UNIVERSIDADE DO ESTADO DO AMAZONAS

ESCOLA SUPERIOR DE TECNOLOGIA

ENGENHARIA QUMICA

Disciplina: Planejamento Experimental Estatstico

Trabalho solicitado para obteno de nota parcial.

Turma: EQM03_T02
Data: 21/05/2015

Prof. Responsvel: Dr. Ricardo Serudo Lima

Alunos

Aluno (a): Natlia Vanessa M. Mximo

Nota da dupla:

Aluno (a): Anne Caroline Freire

Manaus
2015

INTRODUO

As plantas da famlia Lauraceae apresentam-se amplamente distribudas atravs

das regies tropicais e subtropicais do planeta, ocorrendo em todo o mundo,
principalmente nas florestas da Amrica Central e do Sul (VAN DER WERFF e
RICHTER, 1996). Esta famlia possui espcies de elevado valor econmico, com
diversas utilizaes, tais como alimentares (RIBEIRO et al., 1999), aromticas e
produtoras de leos volteis. Tambm possui espcies com amplo uso na medicina
popular, fornecedoras de madeira, alm de outras serem utilizadas na fabricao de
papel, compensado e produo de energia (MARQUES, 2001). A famlia Lauraceae
compreende o gnero Aniba, o qual possui cerca de 40 espcies cuja maioria encontrase na Amaznia. Algumas espcies so exploradas para a preparao de produtos
medicinais, porm as espcies desse gnero so mais conhecidas pela produo e
constituio dos seus leos essenciais para a indstria de perfumaria, destacando-se a
espcie Aniba roseadora Ducke, conhecida como pau-rosa, possuindo o linalol como
principal constituinte do seu leo essencial muito utilizado como fixador (MELO et al.,
2006). Outras espcies, como A. canellila (H.B.K) Mez (preciosa) e A. parviflora
(Meissn) Mez (macacaporanga) tambm so usadas na perfumaria (MARQUES, 2001).
Tcnicas de extrao dos compostos aromticos das plantas, incluindo os leos
essenciais e os extratos, so citadas na literatura, entre elas a extrao com solventes
orgnicos, enflorao, prensagem ou utilizao de CO2 supercrtico (SIMES et al.,
2001). Pode ocorrer variao na composio do leo obtido, em funo do mtodo de
extrao utilizado (SIMES et al., 2001). Estes mtodos tm como finalidade a
obteno de odores como um todo das plantas, no somente os leos volteis, os quais
consistem apenas em uma parte do odor total emitido por uma espcie vegetal. A
extrao dos leos essenciais gera resduos slidos que podem ser reaproveitados como
substrato em processos biotecnolgicos, na obteno de compostos qumicos e de
produtos com valor comercial interessante como lcool, enzimas, cidos orgnicos,
entre muitos outros (PANDEY et al., 2000a).
Os processos biotecnolgicos tm conquistado um lugar de destaque no
desenvolvimento tecnolgico mundial, exibindo caractersticas econmicas e
operacionais que conferem vantagens em relao aos processos qumicos
convencionais. O uso desses processos possibilita a produo de um grande nmero de
metablitos de interesse industrial, incluindo enzimas, as quais podem ser obtidas a
partir do reaproveitamento de recursos naturais e de resduos da agroindstria que
podem ser encontrados em abundncia no Brasil, contribuindo assim, para a reduo de
problemas ambientais (MACIEL, 2006). Muitas so as fontes de enzimas utilizadas
industrialmente. Embora algumas sejam extradas de tecidos animais e vegetais, as
enzimas usadas na indstria so geralmente obtidas de microrganismos. A grande
variedade e disponibilidade de bactrias, leveduras e fungos, aliada ao domnio das
tcnicas de cultivo, tornam as enzimas de origem microbiana as mais utilizadas em
processos industriais. Apesar de um microrganismo ser capaz de produzir mais de mil
enzimas distintas, necessrio um trabalho cuidadoso para o isolamento de espcies que
produzam determinadas enzimas com as caractersticas desejadas (FABER, 2004). A
necessidade de se obter enzimas industriais de maneira economicamente vivel
determina a busca de matrias-primas renovveis e de baixo custo para o processo de
produo das mesmas.

Os resduos agroindustriais que possuem em sua composio material

lignocelulsico demonstram potencial como meio de cultura para produo de lacases
(BCC, 2005). A lacase (benzenediol: oxignio oxidoredutase, EC1.10.3.2) uma enzima
que catalisa a remoo de eltrons e prtons de grupos hidrxi-fenlicos e
aminoaromticos, formando radicais fenxi livres e radicais amino, respectivamente
(Leonowicz et al., 2001). A importncia tecnolgica das lacases resultante da
capacidade de catalisar a transformao de um grande nmero de compostos aromticos
fenlicos e no fenlicos (Durn et al., 2002). Usualmente a enzima origina-se no
citoplasma, mas muitos exemplos de secreo tm sido descritos na literatura,
entretanto, pouca ateno tem sido dada a localizao sub-celular desta enzima e ao
mecanismo de secreo (Mayer & Staples 2002). A produo de lacase afetada por
muitos fatores durante o desenvolvimento fngico, como a composio do meio de
cultura (relao carbono e nitrognio), pH, temperatura, taxa de aerao, etc (Kahraman
& Gurdal 2002).
Muitos pesquisadores procuram aperfeioar as condies de crescimento do
fungo e a produo de lacase, tanto por mtodos convencionais e/ou estatsticos,
fazendo-se a combinao de diferentes fatores capazes de interferir na produo
enzimtica, para selecionar o mtodo mais apropriado. Alm disso, buscam melhor
entender as propriedades da enzima a nvel molecular e cintico, bem como a
identificao mais eficiente de fontes produtoras de lacase (Gianfreda et al., 1999;
Ikehata et al., 2004). Processos usando substratos slidos so importantes
economicamente para pases como o Brasil, que possui abundncia em biomassa e
resduos agroindustriais, que podem ser usados como matrias primas de baixo custo
(Castilho et al., 2000). Existem dois tipos de cultivo em meio slido: a fermentao de
substrato slido, cujo substrato insolvel, e a fermentao slida sobre suporte inerte,
onde o substrato solvel. Alm disso, o cultivo de fungos filamentosos em estado
slido difere em vrios aspectos do crescimento em condies lquidas (Sun et al.,
2009). Esta tcnica tem muitas vantagens sobre a fermentao lquida incluindo um
rendimento superior, uma menor demanda de energia (Krishna, 2005), menor capital e
custos de operao, alm de utilizar equipamentos e meios de cultivo mais simples.
O uso de desenhos experimentais constitui uma ferramenta muito til para a
previso da influncia de alguns elementos qumicos ou biolgicos no meio slido que
ser utilizado para a produo de enzimas. A seleo das variveis que influenciam
significativamente a atividade enzimtica pode ser realizada atravs de delineamentos
baseados em fraes de fatoriais, a fim de identificar quais fatores e seus respectivos
valores que levam respostas experimentais timas (Rodrigues e Iemma, 2005). De
posse das variveis relevantes para o estudo, otimizaes utilizando desenho
experimental fatorial ou ortogonal e o mtodo de superfcie de resposta so
freqentemente aplicados em numerosas tcnicas bioqumicas e em bioprocessos
(Souza e Ayub, 2006). Pretende-se, portanto, com este projeto otimizar a produo de
celulase por meio da fermentao slida a partir do resduo slido gerado durante a
extrao de leos essenciais de plantas do gnero Aniba. Espera-se assim, que o
aproveitamento do resduo da obteno do leo essencial a partir da utilizao
sustentvel de plantios florestais possibilite o desenvolvimento de tecnologias
adequadas realidade da RegioAmaznica.

DESENVOLVIMENTO

Um planejamento experimental fatorial completo 2 3 foi realizado em um projeto

de iniciao cientifica para selecionar as variveis concentrao de cobre, magnsio e
surfactante (tween80) que influenciam de forma estatisticamente significativa a
atividade enzimtica. A anlise estatstica dos dados experimentais foi realizada com a
utilizao do software Statistica 10. A matriz do planejamento experimental est
apresentada na Tabela 1.
Tabela 1 Matriz do planejamento experimental.

Com o auxlio do software Statistica 10 Enterprise observou-se o grfico da

superfcie de contorno que para o fungo A. brasiliensis cultivado no resduo de preciosa,
a concentrao de magnsio e de surfactante tween 80 foram estatisticamente
significativos, e que maiores concentraes de magnsio e menores concentraes de
surfactante levam aos maiores valores de atividade enzimtica como se observa na
figura 1.
Figura 1 - Superfcie de Contorno

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