Resumos Processos PDF

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Apontamentos de Processos de Oxidao-Reduo

Licenciatura em Bioqumica
Alexandra Salvado, n 40267
O catabolismo no 100% eficiente na captao de energia
Captulo 1 Bioenerge tica
Padres no metabolismo: Eficincia da conservao da energia

A energia perdida no deve ser considerada um desperdcio porque:
1. Aparece na clula sob a forma de calor, ajudando a manter a
temperatura do organismo acima da temperatura do ambiente;
2. Assegura que a via global vai no sentido decrescente em termos
de energia e, portanto, mantem um fluxo atravs da via na
direco correcta;
3. Assegura que mesmo nas condies fisiolgicas mais
desfavorveis que podem acontecer ([glucose] baixa e [NADH]
alta) a organizao para a partio energtica pode funcionar
com a mesma estequiometria;
4. As reaces de no-equilbrio, que dissipam energia, permitem o
controlo do metabolismo.

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Energia

Energia a capacidade de efectuar trabalho. Trabalho movimento
contra uma fora contrria (Unidade S.I. do trabalho J=1kg
2
ms
-2
)
Existem duas contribuies para a energia total (E) de um conjunto de
partculas:
E = Ek+ Ep
Energia cintica, (Ek): a energia de um corpo devida ao seu
movimento
Ek= mv
2

Energia potencial, (Ep): a energia que um corpo possui devido sua
posio
Ep= mgh

Distribuio de Energia nos seres vivos

Energia cintica (movimento) Energia potencial (posio)
Calor (Energia trmica) energia
do movimento molecular nos
organismos
Energia de ligaes energia das
ligaes covalentes e no covalentes
Energia radiante energia dos
fotes
Energia qumica energia da
diferena de concentrao atravs de
uma membrana permevel (quanto
maior a diferena, maior a energia)
Energia eltrica energia do
movimento de partculas
carregadas (quanto maior a
velocidade, maior a energia)
Energia eltrica energia devida
separao de cargas.

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Conservao de Energia: Conceitos bsicos

Em termodinmica (cincia que estuda as trocas de
energia que ocorrem numa poro de matria) existem 3 tipo
de sistemas (poro de matria) a ser estudados:

1. Sistema Isolado (ou adiabtico) no troca matria nem
energia com o exterior;
2. Sistema fechado apenas troca energia com o exterior;
3. Sistema aberto troca matria e energia com o exterior.

Trabalho e Calor

Os organismos vivos, que so sistemas abertos, trocam energia com o
exterior na forma de calor e trabalho.

Calor (Q) Processo de transferncia de energia como resultado da
diferena de temperatura entre os sistemas e os seus exteriores.

C Capacidade calorfica
T Variao de Temperatura

Processo exotrmico processo que ocorre no sistema que aquece o
exterior;
Processo endotrmico processo no sistema que aquecido pelo
exterior.
Q = CT

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Trabalho (W) movimento contra uma fora contrria (S.I. = Joule).
O trabalho nas clulas vivas pode ser mecnico (sntese se RNA, movimento
dos cromossomas), eltrico e osmtico (gradiente de concentraes ou ies
nas membranas) ou sinttico (sntese de compostos formao de ligaes
qumicas).

Trabalho necessrio para levantar uma massa (m) atravs de uma
altura (h) na superfcie da terra (g=9,8 ms
-2
).

Quando um sistema faz trabalho, a energia
transferida negativa:

Trabalho e calor so MODOS de transferncia de energia
e NO FORMAS de energia.
W = -pextV

W = mgh

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Energia Interna
A energia interna, U, uma propriedade que nos indica a energia total
do sistema. Esta propriedade impossvel de determinar, no entanto, podemos
determinar a variao de energia interna, U.

Q Energia transferida para o sistema por calor
W Energia transferida para o sistema por trabalho

A energia interna, U, uma funo de estado, pois depende apenas
do estado presente. O facto de a energia interna ser uma funo de estado
implica que que a variao na energia interna, U, entre dois estados de um
sistema seja independente do caminho entre esses estados.

1 Lei da Termodinmica A energia interna de um sistema isolado
constante.
U = Q + W
W = -PV
U = Q + (-PV)
Quando o volume constante, W=0:

Qv = (calor a volume constante)

No entanto, os processos na clula nem sempre ocorrem a volume
constante, mas sim a presso constante surge o conceito de Entalpia.

U = Q + W

U = Qv

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Entalpia
A entalpia, H, de um sistema definida como:

H = U + pV
H = (U + pV)
H = U + pV + Vp

Se a presso for constante, p = 0:

H = U + pV
H = Q + W + pV
H = Q - pV + pV

H o calor transferido num processo a presso constante.

Reagentes Produtos
H positivo H negativo
Reao endotrmica Reaco exotrmica
Produtos tm maior energia Produtos tm menor energia
A reaco necessita de
energia sob a forma de calor
A reaco liberta energia
como calor
H = Q

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Entropia
A medida da disperso de energia ou matria denominada entropia,
S, sendo que quando a matria e a energia se dispersam de um modo
desordenado, a entropia aumenta. Tanto a matria como a energia, tendem a
dispersar-se de um modo desordenado.

2 Lei da Termodinmica A entropia de um sistema isolado tende a
aumentar:
Ssistema + Sexterior = Suniverso > 0

Entropia e Organismos vivos A variao de entropia no sistema
quando sofre uma mudana reversvel a presso constante que resulta em
transferncia de calor para o exterior dada por:

Variao de Entropia no exterior Variao de entropia do exterior
em contacto com o sistema temperatura T dada por:

Entropia e Energia de Gibbs Apesar de no ser possvel medir
directamente as mudanas de entropia no resto do universo causada pelo fluxo
de energia que atravessa a fronteira do sistema, este parmetro pode ser
calculado sob condies de temperatura e presso constantes a partir do
fluxo de entalpia (calor).

A funo termodinmica que tem em conta este fluxo de entalpia a
variao da energia de Gibbs, G.

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Para uma reaco ocorrer espontaneamente, Stotal > 0.
A entropia s aumenta se G < 0.

G < 0 Reao espontnea (exergnica)
G > 0 Reaco espontnea no sentido contrrio (endergnica)
G = 0 Sistema em equlibrio

Estados Padro para Bioqumicos

G est directamente relacionada com a constante de equlibrio:

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Relao entre K e G e sentido da reaco em condies
padro:
G = Gprodutos Greagentes

Quando Keq : G : A reaco:
> 1 Negativo Avana no sentido directo
1 Zero Est em equilbrio
< 1 positivo Avana no sentido contrrio

As variaes reais de energia livre dependem da
concentrao de reagentes e produtos

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O critrio para a espontaneidade de 1 reao G e no G!

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Potencial Qumico e Electroqumico

Potencial Qumico

Para o caso de um composto qumico o potencial qumico um
anlogo energia potencial.
Um sistema ir reagir de modo a que um composto A com alto
potencial qumico se transforme noutro B, de potencial mais baixo.
No equilbrio:

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Potencial Electroqumico

No equilbrio as diferenas de potencial e de concentrao devem
anular-se.
No equilbrio: A = B

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Captulo 2 Papel central do ATP no metabolismo
Variaes de Energia Livre so Aditivas

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ATP Trifosfato de Adenosina
O ATP uma molcula importante no metabolismo pois pode funcionar
tanto como dador de energia como aceitador de energia.
A sua funo a de armazenar a energia disponvel, quando a comida
oxidada assim como a de fornecer energia a uma grande variedade de
processos, como o caso da contraco muscular.

Que razes levam a hidrlise do ATP a ter uma variao
de Energia de Gibbs alta e negativa?

1. H uma diminuio da repulso electroesttica tenso das
ligaes aliviada pela separao de cargas aps a hidrlise;
2. Os produtos da hidrlise (ADP e Pi) so estabilizados por
ionizao e ressonncia O ATP tambm pode ser estabilizado por
ressonncia, no entanto como os oxignios esto entre 2 fosfatos, a
probabilidade menor;
3. H um aumento da entropia, pois aumenta o n de molculas em
soluo;
4. H uma menor energia de solvatao do ADP e Pi relativamente
ao ATP
As constantes de equilbrio no so aditivas.
Elas multiplicam-se!

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G varia com a concentrao de ATP, ADP e Pi

Potencial de fosforilao o G para a sntese do ATP com valor
simtrico ao G da hidrlise do ATP.

Efeito do Mg
2+
no G da reaco de Hidrlise do ATP
O ATP no est l i vre na cl ul a, normal ment e, est acopl ado ao
i o magnsi o, por isso os val ores de G t ambm est o associ ados s
concentraes de Mg
2+
para a reaco de hidrl ise do ATP.

Efeito do pH no G da reaco de Hidrlise do ATP

Como o pH vari a muit o pouco em
ambi ent es bi ol gicos (pH~7), o ef eit o do mesmo
no val or de G , normal ment e, pequeno como
se pode ver pel a f i gura ao l ado, onde ao val or de
pH 7 o val or de G para a hi drlise do ATP de
-35,7 kJ/mol quando o val or dest a de -30, 5.

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O mito da ligao fosfato de alta energia

Pela tabela anterior deve ficar claro que o que define a capacidade dos
reagentes para realizar trabalho a proporo de massa que deslocada do
equilbrio e no a participao de um nico componente.

Exemplo:
Uma clula hipottica pode utilizar qualquer reaco para transformar
energia (transduo) a partir do mitocndrio. Por exemplo, se a reaco do 6-
fosfato de glucose fosse mantida 10 ordens de grandeza longe do equilbrio,
ento a hidrlise do 6-fosfato de glucose era to capaz de produzir trabalho na
clula como o ATP.

O ATP transfere energia por transferncia de grupo e no
por hidrlise simples

Em reaces que participem ATP, GTP, ADP (e semelhantes) ocorre
transferncia de energia devido transferncia do grupo fosforilo e no a
hidrlise simples (maior parte das reaces bioqumicas).
Pode haver excepes na contraco muscular, por exemplo, ocorre
a hidrlise do ATP.

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Potencial de transferncia de grupo: Variao da energia de Gibbs
devida transferncia de um grupo funcional de um composto para outro
composto, geralmente a gua.

O ATP cineticamente estvel em soluo a pH 7

Os compost os de al t a energi a, que
cont m f osf at o, so mais ou menos
inst veis, cont udo o ATP ci neticament e
est vel , in vivo, no se hidrol isando.
A energi a de act i vao da hidrl ise
do ATP el evada.
A cli vagem da l i gao s rpi da
quando cat alisada enzi maticament e.

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O fluxo de electres nas reaces redox responsvel por
todo o trabalho realizado pelos organismos vivos!

Captulo 3 Transporte Electro nico Mitocondrial
Reaces de Oxidao-Reduo Biolgicas

Os electres so doados por vrios intermedirios metablicos para
transportadores de electres especiais, por meio de reaces catalisadas por
enzimas.
Os transportadores transferem os electres para aceitadores de
elevada afinidade (com libertao de energia), denominados transdutores.

As reaces redox podem ser descritas como semi-reaces:

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A transferncia de electres do dador para o aceitador, pode dar-se
das seguintes maneiras:
1. Directamente como electres

2. Como tomos de hidrognio

3. Sob a forma de um io hidreto (:H
-
) exemplo dos NAD-
desidrogenases

4. Combinao directa com O2

Potencial de Reduo (E)

Equao de Nernst
O potencial de reduo padro (E) mede a tendncia de ocorrncia de
uma reaco redox.
E = potencial elctrico gerado por uma reaco redox tendo como
referncia um elctrodo de hidrognio (EH+/H2=0), quando a concentrao das
espcies reduzida e oxidada 1 M.
O potencial de reduo depende das concentraes relativas de
reagentes e produtos:

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Os potenciais de reduo padro podem ser usados
para medir as variaes de energia de Gibbs!

Reaces Redox envolvendo H
+

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Formao de ATP

Anaerobiose

Em anaerobiose, a partir da glucose, s se se obtm duas molculas
de ATP, o que se traduz em muito pouca energia. Surge assim outro
mecanismo, a respirao.

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Respirao Mitocondrial
o novo mecanismo utilizado, de modo a produzir mais energia
(ATP) ciclo do TCA (ciclo dos cidos tricarboxlicos) nos mitocndrios.

Segundo Eugene Kennedy e Albert Lehninger (1948) mitocndrios
isolados so capazes de efectuar todas as reaces do ciclo do cido ctrico e
o transporte de electres de substratos como o succinato para o O2. Este fluxo
de electres est acoplado com a formao de ATP.

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Componentes da Cadeia Respiratria Mitocondrial
A cadeia respiratria transfere electres desde o par NAD
+
/NADH at
ao par O2/2H2O.
Os transportadores redox da cadeia transportadora podem ser:

Transportadores de electres Transportadores de electres e H
+

Citocromos Flavinas
Protenas de Ferro-Enxofre (Fe-S) Ubiquinona

Citocromos
Os citocromos foram os primeiros componentes a ser detectados,
devido ao seu espectro no visvel sensvel a reaces redox.
Um nico citocromo exibe uma banda de absoro principal na sua
forma oxidada, enquanto a maioria dos citocromos mostram trs bandas de
absoro, quando reduzidas.

Sequncia dos citocromos no transporte mitocondrial
Em condies anaerbias os citocromos ficavam rapidamente
reduzidos; na presena de O2 ficavam oxidados;
CN
-
, CO e azeto bloqueavam a oxidao dos citocromos pelo O2;

Banda citocromos em
preparao mitocondrial.
Nos mitocndrios encontram-se os
3 citocromos (a,b e c) em banda .
Esta banda desaparece quando os
citocromos sofrem processos redox.

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Citocromo c oxidase enzima respiratrio
Outros tipos de inibidores (amytal, rotenona e malonato)
bloqueavam a reduo dos citocromos;
Citocromo c purificado no era oxidado directamente pelo O2 mas
era oxidado pelo O2 na presena de um extracto de msculo capaz de
oxidar o sucinato

Protenas de Ferro-Enxofre (Fe-S)

As protenas de ferro-enxofre
contm tomos de ferro (Fe) ligados
covalentemente apoprotena atravs de
pontes persulfureto das cistenas e a outros
tomos de ferro. Os centros Fe-S podem
conter dois ou quatro tomos de Fe, apesar
de cada centro actuar somente como um
transportador de electro.

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Ubiquinona

A ubiquinona, nos mitocndrios,
existe em maior quantidade que os
citocromos.
A semiquinona desempenha um
papel importante tanto no centro de reaco
fotossinttica como no complexo bc1 do
citocromo, onde estabilizada por locais de
ligao nas protenas.
A reduo da ubiquinona e a
oxidao do ubiquinol iro sempre ocorrer
em centros catalticos das protenas de
membrana.

Flavinas
Existem dois tipos de flavinas: o FMN (NADH desidrogenase) e o FAD
(Succinato desidrogenase) na membrana interna. Na matriz o FAD pode ser
Acilo gordo CoA ou Flavoprotena de transferncia de electres-ubiquinona
oxidoredutase).
O processo redox semelhante ao que acontece com a ubiquinona.

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Qual a sequncia dos transportadores na cadeia de
transporte electrnico mitocondrial?

A sequncia foi determinada devido a vrias aproximaes que foram
seguidas:
1. Uso de potenciais redox
2. Estudos espectrofotomtricos e estudos com elctrodos de
oxignio
3. Uso de inibidores
4. Isolamento de fragmentos da cadeia da membrana

Uso de potenciais redox

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No entanto, o uso de potenciais redox tem as suas limitaes:
No realmente o E que determina a direco do fluxo de
eletres, mas sim a diferena entre os potenciais redox operacionais E e esta
diferena dependente da concentrao dos reagentes e produtos;
Mesmo que a transferncia electrnica seja termodinamicamente
favorvel, esta pode no ocorrer a no ser que dois transportadores estejam
suficientemente perto;
Os valores de E de alguns dos transportadores electrnicos
mitocondriais so difceis de medir com exactido.

Uso de Espectrofotometria

Com a adio de succinato havia a formao de FADH2 e reduo
parcial das flavinas, mas adicionando malato, gerava-se NADH e as flavinas
ficam completamente reduzidas.

Concluses: Qualquer dos substratos normais da respirao era
capaz de reduzir todos os citocromos da membrana interna do mitocndrio.
Todos os citocromos e a ubiquinona pertenciam a uma rede comum, que era
alimentada por diversas flavoprotenas dadoras de electres.

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Estudos Cinticos

O succinat o o dador de el ectres ao FAD (FAD FADH2).
Assim, a ordem seria:

Uso de Inibidores

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Estudos com inibidores usando espectros diferenciais:

Estudos com inibidores usando o elctrodo de oxignio:

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Isolamento de fragmentos da cadeia mitocondrial
A cadeia de transporte electrnico mitocondrial pode ser fraccionada
em 4 complexos:

Complexos da Cadeia de Transporte Electrnico Mitocondrial

Complexo I (ou NADH-Q oxidoredutase)

Este complexo catalisa a transferncia de dois electres do NADH para
a ubiquinona, numa reaco que est associada com a translocao de
protes (4H+) atravs da membrana (da matriz mitocondrial para o espao
intermembranar). Este complexo inibido pela rotenona e pela antimicina A.

Complexo I ou NADH-ubiquinona oxidorreductase
Complexo II ou succinato desidrogenase
Complexo III ou complexo de citocromos bc1
Complexo IV ou citocromo c oxidase
Complexo V ou ATP sintase

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Passo a passo da reaco catalisada pelo Complexo I:

1. Transferncia de um
io hidreto do NADH para o FMN;
2. Do FMN passam 2
electres por uma srie de centros Fe-
S at protena de Fe-S N-2;
3. A transferncia de
electres da protena Fe-S para a
ubiquinona forma QH2, que se difunde
pela bicamada lipdica;
4. Esta transferncia de
electres tambm expulsa 4 protes da matriz mitocondrial para o espao
intermembranar;
5. O fluxo de protes produz um potencial electroqumico a nvel
da membrana interna mitocondrial que conserva alguma da energia libertada
pelas reaces de transferncia de electres;
6. Este potencial electroqumico leva sntese de ATP (v-se
pela energia de Gibbs que esta suficiente para a sntese de ATP).

Complexo II (ou Succinato-Q oxidoredutase)

Neste complexo, o succinato oxidado a fumarato com a reduo
simultnea da ubiquinona (Q) a ubiquinol (QH2). Pela energia de Gibbs
percebe-se que esta no
Este complexo composto por 4 polipptidos (A, B, C e D), que se
dividem entre um domnio hidrfobo, localizado no interior da membrana
interna mitocondrial e um domnio hidrfilo, que se estende para a matriz

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mitocondrial. As subunidades A e B so hidrfilas, enquanto as C e D so
protenas integrais da membrana interna do mitocndrio.
As subunidades do domnio hidrfilo (A e B) contm o grupo FAD e trs
centros Fe-S. Por seu lado, as subunidades C e D contm um grupo heme (at
dois nos procariotas).

Passo a passo da reaco catalisada pelo Complexo II:

1. No processo de oxidao do
succinato a fumarato so gerados dois
electres e dois protes que reduzem a
flavina da subunidade A:

Succinato + FAD Fumarato + FADH
2

2. Os electres da flavina
reduzida (FADH2) so transferidos
posteriormente, de uma forma
sequencial, at ubiquinona atravs dos
centros de ferro-enxofre, segundo a
seguinte ordem:
FAD [2Fe 2S] [4Fe 4S] [3Fe 4S]

Complexo III (ou QH
2
-citocromo c oxidoredutase)

Este complexo multienzimtico transmembranar catalisa a
transferncia de electres entre um transportador mvel de dois electres, a
ubiquinona, e um transportador mvel de um electro contendo um grupo

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heme, o citocromo c. Desta forma, o complexo III transporta simultaneamente
dois electres, atravs de uma via bifurcada, e dois protes por electro contra
o gradiente de concentrao.
A energia de Gibbs deste
complexo suficiente para a
sntese de ATP.
Neste complexo, o caminho
seguido pelos electres desde o
QH2 at ao citocromo c no linear
o modo com os electres so
transferidos no Complexo III
conhecido por ciclo Q.

CICLO Q:

No lado P da membrana, duas molculas de QH2 so oxidadas a Q,
libertando 4 protes (H
+
) para o espao intermembranar. Cada QH2 doa 1
electro (e
-
), via centros de Fe-S, ao citocromo c1 e 1 e
-
, via citocromo b, a
uma molcula de Q, no stio QN, reduzindo a molcula de Q a QH2. Esta
reduo tambm utiliza 2 H
+
captados da matriz.

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Passo a passo da reaco catalisada pelo Complexo II:
1. Oxidao da molcula de ubiquinol (QH2) localizada no espao
intermembranar (QP);
2. O primeiro electro segue atravs de um centro Fe-S at
subunidade citocromo c1 e desta para o citocromo c, que fica reduzido;
3. O segundo electro segue via citocromo bL e bH, e deste ltimo
passa para a matriz, QN, onde ir reduzir a ubiquinona (Q) ligada
semiquinona que se mantm ligada;
4. Para que a molcula de semiquinona na matriz seja reduzida a
ubiquinol e libertada, necessrio que outra molcula de ubiquinol se ligue ao
local QP e seja completamente oxidada.

Assim, um ciclo Q completo no complexo III necessita que duas
molculas de ubiquinol sejam oxidadas no espao intermembranar (QP) para
que sejam transferidos dois electres at ubiquinona, na matriz (QN).
Neste processo so libertados 4 protes contra o gradiente de
concentrao: 2 protes por cada citocromo c reduzido.

Inibidores do Ciclo-Q: os inibidores deste ciclo podem ser a
Antimicina (que actua na matriz evitando a formao do radical semiquinona), o
Mixotiazol (que bloqueia os eventos que ocorrem no espao intermembranar) e
a Estigmatelina (que inibe a transferncia de electres para a protena Fe-S).

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Complexo IV (ou Citocromo c oxidase)

A reaco catalisada pelo citocromo c oxidase irreversvel, actuando
como um ponto de regulao, na medida em que, assim, assegura-se que os
electres cheguem ao receptor final, o oxignio.

O citocromo c oxidase um complexo
proteico transmembranar composto por vrias
cadeias polipeptdicas.
Este complexo responsvel por oxidar o
citocromo c e transferir sequencialmente os
electres para a reduo do oxignio.
Este complexo proteico utiliza a energia
de transferncia dos electres e da reduo de
oxignio molecular, para bombear protes contra
o gradiente de concentrao. A reduo de uma
molcula de oxignio requer quatro electres e quatro protes para
produzir uma molcula de gua em conjunto com quatro protes que so
bombeados contra o gradiente de concentrao. de salientar que a reduo
de uma molcula de oxignio requer a oxidao de duas molculas de NADH
ou de FADH2, o que significa que o citocromo c oxidase transporta dois protes
contra o gradiente de concentrao por cada par de electres percorridos, ist o
, por cada unidade de potencial redox.

+
+
+
1
2
2

+
+
2

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Sequncia do Transporte Electrnico

Mecanismo de reduo do dioxignio a gua

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A reduo do dioxignio (O2) a gua (H2O) ocorre por parte do
citocromo c oxidase.
Passos 1 e 2: O complexo [Fe(III)-OH
-
-Cu(II)] reduzido a [Fe(II)-
Cu(I)] atravs de duas transferncias consecutivas de um electro. Ao mesmo
tempo, um proto da matriz adquirido e liberta-se uma molcula de gua. Y-
OH (Tirsoina-244) est no estado fenlico.
Passo 3: O O2 liga-se ao complexo de Ferro(II)
Passo 4: H uma redistribuio electrnica rpida para formar o
complexo [Fe(IV)=O
2-
HO
-
--Cu(II)], na qual a tirosina-244 doou um electro e um
proto ao complexo, sendo que assume, assim, o seu estado radical neutro (Y-
O
.
).
Passo 5: Ocorre uma terceira transferncia de um electro do
citocromo c ao mesmo tempo que se adquirem 2 protes, o que reconverte a
tirosina-244 ao seu estado fenlico. Deste modo liberta-se uma molcula de
gua.
Passo 6: D-se a quarta e final transferncia de um electro e a
aquisio de um proto, completando um ciclo cataltico, na medida em que se
regressa ao complexo inicial.

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Captulo 4 Fosforilaa o Oxidativa
Introduo
A fosforilao oxidativa o estgio final do metabolismo produtor de
energia nos organismos aerbios todas as etapas oxidativas na degradao
dos glcidos, lpidos e aminocidos convergem para este estgio final da
respirao celular onde a energia proveniente da oxidao responsvel pela
sntese de ATP.
Esta etapa d-se nos mitocndrios e envolve a reduo de O2 a H2O com
electres doados pelo NADH e FADH2.
Eficincia da Fosforilao Oxidativa
Como possvel acoplar o transporte electrnico com a sntese de ATP?
Razo ADP/O: nmero de molculas de ATP formadas por par de
electres transferidos ao longo da cadeia respiratria.

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O consumo de oxignio aumenta
quando se adiciona ATP, ou seja, quando h
uma estimulao da respirao.
Controlo respiratrio regulao da
velocidade de transporte electrnico pelo
ADP. a razo entre as velocidades de
consumo de O2 no estado 3 e no estado 4.

Se o controlo respiratrio for maior que 1 mitocndrios acoplados.

O acoplamento perdido:
Quando perdida a integridade da membrana mitocondrial;
Na presena de desacopladores (cidos fracos e hidrfobos);
Com a adio de inibidores, que inibem a sntese do ATP sintase
(por ex. a oligomicina).

Hipteses de Acoplamento Energtico
A sntese endergnica de ATP a partir do ADP e Pi no mitocndrio
catalisada por translocao de protes no ATP sintase e levada a cabo por um
processo de transporte de electres. No entanto como este complexo
fisicamente distindo das outras protenas que medeiam o transporte electrnico,
a energia livre libertada pelo transporte deve ser conservada de tal forma que o
ATP sintase possa utilizar.

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Esta conservao de energia tambm referida como acoplamento energtico
ou transduo de energia.

Hiptese do Acoplamento Qumico (Slater, 1953)
O transporte de electres originava intermedirios reativos (compostos
de alta energia) cuja quebra subsequente levava a fosforilao oxidativa. Esta
hiptese foi abandonada uma vez que nunca se chegou a encontrar, em
laboratrio, esta espcie de alta energia.

Hiptese do Acoplamento Conformacional (Boyer, 1964)
O transporte electrnico fazia com que as protenas da membrana
interna mitocondrial assumissem estados conformacionais activados que de
alguma forma se associavam com o ATP sintase e, ao voltarem para um estado
relaxado, ocorria a sntese de ATP.

Hiptese do Acoplamento Quimiosmtico (Mitchell, 1961)
A energia livre do transporte electrnico conservada pelo movimento
de protes (H
+
) desde a matriz mitocondrial ao espao intermembranar, gerando
um gradiente electroqumico atravs da membrana interna mitocondrial. O
potencial electroqumico deste potencial aproveitado para sintetizar ATP.
Os protes so bombeados para fora do mitocndrio pelos complexos
I,III e IV da cadeia de transporte electrnico (setas azuis), gerando um gradiente
electroqumico atravs da membrana mitocondrial interna. O retorno destes
protes para a matriz exergnico, promovendo a sntese de ATP (seta
vermelha).

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POSTULADOS:
1. O ATP sintase vai usar H
+
para a sntese de ATP o enzima tem
uma forma reversvel de actuar
2. Existe uma estequiometria caracterstica entre o nmero de
electres e o nmero de protes (H
+
/2e
-
). Ao longo da cadeia transportadora
h o bombeamento de protes da matriz para o espao intermembranar e de
electres no sentido oposto.
3. Tem de haver impermeabilidade da membrana a H+ para
assegurar o gradiente electroqumico diferena de pH de um e outro lado da
membrana.

EXPERIMENTALMENTE:
No meio exterior aos mitocndrios, quando h respirao h variao de
pH (quando estes esto intactos). Quando se adiciona um desacoplador, a
diferena de pH desaparece, uma vez que faz com que o pH tanto de dentro
como de fora da membrana se mantenha igual, independentemente da situao
inicial do gradiente electroqumico.

DESACOPLADORES:
Os desacopladores podem ser protonados, ficando na forma neutra.
Desta forma, difundem-se atravs da membrana e o seu contacto com o elevado
pH faz com que perca um proto. Assim, o desacoplador ir actuar como um
transportador de H
+
ao longo da membrana, o que faz com que o gradiente
electroqumico se dissipe.
Diferena de Potencial Electroqumico Protnico

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Fora Protomotriz (p)

a energia armazenada no gradiente electroqumico e apresenta duas
componentes: a energia potencial qumica (diferenas de concentrao de uma
espcie qumica em duas regies separadas pela membrana) e a energia
potencial eltrica (separao de cargas pelo movimento de protes).

Quantificao da Fora Protomotriz

Uma pequena queda de p permite um grande aumento na respirao.
p pode aumentar ou diminuir, conforme as condies do meio, mas
mantm-se sempre volta das 200 mV.
Ex: o ATP sintase pode enviar protes para o interior da matriz e por isso
o valor de p diminui. Quando o ATP gasto, o valor de p volta a aumentar.

Protes que fluem na direo reversa propulsionam a sntese de ATP

Quando o p suficientemente alto, como no pode haver dissociao
do ATP sintase, o bombeamento intenso: em vez de se formar NAD+ forma-se
NADH, os protes so bombeados para trs, para o complexo I. A direo do
bombeamento depende de p.

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Mecanismos de Translocao de Protes
Trs dos 4 complexos do transporte electrnico (Complexos I, III e IV)
esto envolvidos na translocao de protes. Foram propostos dois mecanismos
que acoplam a energia livre do transporte electrnico com o transporte activo de
protes: o mecanismo do loop redox e o mecanismo da bomba de protes.

Mecanismo do Loop Redox
Este mecanismo requer que os centros redox da cadeia respiratria
(FMN, ubiquinona, citocromos e protenas ferro-enxofre) estejam de tal forma
dispostos na membrana que a reduo envolver um centro redox que
simultaneamente aceita e- e H
+
do lado da matriz da membrana.
A re-oxidao deste centro redox pelo centro que lhe segue na cadeia
envolver a libertao de H
+
no lado citoslico da membrana, juntamente com a
transferncia de electres de volta para o lado da matriz.
O fluxo de electres de um centro para o outro produz uma translocao
de protes e, portanto, a criao de um gradiente electroqumico (G e pH).

Assim, este mecanismo requer que o
primeiro transportador redox contenha mais
tomos de hidrognio na sua forma reduzida
que oxidada e que o segundo transportador
redox no tenha diferenas no contedo de
tomos de hidrognio nas formas oxidada e
reduzida.

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No total translocam-se 6H
+
- 2 protes por cada loop (3 no total).

Mecanismo da Bomba de Protes
O complexo IV transporta 4 protes da matriz para o espao
intermembranar por cada O2 que reduzido (2H
+
/2e
-
). Como este complexo no
possui transportadores nem de H
+
nem de e
-
, no pode fazer esse transporte via
ciclo Q. Em alternativa, o transporte feito via mecanismo de bomba de protes.
Em suma, este mecanismo no requer que existam centros redox como sendo
transportadores de H
+
.
Neste modelo, a transferncia de electres resulta de alteraes
conformacionais no complexo sendo que a translocao unidireccional de
protes ocorre como um resultado da influncia destas alteraes no pK dos
aminocidos das cadeias laterais e na sua exposio alternada ao lado interno
ou externo da membrana.
Este mecanismo requer que sejam translocados 2H
+
/2e
-
, mas no tem
qualquer restrio em relao estequiometria. No final podem ser translocados
um total de 8 a 10 protes.

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Mecanismos de Sntese do ATP
ATP Sintase translocador de protes
ATPase (F1F0) bombeador de protes
Estrutura do ATP Sintase
O ATP sintase um enzima multimrico
composto por duas subunidades distintas e
funcionais:
1. F1 protena solvel com
actividade de ATPase mas no de
ATP sintase
2. Fo protena ligada membrana
e sensvel oligomicina

S se tem actividade de ATP sintase quando as
duas subunidades esto ligadas.

Mecanismo de Ao
1. Translocao de protes efetuada pelo Fo;
2. Catlise da formao da ligao fosfoanidrido do ATP efetuada
pelo F1;
3. 3. Acoplamento da dissipao do gradiente protnico com a
sntese de ATP, que requer a interao de F1 e Fo.

Sntese do ATP Mecanismo de Mudana de Ligao (Boyer, 1983)

F1 tem trs protmeros catalticos,cada um num estado conformacional
diferente:
um que liga fracamente substratos e produtos (estado L de Loose)
um que liga fortemente substratos e produtos (estado T de Tight)
um que no liga nem substratos nem produtos (estado O de Open)

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1. Ligao do ADP e Pi ao estado L;
2. Alterao conformacional dependente de energia que converte o
estado L em T, o estado T em O e o estado O em L;
3. Sntese de ATP no estado T e libertao do mesmo pelo estado O;
4. O enzima retorna sua forma inicial depois de mais dois passos desta
reao.
As alteraes conformacionais so propulsionadas pela rotao da
subunidade (no centro, a verde).

Ao fim de cada 120 de rotao da subunidade contrria aos ponteiros do
relgio h a libertao de 1 molcula de ATP.

Mecanismo de Rotao do Rotor F
o
Antes do proto sair, h uma rotao de 360,
saindo desta forma 3 molculas de ATP. Para o proto sair
tem de rodar. S anda quando o resduo de aminocido
protonado.

ESQUEMA:

H
+
entra pela subunidade Protonao do resduo de Glu
Resduos de aspartato do
uma volta de 360
Sada de um proto: por cada
sada de 3/4H
+
libertada uma
molcula de ATP

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Usos alternativos do Gradiente Eletroqumico Protnico
Desacoplamento para gerar calor;
Fuga basal de protes (manter p e limitar a formao de espcies
reativas de oxignio);
Sistemas de transporte (Ex:Ca
2+
- papel essencial no mitocndrio);
Movimento flagelar bacteriano.
Controlo da Respirao e da Sntese do ATP

1. A respirao e a sntese de ATP so limitadas pelas [ADP] e de [Pi]
o aumento do uso de ATP leva a uma diminuio da razo de
massas ([ATP]/[ADP][Pi]) devido ao aumento nos nveis de ADP e
Pi;
2. A concentrao de Ca2+ tambm regula em alguns tecidos;

A fosforilao oxidativa ocorre prxima de um equilbrio (com a excepo
do citocromo coxidase). Nesse caso a respirao e a sntese de ATP so
controladas sobretudo por:
O potencial de fosforilao
A razo NADH/NAD
+

Controlo da Sntese de ATP
Existem situaes de disfuno mitocondrial que podem levar a uma
diminuio do p, como: limitaes de substratos ou disponibilidade de O2;

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defeitos genticos ou adquiridos na atividade da cadeia respiratria; fuga de
protes para a matriz mitocondrial e ativao de protenas desacopladores.

IF1 - um inibidor endgeno do ATP sintase
IF1 fator inibitrio do F1Fo- ATP sintase (1963) que atua como um
homodmero inibindo simultaneamente dois ATP sintases.
Promove a dimerizao do ATP sintase, sendo que a ligao completa
do IF1 ocorre apenas durante a hidrlise do ATP.
A diminuio do pH promove a ligao do IF1 ao ATP sintase, servindo
como inibidor do ATPase. Assim, inibindo a destruio do ATP est-se a inibir
a morte celular.
Organizao supramolecular dos complexos do sistema de
fosforilao oxidativa
Modelo do Estado Fludo: Os complexos I a IV difundem-se
lateralmente na membrana e a transferncia de electres baseada em colises
aleatrias dos complexos individuais.
A FAVOR
Isolamento de complexos individuais funcionais;
No se detetavam associaes de complexos por microscopia
eletrnica ou estudos de fuso com lipossomas;
Comportamento de poolda ubiquinona e citocromo c;

Modelo do Estado Slido: H interaes estveis entre os complexos
dentro de supercomplexos.
A FAVOR
Os supercomplexos podem ser obtidos por eletroforese em gel de
poliacrilamida azul nativo (BN-PAGE);
Os supercomplexos tem actividade o que se pode demonstrar nos
geis azul nativos;
A anlise de estruturas por microscopia electrnica mostram
interaes dos complexos dentro dos supercomplexos isolados;

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Experincias de controlo de fluxo indicam unidades funcionais
maiores que complexos individuais;
Mutaes pontuais em genes que codificam para um complexo
afetam a estabilidade de outro complexo
O consumo de oxignio por mitocndrios isolados relaciona-se com
a abundncia de supercomplexos;
Alguns supercomplexos necessitam de cardiolipina para se
formarem.

Funes dos supercomplexos da fosforilao oxidativa
1. Melhor fluxo de eletres entre os complexos;
a. Menor distncia de difuso;
b. Channeling dos substratos.
2. Estabilizao dos complexos individuais;
3. Impedem a formao de espcies reativas de oxignio.

ATP sintase dimrico e oligomrico e suas funes

1. A ligao dos estatores estabiliza o enzima;
2. Favorecimento da formao de cristae por induo de curvatura;
3. Aumento localizado do gradiente de pH em 0,5 unidades.

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Captulo 5 Transporte Mitocondrial
Noes gerais de transporte atravs de membranas

Transporte no mediado
Difuso passiva

Transporte mediado
O transporte mediado envolve protenas:

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Passivo: no envolve energia
Ativo: direo contrria ao gradiente de concentrao e, por isso, est
envolvida energia (hidrlise de ATP).
Primrio depende diretamente do ATP
Secundrio depende do gradiente j formado por outros
canais/transportadores

O transporte mediado pode ser classificado de acordo com a sua
estequiometria e carga.

Simporte: A e B entram para o mesmo lado da membrana, mas A
precisa de B para passar e vice-versa.
Uniporte: A entra sozinho para o outro lado da membrana.
Antiporte: A e B entram/saem da membrana A entra se B sair pelo
lado oposto e vice-versa.

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Ionforos

a) Difundem-se na membrana;
b) Atravessam a membrana, so mais rpidos

COMO DISTINGUIR? Temperaturas mais baixas provocam uma difuso mais
lenta. Tal acontecimento no ir afetar os ionforos canais, mas parar a
difuso no caso dos ionforos transportadores.

Exemplos de ionforos:
Valinomicina ionforo transportador de carga
mas no de H+;

Nigericina ionforo transportador de H+ mas
no de carga;

Gramicidina A ionforo transportador de
carga e de H
+
.

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Movimento de ies atravs da membrana e swelling
mitocondrial
Fatores que influenciam o transporte mitocondrial
1. Necessidade de manter a neutralidade eltrica;
2. O gradiente eletroqumico (pH+ ) promove:
a. Sistemas de transporte que impliquem a entrada de H
+
ou
sada de HO
-
da matriz (pH)
b. Movimento de ies em resposta ao (dissipando o
potencial)

Swelling Mitocondrial
O que tem de ocorrer para haver swelling (inchamento) mitocondrial?
(1) Tanto o catio como o anio do principal componente osmtico do
meio tm de ser permeveis;
(2) Tem de ser mantido o equilbrio de cargas atravs da membrana
(neutralidade eltrica).

Postulados de Brian Chapel
1. Os mitocndrios comportam-se como osmmetros perfeitos;
2. A membrana mitocondrial impermevel a pequenos ies;
3. A membrana mitocondrial permevel a molculas pequenas
sem carga.

O Swelling pode ser medido por espetrofotometria, uma vez que as
suspenses mitocondriais so trbidas e dispersam a luz. Se houver inchao
mitocondrial o valor de absorvncia diminui.

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Transporte de caties bivalentes
Transporte de clcio

Set point a sada de clcio por
antiporte e entrada por uniporte
mesma velocidade. quase
como se no houvesse fluxo de
clcio.
Entrada de Ca
2+

nos mitocndrios
Diminui
Tem de haver
sada de protes
Aumenta pH
necessrio que
haja fosfato no
sistema
Vai reagir com o clcio
que entrou, formando
um gel osmoticamente
inativo, hidroxiapatite

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Captulo 6 Fotoss ntese
Histria da Fotossntese
Processo fsico-qumico pelo qual as plantas, algas
e bactrias fotossintticas usam a energia luminosa para
sintetizar compostos orgnicos. Podem existir dois tipos de
fotossntese:
Fotossntese oxignea:
Plantas
Algas
Cianobactrias
Fotossntese anoxignea:
Bactrias prpuras e bactrias prpuras sulfurosas
Bactrias verdes e bactrias verdes de sulfurosas
Bactrias verdes deslizantes

Descoberta das Reaes Independentes da Luz
Mayer (1842) os organismos fotossintticos convertem energia
luminosa em energia livre qumica.
F.F. Blackman (1905) A fotossntese um processo que ocorre em
duas fases e apenas uma usa diretamente a luz.

PAPEL DA LUZ

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Van Niel props que a fotossntese era uma reao redox que ocorria
em duas fases:

Reaes Luminosas e Escuras
Reaes Luminosas:
Reaes fotossintticas de transferncia de eletres;
Requerem luz;
Formam NADH e ATP;
Ocorrem na membrana do tilacoide;
Libertam O2.

Reaes Escuras:
Fixao do Carbono;
No requerem luz;
Usam o NADH e ATP produzidos na fase luminosa para sintetizar
glcidos a partir de CO2 e H2O;
Ocorrem no estroma dos cloroplastos.

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Organizao intracelular em sistemas fotossintticos
Algas e Plantas superiores: cloroplastos
Cianobactrias: membranas tilacides
Bactrias verdes: clorossomas
Bactrias purpreas: cromatforos
Pigmentos Fotossintticos
Clorofilas
So os pigmentos que do s plantas a sua cor verde
caracterstica;
Clorofila-a: verde azulada
Clorofila-b: verde amarelada

Carotenides
Derivados dos carotenos;
Pigmentos alaranjados ou amarelados;
Podem ser hidrocarbonetos puros (carotenos) ou oxigenados
(xantfilos)

Ficobilinas
Algas vermelhas e cianobactrias;
So diferentes das clorofilas porque no contm nem fitol nem Mg
e apresentam um arranjo no cclico dos grupos tetrapirricos

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Fotoqumica dos Cloroplastos

Existem vrias formas de perder energia:
1. Por calor (converso interna) ou por excitao sob a forma de luz
(emisso de fluorescncia);
2. Transferncia de energia de ressonncia (antenas dos
fotossistemas) ou energia de excitao;
3. Reao fotoqumica (centros reacionais dos fotossistemas).
Fotossistemas
As membranas tilacides possuem dois tipos diferentes de
fotossistemas: o fotossistema I (PS I) e o fotossistema II (PS II).
Os fotossistemas tm dois componentes: complexos antena ou de
colheita de luz (Light Harvesting Complexes - LHC) e centro reacional
fotossinttico.

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Complexos Antena
A funo da maioria das clorofilas a captao de luz, ou seja,
funcionam como antenas que colhem luz.
LHC-II das plantas: protena de membrana mais abundante dos
cloroplastos das plantas verdes.
Papel Protetor dos Carotenides

1
Clo (clorofila no
estado singleto)
Incidncia de muita luz
3
Clo (clorofila no
estado tripleto)

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Centros Reacionais Fotossintticos
PSI P700 (absorve a 700nm)
PSII P680 (absorve a 680nm)

Fotossistema II (PSII)
ESTRUTURA E COMPOSIO
Este fotossistema responsvel para reduo da plastoquinona
(PQ) e pela oxidao do O2.

Pode

reagir com
1
Car (caroteno)
Forma
1
Clo +
3
Car
3
Clo (clorofila no
estado tripleto)
Pode reagir com
O2 no estado
normal (tripleto)
1
Clo +
1
O
2
REATIVO!
Pode reagir com
3
O2
impedindo que este
reaja com outros
compostos

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As tirosinas so os dadores de eletres ao PSII.

Fotossistema I (PSI)
ESTRUTURA E COMPOSIO

Este fotossistema responsvel
pelas reaes de fixao do carbono.

Tirosinas
Aceita energia e d um
eletro feofitina (Feo)
que um transportador
A feofitina d um eletro
Quinona A (QA) e esta por sua
vez Quinona B (QB) que
solta a plastoquinona (PQ).

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Esquema em Z
Transporte Eletrnico Fotossinttico No Cclico
PROVAS A FAVOR Queda no Vermelho: o PSII no ativado com a
luz superior a 680nm (luz amarela/verde: c.d.o. pequeno). No entanto, muito
bem ativado pela luz azul (c.d.o. maior). A velocidade de libertao de O2 por
ambas a luzes superior soma das velocidades para cada uma das luzes
atuando sozinhas. Este aumento de velocidade ainda ocorre se a luz verde-
amarela for desligada alguns segundos antes da luz vermelha ser ligada e vice-
versa. Ocorre a oxidao do citocromo f na presena e ausncia de DCMU.
Plastocianina
(PC)
Transfere eletres para a
ferredoxina (Fd), onde o
NADP
+
reduzido.

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680nm on oxidao do citocromo
B6F
562nm on PSII, reduo citocromo
B6F
562nm off oxidao citocromo B6F
680nm off reduo citocromo B6F

Organizao na membrana tilacide dos componentes da
cadeia de transporte eletrnico

PS I e ATP sintase ocorrem principalmente nas lamelas de estroma (zona no
empilhada), em contacto com o estroma onde tm acesso ao NADP
+

PS II est localizado quase exclusivamente nos grana (zona empilhada) fora
de contacto direto com o estroma
Citocromo B6F est distribudo uniformemente atravs da membrana.

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Acoplamento energtico fotossinttico
Fotofosforilao
o meio pelo qual os organismos fotossintticos capturam energia da
luz solar e a usam para produzir ATP.
A fotofosforilao ocorre nos cloroplastos e uma reao onde ocorre
a oxidao de H2O a O2, onde o NADP
+
o aceitador de eletres e
absolutamente dependente da energia luminosa.
PSII: 4 fotes do 1 O2 e libertam 4 H
+
no lmen do tilacide + 2 PQH2
CitB6F: Devido ao ciclo Q vo ser oxidadas 4PQH2 8 H+
PSI:4 fotes levam transferncia de 4 electres de 4 molculas de PC reduzida
para 4 molculas de ferredoxina gerando 2 NADPH.

ESTEQUIOMETRIA DAS REAES LUMINOSAS
Por cada molcula de O2 que libertada:
2 molculas de H2O oxidadas;
8 eletres passam pelo esquema Z;
8 quanta de luz absorvidos;
2 NADPH formados;
12 H
+
no lmen do tilacide;
18 ATP formados (1,5ATP/H
+
)

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Diferenas entre a Fotofosforilao e a Fosforilao Oxidativa
O gradiente de potencial eletroqumico, p, atravs da membrana
mitocondrial consiste essencialmente de potencial de membrana () enquanto
nos cloroplastos consiste principalmente no gradiente de pH, pH.
A cadeia respiratria mitocondrial bombeia protes para fora da
matriz (para o espao intermembranar), atravs da membrana interna. A cadeia
de transporte eletrnico do tilacide bombeia protes para dentro do
tilacide.

Reaes Escuras: Ciclo de Calvin

Glcido
A reao total indica
que este ciclo
muito gastador de

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Regulao do Ciclo de Calvin
Nos estromas tambm h
enzimas glicolticos, logo preciso
haver uma regulao do ciclo de
Calvin. Quando no h luz, esses
enzimas so utilizados, por exemplo o
Rubisco.

Atividade do Rubisco
1. Aumenta com o pH. pH timo=8
2. Aumenta com aumento da [Mg2
+
]
3. Aumenta com aumento da [NADPH]
4. Dependente das quantidades relativas
de ATP e ADP+Pi. Quanto maior a [ATP] maior a
atividade.
5. fortemente inibida pelo anlogo do
estado de transio 2-carboxiarabinitol-1-fosfato, que
muitas plantas apenas sintetizam s escuras.
Fotorrespirao
um processo pelo qual as plantas iluminadas consomem O2 e
libertam CO2. 1/3 do CO2 fixado pode ser novamente libertado pela
fotorrespirao.

Fotorrespirao VS. Fixao do Carbono
A fotorrespirao gasta energia e no tem qualquer utilidade para a
clula enquanto a fixao do carbono o processo predominante que
favorecido pelo aumento da temperatura.

Ponto de Compensao do CO
2
a concentrao de estado estacionrio de CO2 atingida quando um
organismo fotossinttico iluminado num sistema fechado. Corresponde, por
outras palavras, concentrao de CO2 em que a velocidade de fotossntese
igual velocidade de fotorrespirao.

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Captulo 7 Esp cis Rativas d Oxig nio
Radicais
As reaes radicalares so em cadeia, irreversveis e no controlveis,
com a amplificao da gerao de radicais.
Quanto menor for o tempo de semi-vida dos radicais, mais reativos eles
so.
E porqu espcies reativas de oxignio (O2)? Porque um bom
agente oxidante, mas cineticamente inerte.

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Formao das EROs
As EROs podem ser geradas por processos distintos:
1. Autoxidao de molculas e ies
a. Flavinas
b. Hemoglobina
c. Ies de metais de transio
2. Enzimas e complexos enzimticos
a. Oxidaes dependentes de flavoprotenas
b. Cadeia respiratria mitocondrial
3. Metabolismo de Xenobiticos
a. Antimicina
4. Fatores fsicos
a. Luz ultravioleta
b. Raios-X

Definio de Oxidante e Antioxidante
Definio Biolgica: Um antioxidante uma substncia capaz de inibir
a oxidao de um substrato quando presente a concentraes mais baixas que
esse substrato (Halliwell & Gutteridge, 1989).
Definio Qumica: Oxidantes so oxidantes fortes e antioxidantes so
oxidantes fracos (Cadenas,1998).

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Reaes do O
2
-
(Anio Superxido)
Protonao

Dismutao
Formao de ONOO (Perxido Nitrito)

Reaes do H
2
O
2

(Perxido de Hidrognio)
Oxidao de Tiis, incluindo resduos de cistena em protenas

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Oxidao de Resduos de Metionina

Formao de HOCl (neutrfilo)

Formao de HO
(radical hidroxilo)

Esta reao catalisada pelo ferro. O nico papel do O2
-
reduzir o Fe
3+
.

Esta reao no ocorreria in vivo pois muito lenta.

Para se dar precisava de Fe
2+
e Cu
2+
livres, mas estes normalmente costumam
estar quelados com protenas.

No entanto, a mioglobina pode libertar o ferro. Assim, poder haver uma
pequena frao de ferro que no est associado a protenas que se move entre
os centros de armazenamento/transporte e os centros onde vai ser usado.
Protenas com ferro libertam o Fe:
Hemoglobina, mioglobina perxidos
Transferrina pH cido
Ferritina reduo pelo O2
-

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A cadeia respiratria mitocondrial a principal fonte de ERO in vivo nas clulas
aerbias

A difuso do H2O2 atravs da membrana livre?
A difuso no livre nas membranas celulares.
Estudo com leveduras e adaptao ao perxido de hidrognio: as
clulas adaptadas, para sobreviverem, produziam mais catlase e citocromo c
peroxidase (enzimas que catalisam a decomposio do H2O2), mas no obstante
alteravam a permeabilidade da membrana entrada de H2O2, fazendo com que
a [H2O2] no exterior fosse maior do que a [H2O2] no interior.

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Formao de EROs
Radiao ltromagntica (Radiao Raios X)

Autoxidao de pequenas molculas
Autoxidao de protenas hmicas

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Oxidao de oses

Ao de enzimas

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Formao e Reaes do
NO
NO: 2 mensageiro relaxao muscular, inibio da agregao

plaquetria, neurotransmisso

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Stress Oxidativo
um desequilbrio entre oxidantes e antioxidantes favorecendo os
oxidantes e potencialmente causadora de danos.
S se considera stress oxidativo se for potencial a ocorrncia de danos
entre o equilbrio de oxidantes vs. antioxidantes.

Consequncias do stress oxidativo
So as EROs txicas ou teis?

O aumento da [EROs] pode afetar a reproduo
das clulas e pode chegar ao ponto de a nica alternativa
a morte celular.
As espcies reativas de oxignio podem danificar
as macromolculas biolgicas.
Oxidao de Glcidos
cido hialurnico

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Peroxidao Lipdica
cidos gordos polissaturados podem ser estabilizados por ressonncia
quando perdem os hidrognios bisallicos.

cidos gordos polissaturados com menos Hs mais difcil ocorrer a
peroxidao lipdica.

Quantas mais duplas ligaes um cido gordo polissaturado tiver, mais
peroxidao lipdica ocorre.

Efeitos da peroxidao lipdica na membrana:
Diminuio da fluidez
Facilitao da troca de fosfolpidos entre as 2 bicamadas
Aumento da permeabilidade
Danos s protenas da membrana

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Oxidao de Protenas

Pode ser reversvel (enzimas antioxidantes) ou irreversvel (degradao
da protena tem de haver nova sntese da protena).

Consequncias da oxidao de protenas:
Oxidao de resduos de aminocidos
Clivagem das ligaes peptdicas
Formao de derivados de carbonilo

S-tiolao

Persulfuretos

Oxidao do DNA
O DNA mitocondrial o alvo principal, pois est menos protegido, uma
vez que no tem histonas associadas, como o DNA nuclear.

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Defesas Antioxidantes dos Sistemas Biolgicos
Mecanismos de ao antioxidante
Preveno: impede a formao do oxidante. Exemplo: quelao de
metais (ferritina, transferrina); design proteico (citocromo c oxidase).
Interceo
Enzimticos catalase, superxido dismutases, GSH
peroxidases, peroxirredoxinas, GSSG redutase, por exemplo
No-enzimticos vitamina E, vitamina C, carotenides,
flavonoides, por exemplo
Reparao: repara os danos causados

Interceo por antioxidantes enzimticos
SUPERXIDO DISMUTASES

CATALASES
Protenas hmicas com atividade localizada nos peroxissomas.

GLUTATIONO PEROXIDASES

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SISTEMA DA TIORREDOXINA

SISTEMA DA GLUTARREDOXINA

Interceo por antioxidantes NO enzimticos
GLUTATIONO
Ciclo Redox

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VITAMINA E
Principal antioxidante chain-breaking nas membranas e
lipoprotenas.
Transferncia do carcter radical para um radical menos potente
derivado do antioxidante.

Estado redox
Estado redox a razo das formas oxidada e reduzida interconvertveis
de um determinado par redox.
definido pelo seu potencial de reduo de meia clula e pela
capacidade redutora desse par.

Ambiente redox celular
Somatrio dos produtos do potencial redox e capacidade redutora para
cada par redox ligado presente.

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Captulo 8 Metabolismo dos Xenobio ticos

XENOBITICOS so compostos qumicos
estranhos a um organismo ou sistema biolgico.
EFEITOS:
1. O xenobitico convertido num
metabolito mais polar;
2. Em geral h um aumento da massa
molecular;
3. A excreo facilitada.

Reaes da Fase I
Introduo de um grupo funcional no xenobitico modificao qumica.
O xenobitico fica mais hidrfilo, o que facilita a excreo, e passa a ser um
substrato de en0zimas que catalisam as reaes de Fase II.
De entre outras, ocorre a oxidao pelo citocromo P450.

Reaes da Fase II
Requerem a presena de um substrato de alta energia e do-se com
produtos da fase I. Estas reaes produzem produtos que esto prontos para ser
excretados. Existem muitas vias complementares, sequenciais e que competem
umas com as outras, como por exemplo:
GLUCORONIDAO: a via mais importante dos mamferos e envolve
a transferncia de cido glucornico na forma ativa a grupos hidroxilo e
carboxilo. O enzima que catalisa a reao o UGT (UDP-Glucuronosil
transferase).

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SULFATAO: ocorre essencialmente com fenis, aminas e tiis para
originar steres de sulfato. A reao catalisada por sulfotransferases.

GLUCORONIDAO VS. SULFATAO: A sulfatao e a
glucoronidao so vias que competem uma com a outra para o mesmo
xenobitico. A sulfatao predomina a baixas concentraes de xenobitico
e a glucoronidao predomina a altas concentraes de xenobitico.

CONJUGAO COM O GLUTATIONO: Usa 5% dos xenobiticos
ativados.

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Reaes da Fase III

Induo do metabolismo dos Xenobiticos
O efeito farmacolgico ou toxicolgico de um xenobitico pode ser
influenciado por um tratamento prvio ou por um tratamento simultneo com
outro xenobitico.
Muitos xenobiticos provocam uma induo dos enzimas envolvidos no
seu prprio metabolismo e no metabolismo de outros xenobiticos.

Desintoxicao versus ativao

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Significado biolgico da induo e inibio do metabolismo dos
xenobiticos

LCOOL VS. FRMACOS

Enzimas que metabolizam o etanol: catalase, citocromo P450
(CYP2E1), lcool desidrogenase (ADH) e indiretamente pelo aldedo
desidrogenase (ALDH2).

Ingesto ocasional de etanol: a principal via de oxidao pelo lcool
desidrogenase, visto que o citocromo P450 est a metabolizar outros
xenobiticos, como frmacos, por exemplo.

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Ingesto crnica de etanol: a via de desintoxicao pelo lcool
desidrogenase fica saturada e, por isso, parte do etanol tem de ser metabolizado
pelo citocromo P450 que assim no ir metabolizar outros xenobiticos, neste
exemplo um determinado frmaco. Quando o consumo em excesso se mantm,
o P450 estimulado e tanto o etanol como outros xenobiticos passam a ser
desintoxicados pelo citocromo.
Consumo de etanol e metabolismo de frmacos: quando h consumo
crnico de etanol, o P450 est estimulado, por isso, tambm metaboliza mais
rapidamente os frmacos.
Assim, estes no tm capacidade ou tempo de atuar e surtir o efeito
desejado. Por outro lado, h frmacos que, depois de metabolizados se tornam
nocivos, o que pode levar ao aparecimento de outras doenas.

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Apontamentos de Processos de Oxidao-Reduo

NO: 2 mensageiro relaxao muscular, inibio da agregao

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