BuscaLegis.ccj.ufsc.

br

Percias em DNA: a coisa certa pode ser feita de forma errada?

Um estudo de caso hipottico

Mary Christina Pitta Pinheiro de Souza Melgao*

Andr Lus dos Santos Figueiredo**
Eduardo Ribeiro Paradela***

Resumo
A introduo das tcnicas para identificao humana por anlise de DNA nos
tribunais de pases como os Estados Unidos da Amrica foi cercada de desconfiana por
uma significativa parcela da comunidade cientfica e dos operadores do direito. Esta
objeo se deveu, em parte, a inexistncia de regras definidas e padronizadas para os
laboratrios envolvidos nestes exames. Embora tal perodo de crtica tenha contribudo para
o estabelecimento de rgidos critrios para os servios prestados, falhas ainda podem
ocorrer. Neste artigo, apresentado um caso criminal hipottico em que se aplicou a
gentica forense como ferramenta investigativa. O objetivo demonstrar algumas
possibilidades de erro j descritas na literatura especializada.

1. Introduo
Na rea criminal, um dos propsitos da identificao humana por DNA
(genotipagem) testar uma hiptese de que determinada pessoa a fonte doadora

de uma evidncia biolgica. Dentre os possveis resultados desta investigao

constam a excluso - as amostras biolgicas possuem origens diferentes; o laudo
com resultados inconclusos - no possvel determinar, com base nos resultados
dos testes, se as amostras provm ou no do mesmo doador; a incluso (ou no
excluso) - as genotipagens so similares e originaram-se da mesma fonte. Esta
ltima concluso de similaridade gentica meramente descreve o fato de que no
foram detectadas diferenas entre duas amostras atravs dos testes realizados
(INMAN e RUDIM, 1997).
As genotipagens de regies STR atravs da tcnica da PCR (reao em
cadeia da polimerase) podem apresentar similaridades em trs circunstncias:
1.As amostras possuem a mesma fonte: a evidncia biolgica (mancha de
sangue, saliva, esperma etc) se origina da mesma pessoa que cedeu a amostra
utilizada como referncia;
2.A similaridade coincidncia: o doador da amostra referncia e o
verdadeiro doador do material biolgico possuem alelos coincidentes em relao
aos marcadores examinados;
3.A similaridade acidental: isto decorre de erros durante os processos de
coleta e/ou anlise das amostras.
Em casos de abuso sexual e em cenas de mltiplos assassinatos, por
exemplo, comum a anlise de amostras contendo mistura de DNA de duas ou
mais pessoas. H situaes em que os profissionais responsveis no levam em
considerao tais aspectos, fazendo pairar dvidas a cerca de seus resultados
(PARADELA et al., 2006). Em relao s investigaes criminais, cada rastro
biolgico encontrado na cena de um crime ou no corpo da vtima pode representar
um vestgio ou uma prova fundamental para elucidar questes. Portanto, deve haver
um cuidado absoluto no levantamento dos vestgios de material orgnico, quando
todo e qualquer material passa a ter relevncia. Sabe-se que a exposio do DNA a
fatores como luz solar, microorganismos e componentes qumicos pode provocar a

degradao da molcula. Logo, quanto melhor for a coleta e a preservao do

material coletado, melhor ser a anlise do material gentico extrado (PARADELA
e FIGUEIREDO, 2007).
Os erros mais comuns nas genotipagens envolvem troca ou contaminao de
amostras e anlise incorreta dos dados. Tal fato pode ser constatado a partir de
algumas manchetes publicadas nos ltimos cinco anos, tais como: "DNA errors lead
to murder case review" (The Times on line, fevereiro de 2007); "Forensic lab errors
in hundreds of crime cases" (The Guardian,fevereiro de 2007); "POLICE
FORENSICS: DNA mix-up prompts audit at lab" (Las Vegas Review-Journal, abril
de 2002); "Audit calls for changes in police DNA lab" (Las Vegas Review-Journal,
maio de 2002); "Laboratrio do PR condenado por erro em exame de DNA"
(Folha de Londrina, julho de 2006); "More than 200 cases reopened after DNA
error" (The Independent, maio de 2007).
Entretanto, se os exames forem corretamente executados, as amostras
estiverem em condies para anlise (a degradao do DNA pode interferir nos
resultados) e os clculos forem apropriadamente executados, a confiabilidade dos
testes de DNA absoluta. A seguir apresentado um caso hipottico de
investigao de abuso sexual que exemplifica algumas das falhas descritas na
literatura em anlises desta natureza.

2. O caso hipottico
2.1 - O caso: violncia sexual contra mulher com vestgios de smen
detectados no raspado vaginal coletado da vtima.
2.2 - O laudo: o documento em que a anlise do material gentico
apresentada informa a comparao de marcadores genticos STR (regies curtas
repetidas in tanden) presentes nas seguintes amostras: EVIDNCIA BIOLOGICA -

esfregao vaginal coletado da vtima (V); AMOSTRAS REFERNCIA - amostras

biolgicas (sangue) cedidas pela vtima e pelo principal suspeito (S1).
De acordo com o laudo, os alelos encontrados foram visualizados com
auxlio de fluorescncia e a razo de verossimilhana foi determinada, no
excluindo (S1) como doador das clulas espermticas encontradas na evidncia
biolgica. Os resultados so parcialmente apresentados na Tabela 1.
Tabela 1 Tipagens e avaliao dos resultados.

locus

Evidncia
biolgica

S1

Freqncia AVALIAO DOS DADOS DO

allica

LAUDO
O estudo dos picos de intensidade das
bandas

se

faz

necessrio

para

determinar os componentes principal e

secundrio na mistura e eliminar a
hiptese de o alelo 8 encontrado no

F13B

9
10

8
9
10

esfregao vaginal ser um "STUTTER

8

25,9

(8) BAND"

10 40,2 (10)

(stutter

conhecido

como

band:
banda

tambm
fantasma)

relativo ao alelo 9 proveniente da

vtima. Tais bandas so artefatos da
reao em cadeia da polimerase e
podem

provocar

equvocos

de

interpretao se certos cuidados no

forem tomados.
A anlise dos picos de intensidade das
TPOX

11 11

46

11 29(11)

(8)

bandas

se

determinar

faz
se

necessria
o

sistema

para
de

amplificao usou como molde o

material das clulas do acusado e da

vtima ou somente as desta ltima,

visto que h coincidncia allica nas
amostras de V e S1. Em casos de
esfregaos vaginais contendo mistura
de material biolgico e sendo o
componente

masculino

predominantemente
clulas

constitudo

espermticas

de

comum a

amplificao preferencial da principal

contribuinte, ou seja, a vtima.
O alelo 13 presente na amostra de V
no verificado no preparado advindo
do

esfregao

vaginal.

Isto

pode

decorrer do fenmeno conhecido como

"AMPLIFICAO DIFERENCIAL",
que um artefato caracterizado pela
diferena na eficcia de amplificao
F13A01

13 6

entre dois alelos (GILL et al, 1997;

32,2 (6)

LYGO et al, 1994). Problemas no

curso dos processos de amplificao e
deteco de alelos invalidam o uso
deste

locus,

pois

no

se

pode

determinar com absoluta preciso se o

material das clulas espermticas foi
amplificado. Desta forma, a razo de
verossimilhana apresentada no laudo
deve ser recalculada.

vWA

17 16

16 25,4

(16)

17 17

17 23,4 (17)

determinao

intensidade

das

necessria

para

dos

picos

de

se

faz

determinar

os

bandas

componentes principal e secundrio na

mistura e eliminar a hiptese de o alelo
16 encontrado no esfregao vaginal ser
um "STUTTER BAND" relativo ao
alelo 17 proveniente do DNA de V.
A

D13S317

8
13

8
12
13

12
12

27,1 (12)

determinao

intensidade

das

necessria

para

dos

picos

de

se

faz

determinar

os

bandas

componentes principal e secundrio na

mistura e eliminar a hiptese de o alelo
12 encontrado no esfregao vaginal ser
um "STUTTER BAND" relativo ao
alelo 13 proveniente do DNA de V.

2.3 - Anlise do laudo tcnico hipottico

O uso de reaes MULTIPLEX empregando corantes fluorescentes
associado deteco automatizada para determinao de alelos STR pela tcnica da
PCR fornece no s informao qualitativa dos alelos presentes na amostra
(tipagem), mas tambm informao quantitativa referente s intensidades relativas
das bandas. Como conseqncia, isto possibilita aferir a quantidade de DNA
amplificado (CLAYTON et al, 1998). Com freqncia, possvel separar as
contribuies principal e secundria em misturas simples (BAN, 2000; CLAYTON
et al, 1998; EVETT et al, 1998) e determinar a presena de "STUTTER BANDS",
bandas extras geradas pelo deslizamento da enzima TAQ POLIMERASE e que
apresentam uma unidade de repetio a menos que a verdadeira (GILL et al, 1997).
Vale ressaltar que tal artefato de tcnica comum nas reaes MULTIPLEX
utilizadas neste caso.
No laudo tcnico em questo no mencionada a avaliao dos picos de
intensidade ("PEAK AREAS") das bandas referentes aos alelos identificados. Tal
anlise importante para eliminar eventuais interpretaes equivocadas dos

resultados (BAN, 2000; CHANNELL, 2000; GUTIN et al, 1999; EVETT et al,
1998; GILL et al, 1998) e determinar as freqncias estatsticas considerando-se
somente os loci para os quais no h mltiplas possibilidades interpretativas.
Todo o processo envolvido na anlise de DNA importante e a
interpretao adequada dos resultados essencial (MELENDEZ, 2001). As anlises
estatsticas so utilizadas para interpretar os resultados das genotipagens
(SALDANHA, 2001). Quando o teste falha em excluir um acusado como possvel
contribuinte para uma evidncia, deve-se calcular a representatividade estatstica do
emparelhamento (MELGAO, 1998). Este clculo depende da freqncia dos
alelos encontrados em determinado grupo populacional (MONSON e BUDOWLE,
1998; ROEDER, 1994; WEIR, 1996).
A anlise de misturas pode ser complexa uma vez que vrias combinaes
de gentipos podem ser consideradas, de acordo com cada situao (CURRAN et
al, 1999). Existem diferentes estratgias para tratamento estatstico de misturas
(MAIA et al, 2001; SZAKACS, 2001). Embora o tipo de clculo para determinao
da razo de verossimilhana utilizada neste caso seja reconhecida por alguns
autores como uma maneira apropriada para interpretar evidncias (AIKEN, 1995;
EVETT e WEIR, 1998), outros tratamentos estatsticos poderiam ser utilizados para
validar os resultados em situaes que envolvem misturas de materiais biolgicos
(SZAKACS, 2001; CURRAN et al, 1999; WEIR et al, 1996). Tais metodologias
levam em considerao diferentes hipteses para construo do perfil allico em
misturas como a encontrada no esfregao vaginal da vtima.
Consideraes finais
Em anlises forenses de DNA, os resultados podem incluir ou excluir
suspeitos como doadores de amostras encontradas em cenas de crime ou no corpo
da vtima. O mesmo acontece quando o propsito do estudo investigar a
existncia de vnculo gentico, pode-se incluir ou excluir a possibilidade de
ocorrncia do parentesco analisado. As excluses no requerem anlise estatstica
desde que sejam absolutas, ou seja, haja diferenas entre as amostras que no

justificadas por outra razo. As incluses, por sua vez, devem ser analisadas
estatisticamente, pois preciso saber a freqncia em que o emparelhamento pode
ocorrer.

3. Consideraes gerais
Para a aceitao de um trabalho pericial, dois componentes devem ser
considerados: a acurcia (validade) e a consistncia (reprodutibilidade) das anlises.
Em anlises de DNA, o perito deve informar honestamente as limitaes dos testes,
quando estas existirem. Qualquer falha entre a coleta de amostras e a divulgao
dos resultados pode levar a concluses equivocadas em exames de DNA.
So recomendaes bsicas de quesitos para a elaborao do laudo pericial
de anlise de DNA: identificao do nmero do inqurito policial ou processo
judicial; identificao das partes envolvidas e amostras; informao da etnia (raa)
dos envolvidos, quando possvel e relevante; citao da metodologia empregada na
coleta e armazenamento de materiais e, se necessrio, esclarecimento dos cuidados
empreendidos para manuteno da cadeia de custdia destes materiais. Em adio,
o laudo deve conter informaes bibliogrficas a cerca das metodologias utilizadas
para a extrao, quantificao e amplificao do DNA; forma de identificao dos
alelos obtidos nos testes e fundamentos empregados para os clculos estatsticos
(CHANNELL, 2000). As freqncias estatsticas utilizadas como base para os
clculos tambm devem ser mencionadas (US CONGRESS, 1990).

4. Concluses
O fato de duas amostras terem o mesmo perfil para um grupo de marcadores
genticos em especial no significa, obrigatoriamente, que elas possuam a mesma
origem. Quando a tipagem gentica de duas amostras igual, torna-se necessrio
expressar numericamente a significncia deste evento. O nmero de marcadores

empregados, a presena de subestruturas na populao e a mistura de amostras

podem interferir nos resultados. A expresso estatstica dos resultados deve basearse na presena ou no de misturas de material biolgico, como freqentemente
observado em casos de abuso sexual.
Uma questo fundamental no uso do DNA como evidncia a validao
cientfica dos mtodos de anlise. Em outras palavras, preciso ter garantias
cientficas de que os testes podem inequivocamente identificar incluses e
excluses para cada marcador gentico utilizado. Inicialmente, a credibilidade dos
testes deve partir da natureza das amostras biolgicas utilizadas. Com freqncia, as
amostras so encontradas em superfcies no-estreis, podendo sofrer danos aps
contato com a luz solar, microorganismos e solventes. Existem procedimentos que
podem minimizar a ao destes fatores de degradao do DNA. Entretanto, muitos
cuidados devem ser tomados para evitar equvocos na interpretao. A amplificao
pela PCR (reao em cadeia da polimerase) que largamente empregada nas
tipagens genticas, pode produzir falhas e artefatos quando a qualidade do material
biolgico

est

comprometida.

Amostras

parcialmente

degradadas

podem

proporcionar, por exemplo, a amplificao preferencial de alelos e o surgimento das

bandas fantasmas ("stutter bands"). No primeiro caso, tem-se a amplificao de um
alelo em detrimento do outro. Isto pode gerar a falsa impresso de se tratar de um
indivduo homozigoto ao invs de heterozigoto para o locus em estudo. J as bandas
fantasmas decorrem de falhas no processo que geram bandas com uma unidade de
repetio a menos que a do alelo original. Deste modo, pode-se interpretar
equivocadamente o resultado como um falso heterozigoto ou identificar um alelo
erroneamente.
Na atualidade, existem tecnologias, como os leitores por fluorescncia
capazes de dirimir dvidas e evitar erros desta natureza. Contudo, estes
equipamentos so caros e poucos tcnicos no Brasil esto capacitados a oper-los.
Outro fator importante a reprodutibilidade dos testes. Em Cincia, preciso que
os resultados sejam passveis de reproduo para que sejam aceitos como verdade
cientfica. No campo forense, no incomum a necessidade de repetio das

tipagens. Isto pode encarecer o processo, mas no deve ser descartado,

principalmente quando o que est sob suspeita o teste em si.
Para as anlises de DNA, diversos quesitos podem ser postulados para a
interpretao dos dados, incluindo-se neste ponto a escolha e o uso apropriado das
tcnicas; as supracitadas freqncias populacionais empregadas para os clculos e o
tipo de anlise estatstica empregada; os controles de qualidade adotados; a
documentao dos procedimentos; a qualidade dos equipamentos e reagentes
utilizados e a capacitao tcnica dos profissionais envolvidos.
Todas as etapas empreendidas para a tipagem do DNA, desde a coleta at a
interpretao do significado estatstico dos dados obtidos, sero consubstanciadas
em uma pea pericial escrita que servir aos interesses de seus leitores. Em
instncia final, o laudo poder ainda servir como elemento de convico para juizes,
promotores e advogados nas aes penais.
Cabe a advogados, juizes e a comunidade cientfica estar atentos ao fato de
que os testes absolutamente no so infalveis, como ocorre com qualquer outra
atividade humana. Deve-se implementar no Brasil, conforme j ocorre em outros
pases, rigorosos padres de qualidade para garantir a credibilidade de to
importante ferramenta.

4. Referncias bibliogrficas
Ban JD. Interpretation of STR profiles-community guidelines. Presentation
in the 3rd annual fluorescent STR megaplex technology workshop. SC, USA, 2000.
Channell K. Writing a complicated STR report. Presentation in the 3rd
annual fluorescent STR megaplex technology workshop. SC, USA, 2000.
Clayton TM, Whitaker JP, Sparkes R, Gill P. Analysis and interpretation of
mixed forensic stains using DNA STR profile. Forensic Sci. Int. 91: 55-70. 1998.

Curran JM, Triggs CM, Buckleton J, Weir BS. Interpreting DNA mixtures
in structured populations. J. Forensic Sci.. 44 (5): 987-995. 1999.
Evett IW, Weir BS. Interpreting DNA Evidence: Statistical Genetics for
Forensic Scientists. Sinauer Associates Ed, Sunderland, MA, US, 1998.
Gill P, Sparkes R, Kimpton C. Development of guidelines to desiguinate
alleles using STR Multiplex systems. Forensic Sci. Int. 89: 185-197. 1997.
Gutin S, Scholl T, Thomas A. Advancement in allele-calling accuracy and
throughput. Proceedings of the 10th International Symposium on Human
Identification. FL, USA. 1999.
Inman K, Rudin N. An introduction to forensic DNA samples. CRC Press.
1997.
Lygo JE, Johnson P, Holdaway J, Woodroffe S, Whitaker JP, Clayton TM,
Kimpton CP, Gill P: The validation of short tandem repeat (STR) loci for use in
forensic casework. Int. J. Leg. Med. 107: 77-89. 1994.
Maia FAS, Paula KAA, Dalton GC. Anlise de mistura de material gentico
em crimes sexuais envolvendo dois suspeitos. Anais do III simpsio latinoamericano de identificao humana. Curitiba, PR. 2001.
Melendez E. Razo de verossimilhana em casos complexos. Anais do III
simpsio latino-americano de identificao humana. Curitiba, PR. 2001.
Melgao, MCP. DNA e Paternidade: "Falsa Excluso". Revista de Direito
da Defensoria. 12, 1998.
Monson KL, Budowle B. Effect of reference database on frequency
estimates of polymerase chain reaction (PCR) Based DNA profiles. J. Forensic
Sci. 43 (3): 483-488. 1998.

Paradela ER, Figueiredo ALS. Gentica Forense - Coleta, Documentao e

Transferncia de Evidncias Biolgicas Destinadas a Testes Forenses de DNA.
Trinolex,

So

Paulo,

11/01/2007.

[Internet].

http://www.trinolex.com/artigos_view.asp?icaso=artigos&id=3177.

Disponvel
Acesso

em

02/05/2007.
Paradela ER, Figueiredo ALS, Smarra ALS. A identificao humana por
DNA: aplicaes e limites. In: mbito Jurdico, Rio Grande, 30, 30/06/2006
[Internet].

ISSN

1518

0360.

Disponvel

em

http://www.ambito-

juridico.com.br/site/index.phpn_link=revista_artigos_leitura&artigo_id=1175.
Acesso em 02/05/2007.
Roeder K. DNA fingerprint: a review of the controversy. Statstical Sci. 9(2):
222-278. 1994.
Saldanha G. Software para clculos estatsticos de casos de investigao de
vnculo gentico. Anais do III simpsio latino-americano de identificao humana.
Curitiba, PR. 2001.
Szakacs N. Perspective on DNA casework: unusual exhibits mixture
interpretation and profiles from inhibited PCR mixtures. Anais do III simpsio
latino-americano de identificao humana. Curitiba, PR. 2001.
US Congress, Office of Technology Assessment: Genetic witness: forensic
uses of DNA tests. OTA-BA-438. US Government Printing Office. Washington,
DC. 1990.
Weir BS. Genetic Data Analysis II. Sinauer Associates Ed. Sunderland, MA,
US, 1996.

Notas esclarecedoras:

Marcadores STR ("short tandem repeats") - seqncias que apresentam

repeties com unidade bsica de 2-7 pares de base e o polimorfismo, assim como
nos loci VNTR, tambm est baseado no nmero de repeties. Devido ao pequeno
tamanho, geralmente menor que 350 pares de base, alelos STR podem ser
analisados aps amplificao pela tcnica PCR.
Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) - A PCR um mtodo in vitro que
sintetiza seqncias especficas de DNA. Esta reao utiliza um DNA que usado
como "molde" (template em ingls) e primers, que so oligonucleotdeos (pequenas
seqncias que complementam o DNA), que hibridam com o molde de DNA para
que a molcula seja copiada. A copia do molde catalisada pela enzima Taq
polimerase. Uma srie de ciclos repetitivos faz com que o molde seja separado em
suas hemi-hlices, os primers hibridem com o molde, a polimerase catalise a
ligao de nucleotdeos para formar uma nova cpia da regio de interesse do DNA.
Como cada cpia produzida em um ciclo pode servir de molde no prximo ciclo, a
cpia do DNA ocorre de forma exponencial. Em aproximadamente 20 ciclos, a
concentrao de DNA aumenta aproximadamente um milho de vezes.

* Coordenadora-geral de Investigao por Anlise do DNA in vivo e post mortem da Defensoria

Pblica Geral do Estado do Rio de Janeiro.

** Diretor da DNA Forense Peritos Associados e Anlises Laboratoriais Ltda.

*** Coordenador do Laboratrio de Vnculo Gentico (VINGENE) da Universidade Federal do
Estado do Rio de Janeiro (UNIRIO)

Disponvel em:< http://jus2.uol.com.br/doutrina/texto.asp?id=10285> Acesso em.: 21 agos.

2007.