COOMBS DIRETO

O teste de Coombs direto usado no diagnstico de doenas auto-imunes e

doena hemoltica do recm-nascido. Ele detecta anticorpos ligados
superfcie das hemcias.
PRINCPIO DO TESTE
O soro Anti-IgG (Soro de Coombs) destina-se pesquisa de anticorpos da
frao gamaglobulina humana, quer estejam adsorvidos s hemcias humanas
in vivo (Teste de Coombs Direto).
COLETA DA AMOSTRA
O sangue deve ser coletado por procedimento assptico aprovado, com ou
sem adio de anticoagulante. As hemcias obtidas de cogulo podem ser
utilizadas em at 5 dias aps sangria. As amostras coletadas em EDTA ou
Heparina devem ser utilizadas em at 48 horas. Se a demora para a execuo
do teste for inevitvel, hemcias de sangue coagulado e as colhidas em EDTA
ou Heparina devem ser separadas do soro/plasma, lavadas e ressuspendidas
em soluo preservativa de glbulos. Estocar a 2 a 8 C, por no mximo, 20
dias. O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser
utilizado at a data de expirao, se armazenado entre 2 e 8C. O
armazenamento prolongado de hemcias antes da execuo do teste pode
causar deteriorao de antgenos e resultar em reaes mais fracas.
PROCEDIMENTO DO TESTE

TESTE DE COOMBS DIRETO OU TESTE DA ANTIGLOBULINA DIRETO
Este teste empregado na pesquisa de anticorpos (gamaglobulinas) j fixados
s hemcias, como ocorre na Doena Hemoltica do RecmNascido, Anemia
Hemoltica Adquirida e em pacientes que tenham recebido transfuses
incompatveis.
1. Colocar em um tubo de hemlise uma gota de suspenso de hemcias
do paciente a 5%, previamente preparadas em soluo salina 0,9%.
2. Lavar as hemcias do tubo por trs vezes com soluo salina 0,9%.
Desprezar o sobrenadante, secando as bordas do tubo na ltima
lavagem para retirar toda a soluo.
3. Acrescentar quatro gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs). Misturar
bem.
4. Centrifugar a 3 400 rpm por 15 segundos.
5. Incubar durante 30 minutos a 37C.
6. Voltar a centrifugar durante 1 minuto.
7. Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no de
aglutinao.

INTERPRETAO:
POSITIVO: (Presena de aglutinao): Presena de anticorpos livres no soro
do paciente, os quais correspondem a um ou mais antgenos presentes nas
hemcias usadas no teste.
NEGATIVO: (Ausncia de aglutinao): Sem presena de anticorpos livres no
soro do paciente.

LIMITAES DO PROCEDIMENTO TCNICO
Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer:

1. Quando as hemcias no forem apropriadamente lavadas ou globulinas
humanas estiverem presentes na vidraria, resultando numa
neutralizao das antiglobulinas humanas.
2. Quando os anticorpos se eluem das hemcias durante incubao
inadequada, no permitindo uma apropriada sensibilizao dos glbulos.
3. Quando hemcias e/ou reagente no so adequadamente conservados
na temperatura indicada, perdendo a reatividade.
4. Quando o Soro Anti-IgG (Soro de Coombs) foi omitido durante o teste.


Resultados FALSO-POSITIVOS podem ocorrer:

1. Quando so utilizadas amostras de sangue contaminado.
2. Quando for realizada uma centrifugao excessiva.
3. Quando o soro, as hemcias e o Soro Anti-IgG(Soro de Coombs)
estiverem excessivamente frios, detectando a presena de aglutininas
frias.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

1-Walker Rh, ed. Technical Manual. 11
th
Edition. Bethesda: AABB, 1993.
2-Race R.R and Sanger R. Blood Groups in Man, 6
th
Edition Oxford Blackwell
Scientific Publishers,1975.
3-Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine. 7
th
Edition. Oxford
Blackwell Scientific, 1983.
4-Guidelines for the Blood Transfusion Service H.M.S.O.