ARTIGO

Dinmica da ovognese em peixes forrageiros da represa de Trs

Marias, Minas Gerais: estudo histolgico e histoqumico
Oogenesis dynamics in forrager fishes from Trs Marias reservoir,
Minas Gerais: histological and histochemical study

NILO BAZZOLI
Museu de Cincias Naturais - lCBS PUC-Minas
Laboratrio de lctiohistologia - Depto de Morfologia - ICB - UFMG

ELIZETE RIZZO
Laboratrio de lctiohistologia - Depto de Morfologia - ICB - UFMG

JOS ENEMIR DOS SANTOS

Depto de Cincias Biolgicas - lCBS - PUC-Minas

YOSHIMI SATO
Estao de Hidrobiologia e Piscicultura de Trs Marias - CODEVASF

RESUMO
O desenvolvimento ovocitrio dos telesteos Hemigrammus marginatus, Moenkhausia
costae e Roeboides xenodon foi dividido em quatro estdios, de acordo com caractersticas citolgicas do ovcito e suas camadas envoltoras. Tcnicas histoqumicas demonstraram presena de glicoprotenas neutras nos glbulos de vitelo, nas clulas
foliculares e na zona pelcida das trs espcies. O contedo dos alvolos corticais
variou entre as espcies: glicoprotenas neutras e glicoconjugados cidos carboxilados
ou sulfatados. A camada externa da zona pelcida de M. costae e H. marginatus contm
tambm glicoconjugados cidos carboxilados e glicoprotenas ricas em cido silico,
respectivamente. As variaes morfolgicas dessas estruturas foliculares podem estar
relacionadas com funes especficas durante a ovognese e fertilizao.
Unitermos: Ovognese, peixes forrageiros, represa de Trs Marias.
ABSTRACT
The oocyte development of teleost species Hemigrammus marginatus, Moenkhausia
costae and Roeboides xenodon was divided into four stages based on ytological
characteristics of the oocyte and its surrounding layers. Histochemical techniques showed
the presence of neutral glycoproteins in the yoIk globules, in follicular cells and in zona
pellucida of three species. The cortical alveoli content varied among the species: neutral
glycoproteins and sulphated or carboxilated acid glycoconjugates. The outer layer of
zona pellucida in M. costae and H. marginatus also contained carboxilated acid
glycoconjugates and sialic acid-rich glycoproteins, respectively. The morphological
variations in the follicular structures may be related to specific functions during oogenesis
and fertilization.
key-words: Oogenesis, forager fishes, Trs Marias reservoir.

BIOS, Cadernos do Departamento de Cincias Biolgicas da PUC-Minas, v.4, n.4, p. 5-10, Dez.1996

NILO BAZZOLI; ELIZETE RIZZO; JOS ENEMIR DOS SANTOS; YOSHIMI SATO

Introduo

Os peixes forrageiros Hemigrammus

marginatus Ellis, 1911, Moenkhausia costae
(Steindachner, 1907) e Roeboides xenodon (Reinhardt,
1849), characdeos de pequeno porte, constituem elo
indispensvel na cadeia alimentar da represa de Trs
Marias, Minas Gerais, servindo de alimento a diversos piscvoros.
O estudo das caractersticas morfolgicas das
vesculas corticais, glbulos de vitelo, zona pelcida
e clulas foliculares dos ovcitos de peixes nativos
constitui etapa bsica e primordial para estabelecer a
biologia reprodutiva dos mesmos (Guraya, 1986). A
determinao da natureza qumica dessas estruturas
essencial para a compreenso de seus papis funcionais na fertilizao, desenvolvimento inicial do
embrio (Hart, 1990) e crescimento de larvas (Moodie
et al., 1989).
Estudos recentes com ovcitos de vrias espcies de peixes da represa de Trs Marias indicaram variaes na morfologia e composio qumica
de estruturas ovocitrias (Bazzoli & Rizzo, 1990; Rizzo
& Bazzoli, 1991; 1993; 1995). Alguns aspectos da
dinmica da ovognese podem apresentar padres
morfolgicos similares em certos grupos sistemticos sem, no entanto, apresentar correlao
filogentica (Bazzoli & Godinho, 1994; 1995). Apesar
da abundncia de peixes forrageiros na referida represa, no existe literatura a respeito da biologia e, em
particular da reproduo dessas espcies. Em vista
disso, o presente trabalho caracteriza histolgica e
histoquimicamente aspectos da ovognese de H.
marginatus, M. costae e R. xenodon da represa de
Trs Marias.
II

Material e Mtodos

Exemplares de Hemigrammus marginatus,

Moenkhausia costae e Roeboides xenodon capturados s margens da represa de Trs Marias, com auxlio de redes de arrasto, foram fixados inteiros em
lquido de Bouin por 18 a 24 horas. No Museu de Cincias Naturais da PUC-Minas, foram selecionadas
5 a 10 fmeas em maturao avanada de cada espcie e seus ovrios dissecados para processamento
histolgico. No Laboratrio de lctiohistologia do ICB/
UFMG, as gnadas foram includas em resina plstica glicol-metacrilato (JB-4, Polysciences), cortadas
com 1 a 5 m de espessura e coradas com azul de
6

toluidina-borato de sdio e colorao de Dominici.

Para anlise do contedo de carboidratos e protenas
nas estruturas ovocitrias, cortes de 5 a 7 m, de
fragmentos includos em parafina, foram submetidos
s seguintes tcnicas histoqumicas, de acordo com
Pearse (1985): Periodic Acid-Schiff (PAS); amilase
salivar + PAS; Alcian blue (AB) pH 2,5; AB pH 0,5;
ninhidrina-Schiff (NS); mtodo combinado de Alcian
yellow (AY) pH 2,5 + AB pH 0,5 (Ravetto, 1964) e
hidrlise com HCl 0,1 N (8 horas a 60C) seguida do
PAS e do AB pH 2,5 (Quintarelli et al., 1961). Para
anlise do contedo de lpides, alguns fragmentos de
ovrios foram fixados em formol a 10%, cortados em
criostato com 12 a 15 m de espessura e submetidos s tcnicas de Sudan black B e Sulfato de azul
do Nilo.
III

Resultados

Ovcitos das espcies estudadas foram classificados em 4 estdios de desenvolvimento, de acordo com Bazzoli & Rizzo (1990): O1 = ovcito jovem,
O2 = ovcito pr-vitelognico, O3 = ovcito com
vesculas corticais e, O4 = ovcito com glbulos de
vitelo ou vitelognico (Figs. 1 a 6).
Nos ovcitos das trs espcies, vesculas ou
alvolos corticais ocorrem como estruturas
vacuoladas, no coradas ou ligeiramente basfilas nas
preparaes histolgicas de rotina (Figs. 2 e 3). Elas
surgem no ooplasma perifrico, antes do incio da
vitelognese, aumentam em nmero e volume, constituindo colar perifrico aps a deposio dos glbulos
de vitelo (Figs. 4 a 6).
Nos ovcitos vitelognicos de R. xenodon
observaram-se alvolos corticais contnuos formados
de vesculas grandes; glbulos de vitelo esfricos;
clulas foliculares cbicas; zona pelcida ondulada e
com duas camadas (Fig. 5). Nos ovcitos vitelognicos
de H. marginatus e M. costae observaram-se alvolos corticais descontnuos formados de vesculas pequenas; glbulos de vitelo esfricos; clulas foliculares
pavimentosas; zona pelcida ondulada e tambm com
duas camadas (Fig. 6).
A anlise histoqumica (Tab. I e II) demonstrou
presena de glicoprotenas neutras nos alvolos
corticais, glbulos de vitelo, clulas foliculares e zona
pelcida das espcies em estudo. Na camada externa da zona pelcida de M. costae, detectaram-se tambm glicoconjugados cidos carboxilados e
glicoprotenas ricas em cido silico em H.
marginatus. Nos glbulos de vitelo das trs espcies,
demonstrou-se presena de lpides neutros. Nos alvolos corticais de M. costae detectaram-se somente glicoprotenas neutras, nos de H. marginatus
BIOS, Belo Horizonte, v.4, n.4, p. 5-10, Dez. 1996

Dinmica da ovognese em peixes forrageiros da represa de Trs Marias, Minas Gerais: estudo ...

glicoprotenas neutras e glicoconjugados cidos

sulfatados e nos de R. xenodon glicoprotenas neutras nos ovcitos vitelognicos (04) e glicoconjugados
cidos sulfatados nos ovcitos com vesculas corticais
(03). A reao do PAS permaneceu inalterada aps
tratamento prvio com amilase salivar, excluindo, deste
modo, presena de glicognio nas estruturas
ovocitrias analisadas. A presena de cido silico
na camada externa da zona pelcida de H. marginatus
foi confirmada pela reao negativa hidrlise cida
seguida do AB pH 2,5 e tambm pela diminuio de
intensidade da reao de hidrlise cida seguida do
PAS.
IV Discusso
Os alvolos corticais dos ovcitos de telesteos
so anlogos aos grnulos corticais de outros vertebrados e invertebrados, sendo seus contedos liberados no espao perivitelnico durante a reao cortical
ps-fertilizao, impedindo a polispermia (Yamamoto,
1961; Selman et al., 1988; Ohta, 1990). No presente
estudo, observou-se morfologia variada dos alvolos
corticais, dependendo da espcie, o que foi tambm
constatado por Kobayashi (1985); Selman et al.
(1988); Hart & Donavan (1983); Bazzoli & Rizzo (1990);
Bazzoli & Godinho (1994).
As glicoprotenas detectadas nos alvolos corticais das trs espcies analisadas coincidem com
aquelas de outros telesteos neotropicais estudados
por Bazzoli & Godinho (1994). Variaes no contedo das vesculas corticais nos 03 e 04 de R. xenodon
indicam modificaes na composio qumica dessas vesculas durante a maturao ovocitria. Observaes similares foram feitas no lambari-bocarra,
Oligosarcus argenteus por Neves et al. (1995). Segundo Verma & Thakur (1988), variaes no contedo
dos alvolos corticais podem possibilitar desempenho
de funes especficas durante a fertilizao.
Estudos recentes identificaram uma polisialoglicoprotena nos alvolos corticais de Salmo gairdnerii
(Inoue et al., 1987; Kitajima et al., 1989) que, aps
fertilizao, apresenta propriedades similares a mucopolissacardeos cidos (Hart, 1990). A presena de
cido silico nos alvolos corticais das espcies analisadas no presente trabalho foi excluda, uma vez que
a intensidade do PAS e do AB pH 2,5 permaneceu

BIOS, Belo Horizonte, v.4, n.4, p. 5-10, Dez. 1996

inalterada aps hidrlise cida. No entanto,

glicoprotenas ricas em cido silico foram detectadas nos alvolos corticais de cicldeos, do pirarucu e
do aruan (Bazzoli & Godinho, 1994).
Nos glbulos de vitelo das trs espcies
estudadas detectaram-se glicoprotenas neutras e
lpides neutros, coincidindo com as observaes de
Bazzoli (1992) em 103 espcies de telesteos
neotropicais de gua doce.
A presena de glicoprotenas neutras na zona
pelcida de telesteos brasileiros uma constante
(Bazzoli, 1992). Entretanto, nossos resultados revelaram, ainda, glicoconjugados cidos carboxilados na
camada externa desse envoltrio em M. costae, coincidindo com observaes em Serrasalmus brandtii
(Rizzo & Bazzoli, 1991) em outros characiformes das
sub-famlias Serrasalminae, Myleinae e tambm em
Prochilodontidae e Pimelodidae (Bazzoli, 1992). Por
outro lado, a zona pelcida de R. xenodon contm
somente glicoprotenas neutras, tanto na camada interna como na externa, semelhante a vrios characdeos, anastomdeos, curimatdeos, entre outros
(Bazzoli, 1992). O cido silico parece ser de ocorrncia rara na zona pelcida de telesteos brasileiros, uma vez que foi detectado somente na espcie
Arapaima gigas, das 103 analisadas por Bazzoli (1992)
e em H. marginatus, no presente trabalho. Variaes
na estrutura e composio qumica da zona pelcida
de telesteos refletem adaptaes de seus ovos a
diferentes habitats (Guraya, 1986).
Nas clulas foliculares das espcies estudadas no presente trabalho detectaram-se glicoprotenas
neutras, o que foi tambm constatado em outros
characiformes por Bazzoli (1992). As protenas sintetizadas pelas clulas foliculares podem ser utilizadas no crescimento da camada folicular, maturao
ovocitria e formao da zona pelcida (Guraya, 1986).
As variaes na morfologia e contedo dos alvolos corticais e zona pelcida, observadas no presente estudo, podem refletir diferentes funes dessas estruturas durante a ovognese e a fertilizao.
Agradecimentos
Estao de Hidrobiologia e Piscicultura de Trs
Marias-CODEVASF, pela coleta e fornecimento do
material biolgico, ao FIP-PUC-Minas, processo 95/
011, CNPq, FAPEMIG e PRPq/UFMG.

NILO BAZZOLI; ELIZETE RIZZO; JOS ENEMIR DOS SANTOS; YOSHIMI SATO

Figura 1- ovcito jovem (01) com citoplasma basfilo, ncleo

vesiculoso com vrios nuclolos perifrico e ovcito prvitelognico (02) com nuclolos acolados no envoltrio nuclear,
fazendo protuses no mesmo- Moenkhausia costae - azul de
toluidina - 180x.

Figura 2- ovcito com vesculas corticais (03) pequenas (setas)

em incio de formao na periferia do ovcito, zona pelcida
ondulada e clulas foliculares pavimentosas - Hemigrammus
marginatus - azul de toluidina - 190x.

Figura 3- ovcito com vesculas corticais (03) grandes no

ooplasma perifrico - Roeboides xenodon - azul de toluidina 190x.

Figura 4- ovcito em incio de vitelognese (04), mostrando

vesculas corticais (setas), formando colar descontnuo no
ooplasma perifrico - Hemigrammus marginatus - azul de toluidina
- 190x.

Figura 5- ovcito vitelognico (04) com alvolos corticais contnuos formados de vesculas grandes, glbulos de vitelo esfricos, zona pelcida ondulada com micrpila (seta) e clulas
foliculares cbicas - Roeboides xenodon - azul de toluidina 150x.

Figura 6- ovcito vitelognico (04) com alvolos corticais

descontnuos formados de vesculas pequenas (seta), glbulos
de vitelo esfricos e clulas foliculares pavimentosas Hemigrammus marginatus - azul de toluidina - 130x.

BIOS, Belo Horizonte, v.4, n.4, p. 5-10, Dez. 1996

Dinmica da ovognese em peixes forrageiros da represa de Trs Marias, Minas Gerais: estudo ...

Tabela I
Contedo das vesculas corticais, glbulos de vitelo, zona pelcida e clulas foliculares de ovcitos
vitelognicos de H. marginatus, M. costae e R. xenodon da represa de Trs Marias, Minas Gerais

CONTEDO
ESTRUTURA

H. marginatus

M. costae

R. xenodon

Alvolos corticais
Glbulos de vitelo
Zona pelcida (CI)
Zona pelcida (CE)
Clulas foliculares

GNE + GSU
GNE + LIPN
GNE
GNE + GSI
GNE

GNE
GNE + LIPN
GNE
GNE + GAC
GNE

GNE
GNE + LIPN
GNE
GNE
GNE

CI= camada interna; CE= camada externa; GNE= glicoprotenas neutras; GSU= glicoconjugados cidos
sulfatados; GAC= glicoconjugados cidos carboxilados; LIPN= lpides neutros; GSI= glicoprotenas
ricas em cido silico.

Tabela II
Contedo ovocitrio e respectivas reaes histoqumicas

REAES HISTOQUMICAS
CONTEDO
GNE
GNE + GSU
GNE + GAC
GNE + LIPN
GNE + GSI

PAS AB 2,5
+
+
+
+
+

+
+
+

AB 0,5 AY 2,5
+
-

+
+

NS

SB

+
+
+
+
+

+
-

SAN HA + AB 2,5
+
-

+
+
-

GNE= glicoprotenas neutras; GSI= glicoprotenas ricas em cido silico; GSU= glicoconjugados cidos
sulfatados; GAC= glicoconjugados cidos carboxilados; LIPN= lpides neutros; PAS= Periodic acid Schiff;
AB 2,5= Alcian blue pH 2,5; AB 0,5= Alcian blue pH 0,5; AY 2,5= Alcian yellow pH 2,5; NS= ninhidrinaSchiff; SB= Sudan black B; SAN= Sulfato de azul do Nilo; HA= hidrlise cida.

BIOS, Belo Horizonte, v.4, n.4, p. 5-10, Dez. 1996

NILO BAZZOLI; ELIZETE RIZZO; JOS ENEMIR DOS SANTOS; YOSHIMI SATO

Referncias bibliogrficas
BAZZOLI, N. Ovognese em peixes telesteos
neotropicais de gua doce. Belo Horizonte: Instituto de Cincias Biolgicas da UFMG. 1992.182 p.
(Tese, Doutorado em Cincias: Morfologia).
BAZZOLI, N.; GODINHO, H. P. Cortical alveoli in oocytes
of freshwater neotropical teleost fish . Boll. Zool., v.
61, p. 301-308, 1994.
BAZZOLI, N.; GODINHO, H. P. Comparative morphology
of the yolk nucleus (Balbiani body) in freshwater
neotropical teleost fish. Rev. Brasil. Biol. v. 55, n. 2,
p. 207-214, 1995.
BAZZOLI, N.; RIZZO, E. A comparative cytological and
cytochemical study of the oogenesis in ten Brazilian
teleost fish specie. Eur. Arch. Biol., v. 101, n. 4, p.
399-410, 1990.
GURAYA, S. S. The cell and molecular biology of fish
oogenesis. Basel: Sauer, H. W., 1986, 223p.
HART, N. H. Fertilization in teleost fishes: mechanisms
of sperm-egg interactions. Int. Rev. Cytol., v. 121, p.
166, 1990.
HART, N. H.; DONAVAN, M. Fine structure of the chorion
and site of sperm entry in the egg of Brachydanio. J.
Exp. Zool. v. 227, p. 277-296, 1983.
INOUE, S.; KITAJIMA, K.; INOUE, Y.; KUDO,S. Localization
of polysialoglycoprotein as a major glycoprotein
component in cortical alveoli of the unfertilized eggs
of Salmo gairdnerii. Dev. Biol. v. 123, p. 442-454,
1987.
KITAJIMA, K.; INOUE, S.; INOUE, Y. Isolation and characterization of a novel type of sialoglycoproteins
(Hyosophorin) from the eggs of medaka, Orizias
latipes: nonapeptide with a large N-Iinked glycan
chain as a tandem repeat unit. Dev. Biol. v. 132, p.
544-553, 1989.
KOBAYASHI, W. Communications of oocyte-granulosa
cells in the chum salmon ovary detected by transmission electron microscopy. Develop. Growth
Differ., v. 27, p. 553-561, 1985.
MOODIE, G. E. E.; LOADMAN, N. L.; WIEGAND, M. D.
Influence of egg characteristics on survival, growth
and feeding in larval walleye (Stizostedion vitreum).
Can. J. Fish. Aquat. Sci. v. 46, p. 516-521, 1989.

10

NEVES, C. A.; ANDRADE, D. R.; MATTA, S. L. P.; VIDAL Jr.,

M. V.; SANTOS, A.A. Cytochemical analysis of
polysaccharides from the cortical alveoli of the
oocytes of the lambari-bocarra (Oligosarcus
argenteus Gunter, 1864) (Pisces, Characidae). Rev.
Brasil. Biol. v. 55, n. 4, p. 693-696, 1995.
OHTA, T., IWAMATSU, M., TANAKA, Y., YOSHIMOTO, Y.
Cortical alveolus breakdown in the eggs of the
freshwater teleost Rhodeus ocellatus ocellatus.
Anat. Rec., v. 227, p. 486-496, 1990.
PEARSE, A. G. E. Histochemistry: theoretical and
applied. 4 ed. Edinburgh: Churchill Livingstone,
1985, 1055p.
QUINTARELLI, G., TSUIKY, S., HASCHIMOTO, Y., PIGMAN,
W. Studies of sialic acid containing mucins in bovine
submaxilary and rat sublingual glands. J. Histochem. Cytochem., v. 9, p. 176-183, 1961.
RAVETTO, C. Alcian blue-Alcian yellow: a new method for
identification of different acidic groups. J. Histochem. Cytochem., v. 12, p. 441, 1964.
RIZZO, E. & BAZZOLI, N. The zona pellucida of the white
piranha Serrasalmus brandtii Reinhardt, 1874
(Pisces, Characidae): A cytological and
cytochemical study. Func. Dev. Morphol. v. 1, n. 4, p.
21-24,1991.
RIZZO, E. & BAZZOLI, N. Oogenesis, oocyte surface and
micropylar apparatus of Prochilodus affinis
Reinhardt, 1874 (Pisces, Characiformes). Eur. Arch.
Biol. v. 104, p. 1-6, 1993.
RIZZO, E. & BAZZOLI, N. Follicular atresia in Prochilodus
affinis Reinhardt, 1874 (Pisces, Characiformes).
Rev. Brasil. Biol. v. 55, n. 4, p. 697-703, 1995.
SELMAN, K. WALLACE, R. A., BARR, V. Oogenesis in
Fundulus heteroclitus. V. The relationship of yolk
vesicle and cortical alveoli. J. Exp. Zool., v. 246, p.
42-56, 1988.
VERMA, G. P; THAKUR, C. Origin and composition of
cortical granules in oocytes of a teleost,
Mastacembelus armatus armatus (Lacpde).
Arch. Biol. v. 99, p. 325-334, 1988.
YAMAMOTO, T. Physiology of fertilization in fish eggs. Int.
Rev. Cytol. v. 12, p. 361-405,1961.

BIOS, Belo Horizonte, v.4, n.4, p. 5-10, Dez. 1996