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Conc de acar
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t (min)
PRTICA 6: DETERMINAO DE ACARES REDUTORES
PELO MTODO DO DNS
Introduo:
Os acares redutores das amostras podem ser determinados pelo mtodo do DNS.
Este mtodo consiste na reduo, em meio alcalino, do cido 3,5dinitrossaliclico em
cido 3-amino-5-nitrossalcilico por ao dos acares redutores, dando origem a um
composto acastanhado que obedece a lei de Lambert-Beer, ou seja, a transmitncia
proporcional concentrao da substncia dissolvida, neste caso, os acares redutores.
Reagentes:
cido 3,5-dinitrossaliclico 1,0 g
Soluo NaOH 2N 20,0 mL
Sal de Rochellle (ver nota A) 30,0g
gua destilada at 100,0 mL
Procedimento:
Dissolver temperatura ambiente (ver nota B) 1,0g de cido 3,5-
dinitrossaliclico em 50 mL de gua destilada (ocorre dissoluo parcial do cido). Aos
poucos, adicionar os 20mL da soluo NaOH 2N, agitando sempre, at a dissoluo
completa do cido. Adicionar 30g de sal de Rochelle; dissolver e completar o volume
at 100mL (ver nota C).
Notas:
A: O sal de Rochelle o tartarato de potssio e sdio tetrahidratado. Sua funo
proteger o reagente e, conseqentemente, o acar da amostra, da ao do oxignio
dissolvido.
B: Essa dissoluo demorada, necessitando de agitao constante. Para favorecer o
processo, ela pode ser feita a uma temperatura prxima a 30
0
C.
C: Proteger o reagente da ao do CO
2
; hidrxido de sdio na soluo.
Curva de Calibrao do DNS
1. Em um Bquer de 50mL pesar em balana semi-analtica, 20g de glicose, anotando
o valor exato. Diluir em um pouco de gua e transferir, analiticamente, para um balo
de 1000mL. Completar o volume e homogeneizar;
2. A partir da concentrao da suspenso padro escolher os valores para as
concentraes, de forma a cobrir uma determinada faixa de concentraes;
3. Realizar uma srie de diluies com um conjunto de pipetas e bales volumtricos
adequados. Utilizar como sugesto os valores da tabela abaixo.
Suspenso
nmero
Conc. da
diluio,
X (g/L)
Fator de
diluio
Modo de preparo
(mL da susp.
padro)
Absorbncia
1 0,2 100x 5 at 500
2 0,4 50x 1 at 500
3 0,6 33,3x 15 at 500
4 0,8 25x 2 at 50
5 1,0 20x 2,5 at 50
6 1,2 16,67x 3,0 at 50
7 1,5 13,33x 19 at 250
8 1,6 12,5x 20 at 250
4. Homogeneizar cada suspenso e fazer as leituras em espectrofotmetro com
comprimento de onda de 540nm.
5. Realizar, pelo menos, duas leituras do valor da absorbncia para cada concentrao.
O espectrofotmetro calibrado antes de cada leitura, com um branco de gua
destilada.
6. Construir um grfico, colocando no eixo das ordenadas os valores da concentrao
de glicose X (g/L) e no eixo das abscissas os valores da absorbncia (D.O).
7. Fazer uma regresso linear com o auxlio de um programa de computador ou
utilizando o mtodo dos mnimos quadrados.
8. Calcular o coeficiente de correlao, r, e determinar o intervalo de concentraes,
X
1
- X
2
, no qual a expresso vlida.
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
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D
O
Concentrao g/L
Curva de calibrao Glicose
Y= -0,06386+0,20038X
r=0,99554
Procedimento experimental para a amostra
1. Preparao das amostras contendo sacarose
Transferir 1mL da amostra para um tubo de ensaio;
Adicionar 1mL de HCl concentrado;
Aquecer em banho-maria a 68C por 15min;
Neutralizar com NaOH utilizando fenolftalena como indicador;
Aferir o volume diluio desejada.
2. Teste com DNS
Transferir 0,5mL da amostra para o tubo de Folin Wu e adicionar 1mL de DNS.
Homogeneizar;
Levar o tubo de Folin Wu a banho-maria por 5min a 100C;
Aferir o volume para 12,5mL com gua destilada;
Homogeneizar a amostra e realizar a leitura da Transmitncia no
espectrofotmetro devidamente calibrado utilizando comprimento de onda =
540nm.
3. Preparao do Branco
Repete-se o mesmo procedimento para a preparao da amostra, entretanto a
alquota retirada deve ser gua. Em seguida, realizam-se os procedimentos para o teste
com DNS.
PRTICA 7/8/9: METABOLISMO
Objetivo:
- Fatores que influenciam o metabolismo celular.
- Observar o crescimento celular da levedura Saccharomyces cervisiae em diferentes
condies ambientais tais como: fontes de carbono, sais, temperatura e pH.
Material:
- Micro-organismo: Saccharomyces cervisiae.
- Meio de cultura bsico (g/l):
Glicose -----------------------100
Extrato de levedura ---------2
Uria-----------------------------1
KH
2
PO
4
-------------------------1
MgSO
4
.7H
2
O ------------------0,5
H
2
O ----------------------------- 1L
Observao: todos os inculos devem ser feitos assepticamente, utilizando pipetas e
tubos de ensaio estreis, um tubo para cada anlise.
Procedimento:
1-Efeito da temperatura
Inocular 0,1ml da suspenso de levedura em 04 tubos de ensaio contendo o meio bsico
e encubar nas temperaturas a seguir: 5C, 30C, 45C e 60C por 48h.
Tubo Temperatura
C
Houve
crescimento?
Concluso
1 4
2 30
4 60
2-Efeito do pH
Inocular 0,1ml do microrganismo em tubos de ensaio contendo meio adequado a
diferentes pH (2,0; 4,0; 8,0; 10,0)e encubar a 30C por 48h
Tubo pH Houve
crescimento?
Concluso
1 2,0
2 4,0
3 7,0
4 10,0
3-Efeito da fonte de carbono
Inocular 0,1ml do microrganismo em tubos de ensaio contendo meios adequados (**),
todos os nutrientes so iguais com exceo a fonte de carbono. Encubar a 30C por 48h
de acordo com a tabela a seguir:
Tubo Fonte de carbono Houve
crescimento?
Concluso
1 Glicose
2 Celulose 1%(P/P)
3 Sacarose
4 Amido
5 Etanol (20%V/V)
6 Glicerol
3-Efeito da concentrao de sais
Inocular 0,1ml do microrganismo em tubos de ensaio contendo meios adequados (**),
todos os nutrientes so iguais com exceo concentrao de sal (NaCl). Encubar a
30C por 48h de acordo com a tabela a seguir:
Tubo Fonte de
carbono
Houve
crescimento?
Concluso
1 0,0% NaCl
3 1% NaCl
3 5% NaCl
4 8% NaCl
5 10% NaCl
Pergunta-se:
1. Voc espera que a levedura cresa em anaerobiose, aerobiose ou facultativa?
2. Quais as funes dos nutrientes de um meio de cultura?
3. Escolha um meio para autotrficos e outro para heterotrficos. Explique-os
4. Qual a funo especifica dos sais no crescimento celular?
5. Descreva etapa por etapa a via metablica envolvida
6. Quais os caminhos para o piruvato em aerobiose e anaerobiose? (use aqueles
dados em sala)
7. D 05 exemplos do uso industrial da via glicoltica
Descreva a lanadeira de eltrons em todas as suas etapas e onde ocorre na clula?
PRTICA 10: CARACTERIZAO DE LIPDIOS
Introduo
Lipdios podem ser caracterizados atravs de suas propriedades fsico-qumicas.
Em geral so solveis em gua e solveis em solventes apolares ou de baixa polaridade.
Os triacilgliceris, que constituem o principal grupo de lipdios, podem ser analisados
por hidrlise seguida de separao e caracterizao dos constituintes. Os triacilgliceris
podem ser hidrolisados por cidos minerais concentrados e por enzimas especficas
(lipases), liberando glicerol e cidos graxos. Na presena de bases sofrem hidrlise
alcalina (reao de saponificao), liberando glicerol e sais de cidos graxos (sabes),
como mostrado na Figura 2.
Figura 2 Hidrlise alcalina de um triacilglicerol.
Objetivos
Caracterizar as propriedades fsico-qumicas de triacilgliceris (estres de cidos
graxos); as reaes de hidrlise cida e alcalina (saponificao); o poder de sabes
solveis.
Procedimento
1. Solubilidade
Numere cinco tubos de ensaio e coloque 2,0 mL dos seguintes solventes: gua,
etanol, ter etlico, clorofrmio e acetona. Em seguida adicione 1,0 mL de leo vegetal a
cada tubo, agite-os. Verifique a solubilidades em cada tubo, agite-os. Verifique a
solubilidade em cada tubo e explique-as em termos fsico-qumicos.
2. Reao de saponificao (preparo de sabo)
Prepare a soluo alcolica de hidrxido de potssio a 20%, misturando 10,0 mL
da soluo aquosa de KOH a 40% e 10,0 mL de lcool etlico (soluo de potassa
alcolica) em um Erlenmeyer de 125 mL. Em seguida acrescente 5,0 mL de leo
vegetal e aquea o sistema em banho-maria fervente. Quando iniciar a fervura, faa
sucessivas retiradas de uma ou duas gotas do sistema, que devero ser acrescentadas a
tubos de ensaio contendo 2,0 mL de gua destilada, agite. Observe se h ou no a
formao de espuma. Explique e conclua.
Obs.: Reserve o contedo do Erlenmeyer para testes posteriores.
3. Separao de cidos graxos
Transfira 4,0 mL do contedo do Erlenmeyer (contendo sabo) para um tubo de
ensaio, acrescente um indicador de pH (2 gotas de fenolftalena). Em seguida coloque
gota a gota, sempre com agitao, HCl concentrado at a viragem do indicador (rseo
para incolor). Verifique a separao da mistura em duas fases.
Obs.: Reserve a soluo para o teste posterior (item 5).
4. Separao de sabo por salificao
Em um tubo de ensaio coloque 2,0 mL da soluo de sabo (item 2), adicione
10,0 mL de soluo saturada de cloreto de sdio (NaCl). Observe a separao do sabo.
Mostre atravs de reao o que ocorreu.
5. Ressaponificao
Transfira 4 gotas da soluo formada no experimento do item 3 para um tubo de
ensaio contendo 5,0 mL de gua destilada quente. Adicione gota a gota da soluo de
NaOH 1,0 mol/L at a solubilizao da parte oleosa. Agite o tubo e verifique a
formao da espuma. Explique a reao qumica ocorrida, o produto que se forma e o
mecanismo da reao.
Obs.: Reserve a soluo para o teste posterior (item 6).
6. Formao de sabo insolveis
Na presena de ons divalentes, como Ca
2+
ou Mg
2+
, os sabes tendem a
precipitar formando sabes insolveis sem poder detergente (Figura 3).
Figura 3 Formao de um sabo insolvel.
Transfira 1,0 mL do contedo do tubo de ensaio da experincia anterior (item 5)
para outro tubo de ensaio. Adicione 1,0 mL de gua destilada e 4 gotas de CaCl
2
a 1%.
Observe e justifique os resultados.
PRTICA 11: NDICE DE SAPONIFICAO
Introduo
O ndice de saponificao o nmero de mg de hidrxido de potssio (KOH)
necessrio para saponificar 1 grama de gordura ou leo. A sua determinao tem
importncia devido a relao entre o ndice de saponificao e o comprimento da cadeia
dos resduos de cidos graxos. Trs molculas de KOH so necessrias para neutralizar
3 cidos graxos liberados pela hidrlise dos triacilgliceris, no importando o tamanho
da cadeia dos cidos graxos. O ndice de saponificao correspondente a uma dada
massa de lipdios varia inversamente com a massa molar dos resduos de cidos graxos.
Os lipdios possuem duas fraes a saponificvel e a insaponificvel. A frao
insaponificvel constituda pelas vitaminas lipossolveis, pr-vitaminas, esteroides e
outros compostos.
Objetivos
Determinao do ndice de saponificao de leos vegetais comerciais.
Procedimento
O ndice de saponificao expresso em mg de KOH necessrio para neutralizar
os cidos graxos de 1g de gordura ou leo.
Em um Erlenmeyer de 250 mL rigorosamente limpo e seco pesar cerca de 1
grama de lipdio. Em seguida adicionar 25 mL de KOH alcolica. Levar o sistema ao
banho-maria fervente por 30 minutos. Retirar do banho e titular ainda quente com HCl
1,5 mol.L
-1
usando 2 gotas de fenolftalena como indicador.
Realizar um prova em branco usando 25 mL de KOH alcolica aquecido (cerca
de 5 minutos) e titular com HCl 0,5 mol.L
-1
, usando a fenolftalena como indicador.
Clculo
IS = (V
B
V
A
) x 28,05 / m
V
B
= volume do HCl gasto na titulao do branco em mL
V
A
= volume do HCl gasto na titulao da amostra em mL
m = massa da amostra em grama
Obs.: Como o ndice de saponificao expresso em mg de KOH, a frmula j contm
as transformaes do volume e da massa.
Produto ndice de saponificao
leo de soja 189-195
leo de milho 187-193
leo de girassol 188-194
leo de amendoim 188-195
leo de arroz 181-189
leo de algodo 189-198
Azeite de oliva 186-196
Azeite de dend 195-205
Gordura de coco 250-264
Gordura de leite 219-234