Replicao do DNA

Prof. Dr. Francisco Prosdocimi

Mitose / Meiose

Como acontece a sntese do

DNA?

Meselson-Stahl experiment
1957
Cresceram E. coli em meio
com N-15 e depois voltaram
pra N-14
Purificao do DNA das
bactrias
Trs tipos de DNA
N-15 + N-15
N-15 + N-14
N-14 + N-14

Ao aquecer o N-15 + N-14 e

separar as fitas ficava claro
que uma fita continha N-15 e
outra N-14

Replicao semi-conservativa

Origens de replicao
Locais com um
contexto de
sequncia especfico
Ligam protenas
especficas
Quando acionadas,
essas protenas
permitem o incio da
replicao

Origens de replicao

Replicao
DNA Polimerase III
Sentido 5 3
Nucleotdeos 3P
so adicionados
Liberao de
Pirofosfato

http://207.207.4.198/pub/flash/24/menu.swf

Primase
Ribonucleoprotena
Liga-se helicase em
procariotos formando o
chamado primossomo
Sintetiza um primer de
RNA contendo
aproximadamente 11
bases; fornece 3 OH
DNA polimerase lenta e
sujeita a erros
Evita a progresso da
forquilha uma vez que a
fita lder anda mais rpido

Micrografia, bolha de
replicao

Forquilhas de replicao

Forquilha de replicao

Replicao das fitas

Fita lder
Primase age uma vez

Fita retardada
Primase age vrias vezes
1967, Fragmentos de Okasaki
Okazaki R, Okazaki T, Sakabe K, Sugimoto K. Mechanism of DNA replication
possible discontinuity of DNA chain growth. Jpn J Med Sci Biol. 1967
Jun;20(3):255-60

Primase na fita retardada

Deslocamento da forquilha de replicao
Primase faz primer

Direes de
replicao na Forquilha

Desenovelamento do DNA
Retirada das histonas
Protenas de ligao a fita simples (SSBPs)
DNA helicase
Quebra pontes de H

DNA topoisomerases
Tiram a tenso

Forquilha de replicao

Polaridade da sntese define fitas

lder e retardada (descontnua)

DNA polimerase
Enzimas que catalisa a reao
de sntese do DNA
Adiciona nucleotdeos trifosfato extremidades 3OH
livre
Alongamento da cadeia de
DNA sempre feito na direo
5>3 (endonuclease 5>3)

Incapaz de fazer DNA do zero

(precisa ter extremidade 3OH
livre)
Possui mecanismo de
correo de erros
(exonuclease 3>5)

Tipos de DNA polimerase

DNA polimerase I
Descoberta em 1956 (Kornberg pai)
Funo precisa descoberta apenas em 1969: remove
o primer de RNA da fita descontnua

DNA polimerase III

Descoberta em 1970 (Kornberg filho)
Principal enzima que realiza a replicao em
procariotos

DNA polimerase II
Lenta, envolvida em reparo do DNA

DNA Replication
DNA Pol precisa de um
molde inicial
Primase: gera um molde
de RNA complementar
A DNA Pol III agora
capaz de adicionar bases
extremidade 3OH

Eliminao
dos
fragmentos
de Okasaki

DNA Pol I

Mecanismo da enzima Ligase

Viso geral
Repare na
posio do
primer de
RNA

Reparo pela
Polimerase
Mecanismo de verificao
(Proof-reading)
DNA-polimerase possui
Uma atividade de
polimerizao 5 3
Uma atividade de
exonuclease 3 5

Reparo pela
Polimerase
Mecanismo de verificao
(Proof-reading)
DNA-polimerase possui
Uma atividade de
polimerizao 5 3
Uma atividade de
exonuclease 3 5

DNA
Repair
Checagem de
pareamento
incorreto
(eucariotos)
Protenas
especiais para
reparo do erro

E as extremidades dos cromossomos?

Doenas causadas por problemas

no mecanismos de replicao
Ataxia de Friedreich's
dano progressivo no sistema nervoso (problemas musculares,
na fala e doenas no corao)
forma mais comum das ataxias herdadas
A seqncia GAATTC se repete, quando existem mais de 40
repeties, o indivduo apresenta a doena.

Xeroderma pigmentosum
envelhecimento precoce
aumento na incidncia de cncer
Falha no mecanismo de reparao
do DNA causado pela luz UV

Ciclo celular
A replicao do DNA
regulada
temporalmente
Fase S do ciclo
celular
Checkpoints do ciclo
celular
Ciclinas

Concluses

Replicao semi-conservativa
Bolha de replicao avana em duas direes
Fita lder e fita retardada
Helicases e topoisomerases desenrolam o DNA
Primase faz o primer
DNA polimerase III, DNA polimerase I
DNA ligase
Telomerase