INSTITUTO FEDERAL CATARINENSE

CMPUS CONCRDIA
MEDICINA VETERINRIA

AVALIAO DA RESPOSTA CICATRICIAL APLICAO TRANSDRMICA E

INTRADRMICA DE SCAFFOLD A BASE DE AMIDO E PRPOLIS EM FERIDAS
CIRRGICAS DE Oryctolagus cuniculus

GISELE SCHIOCHET

Relatrio Parcial apresentado ao

Instituto Federal Catarinense, em
cumprimento a exigncia do Edital
N 168/2014.
Orientador (a):
Cristina Olsson.

Concrdia
Fevereiro/2015

Prof.

Dbora

2. OBJETIVOS
2.1 Objetivos Gerais
Avaliar a resposta do organismo de coelhos aplicao de novo adesivo scaffold base de amido
acrescido de prpolis em feridas cirrgicas.
2.2 Objetivos Especficos

Avaliar as alteraes histolgicas provocadas pelo material aplicado.

Analisar as alteraes macroscpicas decorrentes da aplicao do material. Atravs de

planimetrias e fotografias.
Classificar a resposta dos coelhos ao adesivo como positiva ou negativa.
Avaliar se o referido material ter potencial para ser utilizado futuramente.
Disponibilizar informaes que auxiliem para o desenvolvimento do biomaterial com prpolis
para utilizao em sistemas transdrmicos.

2.3 Objetivos Alcanados

Avaliao das alteraes histolgicas provocadas pelo material aplicado.

Anlise das alteraes macroscpicas decorrentes da aplicao do material por meio de
planimetria.

3. RESULTADOS PARCIAIS

O experimento foi realizado no bloco cirrgico do Centro Prtico Clnico e Cirrgico do Instituto
Federal de Santa Catarina - Campus Concrdia.
Utilizaram-se 20 coelhos da raa Nova Zelndia branco, de ambos os sexos, adultos, com peso
aproximado de quatro quilogramas, provenientes do Biotrio do Instituto Federal Catarinense Campus
Araquari.
Os mesmos foram separados em quatro grupos, colocados em gaiolas individuais e mantidos com
rao e gua vontade por um perodo no inferior a 15 dias para sua adaptao, respeitando o bem-estar
animal. Durante todo o experimento, os animais mantiveram-se em boxes individuais, recebendo rao
industrializada e gua ad libidum.
Para a realizao do procedimento cirrgico os animais ficaram em jejum alimentar de 4h e hdrico
de 2h antes da interveno e foram pesados e aps realizou-se a tricotomia ampla na regio dorsal da
escpula esquerda, onde foi realizada a ferida cirrgica.
Os coelhos foram divididos aleatoriamente em quatro grupos com cinco animais em cada, sendo
que todos passaram pelo procedimento cirrgico para criao de uma ferida. O primeiro grupo ou grupo A
foi o grupo controle drmico negativo, o qual no foi aplicado o biomaterial na ferida. O grupo B intradrmico
negativo, o qual no recebeu bioadesivo. Nos animais do grupo C, foi aplicado de forma drmica o biofilme,
que foi suturado sobre a ferida. O grupo D foi aplicado de forma intradrmica a mesma membrana biolgica
base de amido na ferida. Dentro de cada grupo, os animais foram submetidos bipsia no 7 e 14 dia
aps o procedimento cirrgico.
Na fase pr-operatria os animais foram submetidos ao exame clnico de rotina e exames
laboratoriais como anlise de hemograma e perfil bioqumico sete dias antes do experimento. Realizou-se a
coleta de trs ml de sangue via intracardaca de cada animal, para anlise das variveis hemcias (He),
hemoglobina (Hb), hematcrito (Ht), leuccitos (Leu) e protena plasmtica (PP).
A medicao pr-anestsica foi constituda a partir da associao de cloridrato de cetamina, na
dose de 4 mg.kg-1, maleato de midazolam, na dose de 2 mg.kg-1, e sulfato de morfina, na dose de 5 mg.kg1,por via intramuscular (FONSECA et al., 1996).
Os coelhos foram encaminhados para o centro cirrgico do Centro Prtico Clnico e Cirrgico do IFC Campus Concrdia. No interior da sala cirrgica foi procedida a induo anestsica com propofol na dose
de 10 mg.kg-1, intubao orotraqueal e manuteno anestsica com propofol por infuso contnua na dose
de 0,4 mg.kg-1 min.
A fluidoterapia intravenosa foi realizada com soluo de ringer com lactato, por meio de canulao
da veia auricular caudal, durante todo o procedimento cirrgico, em gotejamento venoso de 10 a 15 ml.kg1/1h-1. Com o auxlio de um oxmetro de pulso monitorou-se a perfuso capilar e presso arterial por meio
de um sensor conectado ao pavilho auricular do paciente. Como antibioticoprofilaxia foi administrado
cefalotina, na dose de 12,5 mg.kg-1, por via intravenosa, 10 minutos antes do procedimento cirrgico.
Os animais foram submetidos a procedimento cirrgico para criao do defeito cutneo. Com devida
tricotomia na regio dorsal do pescoo e posicionados em decbito esternal, com os membros plvicos
direcionados caudalmente, foi realizada antissepsia com lcool-iodo-lcool e colocao de panos de campo.
Foi realizada uma inciso cutnea e divulso do tecido subcutneo com o auxlio de uma tesoura de
Metzembaum. De maneira atraumtica, com pinas de dissecao, as bordas cutneas foram manipuladas

e os vasos sanguneos identificados, pinados e a hemostasia realizada somente por compresso ou por
forcitoro. A gordura subcutnea foi divulsionada e excisada completamente.
O grupo A, controle drmico negativo, no recebeu nenhum tratamento para o fechamento do
defeito criado, apenas curativo com gaze e atadura, trocados diariamente. Os animais do grupo C tiveram
sua leso lavada com soluo fisiolgica e gaze estril, o biofilme foi posicionado sobre a leso e suturado
com mononailon 4-0 ao leito da ferida.
Para os animais do grupo D, de aplicao intradrmica, foi realizada uma inciso em forma de L,
com posterior divulso do tecido subcutneo onde o biofilme foi inserido e posicionado intradrmicamente,
em seguida foi suturada a feriada criada. Os do grupo B, de controle intratrmico negativo, passaram pelo
mesmo processo descrito pelo grupo D, porm com aplicao de gel base de gua ao invs de biofilme.
No ps-operatrio imediato os animais foram monitorados at o restabelecimento completo de sua
conscincia, logo aps, encaminhados para seus boxes individuais. Foi administrado meloxican (0,2 mg.kg1) como anti-inflamatrio, via subcutnea, uma vez ao dia, durante trs dias. Para analgesia dos animais
administrou-se sulfato de morfina (5 mg.kg-1), via intramuscular (IM), quatro vezes ao dia, durante trs dias.
Os animais do grupo A, controle negativo, foram submetidos limpeza da ferida cirrgica com soluo
fisiolgica uma vez ao dia. Em todos os grupos foi realizado curativo com gaze sobre a leso, o qual foi
trocado diariamente.
Aps o procedimento, os coelhos foram avaliados clinicamente quanto aos parmetros fisiolgicos
(freqncia cardaca, freqncia respiratria, defecao e mico) e quanto ao seu comportamento e
retorno da alimentao. A viabilidade cutnea tambm foi avaliada clinicamente, por meio de percepo
visual quanto colorao, aquecimento, sensao de dor e sangramento.
Os animais foram submetidos mensurao de suas feridas no momento da criao da leso (dia
0) e aos 7 e 14 dias de ps-operatrio. Para a bipsia, foram anestesiados com o mesmo protocolo
institudo anteriormente e posicionados sempre em decbito ventral, com os membros plvicos voltados em
direo caudal, para evitar mudana de conformao da ferida. As medidas (altura e largura) foram obtidas
com a utilizao de um paqumetro e desenhadas em papel manteiga para posterior conferncia. As novas
feridas, ocasionadas pelas bipsias, no foram levadas em considerao nas mensuraes seguintes.
Com a utilizao de um punch de bipsia cutnea de 6 mm, foi retirado um fragmento cutneo, na
interface da leso criada e do tecido no lesado de todos os grupos. A bipsia de 7 dias foi realizada na
margem dorsal da ferida, enquanto que a segunda bipsia, aos 14 dias, foi realizada na borda caudal da
ferida. O fragmento colhido foi fixado em formol tamponado e emblocado em parafina para a realizao dos
cortes de microscopia com auxlio de um micrtomo. As lminas de microscopia, contendo os cortes
histolgicos das amostras, foram coradas com hematoxilina-eosina para avaliao histopatolgica. A
confeco e leitura das lminas foram executadas no Laboratrio de Patologia Veterinria do IFC Concrdia, por um nico avaliador, dispondo de um microscpio ptico conectado a um sistema de captura
de imagens.
Foi realizada anlise estatstica das medidas de planimetria das feridas e das variveis
analisadas na histopatologia. A anlise estatstica da planimetria foi conduzida a partir da
mdia dos grupos, utilizando-se o teste de Tukey para correo das mdias, com posterior
teste de anlise de regresso, atravs do software computacional estatstico SAS.

Considerou-se diferena estatstica significativa quando o nvel de significncia foi igual ou

menor que 1% (p <0,01 e p<0,05).
Tabela 1. Mdia da angiognese dos grupos aos 7 e aos 14 dias.
DIAS
GRUPOS (tratamentos)
7
14
A
120 a
97,42 c
B
143,67 a
106,92 bc
C
137,83 a
148,08 a
D
140,33 a
140,27 ab
* Mdias, seguidas pela mesma letra na coluna, no diferem entre si pelo teste de Tukey a 1% de
probabilidade.
** Grupo A (controle drmico negativo); Grupo B (controle intradrmico negativo); Grupo C (controle
drmico); Grupo D (controle intradrmico).
Conforme a tabela acima, aos 7 dias no houve diferena estatstica entre os grupos, porm, aos 14
dias, os trs grupos C e D apresentaram melhores resultados que o grupo A e B, onde no houve a
aplicao do biomaterial na ferida. Os resultados mostram que a membrana biolgica ( scaffold) utilizada nos
grupos C e D favoreceram o processo de cicatrizao.
J para avaliao das clulas polimorfonucleares, aos 7 dias os grupos C e D demonstraram
valores estatisticamente iguais e o grupo A, foi o que demonstrou melhor resultado favorecendo o processo
de cicatrizao. Em relao aos 14 dias o grupo A favoreceu o processo de cicatrizao. O que difere dos
grupos B, C e D que estatisticamente obtiveram valores iguais como pode ser visualizado na tabela 2
abaixo.
Tabela 2. Mdia das clulas mononucleares dos grupos aos 7 e aos 14 dias.
DIAS
GRUPOS (tratamentos)
A
B
C
D

7
125,67 B
250,58 A
217,58 AB
286,27 A

14
101,33 C
351,25 AB
205,80 BC
428,87 A

* Mdias seguidas pela mesma letra maiscula na coluna, no diferem entre si pelo teste de Tukey a 1% de
probabilidade.
** Grupo A (controle drmico negativo); Grupo B (controle intradrmico negativo); Grupo C (controle
drmico); Grupo D (controle intradrmico).
*** Mdias seguidas pela mesma minscula na linha, no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de
probabilidade.

4. DIFICULDADES ENCONTRADAS

Aquisio de coelhos para projeto como modelo experimental.

Infra-estrutura apropriada para manter os animais no biotrio.
Conciliar horrios intensivos de aula didtica e terica com cuidados intensivos da sala

destinada para alojamento dos coelhos.

Dificuldades financeiras no andar do desenvolvimento da pesquisa.

5. PLANO DE TRABALHO E CRONOGRAMA DAS ETAPAS SEGUINTES

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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(Mestrado). So Paulo: Universidade Federal de So Paulo - UNIFESP; 2002.
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7. ASSINATURAS