; INT(R5 / R3) PRINT "Mn = "; INT(R3 / R6) PRINT "Mw/Mn = "; INT((R5 / R3) / (R3 / R6) * 100) / 100 goto VE "; CHR$(30); "<---"; N; CHR$(167);" Hi" rem truquezinho grafico meio ultrapassado, este do chr$30 - S funciona em DOS
Programa desenvolvido no IMA para clculo de M.M. por GPC
Massas Molares Mdias obtidas por GPC

So valores relativos e no absolutos!
Os valores de massa molar obtidos para uma dada distribuio so calculados a partir de uma curva de calibrao, obtida para amostras padro. Assim, os valores de massa molar obtidos so ditos serem valores relativos.
Preciso e Exatido
na tcnica de GPC
..
preciso: (repetitividade) melhor do que 5%
exatido ou acurcia: (concordncia com o valor verdadeiro) em torno de 10%

O problema da calibrao
Relao entre massa molar e volume hidrodinmico
Uma amostra com a mesma massa do padro 2, porm de um polmero mais rgido, ser mais aberta, isto , ter um volume hidrodinmico maior e sair mais cedo da coluna. De acordo com esta curva de calibrao, ser como se a amostra tivesse uma massa molar maior do que sua massa real.
M1, V1
M2, V2
ln (Mw)
M3, V3
M4, V4
MASSA MOLAR E VOLUME HIDRODINMICO

Massa Molar versus Volume Hidrodinmico Fatores que afetam o Volume Hidrodinmico Conformao e Configurao (Rigidez, Ramificaes etc.)
Volume Hidrodinmico e Massa Molar

Em SEC a separao se d por Volume Hidrodinmico
De fato, a tcnica de SEC no separa as molculas de acordo com suas massas molares, mas de acordo com o volume hidrodinmico que apresentam. Assim, a curva de calibrao obtida s vlida para amostras que possuam a mesma relao entre massa molar e volume hidrodinmico que aquela apresentada pelos padres empregados.

O que Volume Hidrodinmico?
O Volume Hidrodinmico indica quo grande o novelo em soluo. O volume hidrodinmico no informa sobre a distribuio de massa no interior do novelo. Para uma dada amostra, quanto maior for sua massa molar, maior ser seu volume hidrodinmico.

Fatores que afetam esta relao
Os fatores que afetam a relao entre Vh e M.M. so: Configurao da cadeia polimrica Conformao da cadeia polimrica Interao entre o polmero e o solvente Temperatura

exemplos Mesmo valor de massa molar, mas diferentes valores de volume hidrodinmico
cadeia mais aberta, maior Vh cadeia mais fechada, menor Vh
Mesmo valor de volume hidrodinmico, mas massas molares distintas:
Massa Molar Relativa...

...quer dizer mais do que se imagina!
Quando se usa um padro de massa molar que no possui a mesma relao entre Vh e MM que o polmero-problema, ento a massa molar obtida ser relativa tambm ao tipo de padro usado: relativa por ter sido calculada com o uso de padres de massa molar e relativa ao tipo de padro usado!
O que realmente significa quando se diz que a amostra apresenta certo valor de Massa Molar?
Quando se diz: A massa do polmero-problema foi calculada usando padres de PS, obtendo-se o valor de 100.000 g/mol. ou: A massa do polmero-problema foi calculada em 100.000 g/mol em relao a padres de PS. ...na verdade o que se quer transmitir : O polmero-problema apresenta o mesmo volume hidrodinmico que PS de massa molar igual a 100.000 g/mol.
Curvas de Calibrao
Calibrao com Padres de Distribuio Estreita de Massa Molar Calibrao com Amostras de Distribuio Larga de Massa Molar Calibrao Universal Quando cada tipo de calibrao mais eficaz Tcnicas Absolutas em GPC
Calibrao com Padres de Distribuio Estreita
Calibrao com Padres de Distribuio Estreita

Injeo de padres M1, V1
Padres para GPC so amostras polimricas com distribuio estreita e conhecida de massa molar. As diferentes amostras de padro, cada qual com um diferente valor de massa molar, possuem a mesma relao entre massa molar e volume hidrodinmico. Assim, quanto maior a massa molar, maior o volume hidrodinmico e mais cedo esta amostra deixa a coluna. Os padres de M.M. conhecida so injetados para que se obtenha o volume de eluio de cada um deles neste equipamento, coluna, solvente e temperatura.
M2, V2
M3, V3
M4, V4
Curva de Calibrao
Bsica: volume de eluio versus massa M1, V1
Com os pares de pontos log(Mi) e Vi traa-se um grfico e calcula-se a melhor reta, cujos parmetros so a e b. Isto , y = a + b.x
log M i = a b.V e
log (Mw)
M2, V2
M3, V3
M4, V4
A massa molar de qualquer amostra que tenha a mesma relao entre massa e volume hidrodinmico que os padres e que deixe a coluna aps Ve dada por:
M i =10
a b.V e
Curva de Calibrao
Relao entre Massa Molar e Volume de Eluio Ajuste Polinomial
log (Mi)
linear
log M i = a b.V e
quadrtico (2a ordem)
log M i = a b.V e c.V 2 e

Volume de Eluio
cbico (3a ordem)

3 log M i = a b.V e c.V 2 d.V e e
Alguns fabricantes de colunas sugerem que se use polinomiais de 5 a ordem!!! Isto por qu a distribuio de volume dos poros no recheio da coluna no linear!
Curva de Calibrao
Limites de Excluso
Ve = V0 + KVP
Ve = volume de eluio V0 = volume intersticial Vp = volume dos poros K = coeficiente de distribuio do soluto O pico em (A) indica algum tipo de repulso entre as molculas do polmero (excluso inica). V0
VP
V0+VP
-O pico em (C) indica adsoro do polmero pelo material da coluna. -O modo como este polmero elui poderia ser representado pela curva indicada em (B) (interaes hidrofbicas ou hidroflicas).
Curva de Calibrao
Alguns Exemplos
Curva de Calibrao
Ateno aos limites da curva! No extrapolar!
Sempre observar com ateno os picos em torno de Vo e de Vo+Vp ! Uma amostra com molculas que ultrapassem os limites de eluio da coluna poder se apresentar da seguinte forma: Parece bimodal, no? Mas no ! Vejam:
Todas as molculas maiores do que o limite de excluso sairo juntas da coluna, isto , sero acumuladas no volume de eluio V o, parecendo constituir um pico. O mesmo tipo de problema pode ocorrer com molculas menores do que o limite da coluna, as quais sairo em torno de V o+Vp.
Curva de Calibrao
Padres Comuns
Padres para GPC orgnico: poli(metaacrilato de metila) poli(isoprenos) polibutadienos poli(THF) Padres para GPC aquoso: poli(etileno glicol) poli(xido de etileno) pululanas Polidisperso usual: < 1,1
Calibrao com Amostras de Distribuio Larga
Calibrao com Amostras de Distribuio Larga

Injeo de padres
Nesta tcnica, para se realizar a anlise de uma dada amostra-problema, injeta-se na coluna um padro de distribuio larga e de massa molar conhecida. Este padro pode ser comercial ou, se possvel, do mesmo polmero sendo analisado. A curva de distribuio obtida para este padro, na mesma coluna e condies na qual se analisar a amostra-problema. De posse desta curva de distribuio e dos valores conhecidos de M w e de Mn para o padro, calcula-se por um mtodo iterativo a curva de calibrao que ser empregada para a anlise das amostras-problema. conveniente empregar pelo menos dois padres ao usar esta tcnica. Os pontos da curva de calibrao correspondem a M n e a Mw de cada um dos padres empregados.
Calibrao Universal
Calibrao Universal
em duas formas diferentes
Existem duas formas de realizar a Calibrao Universal: A primeira delas a calibrao universal clssica, para a qual se utiliza um viscosmetro em linha com o sistema de GPC . Em um mesmo volume de eluio, as amostras problema e padro apresentaro um mesmo volume hidrodinmico e, portanto, um mesmo valor para o produto [].M. Uma vez dispondo deste produto para o padro, basta medir a [ ] da amostra problema em cada alquota e calcular seu valor de M. Caso o equipamento no disponha de um viscosmetro em linha , pode ser usada a segunda forma de construo da calibrao universal. Esta forma combina os princpios da calibrao universal com a equao de Mark-Houwink-Sakurada. Neste caso, obtm-se M da amostra-problema em relao a uma curva construda com padres de distribuio estreita. Este valor de M , ento, corrigido, usando-se para tal os valores de K e de a da amostra problema e do padro.
Calibrao Universal
Para sistemas com viscosmetro em linha
- Polmeros com o mesmo volume hidrodinmico (VH) eluiro no mesmo volume de eluio; - A interao do polmero com o solvente ir se refletir no valor de viscosidade intrnseca, []; - Segundo Einstein
VH . M V
Assim,
[]1.M1 = []2.M2
- Medindo o valor de [] para padres de massa molar conhecida, e verificando seus volumes de eluio, pode-se traar a curva log([].M) versus volume de eluio a qual consistir na curva de calibrao para este polmero. - Mede-se Ve para cada alquota da amostra-problema e obtm-se da curva de calibrao seu valor de [].M. Divide-se este valor por [] medido no viscosmetro para esta alquota e obtm-se M da alquota. - As curvas de calibrao para uma grande variedade de polmeros orgnicos so sobreponveis, por isto o nome Calibrao Universal.
Calibrao Universal
curvas para vrios polmeros em uma mesma coluna
log([].M)
volume de eluio
Calibrao Universal
Para sistemas sem viscosmetro em linha
Do princpio de calibrao universal: Substitui-se [] pelo valor da equao de Mark-Houwink-Sakurada: Desta forma se obtm:
K1 . M 1
1 a1
[ 1 ] . M 1=[ 2 ] . M 2 [ ]= K.M
1a 2 a
=K 2. M 2
Isolando M1 nesta equao:
K M 1i= K1
1 2 1 a1
.M
1 a2 1 a1 2i
M2 obtido para a amostra-problema a partir do V e e de uma curva de calibrao com padres de distribuio estreita. Se forem conhecidos 'K' e 'a' para as amostras padro e problema, obtm-se M1, o valor corrigido de massa.
Curva de Calibrao Universal

e a equao de Mark-Houwink-Sakurada Curva de Calibrao Universal
log([].M)
log([ ].M) versus Ve
volume de eluio
Mark-Houwink
log([])
log [ ] versus log M a

log (M)
log k
a a inclinao e log(K) a interseo da curva mostrada
[] = KMa
Tcnicas Absolutas em GPC

Descrio sucinta
Espalhamento de Luz Esttico SLS
Osmometria de Membrana
Mi =
RTci i


As Colunas
Recheios Definio de termos Escolha das colunas Eficincia, seletividade e resoluo Contribuies para o alargamento dos picos Condies timas de anlise Contaminao, entupimento, controle de presso Proteo das colunas
Colunas de GPC
Recheios
Caractersticas desejadas: Inrcia qumica, estabilidade nas condies desejadas de pH e temperatura, reduzida interao com a amostra etc. Recheios comuns de colunas para gua: Gis de dextrana (ex.: Sephadex da Pharmacia) Gis de poliacrilamida (ex.: Bio-Gel da Bio-Rad) Glicose-Divinilbenzeno Gis de gar, agarose, Sepharose etc. (para GPC em baixa presso) Recheios comuns de colunas para solventes orgnicos : Divinilbenzeno Divinilbenzeno sulfonado Poliestireno-Divinil benzeno Poli(meta acrilato de metila) Os recheios podem ser melhor escolhidos se for conhecida a aplicao especfica que se deseja para o equipamento.
Curva de Calibrao
Alguns Exemplos
Escolha da Coluna de Separao

de acordo com sua Curva de Calibrao
Neste exemplo, a coluna 2 separa melhor as amostras A, B e C. Deseja-se que pequenas variaes de VH nas amostras levem a grandes variaes no volume de eluio de seus picos. Assim, deve-se escolher sempre as colunas de separao cuja curva de calibrao apresente a MENOR inclinao na faixa de massa molar das amostras de interesse.

observar as sugestes dos fabricantes
Qualidade da Separao - RESOLUO

O que ? do que depende?
Alta resoluo significa boa seletividade (grande mudana em Ve para pequenas mudanas em R H) e grande eficincia (pequeno alargamento de bandas - pequeno W).
Seletividade
O que ?
Seletividade a habilidade de separar os picos entre si. Em GPC uma boa seletividade significa que a coluna capaz de levar a uma grande mudana no volume de eluio para pequenas mudanas no raio hidrodinmico das amostras.
baixa seletividade
grande seletividade
Seletividade
Como medir?
A seletividade pode ser medida pela separao relativa entre os picos de interesse:
t R1 t 0 = t R 2 t0
A seletividade pode ser melhorada alterando-se o coeficiente de distribuio. Para uma dada coluna, isto se consegue atravs de mudanas no solvente. Isto justifica o uso de bombas-gradiente.
Eficincia
O que ?
Eficincia est relacionada com a faixa de valores de volume de eluio que correspondem a um mesmo valor de volume hidrodinmico, isto , eficincia est relacionada ao alargamento dos picos. Grande eficincia significa que os picos so estreitos. Uma medida de eficincia o nmero de pratos tericos de uma dada coluna, que relaciona a largura do pico com o tempo que a amostra ficou retida na coluna.
alta eficincia baixa eficincia

A eficincia pode ser controlada alterando-se a vazo da fase mvel e evitando irregularidades na mesma.
Verificando a Eficincia
Nmero de Pratos Tericos
t R1 N =5,54 . w 1 /2
Quanto maior o comprimento da coluna, maior o nmero de pratos tericos, mas maior ser a presso. Para indicar a eficincia em uma dada coluna, de forma independente de seu comprimento, indica-se a altura equivalente de um prato terico, HETP.
Altura Equivalente a um prato terico (HETP) HETP = comprimento da coluna / N
Eficincia de Separao
Alargamento de Bandas Fora da Coluna
Todos os tubos, clulas de fluxo e conectores pelos quais as fraes eludas passaro contribuem para o alargamento das bandas!
Para reduzir este efeito de alargamento: * usar tubos com dimetro interno reduzido; * usar conectores sem volume morto; * usar clulas dos detectores que no diluam ou misturem zonas separadas; * as fraes coletadas devem ser de volume reduzido, para preservar a separao obtida.
Eficincia, Seletividade e Resoluo

Relao entre os termos Resoluo OK ?
eficincia boa
eficincia ruim
OK!
seletividade boa
OK!
OK!
seletividade ruim
NO!
Alargamento da Curva
Difuso
Difuso ao longo do comprimento da coluna.
em funo da Vazo
Transferncia de massa para dentro e para fora dos poros do recheio.
Os Efeitos Principais
Efeitos Combinados - Condies timas de anlise
Efeitos Combinados - em funo do tamanho molecular
importante notar que algumas das figuras ou tabelas utilizadas neste material podem ter restries para uso no acadmico, por questes de copyright, de deciso de seus proprietrios, sendo usadas aqui de acordo com as condies de "fair use". O material, figuras e tabelas de minha autoria podem ser usados para finalidades didticas, usando a seguinte forma de citao: Ricardo Cunha Michel; Mtodos Fsicos Aplicados a Polmeros (MMP-712); Anotaes de aula; Instituto de Macromolculas Professora Eloisa Mano, IMA/UFRJ, Rio de Janeiro, 2012.
FIM

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CROMATOGRAFIA DE PERMEAO EM GEL

ou CROMATOGRAFIA DE EXCLUSO POR TAMANHO

IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013

IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013

Cromatografia de Excluso por Tamanho SEC

Cromatografia de Excluso por Tamanho

Cromatografia de Excluso por Tamanho

'loop' coluna detector

bomba isocrtica ou de gradiente

Cromatografia de Excluso por Tamanho

'loop' coluna detector

bomba isocrtica ou de gradiente

Cromatografia de Excluso por Tamanho

Cromatografia de Excluso por Tamanho

Cromatografia de Excluso por Tamanho

Cromatografia de Excluso por Tamanho

Como Calcular Massa Molar?

n=0 : Mn n=1 : Mw n=2 : Mz n=3 : Mz+1

PD = Mw/Mn Massa Molar (g/mol)

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Como Calcular Massa Molar?

tenso eltrica (volts)

tempo (minutos) ou volume (mL)

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Como Calcular Massa Molar?

tenso eltrica (volts)

tempo (minutos) ou volume (mL)

Como Calcular Massa Molar?

tenso eltrica (volts)

n=0 : Mn n=1 : Mw n=2 : Mz n=3 : Mz+1

PD = Mw/Mn Massa Molar (g/mol)

tempo (minutos) ou volume (mL)

Clculo de Massa Molar

Volume de reteno massa molar

Como Calcular Massa Molar?

IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013

Clculo dos Valores de Massa Molar

Tipicamente, utiliza-se uma reta para fazer este ajuste.

IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013

Clculo da Massa Molar e Polidisperso

n=0 : Mn n=1 : Mw n=2 : Mz n=3 : Mz+1

Massa Molar (g/mol)

IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013

IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013

Programa desenvolvido no IMA para clculo de M.M. por GPC

Massas Molares Mdias obtidas por GPC

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preciso: (repetitividade) melhor do que 5%

exatido ou acurcia: (concordncia com o valor verdadeiro) em torno de 10%

MASSA MOLAR E VOLUME HIDRODINMICO

Volume Hidrodinmico e Massa Molar

Volume Hidrodinmico e Massa Molar

Volume Hidrodinmico e Massa Molar

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Volume Hidrodinmico e Massa Molar

Mesmo valor de volume hidrodinmico, mas massas molares distintas:

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Massa Molar Relativa...

IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013

IMA CT / UFRJ Ricardo C. Michel v. 2013

Calibrao com Padres de Distribuio Estreita

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