Cromatografia

Baseia-se na interaco da amostra a

analisar (soluto) com uma fase mvel
e uma fase estacionria

1. a fase mvel (gs ou lquido) arrasta a amostra

(soluto) atravs da fase estacionria (slida ou lquida)

fase
mvel

soluto
fase estacionria

2. os componentes da amostra dividem-se entre as duas

fases, conforme a afinidade.

Interaco com a fase estacionria

1. Adsoro

fsica (interaces
dipolo-dipolo)

reteno
superfcie de
um slido

qumica (lig. qumica

s molculas do adsorvente)
por troca inica (o slido cede
ies ao fluido e recebe outros
em troca)

2. Absoro

transferncia para o
interior da fase
estacionria

adsoro

absoro

Tcnicas cromatogrficas

- cromatografia em camada fina (TLC)

- cromatografia em coluna (vrios tipos)
-cromatografia em papel
-cromatografia gasosa
-cromatografia de alta presso (HPLC)
- etc, etc!!!!!!!

de partio
2 tipos fundamentais:
de adsoro

cromatografias de partio:
fase estacionria lquida
fase mvel lquida ou gasosa
- os componentes distribuem-se (particionam-se)
entre as duas fases, de modo diferencial, de acordo
com a sua solubilidade numa e noutra
ex: cromatografia em papel, gs-lquido, HPLC

cromatografias de adsoro:
fase estacionria slida
fase mvel (eluente) lquida ou gasosa

ex: cromatografia em camada fina, alguns tipos

de cromatografia em coluna
(adsorventes mais comuns: gel de slica, alumina)

placa de TLC (Thin Layer Chromatography)

origem
eluente

x1

y
x2

mobilidade relativa (rf):

rf=x/y

rf1rf2 posso distinguir os 2 compostos

Tina de cromatografia
tampa

papel de filtro

placa de
TLC

eluente

Exemplo: TLC de lpidos

Identificao do grupo

Escrever
a lpis
Amostra a separar
(extracto lipdico)

padres

Cromatografia em coluna:

Mistura a
separar

Solvente (fase
mvel) sempre
adicionado, de
modo a nunca
secar a coluna

quanto > a
afinidade
para a fase
estacionria,
mais tempo
demoram a
ser arrastadas
pelo eluente
Enchimento da
coluna (fase
estacionria)

Tempo

recolha de diferentes
fraces para tubos de
ensaio diferentes

MTODOS CROMATOGRFICOS DE SEPARAO DE PROTENAS

Diferentes tipos:
- excluso molecular
- troca inica
- afinidade

CROMATOGRAFIA DE EXCLUSO MOLECULAR volume/forma

CROMATOGRAFIA DE TROCA I
INICA carga

Trocadores aninicos (+)

e catinicos (-)

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Hemoglobina glicosilada
A glucose liga-se hemoglobina de forma no enzimtica:

Glucose
sangunea

Glucose em
excesso

a % de hemoglobina glicosilada (HBA1c)depende da concentrao mdia de

glucose durante o tempo de vida mdio dos eritrcitos

Hba1c mais aninica (carga menos + que as outras

hemoglobinas)

Resina Bio-Rex, com grupos carboxlicos (trocador
catinico) hemoglobina liga-se aos grupos COO
Eluio feita com tampes de fosfato de sdio de
fora inica crescente

Hba1c menos positiva, portanto a sua eluio
mais rpida (i.e., a primeira a sair)

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CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE selectividade de liga

ligao

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