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MARLUS CHORILLI, ET AL.

Efeito de Emulso
Contendo Extrato Seco
de Guaran sobre os
Vasos Sanguneos da
Derme Papilar de Ratos
Emulsion Effect Containing Dry
Extract of Guarana Over the Blood
Vessels of the Papillary Dermis of Rats

MARLUS CHORILLI*
Departamento de Frmacos e
Medicamentos Faculdade de
Cincias Farmacuticas de
Araraquara (Unesp/SP)

MARIA CRISTINA DE ALMEIDA

PRADO RIBEIRO
Biloga graduada pela UNIMEP/SP

MARIA SLVIA MARIANI

PIRES-DE-CAMPOS
Curso de Fisioterapia Faculdade de
Cincias da Sade (UNIMEP/SP)

GISLAINE RICCI LEONARDI

Curso de Farmcia Faculdade de
Cincias da Sade (UNIMEP/SP)

MARIA LUIZA OZORES

POLACOW
Cursos de Farmcia e Fisioterapia
Faculdade de Cincias da Sade
(UNIMEP/SP)
*Correspondncias:
Rua Silva Jardim, 1.198, Bairro Alto,
13417-230, Piracicaba/SP
chorilli@fcfar.unesp.br

RESUMO O extrato seco de guaran (ESG) rico em cafena, a qual vem sendo utilizada em formulaes tpicas destinadas preveno e tratamento da
lipodistrofia ginide. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos de
emulso (E) contendo concentraes diferentes de ESG, acrescida, separadamente, de dois promotores qumicos de permeao cutnea cido olico
(AO) ou miristato de isopropila (MI) sobre os vasos sanguneos da derme
papilar de ratos. Foram utilizados dois grupos experimentais com cinco ratos machos Wistar cada, nos quais delimitaram-se quatro reas de tratamento de 1 cm2 no dorso, expostas s seguintes formulaes: no primeiro grupo
experimental, E + ESG 20%, E + ESG 20% + AO 1%, E + ESG 20% + MI
1% e controle (C); j no segundo grupo, realizaram-se os tratamentos E +
ESG 50%, E + ESG 50% + AO 1%, E + ESG 50% + MI 1% e C. Fragmentos
dessas reas foram fixados em soluo tamponada de formol 10% e processados para colorao com hematoxilina e eosina (HE). Os vasos sanguneos
foram contados utilizando-se ocular reticulada. Os resultados mostraram
aumento no nmero de vasos sanguneos na derme papilar apenas quando
empregado E + ESG 50% (439,22%). Todavia, os promotores qumicos no
alteraram o efeito do ESG 50% nos vasos sanguneos da derme (aumento do
nmero de vasos de 500% com AO e, de 460%, com MI).
Palavras-chave GUARAN PROMOTORES DE PERMEAO DERME PAPILAR
VASOS SANGUNEOS.
ABSTRACT The dry extract of guarana (DEG) is rich in caffeine. It has been
used in topic formulations destined to the prevention and treatment of the
gynoid lipodystrophy. The aim of this work was to study the effects of
emulsion (E) with different concentrations of DEG, mixed with two distinct
chemical promoters of cutaneous permeation oleic acid (OA) or isopropyl
myristate (IM), over the blood vessels in papillary dermis of rats. Two
experimental groups with five male Wistar rats were used. Four areas of 1
cm2 in the back were submitted to the following formulations: in the 1st
experimental group E + DEG 20%, E + DEG 20% + OA 1%, E + DEG
20% + IM 1% and control (C); in the 2nd group the treatments were E +
DEG 50%, E + DEG 50% + OA 1%, E + DEG 50% + IM 1% and C.
Segments of these areas were fixed in 10% buffered formaldehyde and
processed for staining with Hematoxylin and Eosin (HE). The number of
blood vessels was counted using a reticular eyepiece. The results showed
that only emulsions with 50% of DEG increased the number of papillary

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EFEITO DE EMULSO CONTENDO EXTRATO SECO DE GUARAN SOBRE OS VASOS SANGUNEOS DA DERME PAPILAR DE RATOS

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dermis blood vessels (439.22%). However, the chemical promoters did not
alter the effect of 50% DEG in dermis blood vessels (increase of the number
of vessels of 500% with AO and 460% with MI).
Keywords GUARANA PERMEATION PROMOTERS PAPILLARY DERMIS
BLOOD VESSELS.

INTRODUO

rias plantas vm ganhando aceitao por

parte dos profissionais da rea cosmtica e
dos consumidores. O uso de extratos vegetais em produtos cosmticos tem sido cada vez
mais motivado pelos pesquisadores e formuladores da rea. Porm, preciso cautela e um estudo
minucioso da eficcia de cosmticos contendo extratos vegetais para a obteno de produtos de
alta qualidade.8
H sculos, o extrato de guaran vem sendo
utilizado, via oral, como estimulante do sistema
nervoso central. Tal propriedade pode ser associada especialmente cafena, um dos princpios
ativos mais abundantes nesse extrato.9 O extrato
de guaran composto quimicamente por bases
xantnicas (cafena, teofilina e teobromina) e por
saponinas e taninos em altas concentraes, sendo que os taninos apresentam ao antioxidante.9
Sabe-se que a cafena sinttica vem sendo empregada em formulaes tpicas para o tratamento e a preveno da lipodistrofia ginide.1, 7
Assim, distribuidores do extrato de guaran tm
sugerido o uso dele em formulaes tpicas para
lipodistrofia ginide. No entanto, a eficcia do
uso do extrato de guaran topicamente ainda no
foi comprovada na literatura cientfica.
A lipodistrofia ginide, conhecida popularmente
como celulite, configura-se como uma alterao do
relevo cutneo, que ocorre sobretudo em mulheres,
nas regies da cintura plvica, membros inferiores e
abdome. A alterao inicial que leva formao da
celulite parece ser a deteriorao da substncia intersticial e rede capilar, levando a reteno excessiva
de lquidos na derme e em tecidos subcutneos. Tais
alteraes so determinadas pelo estrgeno.16
Estudos de Rosenbaum et al.15 apontam a
anatomia topogrfica do tecido adiposo, na qual
distinguem-se duas camadas separadas por uma
fscia superficial. A camada mais externa, que fica
em contato com a derme, chama-se areolar e
composta por adipcitos globulares e volumosos,
em disposio vertical, com vasos sanguneos numerosos e delicados. J a camada mais profunda,
denominada lamelar, apresenta clulas fusifor8

mes, menores e com disposio horizontal, onde

os vasos so de maior calibre.15
Em mulheres, o limite derme-hipoderme irregular e os septos de tecido conjuntivo formam vigas
verticais. Dessa forma, se houver hipertrofia da hipoderme, ocorrer formao de herniaes para a derme reticular, resultando no aspecto casca de
laranja na pele. Em homens, o limite derme-hipoderme liso, os septos so mais espessos e oblquos,
e, quando ocorre hipertrofia da hipoderme, esses
septos, por serem oblquos, pressionam as clulas
adiposas contra a musculatura subjacente em direo
derme, sem formar, portanto, herniaes.15, 16
Qualquer substncia que atue sobre a substncia fundamental amorfa, sobre vasos ou sobre o
tecido adiposo poder ser til no tratamento da
lipodistrofia ginide, j que a sua causa multifatorial.16 Mas, para atuar na derme e hipoderme,
a substncia ativa precisa permear a pele e, por isso, promotores qumicos de permeao, muitas
vezes, so adicionados nas formulaes.17
A presena dos promotores de permeao,
atuando por mecanismos diversos, pode proporcionar variaes no fluxo de uma substncia atravs da pele, mediante modificaes na estrutura
das membranas celulares, alteraes dos coeficientes
de difuso e dos coeficientes de partilha estrato crneo-veculo, influenciando no contedo hdrico ou
ainda por diminuio das tenses de interface.17 Tais
promotores, todavia, devem apresentar-se incuos,
farmacologicamente inativos, no interferindo nos
princpios ativos nem modificando as caractersticas
fsicas e sensoriais prprias de cada produto, devendo tambm apresentar efeito imediato e reversvel.17
Entre os promotores de permeao, tem-se o
cido olico (AO) e o miristato de isopropila (MI).
Por tcnicas calorimtricas, justifica-se o emprego
do AO pelo fato de ele fluidificar os lipdeos do estrato crneo, permitindo a difuso mais rpida das
substncias. O MI, ster de cido graxo, pode aumentar a solubilidade das substncias no veculo.17
Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar os
efeitos de emulso (E) contendo concentraes
diferentes de extrato seco de guaran (ESG), acrescida, separadamente, de dois promotores qumiSADE REV., Piracicaba, 6(14): 07-12, 2004

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cos de permeao cutnea AO ou MI sobre os

vasos sanguneos da derme papilar de ratos.

MATERIAL E MTODOS
Quantificao de cafena no ESG
A quantificao de cafena no ESG foi realizada segundo procedimento encontrado na Farmacopia dos Estados Unidos do Brasil, 2. ed.10
Pesou-se cerca de 5 g de ESG e transferiu-se
para um funil de separao. Adicionaram-se 40
mL de clorofrmio, 5 mL de hidrxido de amnio 10% e agitou-se por cinco minutos. Deixouse em repouso por 15 minutos e filtrou-se o clorofrmio para um bquer atravs de algodo hidrfilo. Repetiu-se a extrao com trs pores
de 20 mL de clorofrmio. Em banho de areia,
evaporaram-se os extratos clorofrmicos reunidos, at a secura. Juntaram-se ao resduo 15 mL
de gua destilada, 0,5 mL de cido sulfrico 10%
e ferveu-se por dois minutos. Os extratos foram
resfriados e filtrados em papel de filtro para um
funil de separao.
Alcalinizou-se o filtrado com hidrxido de
amnio 10% e extraiu-se a cafena com 20 mL,
25 mL e 30 mL de clorofrmio. Os extratos clorofrmicos foram recolhidos, filtrando-os atravs
de algodo hidrfilo para um bquer tarado. Evaporou-se o extrato clorofrmico em banho de
areia, levando-o posteriormente a uma estufa a
90C por uma hora. Esfriou-se o extrato em dessecador e calculou-se a quantidade percentual de
cafena extrada do ESG. O experimento foi realizado em triplicata.

trole; j no segundo grupo empregou-se numa das

reas E + ESG 50%, em outra E + ESG 50% + AO
1% e numa terceira E + ESG 50% + MI 1%, servindo de controle a quarta rea. A quantidade de formulao aplicada nas reas de tratamento foi de 1 g
por dia, com exceo do grupo-controle, que no
recebeu formulao.
Fragmentos dessas reas foram fixados em soluo tamponada de formol 10% e processados
rotineiramente em parafina para colorao com
hematoxilina e eosina (HE). De cada rea fizeramse trs lminas com trs cortes no seriados de 6
m. Contaram-se os nmeros de vasos sanguneos em cinco reas de 250 m2 por corte, utilizando ocular reticular integradora milimetrada
da Zeiss.5 Portanto, por animal, em cada tratamento, obteve-se uma rea total de 11.250 m2
(250 m2 x cinco reas x nove cortes).
A anlise estatstica foi realizada por meio de
teste no paramtrico de Kruskal-Wallis, seguido
por teste de comparao mltipla de Dunn's.

RESULTADOS E DISCUSSO
Quantificao de cafena no ESG
Os resultados da quantificao de cafena no
ESG encontram-se na tabela 1.

Tabela 1. Quantificao de cafena em 5g de ESG.

AMOSTRA QUANTIDADE DE CAFENA
%
1
0,503
10,06
2
0,49
9,8
3
0,501
10,02
Mdia
0,498 0,007
9,96 0,14

Anlise experimental
As emulses empregadas no experimento
compuseram-se de base auto-emulsionante a frio
(que contm uma associao balanceada de doadores de viscosidade, emulsionantes, steres fosfricos e emolientes) 5%, MI ou AO 1%, metil
dibromoglutaronitrila e fenoxietanol 0,2%, glicerina 5%, gua destilada e ESG 20% ou 50%.
Utilizaram-se dez ratos machos albinos, linhagem Wistar, divididos em dois grupos experimentais. Em todos os animais, foram delimitadas
quatro reas de 1 cm2 no dorso, expostas diariamente, por um perodo de 15 dias, s seguintes formulaes: o primeiro grupo experimental recebeu
E + ESG 20% numa das reas, E + ESG 20% + AO
1% numa segunda rea e E + ESG 20% + MI 1%
numa terceira, reservando-se a quarta para o con-

Estudos anteriores comprovaram que 5% de

cafena em formulaes dermocosmticas provocaram diminuio significativa do nmero de adipcitos, levando ainda lise dessas clulas.3 Alm
disso, tal concentrao de cafena est presente em
vrias formulaes lipolticas presentes no mercado. Dessa forma, pretendia-se incorporar nas formulaes uma quantidade de extrato de guaran
em que se tivesse 5% de cafena. Para tanto, realizou-se a quantificao de cafena no ESG (tab. 1).
Observou-se a presena de cerca de 10% de cafena em 5 g de extrato. Esse resultado est de acordo ao preconizado na literatura.10 Assim, para se
ter 5% de cafena na formulao, 50% de extrato
precisariam ser incorporados a ela. Para outro
grupo, incorporaram-se 20% de extrato nas for-

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EFEITO DE EMULSO CONTENDO EXTRATO SECO DE GUARAN SOBRE OS VASOS SANGUNEOS DA DERME PAPILAR DE RATOS

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mulaes (2% de cafena), com o propsito de saber se a ao seria dose-dependente.

Anlises morfomtricas e histolgicas

A tabela 2 apresenta os resultados das contagens
do nmero de vasos sanguneos nos tratamentos realizados. Observa-se que rea controle no apresentou
diferena estatisticamente significativa em relao
rea tratada com E + ESG 20%, independentemente
da presena ou no dos promotores qumicos de
absoro. Isso nos leva a acreditar que tal concentrao de extrato pode ser insuficiente para ocasionar algum benefcio na pele acometida pela celulite.
Por outro lado, quando a base cosmtica foi
acrescida de 50% de ESG, obteve-se um aumento
de 439,22% na vascularizao da derme. Todavia,
a presena dos promotores qumicos no alterou
estatisticamente o efeito do ESG 50% nos vasos sanguneos da derme (aumento do nmero de vasos
de 500% com AO e 460% com MI). Esses promotores foram utilizados em concentraes geralmente
comuns nas formulaes. Ainda assim, elas provavelmente no se revelaram suficientes para promover alguma alterao no efeito do ESG 50%.
Alberti et al.2 verificaram o efeito promotor do MI
numa concentrao de 50% na formulao. J
Touitou et al.18 observaram o efeito promotor do
AO numa concentrao de 10%.
Os efeitos das formulaes nos vasos sanguneos da derme podem ser melhor visualizados na
figura 1, em que se percebe maior nmero de vasos sanguneos nas reas onde aplicou-se ESG 50%
(1e, 1f e 1g) quando comparado com o controle
(1a). Nas reas que receberam ESG 20%, entretanto, no se verificou alteraes estatisticamente significativas no nmero de vasos sanguneos (1b, 1c
e 1d) em relao ao controle (1a).
Tabela 2. Contagem do nmero de vasos sanguneos da
regio papilar da derme analisados numa rea de
11.250 m2.
TRATAMENTOS
MDIA ERRO-PADRO
MDIO

Controle
9,00
0,89
E + ESG 20%
17,40
2,75
E + ESG 20% + AO 1%
18,53
3,73
E + ESG 20% + MI 1%
16,60
3,24
E + ESG 50%
39,53*
1,64
E + ESG 50% + AO 1%
45,13*
3,76
E + ESG 50% + MI 1%
41,40*
1,06
* p < 0,05 quando comparado com o controle. Os valores esto
representados como mdia erro-padro mdio (n = 5).
10

O objetivo principal do trabalho era verificar

a eficcia das formulaes na hipoderme do rato,
mas ela revelou-se bastante reduzida e irregular.
Em estudo anterior, observou-se que o suno tem
se mostrado um bom modelo experimental para
o estudo de formulaes destinadas a preveno e
tratamento da celulite.3, 14
Contudo, os resultados obtidos sugerem que
50% do extrato na base cosmtica, independentemente do promotor qumico utilizado, podem ocasionar efeitos interessantes na pele, uma vez que o
aumento da vascularizao essencial ao fornecimento suficiente de oxignio e nutrientes para a pele, mantendo a homeostase e a nutrio tecidual
normal.6 Tal efeito deve ser buscado por um produto cosmtico, visto que, aprimorando a nutrio
cutnea, seu aspecto conseqentemente tambm
ir melhorar.
Essas alteraes na derme apontam possivelmente um quadro de angiognese, que pode ser
definida como um complexo processo biolgico
caracterizado pelo desenvolvimento de novos vasos sanguneos. Tal processo envolve mltiplos
passos, entre eles, induo da hiper-permeabilidade microvascular, levando ao extravasamento de
protenas plasmticas, como fibrinognio e protrombina, degradao enzimtica da membrana
basal vascular e matriz intersticial, migrao e
proliferao de clulas endoteliais mediante a liberao do fator de crescimento vascular endotelial (FCVE) e, finalmente, formao de vasos
sanguneos maduros.6
Segundo Espnola et al.,9 taninos e saponinas esto presentes em altas concentraes no extrato de
guaran. Os taninos constituem um grupo de
bioflavonides polifenlicos ativos, sintetizados por
muitas plantas, facilitando a cicatrizao de feridas.11
Khanna et al.12 notaram que o tratamento tpico com extrato de semente de uva com suas
altas concentraes de taninos, que possuem notvel ao antioxidante aumentou a liberao
do FCVE. O aumento da liberao de FCVE, por
sua vez, leva maior permeabilidade vascular,
promovendo angiognese. Para Detmar,6 durante
a angiognese, a expresso do FCVE induzida
em queratincitos da epiderme por vrios estmulos, transformando fator de crescimento tumoral alfa (TNF-) e hipxia, o que aumenta a
vascularizao da derme, como verificado neste
trabalho (fig. 1 e tab. 2).
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Figura 1. Controle (1a); E + ESG 20% (1b); E + ESG 20% + AO 1% (1c); E + ESG 20% + MI 1% (1d); E + ESG 50% (1e); E + ESG 50% +
AO 1% (1f); E + ESG 50% + MI 1% (1g). Observar nos tratamentos com E + ESG 50%, acrescido tanto de AO 1% quanto de MI 1%, a presena de vasos sanguneos na derme seta (HE, 10x).

1a

1b

1c

1d

1e

1f

1g
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11

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Morisaki et al.13 tambm perceberam que as

saponinas, presentes no ESG, estimulam a angiognese in vivo. Em relao ao excessivo sangramento observado no momento da retirada dos
fragmentos de pele, ele pode ser explicado pelo
fato de o extrato de guaran diminuir a agregao
plaquetria e a formao de tromboxanas plaquetrias, aumentando a quantidade de sangue.4
Este estudo preliminar, por sua vez, nos conduzir, certamente, a outras pesquisas. Em estudos futuros, pretende-se, por exemplo, avaliar a
eficcia da base acrescida de 50% de extrato no
tecido adiposo de sunos. Por outro lado, pode-se
verificar que 50% de ESG aumentaram a microcirculao cutnea, o que pode ser interessante a outras categorias de cosmticos, como os que

possuem atividade antienvelhecimento da pele, j

que permitem melhora na nutrio cutnea.

CONCLUSES
Diante das condies experimentais, pode-se
concluir que:
o rato no se mostrou um modelo experimental para estudo de hipoderme;
ESG 20% no provocou alteraes significativas na derme papilar de ratos, independentemente do promotor qumico utilizado; j ESG
50% causou aumento do nmero de vasos sanguneos na derme, sendo que os promotores qumicos de absoro no potencializaram o efeito
do extrato.

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Submetido: 15/jan./2004
Aprovado: 17/set./2004
12

SADE REV., Piracicaba, 6(14): 07-12, 2004