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South Wales
C Ridoutt,a A Lee,a B Moloney,b PD Massey,c N Charmand and D Jordane*
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acordo com a Canon e Roe, quando a prevalncia da doena em uma grande populao
de animais de 1%, aproximadamente, 300 devem ser colhidas amostras para ter 95%
de certeza de detectar a doena. Neste levantamento, os constrangimentos prticos sobre
o nmero de animais disponveis para abate e amostragem significa que apenas 239
animais puderam ser avaliados no perodo de estudo (Figura 1). Um mtodo baseiaintencional e convenincia foi utilizado para obter amostras. A amostragem aleatria
no era vivel por causa dos nmeros e distribuio de sunos selvagens em todo NSW
desconhecidos. Caadores de porcos selvagens (amadores e profissionais), guardas
florestais da Pecuria de sade e autoridades de pragas e guardas do NSW Parques
Nacionais e Vida Selvagem de servio foram as fontes de amostras de sunos selvagens.
Obteno de amostras por esta abordagem tinha a desvantagem de no necessariamente
verdadeiramente refletindo o estado de infeco de todos os sunos selvagens em NSW,
embora tivesse o forte vantagem de alvejar o subconjunto da populao de sunos
selvagens que representa o maior risco para os seres humanos. A partir de cada animal,
uma amostra de sangue coagulado foi depositado num tubo liso 10 mL de uma inciso
abaixo do membro anterior ou na veia jugular. As amostras foram inicialmente mantidos
temperatura ambiente at a formao de cogulos, seguido de refrigerao a 4 C e,
em seguida, a apresentao em recipientes refrigerados para o Laboratrio de
Diagnstico Veterinrio Estado em Elizabeth Institute Agricultura Macarthur, Menangle,
NSW. As amostras foram centrifugadas durante aproximadamente 10 min a 3000 rpm
chegada e anlises ocorreu dentro de 48 h.
Testes sorolgicos
Todas as amostras de soros foram inicialmente testados para anticorpos por
meio do teste de rosa de bengala (RBT), com apenas os soros positivos testados usando
o teste de fixao de complemento (CFT), seguindo tcnicas de diagnstico padro
australiano. RBT um teste direto para Brucella, porem como B. abortus e B. melitensis
no ocorrem na populao animal australiana, ele serve como um teste de triagem til
para B. suis quando juntamente com o CFT. Os soros foram classificados como positivo
para o RBT se rendendo um 1 ttulo e foram classificados positivo para CFT se
rendendo um ttulo 8. S foram classificados como positivos para B. suis se ambos os
testes foram positivos. A sensibilidade e especificidade de RBT tm sido relatados como
79,1% e 81,2%, respectivamente.
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Os soros que testou positivo para ambos RBT e CFT foram submetidas a cultura e PCR para
deteco de B. suis. Para a cultura, cada amostra de soro foi inoculada numa placa de agar de sangue de
ovelha a 5% e uma Thayer-Martin (MTM) placa de gar modificado, com ambas as placas foram
incubadas a 37 C em uma atmosfera de 5-10% de CO2. As placas foram examinadas diariamente para o
crescimento durante 7 dias. Para a identificao de PCR, estirpes padro de B. ovis serviu como um
controlo positivo. Os iniciadores do gene alvo bcsp31, que est presente em todos Brucella spp.
Analise estatistica
Descriptive statistics and exact binomial 95% confidence intervals were generated for B. suis
and L. hardjo, because of the sparseness of positive titres in the data. For L. pomona, it was possible to
use mixed effects logistic modelling to estimate the prevalence of infection and corresponding 95%
confidence intervals and in doing so account for the effect of clustering on estimates. The latter model
consisted of region as fixed effect and culling locations within regions as random effect. All analysis was
performed in Stata version 12.1 (Stata Corporation, College Station, TX, USA).
Resultados
Em geral, os anticorpos B. suis foram detectados em 7 de 238 amostras, dando uma
seroprevalncia em todo o levantamento de 2,9%. Positivo B. suis ttulos foram distribudos de forma
desigual entre as regies analisadas, com todos os positivos estando presente no norte da NSW (Figura 1,
Tabela 1). Uma amostra de alta B.suis ttulo veio de um porco com orquite da regio de amostragem 1 e o
restante eram de amostragem regio 3. A distribuio da dimenso de ttulos positivos para B. suis
mostrado na Figura 2a. Organismos Brucella suis no foram cultivadas em sangue ou detectado por
anlise de PCR.
Ttulos de anticorpos elevados para L. pomona foram detectados em todas as regies, com
uma seroprevalncia de todo o levantamento de 53% (Tabela 1). Ttulos MAT 800 foram registrados
para> 60% das amostras positivas L. pomona (Figura 2b). A soroprevalncia de L. pomona foi elevada
nas regies do norte de amostragem (regies 1, 2 e 3), assim como a regio de amostragem 5, e baixa em
regies de amostragem 4 e 6 (Tabela 1). De 239 amostras, 9 foram positivas para L. hardjo, com o
Positivos agrupados em regies de amostragem 1 e 3 (Tabela 1). Os ttulos para anticorpos L. hardjo
foram muito menores do que os de L. pomona (Figura 2 c).
Discusso
Os resultados fornecem bons indcios sobre a infeco por B. suis em sunos selvagens na
NSW porturia, ainda que em nveis baixos. Vrios ttulos elevados para Brucella CFT> 32 (Figura 2a)
so considerados como tendo um alto valor preditivo para a presena de Brucella na populao, devido
alta especificidade do ensaio CFT.26 A cultura e a PCR de B. suis foram tentadas para se obter provas
conclusivas da presena do patgeno, mas no foram obtidos resultados positivos, o que pode ser devido
utilizao apenas de amostras de soro positivos para o cultivo (no de sangue total), e porque os suinos
em estudo no estavam em um estado de bacteremia no momento da amostragem. O ltimo consistente
com a patognese da infeco por Brucella em que os animais s exprimem uma breve bacteremia
transitria aps a infeco.27
As amostras positivas para B. suis tambm ajudam a entender melhor a distribuio dos casos
em ces utilizados na caa, pois estes ocorreram na mesma regio em que a maioria dos doropositivos
foram detectados neste estudo. Alem disso, a regio de amostragem com maior numero de de
soropositivos para B. suis est geograficamente conectado fronteira da queenslandia, onde h dcadas
que se tem conhecimento da ocorrncia da infeco em sunos selvagens. 4,5 Grande parte dessa fronteira
entre NSW e Queensland est aberta ao transito de sunos selvagens, seja pelo contrabando por caadores
ou pelo livre transito pela fronteira. Embora os dados para a prevalncia de anticorpo B. suis indiquem
uma baixa probabilidade de exposio humana, o risco para a sade deve ser considerado alto devido
gravidade e a prolongada durao da doena em seres humanos.2
A soroprevalncia de L. pomona observada neste estudo muito maior do que os
anteriormente registrados na Austrlia. Uma seroprevalncia estimada de 8,5% foi registrada no noroeste
NSW 5, em comparao com os 53% em todas as regies em estudo. Alm disso, foram registrados um
grande nmero de ttulos elevados (MAT 800), sugerindo infeco atual ou recente com L. pomona em
larga escala.15 A seca prolongada seguida de alta pluviosidade e as inundaes nos poucos anos antes do
estudo poderia ser responsvel por esses resultados.
13,28
NSW onde a soroprevalncia de L. pomona foi muito maior do que em outras regies. Em geral, as
condies mais midas, promover a disseminao e sobrevivncia das leptospiras. Alm disso, os
roedores so mais abundantes em boas estaes, pode atuar como hospedeiros de diferentes sorotipos de
Leptospira e potencialmente exacerbar a disseminao de contgio atravs da contaminao do meio
ambiente com a urina e fezes.29
A proporo de ttulos positivos para L. hardjo na amostra foi baixa em comparao com L.
pomona, indicando que os sunos selvagens podem ter um papel limitado como hospedeiros acidentais de
este sorotipo nas regies de NSW pesquisadas.
15
sorovares de Leptospira spp. de sunos selvagens aos animais domsticos requer a considerao, dado o
potencial de perdas econmicas.30 Vacinas muito eficazes esto disponveis
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e so, provavelmente, a