6 Metabolismo:

STRYER, L.; TYMOCZKO, J.L.; BERG, J.M. Bioqumica. 6 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,
2008. Captulos 17.
6.2. Ciclo do cido ctrico
O ciclo do cido ctrico ocorre na mitocndria
Uma viso geral do ciclo
A entrada no ciclo: Piruvato desidrogenase
C4 + C2 = C6: Citrato sintase
Mecanismo da citrato sintase
Fazendo energia: mecanismo da Succinil CoA sintetase
Ciclo do
cido ctrico
Controle do ciclo do
cido ctrico
Papis do ciclo do cido ctrico na biossntese
6 Metabolismo:
STRYER, L.; TYMOCZKO, J.L.; BERG, J.M. Bioqumica. 6 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,
2008. Captulos 18.
6.4. Fosforilao oxidativa
A fosforilao oxidativa ocorre na mitocndria
A fosforilao oxidativa depende da transferncia de eltrons
Potenciais-padro de Reduo
Os eltrons podem ser transferidos entre grupamentos que no esto em contato
H quatro complexos envolvidos na fosforilao oxidativa
NADH:Q Oxidorredutase (Complexo I)
NADH:Q Oxidorredutase (Complexo I)
Q:Citocromo c Oxidorredutase (Complexo III)
Q:Citocromo c Oxidorredutase (Complexo III) Ciclo Q
Citocromo c Oxidase (Complexo IV)
Citocromo c Oxidase (Complexo IV)
Um gradiente de prtons impulsiona a sntese de ATP
ATP Sintase acopla a sntese de ATP com o gradiente de prtons
ATP Sintase exibe um mecanismo de ligao-troca
O fluxo de prtons ao redor do anel c impulsiona a sntese de ATP
O movimento de prtons pela membrana impulsiona a rotao do anel c
Caminho do prton pela membrana
LISTA DE EXERCCIOS
(Metabolismo Lista 2)

Ciclo do cido ctrico (Stryer, 5 ed.)

1. Qual o destino da marcao radioativa quando se adiciona cada um dos compostos
abaixo a um extrato celular contendo as enzimas e os co-fatores da via glicoltica e do ciclo do
cido ctrico, e o complexo piruvato desidrogenase? (O
14
C marcado est sublinhado).
(a) (b)
(c) (d)
(e) Glicose 6-fosfato marcada no C-1

2. Qual a G
o
para a oxidao completa de uma acetila da acetil CoA pelo ciclo do cido
ctrico?

3. Uma amostra de NAD reduzido deuterado foi preparada pela incubao do H
3
C-CD
2
-OH e
NAD
+
com lcool desidrogenase. Esta coenzima reduzida foi adicionada a uma soluo de 1,3-
BPG e gliceraldedo 3-fosfato desidrogenase. O NAD
+
formado por esta segunda reao
continha um tomo de deutrio, enquanto o gliceraldedo 3-fosfato, o outro produto, no o
continha. O que revela esta experincia acerca da estereoespecificidade da gliceraldedo 3-
fosfato desidrogenase?

4. Pacientes em choque frequentemente sofrem de acidose lctica devida a deficincia de O
2
.
Por que a falta de O
2
leva a um acmulo de cido lctico? Um tratamento para o choque
administrar dicloroacetato, que inibe a cinase associada ao complexo da piruvato
desidrogenase. Qual a razo bioqumica para este tratamento?

5. A oxidao do malato pelo NAD
+
formando oxaloacetato uma reao altamente
endergnica em condies padres (G
o
= +29 kJ mol
-1
). A reao ocorre prontamente em
condies fisiolgicas.
(a) Por qu?
(b) Considerando uma relao [NAD
+
]/[NADH] de 8 e um pH de 7, qual a relao
[malato]/[oxaloacetato] mais baixa em que pode ser formado oxaloacetato a partir do
malato?

6. Em experincias executadas em 1941, para investigar o ciclo do cido ctrico, oxaloacetato
marcado com
14
C no carbono da carboxila mais afastada da acetona foi introduzido numa
preparao ativa de mitocndrias.


A anlise do -cetoglutarato formado mostrou que nenhuma marcao radioativa tinha sido
perdida. A descarboxilao do -cetoglutarato originou ento succinato desprovido de
radioatividade. Toda a marcao estava no CO
2
liberado. Por que os primeiros pesquisadores
do ciclo do cido ctrico se surpreenderam com toda a marcao emergindo no CO
2
?




7. A interpretao das experincias abordadas no problema anterior era que o citrato (ou
qualquer outro produto simtrico) no poderia ser um intermedirio na formao do -
cetoglutarato, devido ao destino assimtrico da marcao. Esta verso parecia obrigatria, at
que Alexander Ogston, de modo incisivo, apontou em 1948 que possvel que uma enzima
assimtrica que ataque um composto simtrico possa distinguir entre seus grupamentos
idnticos. Para simplificar, considere uma molcula em que dois hidrognios, um grupamento
X e um grupamento diferente Y estejam ligados a um tomo de carbono tetradrico como no
modelo para o citrato. Explique como uma molcula simtrica pode reagir com uma enzima de
uma maneira assimtrica.

8. Descreva o mecanismo das enzimas abaixo e responda as perguntas com relao aos
resduos de aminocidos de seus stios ativos:
(a) Citrato sintetase. Quais so os papeis das cadeias laterais de histidina?
(b) Succinil CoA sintetase. Qual o papel da cadeia lateral da histidina nucleoflica?

9. A atividade do ciclo do cido ctrico pode ser acompanhada pelo monitoramento da
quantidade consumida de O
2
. Quanto maior a taxa de consumo de O
2
, mas rpida a
velocidade do ciclo. Hans Krebs utilizou este mtodo para investigar o ciclo em 1937. Utilizou
como seu sistema experimental msculo modo de peito de pombo, que rico em
mitocndrias. Num conjunto de experincias, Krebs mediu o consumo de O
2
na presena
somente de glicdeos e na presena de glicdeos e citrato. Os resultados so mostrados no
quadro a seguir.

Micromoles de Oxignio Consumido
Tempo (min) Somente Glicdeo
Glicdeo mais
3 mol de Citrato
10 26 28
60 43 62
90 46 77
150 49 85

(c) Quanto de O
2
deveria ser absorvido se o citrato adicionado fosse completamente
oxidado a H
2
O e CO
2
?
(d) Baseado em sua resposta no item a, o que sugerem os resultados dados no quadro?




Fosforilao oxidativa (Stryer, 5 ed.)

1. Qual o rendimento de ATP quando cada um dos seguintes substratos completamente
oxidado a CO
2
por um homogenato celular de mamfero? Suponha que a gliclise, o ciclo do
cido ctrico e a fosforilao oxidativa estejam completamente ativos.
(a) Piruvato
(b) Frutose 1,6-bisfosfato
(c) Fosfoenolpiruvato
(d) Di-hidroxiacetona fosfato

2. O potencial padro de reduo para a reduo de O
2
a H
2
O dado como 0,82 V em
bioqumica. Contudo, o valor dado em textos de qumica de 1,23 V. Explique esta diferena.






3. Desenhe uma curva de captao de oxignio ([O
2
] versus tempo) para uma suspenso de
mitocndrias isoladas quando os seguintes compostos so adicionados na ordem indicada.
Com a adio de cada composto, todos os previamente adicionados permanecem presentes. A
experincia comea com uma quantidade fixa de oxignio. A [O
2
] pode somente diminuir ou
no ser afetada.
(a) Glicose
(b) ADP + P
i

(c) Citrato
(d) Succinato

4. O nmero de molculas de fosfato inorgnico incorporado na forma orgnica a partir de
cada tomo de oxignio consumido, chamado de relao P:O, era frequentemente usado como
um ndice de fosforilao oxidativa.
(a) Qual a relao entre P:O, a proporo do nmero de prtons translocados por par de
eltrons (H
+
/2e
-
) e a proporo do nmero de prtons necessrios para sintetizar ATP e
transport-lo para o citossol (P/H
+
)?
(b) Quais so as relaes P:O para os eltrons doados pelo NADH da matriz e pelo
succinato?

5. Compare os valores de G
o
para a oxidao do succinato pelo NAD+ e pelo FAD. Use os
dados do Quadro 18.1 (do livro de Stryer, 5 ed.) e suponha que E
o
para o par redox
FAD/FADH
2
seja quase 0 V. Por que o FAD e no o NAD
+
o aceptor de eltrons nesta reao
catalisada pela succinato desidrogenase?

6. Para uma fora prton-motriz de 0,2 V (matriz negativa), qual a relao [ATP]/[ADP].[Pi]
mxima compatvel com a sntese de ATP? Calcule esta proporo trs vezes, supondo que o
nmero de prtons translocado por ATP formado seja dois, trs e quatro, e que a temperatura
seja de 25 C.

7. A conduo de prtons pela unidade F
0
da ATP sintase bloqueada pela modificao de
uma s cadeia lateral, pela diciclohexil carbodiimida. Quais so os alvos mais provveis da
ao deste reagente? Como voc utilizaria a mutagnese localizada especfica para determinar
se este radical essencial para a conduo de prtons?

8. Foi lhe pedido que determinasse se uma substncia qumica um inibidor da cadeia de
transporte de eltrons ou um inibidor da ATP sintase. Esboce uma experincia para determinar
isto.

9. O ATPS, um anlogo do ATP lentamente hidrolisvel, pode ser usado para sondar o
mecanismo das reaes de transferncia de fosforila. Foi sintetizado ATPS quiral, contendo
18
O em uma posio especfica e
16
O comum nos outros locais da molcula. A hidrlise desta
molcula quiral pela ATP sintase em gua enriquecida com
17
O produz [
16
O,
17
O,
18
O] tiofosfato,
com a configurao absoluta mostrada a seguir. Ao contrrio, a hidrlise deste ATPS quiral
por uma ATPase bombeadora de clcio de msculo origina trifosfato com a configurao
oposta. Qual a interpretao mais simples destes dados?