647378

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO
FACULDADE DE FARMCIA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS FARMACUTICAS
DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DA METODOLOGIA

DE ANLISE DO TEOR DE FILTROS SOLARES E
DETERMINAO DO FPS IN VITRO EM
FORMULAES FOTOPROTETORAS COMERCIAIS
RENATA PIETSCH RIBEIRO
RIO DE JANEIRO
2004
DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DA
METODOLOGIA DE ANLISE DO TEOR DE FILTROS
SOLARES E DETERMINAO DO FPS IN VITRO EM
FORMULAES FOTOPROTETORAS COMERCIAIS
RENATA PIETSCH RIBEIRO
Dissertao de Mestrado apresentada ao Programa de

Ps-Graduao
em
Cincias
Farmacuticas
da
Universidade Federal do Rio de Janeiro, como parte

dos requisitos necessrios obteno do ttulo de
Mestre em Cincias Farmacuticas.
Orientador: Prof. Adjunto Dra. Sheila Garcia
RIO DE JANEIRO
Junho de 2004
ii
FOLHA DE APROVAO
DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DA METODOLOGIA DE

ANLISE DO TEOR DE FILTROS SOLARES E DETERMINAO DO FPS IN VITRO
EM FORMULAES FOTOPROTETORAS COMERCIAIS
Renata Pietsch Ribeiro
Dissertao submetida ao programa de ps graduao em Cincias Farmacuticas

da Faculdade de Farmcia da Universidade Federal do Rio de Janeiro - UFRJ, como parte
dos requisitos necessrios obteno do grau de Mestre.
Aprovada por:
Prof.________________________
- Sheila Garcia
(Adjunto)
Prof.________________________
(Titular)
- rika Rosa Maria Kedor
Prof.________________________
- Ndia Maria Volpato
(Adjunto)
Prof.________________________
- Antnio Jorge Ribeiro da Silva
(Adjunto)
Rio de Janeiro
2004
iii
Ficha Catalogrfica
R484
Ribeiro, Renata Pietsch

Desenvolvimento e validao da metodologia de anlise do teor de filtros solares e
determinao do FPS in vitro em formulaes fotoprotetoras comerciais/ Renata Pietsch Ribeiro;
orientadora Sheila Garcia. - Rio de Janeiro : UFRJ, Faculdade de Farmcia, 2004.
xviii, 92f. : il. ; 30cm.
Dissertao (Mestrado) - UFRJ/ Faculdade de Farmcia, 2004.
Referncias Bibliogrficas: f.65-72.
1. Filtros solares. 2. CLAE. 3. Validao. 4. FPS in vitro. 5. Formulaes cosmticas.

6. Controle de qualidade. I. Garcia, Sheila. II. Universidade Federal do Rio de Janeiro,
Faculdade de Farmcia. III. Desenvolvimento e validao da metodologia de anlise do teor de
filtros solares e determinao do FPS in vitro em formulaes fotoprotetoras comerciais.
iv
Aos meus pais, Nelson e Teresa,

por me conduzirem at aqui.
AGRADECIMENTOS
Gostaria de agradecer minha orientadora Sheila, pelo estmulo, confiana,
pacincia e pelas tantas cobranas, sem as quais este trabalho iria demorar um pouco
mais...
Agradeo minha famlia, pais, irmo, marido, tios, primos, por tanta dedicao e
cuidados dispensados durante toda minha vida; pelo apoio e incentivos inumerveis, sem
os quais seria impossvel esta realizao.
professora Ndia por suas orientaes e suporte financeiro, em nome do LabCQ,
e aos professores Maurcio e Valria, do LabCQ, por suas orientaes e momentos
descontrados durante este perodo.
Indstria de Cosmticos Samana pelas ajudas e materiais cedidos;
Indstria Farmacutica Spectrum Qumica pelo gentil fornecimento de matrias
primas importantes deste trabalho.
s amigas e amigos do LabCQ pela amizade e pelos auxlios durante essa jornada.
Farmcia Alquimia pelo gentil fornecimento de algumas formulaes deste
trabalho;
Professora Bete da Farmcia Universitria pelo auxlio na preparao das
formulaes padro;
Aos amigos da Universidade Federal do Rio de Janeiro, pela amizade, ajuda e bons
momentos juntos. Especialmente ao Vincius que, alm da amizade, trabalhou junto,
ajudando bastante!
Aos meus amigos que me proporcionam maravilhosos momentos, os quais me do
energia para seguir em frente.
Ao Departamento de Medicamentos pelas dispensas do trabalho e incentivos
financeiros em alguns congressos que participei.
Aos professores do Programa de Ps-graduao em Cincias Farmacuticas da
Faculdade de Farmcia do Rio de Janeiro, por todos os ensinamentos e dedicao.
E principalmente a Deus, o grande responsvel por tudo isso: tudo o que sou, toda a
fora que tive, a sade que tenho e as pessoas que colocou ao meu redor.
vi
RESUMO
DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DA METODOLOGIA DE
ANLISE DO TEOR DE FILTROS SOLARES E DETERMINAO DO FPS
IN VITRO EM FORMULAOES FOTOPROTETORAS COMERCIAIS
Orientador: Sheila Garcia
Resumo da Dissertao de Mestrado submetida ao Programa de Ps-graduao em
Cincias Farmacuticas, Faculdade de Farmcia, da Universidade Federal do Rio de
Janeiro (UFRJ), como parte dos requisitos necessrios obteno do ttulo de Mestre em
Cincias Farmacuticas.
Os filtros solares so compostos que absorvem ou refletem a radiao
ultravioleta e so utilizados em produtos, considerados cosmticos pela legislao
brasileira, para prevenir ou minimizar os efeitos prejudiciais da radiao solar na pele,
como eritema, reaes fototxicas, fotoenvelhecimento e cncer de pele. As formulaes
que surgiram nas ltimas dcadas ampliaram o espectro de proteo, quando utilizaram
mistura de filtros solares, para proteger a pele da radiao ultravioleta, numa faixa maior
(UVA e UVB).
Este trabalho mostra o desenvolvimento e validao de um mtodo de avaliao do
teor de filtro solar por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) para matriaprima e formulaes comerciais. Este mtodo possibilita a anlise de formulaes
contendo apenas um filtro solar ou misturas destes, foi validado e apresenta resultados
condizentes com o esperado. Atravs de avaliaes estatsticas comprova-se que o mtodo
linear, reprodutvel, preciso e exato, podendo-se avaliar formulaes de diferentes
procedncias.
Alm disso, utilizou-se a espectrofotometria para a determinao do Fator de
Proteo Solar (FPS) das formulaes, comparando-o com o FPS rotulado.
Palavras-chave: filtros solares, validao, CLAE, FPS in vitro, controle de qualidade,
formulaes cosmticas.
Rio de Janeiro
Junho de 2004
vii
ABSTRACT
DEVELOPMENT AND VALIDATION OF SUNSCREENS CHEMICALS
QUANTIFICATION AND IN VITRO SPF DETERMINATION OF COMMERCIAL
SUNSCREENS PRODUCTS
Orientador: Sheila Garcia
Abstract da Dissertao de Mestrado submetida ao Programa de Ps-graduao em

Cincias Farmacuticas, Faculdade de Farmcia, da Universidade Federal do Rio de
Janeiro (UFRJ), como parte dos requisitos necessrios obteno do ttulo de Mestre em
Cincias Farmacuticas.
Sunscreens are substances that absorb or reflect the ultraviolet radiation and these
compounds are used in products, considered cosmetics by Brazilian regulations, to prevent
or lower the harmful effects of solar radiation on the skin, as erithemas, phototoxic
reactions, photoaging and skin cancer. In the last decade, the protection spectrum has been
increased by formulations using more than one chemical, to protect skin from UVA and
UVB radiation.
This work shows the development and validation of a High Performance Liquid
Chromatography (HPLC) quantification method for sunscreens formulations and
sunscreens chemicals. This method has been used to analyze formulations containing just
one or several chemicals and has been validated with linear, reproductible, precise and
exact results.
Besides, this work has been used the in vitro SPF spectrophotometric methodology
to compare between the declared and the evaluated SPF of the commercial formulations.
Keywords: sunscreens, validation, HPLC, SPF in vitro, quality control, commercial

formulations.
Rio de Janeiro
Junho de 2004
viii
LISTA DE SIGLAS E ABREVIAES

L: microlitro
3,4BC: 3-(4-metilbenzilideno) cnfora
a: coeficiente angular da reta
AAG: cido actico glacial
ANPR: aviso antecipado de proposta de regulamentao
ANVISA: Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
AVO: avobenzona
b: coeficiente linear da reta
BV: balo volumtrico
BZ3: benzofenona-3
C: concentrao
Ca: concentrao do analito
CCD: cromatografia em camada delgada
CLAE: cromatografia lquida de alta eficincia
CMD: concentrao mdia determinada
CME: concentrao mdia experimental
COLIPA: Comitee de la Liaison des Associations Europeans de LIndustries de la
Parfumerie, de Produits Cosmetiques et de Toilette (Associao Europia das Indstrias
Cosmticas, de Artigos de Toucador, e Perfumaria)
CT: concentrao terica
DAD: detetor de arranjo de fotodiodos
DME: dose mnima de energia capaz de produzir eritema
DNA: cido desoxi ribonucleico
DP: desvio padro
DPR: desvio padro relativo
EE: efeito eritematognico
EtOH: etanol
EUA: Estados Unidos da Amrica
FDA: Food and Drug Administration
FPS: fator de proteo solar
h: hora
ix
I: intensidade
IC: intervalo de confiana
ICH: International Conference on Harmonization ou Conferncia Internacional de
Harmonizao
k: fator de capacidade
mcg: micrograma
MCO: p-metoxicinamato de octila
min: minuto
mL: mililitro
MS: Ministrio da Sade
N: nmero de pratos tericos
n: nmero de replicatas
ng: nanograma
nL: nanolitro
nm: nanmetro
o
C: graus Celsius
OCT: octocrileno
ODP: octil dimetil PABA
OTC: over the counter (ou medicamentos de venda livre)
P.A.: pr-anlise
PABA: cido para-amino benzico
pH: potencial de hidrognio inico
qsp: quantidade suficiente para
r: coeficiente de correlao
R: resoluo em CLAE
RE: resoluo (legislao)
Rf: fator de reteno
SAA: Standards Australia Association (Associao Australiana de Normas)
SO: salicilato de octila
T: fator de cauda ou assimetria
THF: tetraidrofurano
TR: tempo de reteno
UV/Vis: radiaes ultravioleta e visvel

UV: radiao ultravioleta
UVA: radiao ultravioleta A
UVB: radiao ultravioleta B
UVC: radiao ultravioleta C
: comprimento de onda
xi
LISTA DE ESQUEMAS
Pgina
Esquema 1: Representao da determinao do valor do fator de reteno
36
Esquema 2: Esquema do equipamento utilizado
38
Esquema 3: Preparo da soluo das amostras
40
Esquema 4: Comportamento e Rf dos filtro solares em CCD
48
LISTA DE GRFICOS
Pgina
Grfico 1:
Curva padro da benzofenona-3
51
Grfico 2:
Curva padro da avobenzona
51
Grfico 3:
Curva padro do octocrileno
52
Grfico 4:
Curva padro do salicilato de octila
52
Grfico 5:
Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 1.1
54
Grfico 6:
54
Grfico 7:
54
Grfico 8:
55
Grfico 9:
55
Grfico 10:
55
Grfico 11:
56
Grfico 12:
56
Grfico 13:
56
xii
LISTA DE FIGURAS
Pgina
Figura 1:
Radiao Solar No-Ionizante
Figura 2:
Espectro da Radiao Ultravioleta
Figura 3:
Estrutura molecular do cido urocnico
Figura 4:
Estrutura da pele humana
figura 5:
Estrutura do cido p-aminobenzico (PABA).
Figura 6:
Ressonncia de eltrons no PABA
Figura 7:
Estrutura geral de salicilatos
Figura 8:
Estrutura geral dos parabenos
10
Figura 9:
Esquema da estrutura molecular dos cinamatos
10
Figura 10: Ressonncia de eltrons na estrutura molecular de benzofenonas
11
Figura 11: Ressonncia eletrnica ocorrida no metil antranilato
11
Figura 12: Estrutura molecular dos dibenzoilmetanos
12
Figura 13: Estrutura molecular dos derivados da cnfora utilizados como filtro solar
12
Figura 14: Estrutura molecular do cido 2-fenilbenzimidazol-5-sulfnico
12
Figura 15: Estrutura molecular do filtro solar benzofenona-3
32
Figura 16: Estrutura molecular do octil dimetil PABA
32
Figura 17: Estrutura molecular do filtro solar para-metoxicinamato de octila
33
Figura 18: Estrutura molecular do filtro solar salicilato de octila
33
Figura 19: Estrutura molecular do filtro solar octocrileno
33
Figura 20: Estrutura molecular do butil metoxidibenzoil metano (ou avobenzona)
33
Figura 21: Estrutura da imiduria
42
Figura 22: Estrutura do BHT
42
Figura 23: Pico cromatogrfico assimtrico
50
xiii
LISTA DE TABELAS
Pgina
Tabela 1:
Filtros solares e algumas de suas propriedades
19
Tabela 2:
Formulaes analisadas
34
Tabela 3:
Condies cromatogrficas
37
Tabela 4:
Concentrao dos padres das curvas de calibrao
39
Tabela 5:
Formulaes 1.1, 1.2 e 1.3 para validao do mtodo I
41
Tabela 6:
Formulaes 2.1, 2.2 e 2.3 para validao do mtodo I
43
Tabela 7:
Formulaes 3.1, 3.2 e 3.3 para validao do mtodo II
43
Tabela 8:
Condies cromatogrficas
49
Tabela 9:
Comprimentos de onda de quantificao
51
Tabela 10: Formulaes para recuperao
53
Tabela 11: Resultados das formulaes A e B.
57
Tabela 12: Resultados das formulaes C, D, E, F, G e H.
58
Tabela 13: Resultados das formulaes I, J e L.
59
Tabela 14: FPS das formulaes analisadas
60
Tabela 15: Clculo terico do FPS das formulaes B, E, G, H e I
61
LISTA DE FRMULAS
Pgina
Frmula 1: Fator de Proteo solar
14
Frmula 2: Clculo do FPS segundo Mansur
17
Frmula 3: Desvio padro relativo (DPR)
28
Frmula 4: Exatido de um mtodo analtico.
29
xiv
Frmula 5: Clculo do fator de reteno

LISTA DE QUADROS
36
Pgina
Quadro 1: Expresses orientativas para rotulagem de protetores solares
16
Quadro 2: Relao entre o efeito eritematognico e a intensidade da radiao

em cada comprimento de onda
18
Quadro 3: Classificao dos testes, segundo sua finalidade
23
Quadro 4: Caractersticas de Validao recomendadas dos vrios tipos de testes
23
xv
SUMRIO
pgina
1
INTRODUO
2
REVISO DA LITERATURA
2.1
Radiao ultravioleta
2.2
Sistemas naturais de proteo radiao UV
2.3
Os protetores solares
2.3.1 Relao estrutura-atividade dos protetores solares
2.4
Eficcia dos filtros solares e fator de proteo solar
2.4.1 Mtodos para determinao do FPS
2.4.1.1 Metodologias de determinao do FPS segundo a ANVISA
2.4.1.2 Metodologias in vitro de determinao do FPS
2
2
5
7
8
13
15
15
2.5
2.6
2.6.1
2.6.2
2.6.3
2.6.4
2.6.5
2.6.6
Determinao do teor de filtros solares

Validao de mtodos analticos
Especificidade
Linearidade
Intervalo de confiana
Preciso
Exatido
Robustez
17
20
22
24
25
26
26
28
29
3
3.1
3.2
OBJETIVOS
Objetivo geral
Objetivos especficos
30
30
30
4
MATERIAIS E MTODOS
4.1
Materiais
4.1.1 Equipamentos
4.1.2 Reagentes
4.1.3 Padres de filtros solares
4.1.4 Produtos analisados
4.2
Mtodos
4.2.1 Avaliao da separao cromatogrfica
4.2.2 Anlise do teor de filtros solares
4.2.2.1 Preparo da soluo padro
31
31
31
31
31
32
35
35
37
38
xvi
4.2.2.2 Construo da curva padro

4.2.2.3 Preparo da soluo da amostra
4.2.2.4 Quantificao da amostra
4.2.3 Validao do mtodo
4.2.3.1 Formulaes para a validao dos mtodos
4.2.4 Determinao do Fator de Proteo Solar (FPS)
4.2.4.1 Preparo da soluo
4.2.4.2 Anlise no espectrofotmetro
39
39
40
40
41
44
44
44
5
5.1
5.2
5.3
5.3.1
5.3.2
5.3.3
5.3.4
5.4
RESULTADOS E DISCUSSO
Avaliao da separao cromatogrfica por CCD
Parmetros cromatogrficos
Determinao do teor de filtro solar
Comprimentos de onda de quantificao
Curva de calibrao
Validao do mtodo
Formulaes comerciais
Determinao do FPS das formulaes
46
46
49
51
51
51
52
57
60
CONCLUSES
62
PERSPECTIVAS FUTURAS
64
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
65
9
9.1
9.2
9.3
9.4
9.5
9.6
APNDICE
Grfico 3D benzofenona-3 (BZ3)
Grfico 3D avobenzona (AVO)
Grfico 3D octocrileno (OCT)
Grfico 3D salicilato de octila (SO)
Grfico 3D p-metoxicinamato de octila (MCO)
Grfico 3D octil dimetil PABA (ODP)
73
74
75
76
77
78
79
9.7
Cromatogramas da mistura dos filtros solares BZ3, AVO, OCT e

SO pelo mtodo I
80
Cromatogramas da mistura dos filtros solares BZ3 e MCO pelo

mtodo I
82
9.8
9.9
Cromatogramas da mistura dos filtros solares BZ3, ODP e MCO
xvii
9.10
pelo mtodo II
Clculo terico do FPS de formulaes
83
84
10
ANEXOS TRABALHOS EM CONGRESSOS
86
10.1
Certificado do 3 Congresso de Cincias Farmacuticas do Rio

de Janeiro
10.1.1 Resumo do trabalho apresentado (Anais)
10.2 Certificado do VII Pharmatech / IV Enecq
10.2.1 Resumo do trabalho apresentado (Anais)
10.3 Certificado do 18 Congresso Brasileiro de Cosmetologia
10.3.1 Trabalho apresentado (trabalho completo Anais)
xviii
87
88
89
90
91
92
Introduo
Introduo
Os filtros solares so substncias usualmente utilizadas em produtos cosmticos

para proteger a pele contra a radiao ultravioleta solar. Eles so capazes de diminuir a
quantidade de radiao UV que atinge a pele humana por absoro e/ou reflexo desta
radiao (PERUGINI et al., 2002).
Este projeto de pesquisa prope-se a desenvolver uma avaliao de produtos

comerciais de diferentes procedncias utilizados como protetores solares, no que se refere
ao valor de FPS (fator de proteo solar) e teor de filtro solar contido em cada formulao.
Para isso, utiliza uma metodologia de clculo de FPS por espectrofotometria desenvolvida
anteriormente, e descreve o desenvolvimento e a validao de uma metodologia de
quantificao dos filtros solares por cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE).
Reviso da Literatura
2
2.1
REVISO DA LITERATURA
RADIAO ULTRAVIOLETA
A radiao eletromagntica emitida pelo sol mostra um largo espectro de
comprimentos de onda e uma fonte de energia natural que possui um grande potencial de
utilizao devido sua abundncia e acessibilidade. Pode ser dividida em duas maiores
regies de acordo com a capacidade de ionizao atmica: radiao ionizante e radiao
no-ionizante. A radiao ionizante, por sua vez, subdividida em raios-X e raios gama,
enquanto a radiao no-ionizante (Figura 1) subdivide-se em radiao ultravioleta, luz
visvel e radiao infravermelha. Felizmente a radiao ionizante altamente prejudicial no
penetra na atmosfera terrestre (KIRCHOFF, 1995).
400 425
100
490
575 585
650
Vermelho
Faixa Invisvel
Laranja
Amarelo
Azul
Verde
Faixa Visvel
Violeta
Ultravioleta
Faixa Invisvel
800
(alta energia)
1700
(baixa energia)
Comprimento de Onda (nm)
Figura 1: Radiao Solar No-Ionizante.
Todo esse espectro de radiao comumente classificado de acordo com seu

comprimento de onda (). A radiao UV (Figura 2) a parte do espectro eletromagntico
entre 100 e 400nm. E , por sua vez, subdividida arbitrariamente em outros componentes
de acordo com efeitos biolgicos: UVA (bronzeante), UVB (eritematosa) e UVC
(germicida). Os efeitos adversos dos raios UV no homem incluem queimadura solar
(eritema), conjuntivite, cncer de pele, envelhecimento precoce, entre outros. Em contraste,
o fenmeno vital da fotossntese um exemplo do efeito benfico da luz solar no meio

ambiente.
UV do vcuo
100
UV-C
200
UV-B
280
UV-A
320
400
(alta energia)
(baixa energia)
Comprimento de Onda (nm)
Figura 2: Espectro da Radiao Ultravioleta.

Contudo, a radiao solar atenuada ao atravessar as camadas atmosfricas, no
permitindo que uma parte substancial atinja a superfcie terrestre. Esse fenmeno deve-se
absoro, disperso e reflexo na estratosfera (camada mais externa), com sua fina camada
de oznio, e troposfera, onde se formam as nuvens e as manifestaes climticas
(EPSTEIN, 1997; ROY et al, 1998).
Mesmo sendo um pr-requisito para a vida, a luz do sol pode ser extremamente
nociva sade humana. Apesar de no penetrar profundamente no organismo, ela atinge as
partes externas do corpo (pele, olhos e mucosas) e uma exposio excessiva ao sol est
associada com o aumento nos riscos de cncer de pele, fotoenvelhecimento, cataratas e
outras doenas oftalmolgicas. Pode tambm afetar o sistema imune, comprometendo a
eficcia dos programas de vacinao, por exemplo. (MURPHY, 2002; SLINEY, 2001;
CLYDESDALE et al, 2001; GRUIJL, 2001; BRIDGES, 1998; NORVAL, 2001)
Essa exposio excessiva resulta em severo estresse oxidativo nas clulas da pele
por: (a) interaes com cromforos intracelulares e fotosensibilizadores, resultando em
danos genticos transitrios e permanentes; e (b) pela ativao de sinalizadores
citoplasmticos de vias de transduo de sinais relacionadas com o crescimento, a
diferenciao,
envelhecimento
degradao
do
tecido
conectivo.
fotoenvelhecimento da pele um processo biolgico complexo que afeta vrias camadas

da pele, sendo que o maior dano observado no tecido conectivo da derme
(WLASCHECK et al., 2001). As pessoas ficam com a aparncia mais velha, quando a pele
perde a firmeza e tonicidade, aparecendo rugas. (LEYDEN, 2001, GIES et al, 1998;
MURPHY, 2002)
A incidncia do cncer de pele aumenta a cada ano e h evidncias que os trs

principais tipos (carcinoma da clula basal, carcinoma da clula escamosa e o melanoma
cutneo maligno) so causados pela exposio solar (muitas vezes, exposio recreativa
que leva s queimaduras, eritemas). Os raios UV so capazes de danificar o DNA celular
diretamente, causando mutaes nos genes, possibilitando o desenvolvimento do cncer.
observada uma relao epidemiolgica entre o aparecimento da doena com alguns
parmetros como latitude, resistncia pessoal e efeito da migrao, origem tnica,
colorao da pele no exposta, propenso queimadura e habilidade de bronzeamento,
freqncia de exposio etc., alm de comprovaes da mutao gentica caracterstica
causada pelos raios UVB nos melanomas. H tambm uma evidncia que o risco ao
melanoma esteja relacionado exposio intermitente ao UV especialmente na infncia
(ARMSTRONG & KRICKER, 2001; MURPHY, 2002; BRIDGES, 1998; BERG, 2004).
A exposio do olho humano ao UV depende de muitos fatores: reflexo causada

pela superfcie, claridade do cu, reflexo atmosfrica, e o no uso de culos protetores. Os
efeitos
agudos
dessa
incidncia
incluem o desenvolvimento de fotoqueratite,
fotoconjuntivite, que parecido com uma queimadura solar nos tecidos mais delicados da
pele, causada na crnea e na plpebra. Apesar de doloroso, esse processo reversvel e
facilmente prevenido com o uso de culos escuros. Os efeitos crnicos incluem a
possibilidade do desenvolvimento de cncer no tecido conjuntivo e catarata. (WHO/OMS,
1999; SLINEY & LEARY, 1992; CLYDESDALE et al, 2001).
Para o sistema imunolgico, os raios UV podem ser nocivos por modificar a

atividade e distribuio das clulas responsveis para o disparo da resposta imune. A
radiao ultravioleta gera uma resposta negativa (downregulation) da imunidade que acaba
por gerar uma falha na resposta imune do indivduo. (WHO/OMS, 1999; NORVAL, 2001;
CLYDESDALE et al, 2001; MOYAL et al, 1997)
2.2
SISTEMAS NATURAIS DE PROTEO RADIAO UV

A pele constitui uma considervel proteo para a penetrao dos raios ultravioleta.
Os sistemas naturais que previnem os danos solares so formados pela secreo sudorpara,
pigmentao (melanina) e pela camada crnea. (BARTH, 2000; LPORI, 2002)
Na secreo sudorpara existe um componente, o cido urocnico (cido 4imidazoilacrlico) (Figura 3), cujas propriedades absorventes se situam na faixa das
radiaes UVB, com o mximo de absoro em 277nm.
H
N
N
OH
O
Figura 3: Estrutura molecular do cido urocnico.
A melanina (eumelanina) o pigmento biolgico presente na pele, cabelos e olhos.

Sua absoro ocorre numa extensa faixa de comprimentos de onda, desde o ultravioleta at
as regies prximas do infravermelho. Ela bioquimicamente um radical livre sem reao,
neutraliza e separa radicais livres na pele e finalmente desprendido com o estrato crneo.
Apresenta sinergia com outros antioxidantes como o tocoferol. A concentrao de
melanina na pele reduz a alvura. (CHEDEKEL, 1998) Nas clulas observa-se que o
pigmento tende a cobrir a parte superior do ncleo para proteger o DNA celular do dano
que possa ser ocasionado pela radiao UV (LPORI, 2002).
A camada crnea (ou estrato crneo) formada pela sobreposio de clulas

queratinizadas e anucleadas, e a camada mais superficial da epiderme. Ela funciona como
uma barreira perda de gua do organismo para o meio ambiente e contra a penetrao de
produtos do meio ambiente (Figura 4). Entre 5% e 10% da luz que incide refletida pelo
estrato crneo. A pele onde se tem este estrato fino muito mais sensvel radiao UV e
pode ser queimada ou lesionada com mais facilidade do que aquela dotada de uma
abundante camada crnea (LPORI, 2002).
Figura 4: Estrutura da pele humana (LPORI, 2002)
2.3
OS PROTETORES SOLARES
Os protetores solares surgiram quando se observou que existiam substncias
capazes de prevenir a queimadura da pele (eritema) pelos raios solares. No incio do sculo
era observado que sulfato de quinina acidificado e, mais tarde, o Antilux (2-naftol-6,8dissulfonato de sdio) evitavam as queimaduras (URBACH, 2001). Ao longo do sculo
XX, muitas substncias surgiram com eficcia na preveno de eritema solar e seu uso se
tornou mais popular aps a Segunda Guerra Mundial, com o cido p-amino benzico
(PABA). (SHAATH, 1997)
Os filtros solares, como mencionado anteriormente, so substncias capazes de

absorver a energia eletromagntica na faixa denominada ultravioleta e emiti-la sob outra
forma (geralmente na faixa do infravermelho, gerando sensao de calor). Com isto, no
ocorre a penetrao da radiao na pele, evitando-se os danos.
Permite-se, assim, maior tempo de exposio ao sol e, recentemente, esto sendo

utilizados ainda mais devido necessidade de preveno contra as reaes fototxicas, o
cncer de pele e o envelhecimento precoce da pele (OZER et al., 2001; UITTO et al,
1997). A eficcia dos filtros solares dependente da sua capacidade de absoro da energia
radiante, que proporcional sua concentrao, intervalo de absoro e comprimento de
onda onde ocorre absoro mxima. A associao de diferentes filtros em formulaes
tambm um recurso para eficcia (DE PAOLA & RIBEIRO, 1998)
Alm do uso contnuo de protetores solares, alguns autores defendem ainda que
imprescindvel a conscientizao dos efeitos danosos da radiao UV para que outros
hbitos sejam adotados, como uso de culos, roupas apropriadas e menor tempo de
exposio. (DIFFEY, 2001a)
2.3.1 Relao estrutura-atividade dos protetores solares:

Os protetores solares podem agir de duas maneiras: absorvendo a radiao
incidente ou refletindo-a. As substncias que refletem a radiao so denominadas
protetores fsicos, pois so como uma barreira fsica que no permite a passagem da
radiao (exemplo: dixido de titnio e xido de zinco). Os protetores qumicos so
aqueles que possuem como caracterstica a absoro de um ou mais comprimentos de onda
especficos, transformando-o em outro tipo de energia. Esses filtros UV podem ser
classificados como: (SHAATH, 1997).
Derivados do PABA (ou p-aminobenzoatos);
Salicilatos;
Cinamatos;
Benzofenonas;
Antranilatos;
Dibenzoilmetanos;
Derivados da cnfora;
Diversos.
O cido p-aminobenzico (PABA), foi o primeiro filtro ultravioleta patenteado e foi

imensamente utilizado nas dcadas de 50 e 60. Ele possui uma absoro mxima em
296nm. Sua estrutura qumica (Figura 5) mostra a presena de dois grupos funcionais
reativos substituindo com orientao para no ncleo benznico. (SHAATH, 1997)
H ..
N
H
C O
OH
Figura 5: cido p-aminobenzico (PABA).
Essa configurao de um grupamento doador de eltrons (-NH2) para em relao a

um grupo aceptor de eltrons (-COOH) permite uma migrao de eltrons como mostrado
na Figura 6:
H ..
N
H
H +
N
H
C O
OH
C O
OH
Figura 6: Ressonncia de eltrons no PABA.

Clculos de qumica quntica revelaram que essa energia de deslocalizao dos
eltrons corresponde a transies eletrnicas associadas com a regio UVB do espectro
solar.
Os salicilatos como o salicilato de benzila, de octila, de homomentila, de
trietanolamina, entre outros, so compostos orto-disubstitudos, com um arranjo espacial
que permite uma ligao de hidrognio interna na molcula (Figura 7), absorvendo a
radiao UV em torno de 300nm.
OR
C
O
O
H
Figura 7: Estrutura geral de salicilatos.
A ligao de hidrognio intramolecular evidenciada na figura 7, diminui a energia

necessria para promover o composto ao seu estado excitado. Com isso, a molcula
absorve radiao por volta de 300nm e no por volta de 270nm como era de se esperar se
os salicilatos fossem comparados com parabenos, que so molculas semelhantes. Os
parabenos no possuem a ligao de hidrognio intramolecular como os salicilatos, pois
seu padro de substituio no anel para (Figura 8), e a energia absorvida em torno de
270nm.
Reviso da Literatura 10
O
O
Figura 8: Estrutura geral dos parabenos.
Os salicilatos possuem excelente segurana e estabilidade, justificados por este

padro de substituio em orto, que faz com que os dois grupos funcionais ativos fiquem
ligados entre si por uma ligao intramolecular. Alm disso, os eltrons de suas estruturas
esto menos disponveis para interaes com outros componentes ou substratos biolgicos
da pele. Similarmente, numa formulao estes compostos esto menos susceptveis a efeito
dos solventes e seu comportamento em todos os meios (polar e apolar) estvel e
conseqentemente, previsvel.
Da classe dos cinamatos, o benzilcinamato, apesar de no ser mais utilizado hoje

em dia, foi uma das primeiras substncias utilizadas para proteo solar, utilizada em
combinao com o salicilato de benzila. Hoje essa classe, principalmente o pmetoxicinamato de octila, uma das mais utilizadas na proteo da poro UVB do
espectro eletromagntico (SHAATH, 1997).
Na estrutura molecular dos cinamatos h uma insaturao extra, conjugada com o

anel aromtico e o grupamento carbonila que permite um deslocamento eletrnico (Figura
9). A energia capaz de gerar essa transio eletrnica corresponde ao comprimento de onda
nas proximidades de 305nm.
R3
R1
C
R2
C C
R5
R4 O
Figura 9: Esquema da estrutura molecular dos cinamatos.
Os benzofenonas so a nica classe de filtros solar que pertencem categoria das

cetonas aromticas. A deslocalizao por ressonncia, como nas outras classes de
compostos, acrescida pela presena de um grupamento doador de eltrons nas posies
orto e/ou para. O grupamento carbonila participa deste processo sendo o grupamento
eltron receptor (Figura 10).
O
O
C
R ..
O
..
R +
O
Figura 10: Ressonncia de eltrons na estrutura molecular de benzofenonas.
Esses compostos fazem ressonncia mais facilmente, requerendo menor energia

quntica para a transio eletrnica. E, como a energia inversamente proporcional ao
comprimento de onda (E = hc/), os compostos desta classe absorvero a energia com
valores correspondentes de comprimento de onda acima de 320nm (SKOOG & LEARY,
1992).
Os antranilatos so outra classe de compostos que absorvem energia na faixa

ultravioleta do espectro eletromagntico. Estes compostos possuem o efeito orto que
facilita a deslocalizao do eltron, permitindo uma transio de baixa energia, a 336nm
para o metil antranilato (Figura 11) (SHAATH, 1997).
H
N
..
C
H
O
O C10H19
mx 336nm
Figura 11: Ressonncia eletrnica ocorrida no metil antranilato.
Dibenzoilmetanos ou dicetonas substitudas (Figura 12) so uma classe

relativamente nova de filtros UV. Esses compostos exibem propriedades resultantes de
tautomerismo ceto-enlico. Em configurao cetona, a absoro mxima se d em torno de
260nm. Entretanto, na forma enlica se observa valores alm de 345nm, tornando os
compostos bons candidatos a filtros UVA (SHAATH, 1997).
H
R1
C
O
R2
R3
Figura 12: Estrutura molecular dos dibenzoilmetanos.
Os derivados da cnfora so compostos bicclicos que absorvem na faixa da

radiao UVB, de 290 a 300nm. A grande absortividade devida a deslocalizao
eletrnica da ressonncia (Figura 13) (SHAATH, 1997).
R1
R2
Figura 13: Estrutura molecular dos derivados da cnfora utilizados como filtro solar.
H ainda alguns compostos utilizados como filtro solar que no fazem parte das
classes descritas anteriormente, como o cido 2-fenilbenzimidazol-5-sulfnico (Figura 14),
um filtro bastante utilizado no Brasil e em outros pases, como Estados Unidos e pases
europeus (SHAATH, 1997); tambm como os extratos vegetais (GARCIA et al, 1995).
HO3S
N
N
H
Figura 14: Estrutura molecular do cido 2-fenilbenzimidazol-5-sulfnico.
2.4
EFICCIA DOS FILTROS SOLARES E FATOR DE PROTEO SOLAR
A crescente preocupao com os efeitos deletrios da exposio radiao levou ao

desenvolvimento de preparaes tpicas que se utilizam de uma combinao de filtros que
protegem em toda a faixa do ultravioleta. Quando se utiliza uma combinao de filtros
UVA e UVB, permite-se uma proteo de amplo espectro pele e, se os filtros solares
forem tambm fotoestveis, poder-se- permitir uma proteo de longa durao (OZER et
al., 2001; NOHYNEK & SCHAEFER, 2000; MAIER et al, 2001).
Alm de absorver a radiao ultravioleta incidente, um produto para proteo solar

deve ainda ser estvel na pele humana e ao calor, e ser fotoestvel sob a luz do sol para
permitir proteo durante vrias horas, evitando contato com produtos de degradao.
Paralelamente, os filtros solares ainda no devem ser irritantes, sensibilizantes ou
fototxicos. Eles devem recobrir e proteger a superfcie da pele, mas no devem penetr-la,
para que no se tenha uma exposio sistmica a essas substncias. Os filtros solares no
devem ser txicos, j que so absorvidos traos deste atravs da pele ou ingeridos aps a
aplicao nos lbios. Finalmente, um bom protetor solar deve ser resistente gua,
inspido, inodoro e incolor, e deve ser compatvel com formulaes cosmticas (MARTIMESTRES et al, 1997; NOHYNEK & SCHAEFER, 2000; JOHNCOCK, 2000).
A reaplicao do protetor solar na pele tambm um evento que deve ser

considerado. Dependendo da quantidade aplicada e do tempo de reaplicao da formulao
a proteo da pele pode ser alterada (DIFFEY, 2001b). O uso freqente de protetores
solares, principalmente os de amplo espectro que protegem contra as radiaes UVA e
UVB, mostra-se eficaz na preveno de carcinomas. Porm, usurios de filtros solares que
no tomam nenhuma outra medida de preveno aos raios UV, podem aumentar o risco de
melanoma por aumentarem o tempo de exposio ao sol (BERG, 2004).
A determinao do FPS uma tcnica que comprova a eficcia dos filtros solares
para a poro UVB do espectro eletromagntico. Como o UVB o responsvel por causar
eritema na pele, um filtro bastante eficaz aquele que capaz de proteger a pele exposta
contra a queimadura solar. O FPS uma razo entre o tempo de exposio radiao
ultravioleta necessrio para produzir eritema na pele protegida pelo protetor solar e para a
pele desprotegida (Frmula 1) (RUVOLO JNIOR, 1997; AGNCIA NACIONAL DE
VIGILNCIA SANITRIA, 2002).
FPS = .
DME na pele protegida

DME na pele desprotegida
Frmula 1: Fator de Proteo solar
onde DME a dose mnima de

radiao capaz de produzir um
eritema mnimo, expressa em
KJ/min.
A metodologia apropriada para se determinar a eficcia de produtos antisolares

expressa como um nmero de FPS uma questo industrial internacional. H a
necessidade de um meio de comparao pelo consumidor, j que muitos produtos atuam no
mercado do mundo inteiro como concorrentes (JANOUSEK, 1997).
Existem substncias que, embora destitudas de efeito fotoprotetor intrnseco,

determinam o aumento da performance das formulaes contendo filtros solares. Estas
substncias desempenham diversos papis na formulao, como por exemplo, a de agentes
formadores de filmes (filmgenos), capazes de torn-las altamente resistentes lavagem
com gua pois so insolveis em gua, possuindo baixa tenso superficial, conferindo as
propriedades de formador de filme. Os agentes de emolincia tambm podem contribuir
com o aumento da eficcia da formulao fotopotetora por aumentarem sua lipofilicidade,
determinando uma melhor deposio dos filtros solares na pele e conferindo uma maior
resistncia gua (AZZELLINI, 1995). Substncias que previnem reao inflamatria
ocasionada pela radiao UVB tambm so propostas para a melhoria da eficcia dos
protetores solares (COHEN et al, 1994).
No Brasil os protetores solares so considerados cosmticos (AGNCIA

NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2002), diferentemente dos Estados Unidos
da Amrica, onde o FDA (Food and Drug Administration) considera esses produtos como
OTC (over the counter, uma denominao utilizada para medicamentos de venda livre)
desde 25 de agosto de 1978, quando publicou no Federal Register um aviso antecipado de
proposta de regulamentao (ANPR) quando utilizados em seres humanos (RUVOLO
JNIOR, 1997), j que so considerados como produtos para preveno de efeitos agudos
(como o eritema solar) e crnicos (como o cncer de pele) causados pela radiao
solar.(FDA, 1999).
2.4.1 Mtodos para determinao do FPS
Para a determinao do FPS de formulaes, existem basicamente trs tipos de

metodologias preconizadas: a do FDA, utilizada nos EUA; a da COLIPA, utilizada nos
pases Europeus; e a da SAA, norma australiana utilizada na Austrlia e Nova Zelndia
(RUVOLO JNIOR, 1997). Estes mtodos se utilizam de indivduos para determinar o
FPS e por isso so contestados por alguns autores.
A determinao do FPS de formulaes feita por mtodos in vivo, utilizando 20

indivduos sadios, sendo homens e mulheres com sensibilidade mediana ao UV. Numa
parte das costas de cada indivduo (0,3m x 0,3m), aplica-se o produto (150
15mg/100cm2) em 4 cm2, deixando tambm uma parte descoberta (superfcie teste),
separada por uma fita de 1cm de largura. Irradia-se com lmpada UV de 300w vinte
minutos aps a aplicao do produto. Observa-se o tempo de formao do eritema e
obtm-se o FPS aps a realizao dos clculos (JANOUSEK, 1997). O padro utilizado
pelo FDA uma formulao contendo 8% de salicilato de homomentila, que confere um
FPS de 4,47 a esta formulao e, para o COLIPA a frmula padro contm 2,7% de pmetoxicinamato de octila (FPS 3,7 0,3).
2.4.1.1
Metodologias de determinao do FPS segundo a ANVISA:

(AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2002)
Este rgo no desenvolve nenhuma metodologia especfica, mas determina que

sejam utilizadas estritamente a metodologia de determinao do fator de proteo solar
indicada pelo FDA, de maio de 1993, ou a norma COLIPA, de outubro de 1994.
Assim como para o FPS, no foi desenvolvida nenhuma metodologia para a

determinao de resistente a gua ou muito resistente a gua, mas sim uma
orientao para se seguir a metodologia do FDA.
Para a quantificao da proteo UVA, no se tem nenhuma recomendao

estabelecida, mas uma determinao de que qualquer metodologia pode ser seguida se
estiver devidamente validada (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA,
2002).
Rotulagem
Estabeleceu-se que seria obrigatrio a indicao do nmero de proteo solar
precedido pela sigla FPS ou SPF ou das palavras Fator de Proteo Solar. Alm
disso, no verso da embalagem estabeleceu-se conter expresses orientativas como as do
quadro 1 (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2002):
Quadro 1: Expresses orientativas para rotulagem de protetores solares.

Baixa:
Pele pouco sensvel
(FPS: 2 < 6)
Moderada:
queimaduras solares
Pele sensvel
(FPS: 6 < 12)

Alta:
Oferece baixa proteo contra
Oferece moderada proteo contra

queimaduras solares
Pele muito sensvel
(FPS: 12 < 20)
Oferece alta proteo contra

queimaduras solares
Muito Alta:
Pele extremamente
Oferece muito alta proteo contra
(FPS: 20)
sensvel
queimaduras solares
(adaptado de AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2002)
Alm dessa orientao, outras foram determinadas a conter no rtulo de produtos

fotoprotetores, como: necessria a reaplicao do produto para manter sua
efetividade, ajuda a prevenir as queimaduras solares, para crianas menores de
(6) seis meses, consultar um mdico, este produto no oferece nenhuma proteo
contra insolao, evitar exposio prolongada das crianas ao sol, aplique
generosamente ou livremente antes da exposio ao sol e sempre que necessrio,

incluindo tempo, determinado pelo fabricante, caso seja requerido perodo de espera para
exercer a ao ou proteo.
Para produtos que adequadamente comprovem a resistncia a gua, esta informao

deve estar contida no rtulo tambm. Alm disso, deve conter informaes sobre o tempo
mximo para a reaplicao (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA,
2002).
2.4.1.2
Metodologias in vitro de determinao do FPS
Tambm esto descritos na literatura cientfica mtodos in vitro (MANSUR et al.,

1986; DIFFEY, 1997; SPRINGSTEEN et al, 1999) que tm como vantagem a segurana
de no ser preciso a utilizao de voluntrios humanos para a determinao do FPS.
empregada a espectrofotometria na regio do UV para a avaliao das formulaes.
O mtodo desenvolvido por Mansur e colaboradores (MANSUR et al., 1986)

demonstrou ser eficaz e rpido, alm de apresentarem uma boa correlao com os
resultados in vivo, j tendo sido utilizado em outros trabalhos (BARTH, 2000; SANTOS et
al, 1999; GARCIA et al., 1990). Mede-se a absorbncia de uma soluo da formulao em
vrios comprimentos de onda (290, 295, 300, 305, 310, 315 e 320nm) e aplica-os na
frmula 2 apresentada a seguir:
FPS = FC .
320
. EE () . 2 . I () . Abs ()
290
Frmula 2: Clculo do FPS segundo Mansur (MANSUR, 1986).

FC = fator de correo (igual a 10)
EE () = efeito eritematognico da radiao de comprimento de onda .
() = intensidade da luz solar no comprimento de onda .
Abs () = leitura espectrofotomtrica da absorbncia da soluo da preparao no
comprimento de onda ().
Quadro 2: Relao entre o efeito eritematognico e a intensidade da radiao em cada

comprimento de onda: (MANSUR, 1986)
(nm)
EE () x I ()
290
295
300
305
310
315
320
0,0150
0,0817
0,2874
0,3278
0,1864
0,0839
0,0180
1,0000
O mtodo desenvolvido por Diffey (DIFFEY, 1997) calcula o FPS utilizando um

espectrofotmetro de reflectncia. A principal vantagem deste mtodo poder determinar
o FPS de formulaes contendo bloqueadores solares (filtros solares fsicos, como o
dixido de titnio, por exemplo).
FILTROS SOLARES COMERCIAIS
Na tabela 1 esto relacionadas as nomenclaturas, os nomes comerciais e algumas

das propriedades desses filtros solares, como a faixa de comprimentos de onda no(s) qual
(quais) absorve e o comprimento de onda de maior absoro de cada substncia, adaptado
de ENCICLOPDIA, 1995.
Tabela 1: Filtros solares e algumas de suas propriedades.
Filtro Solar
Sinnimos
Nomes Comerciais
Absoro
UV
mximo
(nm)*
Uvinul M-40
Benzofenona-3
Oxibenzona
Eusolex 4360
UVA
Neo-Heliopan BB
UVB
288/325
Escalol 567
Butil metxi
dibenzoil metano
3-(4-metil
benzilideno)
cnfora
Octocrileno
Octil Dimetil
PABA
Avobenzona
3-(4-metil benzilideno)
cnfora
2-ciano-3,3-difenilacrilato de 2 etil-hexila
Padimato O;
p-aminobenzoato de
octil-dimetila
Parsol 1789
Eusolex 9020
UVA
358
UVB
300
UVB
303
UVB
311
Eusolex 6300
Parsol 5000
Neo Heliopan MBC
Neo Heliopan 303
Uvinul N-539
Escalol 597
Eusolex 6007
Escalol 507
Escalol 557
p-metoxicinamato
p-metoxicinamato de
Parsol MCX
UVA
de octila
2-etil-hexila
Neo-Heliopan AV
UVB
311
Uvinul MC-80
Salicilato de Octila
Salicilato de 2-etilhexila
Uvinul O-18
Neo Heliopan OS
UVB
307
Escalol 587
* em etanol.
Cosmetics & Toiletries (Edio em Portugus), vol.7, p.47-58, 1995.
2.5
DETERMINAO DO TEOR DE FILTROS SOLARES
Para determinar a quantidade de uma substncia numa formulao ou para se

determinar o teor de uma matria prima, deve-se fazer seu ensaio de teor que a
determinao quantitativa da substncia presente numa amostra, isto , sua quantificao.
A quantificao por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) tem sido

adotada para diversas anlises por ser uma metodologia bastante verstil e prtica pois
pode ser totalmente automatizada. Ela tem a capacidade de realizar separaes e anlises
quantitativas de uma grande quantidade de compostos presentes em diversos tipos de
amostras, em escala de tempo de poucos minutos, com alta resoluo, eficincia e
sensibilidade (GUIMARES et al., 1997). Alm disso, existem ensaios descritos por
CLAE com a separao e determinao de filtros solares (VANQUERP et al., 1999;
IKEDA et al., 1989; GAGLIARDI et al., 1989; RASTOGI et al., 1998; SALVADOR et
al., 2003; CHISVERT & SALVADOR, 2002; DINUNZIO & GADDE, 1990; SCALIA,
2000; SMYRNIOTAKIS & ARCHONTAKI, 2003).
Propriedades como massa molecular, solubilidade, estrutura e pKa devem ser

consideradas ao se escolher a melhor condio cromatogrfica para a separao dos
componentes de uma determinada amostra. (GUIMARES, 1997)
Em relao fase mvel, esta deve ser de alto grau de pureza ou de fcil
purificao, dissolver a amostra sem decompor seus componentes, no decompor ou
dissolver a fase estacionria, ter baixa viscosidade, ser compatvel com o tipo de detetor
utilizado, ter polaridade adequada para permitir uma separao conveniente dos
componentes da amostra (GUIMARES, 1997).
H cinco tipos diferentes de CLAE: por adsoro, por partio, com fase ligada
(podendo ser fase normal ou fase reversa), por excluso, e por troca inica. Essa diferena
determinada pelo tipo de fase estacionria utilizada. A cromatografia por adsorso se
baseia na competio que existe entre as molculas da amostra e as da fase mvel em
ocupar os stios ativos na superfcie da fase estacionria. A cromatografia por partio,
tambm chamada de lquido-lquido, utiliza uma fase estacionria de gua em slica e a

fase mvel orgnica. Seu mecanismo de separao baseia-se nas diferentes solubilidades
dos componentes da amostra na fase mvel e na fase estacionria. Os componentes mais
solveis na fase estacionria sero seletivamente retidos, enquanto os menos solveis sero
transportados mais rapidamente pela fase mvel (GUIMARES, 1997).
A cromatografia lquida com fase ligada tambm baseia-se no mecanismo de

partio como a anterior, s que possui a fase estacionria quimicamente ligada ao suporte,
o que a torna mais estvel. Variando-se a natureza dos grupos funcionais ligados ao
suporte da coluna, pode-se obter diferentes tipos de seletividade, que podem ter natureza
polar (fase normal) ou apolar (fase reversa).
A cromatografia por excluso efetua a separao de acordo com o tamanho das

molculas. O tamanho dos poros da coluna controlado a fim de que se tenha as molculas
pequenas (de baixo peso molecular) percorrendo um trajeto maior e apresentando um
maior tempo de reteno, e as molculas maiores no penetram em todos os poros e so
eludas mais rapidamente.
A cromatografia por troca inica possui uma resina com uma molcula inica
ligada. esta, ligam-se contra-ons que so molculas de carga oposta. Estes, por sua vez,
podem ser deslocados pelos ons da fase mvel de carga similar a ele. Ocorre, ento, um
equilbrio entre a ligao nos stios da fase estacionria com o contra-on e com o on da
amostra (GUIMARES, 1997).
2.6
VALIDAO DE MTODOS ANALTICOS
A validao o ato documentado que atesta que qualquer procedimento, processo,

equipamento, material, operao ou sistema realmente conduza aos resultados verdadeiros
(AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2001). A validao de um
mtodo analtico objetiva a produo de resultados com Confiabilidade Analtica estando,
o laboratrio e o mtodo escolhido ou desenvolvido, voltados para tal (LEITE, 2002).
O ICH (International Conference on Harmonization) uma organizao que define

parmetros para a harmonizao das tcnicas de validao de metodologias
internacionalmente (ERMER, 2001).
Desde 1999, atravs da resoluo 391 de 9 de agosto de 1999, j era dada a devida
importncia validao por normatizar, disciplinar e regulamentar critrios para registro
de medicamentos genricos no Ministrio da Sade, qualificando a validao de mtodos
analticos como um dos pr-requisitos para o registro (AGNCIA NACIONAL DE
VIGILNCIA SANITRIA, 1999). Desde ento, foram emitidas e revogadas vrias
legislaes complementando e aprofundando as anteriores. A legislao em vigor a
resoluo RE no. 899 de 29 de maio de 2003 na qual se estabelece a definio dos
parmetros para a validao de Mtodos Analticos e Bioanalticos (AGNCIA
NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003).
A validao deve garantir, por meio de estudos experimentais, que o mtodo atenda
s exigncias das aplicaes analticas, assegurando a confiabilidade dos resultados. Para
tanto, deve apresentar especificidade, linearidade, intervalo, preciso, sensibilidade (ou
limite de deteco), limite de quantificao, exatido, adequados anlise (SHABIR,
2003; AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003). Essas
caractersticas da validao que so geralmente exigidas variam de acordo com a finalidade
do teste, que esto classificadas no quadro 3.
Quadro 3: Classificao dos testes, segundo sua finalidade (AGNCIA NACIONAL DE

Categoria
I
II
III
IV
Finalidade do teste
Testes quantitativos para a determinao do princpio ativo em produtos
farmacuticos ou matrias-primas
Testes quantitativos ou ensaio limite para a determinao de impurezas e
produtos de degradao em produtos farmacuticos e matrias-primas
Testes de performance (dissoluo, liberao do ativo)
Testes de identificao
O quadro 4 demonstra os ensaios necessrios para a validao segundo sua

categoria.
Quadro 4: Caractersticas de Validao recomendadas dos vrios tipos de testes.

Categoria
I
Parmetro
Especificidade
Linearidade
Intervalo
Repetibilidade
Preciso
Intermediria
Limite de Deteco
Limite de Quantificao
Exatido
Robustez
Sim
Sim
Sim
Sim
**
No
No
Sim
Sim
Categoria II
QuantiEnsaio
tativo
Limite
Sim
Sim
Sim
No
Sim
*
Sim
No
**
No
No
Sim
Sim
No
Sim
*
Sim
Sim
Categoria Categoria
III
IV
*
*
*
Sim
**
*
*
*
No
Sim
No
No
No
No
No
No
No
No
* Pode ser necessrio dependendo da natureza do teste especfico.

** Se houver comprovao da reprodutibilidade no necessria a comprovao da
Preciso Intermediria.
Adaptado de AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003.
Deve-se utilizar substncias de referncia oficializadas pela Farmacopia Brasileira

ou, na ausncia destas, por outros cdigos autorizados pela legislao vigente. No caso da
inexistncia dessas substncias, admitido o uso de padres de trabalho, desde que a
identidade e o teor sejam devidamente comprovados (SHABIR, 2003; AGNCIA
A validao para mtodos cromatogrficos de ensaio de teor, como para a

determinao de teor de filtros solares em formulaes comerciais, enquadra-se na
categoria I da Resoluo RE no 899 de 29 de maio de 2003 (AGNCIA NACIONAL DE
VIGILNCIA SANITRIA, 2003), havendo a necessidade da comprovao de
especificidade, linearidade, intervalo de confiana, preciso (repetibilidade), exatido e
robustez. As definies destes parmetros so:
2.6.1 Especificidade
A Especificidade de um mtodo analtico a capacidade de determinar com

exatido somente a substncia de interesse na presena de outros componentes tais como:
impurezas, produtos de degradao e outros componentes da matriz.
Para anlise quantitativa (teor), a especificidade pode ser determinada pela

comparao dos resultados obtidos de amostras (frmaco ou medicamento) contaminadas
com quantidades apropriadas de impurezas ou excipientes e amostras no contaminadas,
para demonstrar que o teste no afetado por estes materiais. Quando a impureza ou
padro do produto no estiverem disponveis, pode-se comparar os resultados dos testes
das amostras contendo impurezas ou produtos de degradao com os resultados de um
segundo procedimento bem caracterizado (por exemplo metodologia farmacopica ou
outro procedimento validado). Estas comparaes devem incluir amostras armazenadas sob
condies de estresse (por ex. luz, calor, umidade, hidrlise cida/bsica, oxidao)
(AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003; SHABIR, 2003).
Para mtodos cromatogrficos, deve-se tomar precaues necessrias para garantir

a pureza dos picos cromatogrficos. A utilizao de testes de pureza de pico (por exemplo,
com auxlio de detetor de arranjo de fotodiodos ou espectrometria de massas) so
interessantes para demonstrar que o pico cromatogrfico atribudo a um s componente
(AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003).
2.6.2 Linearidade
A busca da linearidade de um mtodo analtico est em obter resultados diretamente

proporcionais s concentraes da substncia em estudo (LEITE, 1998). Ela est
diretamente relacionada com o sistema analtico. Teoricamente a linearidade determina a
regio da curva resposta ou de quantificao onde h relao direta sinal/concentrao
(LEITE, 2002). No caso da determinao quantitativa do analito em matrias-primas ou em
formas farmacuticas, estas concentraes devem estar compreendidas entre 80 e 120% da
concentrao terica do teste (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA,
2003).
O coeficiente de correlao (r) expressa a relao de x a y na curva, onde os valores

ideais esperados so 1 e -1, ou seja, quanto mais prximo da unidade, maior a relao,
maior a probabilidade de existir uma relao linear definida. Caso os valores tendam a
zero, no h relao linear (LEITE, 2002).
Para determinao da linearidade, o ensaio realizado utilizando-se no mnimo

cinco concentraes conhecidas do padro (em triplicata) e, essas concentraes devem
estar abrangidas no intervalo especificado pelo mtodo. Com esses dados, constri-se uma
curva de calibrao com as concentraes da substncia versus a resposta gerada no ensaio,
isto , uma regresso linear simples para analisar a relao funcional entre duas variveis.
(LEITE, 1998). Pela equao da reta (y = a x + b) pode-se determinar a concentrao de
um determinado analito utilizando-se a expresso: Ca = (y - b) / a; onde Ca a
concentrao do analito (varivel independente na curva); b o coeficiente linear da reta; y
o sinal analtico (varivel dependente na curva); e a o coeficiente angular da reta.
A aceitabilidade da linearidade ser julgada por:
1. Coeficiente de correlao (r), que expressa o quo prximo a uma reta perfeita est
a relao de x e y na curva;
2. Intercepto, que traduz uma medida de tendncia do mtodo (um erro sistemtico).
(LEITE, 1998)
A aceitao do coeficiente de correlao deve ser um critrio obtido pelo grupo de

confiabilidade, assim como o nmero de decimais a ser utilizado (LEITE, 2002). Pela
nossa legislao, o critrio mnimo aceitvel do coeficiente de correlao (r) deve ser
prximo a unidade (0,99 ou mais). (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA
SANITRIA, 2003).
2.6.3 Intervalo de confiana
O intervalo de confiana a faixa entre os limites de quantificao inferior e

superior de um mtodo analtico. Normalmente derivado do produto da linearidade e
dependente da aplicao pretendida do mtodo. estabelecido pela confirmao que o
mtodo apresenta preciso, exatido e linearidade adequados quando aplicados a amostras
contendo quantidades de substncias dentro do intervalo especificado. No caso de
determinao quantitativa do analito em matrias-primas ou em formas farmacuticas, o
intervalo de anlise deve ser entre 80 e 120% da concentrao terica do teste (AGNCIA
NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003; SHABIR, 2003).
2.6.4 Preciso
Preciso a concordncia entre os vrios valores experimentais obtidos, quanto

mais prximos entre si estiverem, ou seja, maior ser a preciso quanto menor for a
amplitude das medidas (A) (LEITE, 2002). A preciso deve ser considerada em trs nveis
(AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003):
a) Repetibilidade: a mxima diferena aceitvel entre duas repeties (dois resultados

independentes, do mesmo ensaio e no mesmo laboratrio, sob as mesmas condies)
(LEITE, 2002; AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003). Por
considerar a mesma condio, tambm chamada de preciso intra-corrida.
A repetibilidade do mtodo verificada por, no mnimo, 9 (nove) determinaes,

contemplando o intervalo linear do mtodo, ou seja, 3 (trs) concentraes, baixa, mdia e
alta, com 3 (trs) rplicas cada ou mnimo de 6 determinaes a 100% da concentrao
teste (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003, SHABIR, 2003).
b) Preciso intermediria: concordncia entre os resultados do mesmo laboratrio, mas

obtidos em dias diferentes, por analistas diferentes e/ou equipamentos diferentes
(AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003). denominada,
tambm, por preciso inter-corridas.
Para a determinao da preciso intermediria recomenda-se um mnimo de 2 dias

diferentes com analistas diferentes (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA
SANITRIA, 2003).
c) Reprodutibilidade: a concordncia entre resultados obtidos em diferentes laboratrios

como em estudos colaborativos, geralmente aplicados padronizao de metodologia
analtica, por exemplo, para incluso de metodologia em farmacopias. a preciso
inter-laboratorial (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003). A
reprodutibilidade pode ser conceituada tambm, para uma amostra, quando esta
analisada por instrumentos diferentes, obtendo-se desvio aceitvel e compatvel. De
forma geral a reprodutibilidade pode ser obtida a partir de: (LEITE, 2002)
4 amostras diferentes do mesmo ponto amostral;
4 diferentes analistas;
4 diferentes equipamentos;
4 diferentes momentos;
4 diferentes tcnicas;
4 diferentes calibraes;
4 diferentes ajustes.
A preciso de um mtodo analtico normalmente expressa como a estimativa do

desvio padro ou do desvio padro relativo (frmula 3) de uma srie de medidas e deve
incluir os estudos da mdia, do desvio padro, desvio padro relativo e intervalo de

confiana.
DPR =
DP
x 100
CMD
Frmula 3: Desvio padro relativo (DPR), onde DP o desvio padro e CMD, a

concentrao mdia determinada.
No admite-se valores superiores a 5%, segundo a Resoluo RE no 899 de 29 de

maio de 2003 (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003).
2.6.5 Exatido
A exatido de um mtodo analtico a proximidade dos resultados obtidos em

estudo em relao ao valor verdadeiro (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA
SANITRIA, 2003).
A exatido calculada como porcentagem de recuperao da quantidade conhecida

do analito adicionado amostra, ou como a diferena percentual entre as mdias e o valor
verdadeiro aceito, acrescida dos intervalos de confiana (AGNCIA NACIONAL DE
A exatido do mtodo deve ser determinada aps o estabelecimento da linearidade,

do intervalo linear e da especificidade do mesmo, sendo verificada a partir de, no mnimo,
9 (nove) determinaes contemplando o intervalo linear do procedimento, ou seja, 3 (trs)
concentraes, baixa, mdia e alta, com 3 (trs) rplicas cada. A exatido de um mtodo
analtico normalmente expressa como o desvio percentual das concentraes calculadas
em relao s concentraes reais (frmula 4) (KARTAL, 2001; AGNCIA NACIONAL
DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003, SHABIR, 2003).
Exatido = CME
CT
x 100
Frmula 4: Exatido de um mtodo analtico; onde CME a concentrao mdia

experimental e CT a concentrao terica.
2.6.6 Robustez
A robustez do mtodo a avaliao da variao da resposta do mtodo ao se

provocar pequenas alteraes do procedimento. Indica sua confiana durante o uso normal.
Se o grau de reprodutibilidade for alto, o mtodo ser determinado resistente e robusto.
Para cromatografia lquida, os principais parmetros que esto preconizados na a
Resoluo RE no 899 de 29 de maio de 2003 e que podem resultar em variao na resposta
do mtodo so os seguintes: variao do pH da fase mvel; variao da composio da fase
mvel; diferentes lotes ou fabricantes de colunas; temperatura; fluxo da fase mvel.
(AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003).
Objetivos
30
Objetivos
3.1
OBJETIVO GERAL
Comparar formulaes fotoprotetoras comerciais quanto composio dos filtros

solares e valores de FPS.
3.2
OBJETIVOS ESPECFICOS
Realizar uma pr-avaliao da separao dos filtros solares por cromatografia em

camada delgada (CCD).
Desenvolver um mtodo de avaliao do teor de filtro solar por CLAE

(Cromatografia Lquida de Alta Eficincia) para formulaes comerciais que seja
especfico, preciso, exato e reprodutvel.
Validar a metodologia desenvolvida.
Avaliar formulaes de amplo espectro, contendo um ou mais filtros solares em sua

composio.
Comparar as concentraes de filtros solares encontrados nas anlises com as

especificaes do rtulo.
Determinar o FPS in vitro de formulaes comerciais utilizando o mtodo de

Mansur.
Verificar se as formulaes comerciais obedecem resoluo RDC n.161 de 11 de

setembro de 2001 (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA,
2001), que trata dos filtros ultravioletas permitidos para produtos de higiene
pessoal, cosmticos e perfumes, limitando a concentrao mxima de cada
substncia nas formulaes.
Materiais e Mtodos
31
Materiais e Mtodos
4.1 MATERIAIS
4.1.1 Equipamentos
Balana analtica METTLER TOLEDO AG204;
Balana de preciso METTLER TOLEDO PB3002;
Cromatgrafo lquido de alta eficincia SHIMADZU bomba modelo LC-10AD VP,

auto injetor modelo SIL-10AD VP, detetor de arranjo de fotodiodos modelo SPDM10A VP e sistema de dados (software) modelo CLASS-VP verso 6.1;
Espectrofotmetro SHIMADZU UV 2401PC;
Potencimetro DIGIMED DME CV4;
Ultrapurificador de gua ELGA Elgastat maxim ultra pure water;
Cuba cromatogrfica de vidro, dimenses internas 20 x 20 x 8 cm;
Placas cromatogrficas de fase reversa RP-18 F254S 5 x 20cm;
Agitador mecnico Fisatom, modelo 713D, potncia 70-130W com p tipo turbina;
4.1.2 Reagentes
CH3CN (acetonitrila) para CLAE (marca Tedia) e grau P.A. (marca Vetec);
CH3OH (metanol) para CLAE (marca Tedia) e grau P.A. (marca Vetec);
THF para CLAE (marca Tedia) e grau P.A. (marca Vetec);
Etanol para CLAE (marca Tedia) e grau P.A. (marca Vetec);
Isopropanol grau P.A. (marca Vetec);
Chembase (marca Emelfar).
4.1.3. Padres de filtros solares
Como no h disponvel substncias qumicas de referncia (padres primrios) dos

filtros solares pela Farmacopia Brasileira nem por qualquer outra, utilizou-se como
Materiais e Mtodos
32
padres matrias primas com teor de pureza declarado, cedida pela empresa Spectrum
Qumica Ltda.
Todos os filtros UV utilizados neste trabalho so permitidos ao uso em cosmticos,
perfumes e produtos de higiene pessoal, de acordo com a resoluo RDC no 161, de 11 de
setembro de 2001.
Benzofenona-3: 102,7%
Octil dimetil PABA: 99,1%
p-metoxicinamato de octila 98,5%
Salicilato de octila: 102,4%
Octocrileno: 99,2%
Avobenzona: 98,2%
4.1.4 Produtos analisados
Foram analisadas diferentes formulaes contendo os seguintes filtros solares:
benzofenona-3 (BZ3) (figura 15),
octil dimetil PABA (ODP) (figura 16),
p-metoxicinamato de octila (MCO) (figura 17),
salicilato de octila (SO) (figura 18),
octocrileno (OCT) (figura 19) e
butil metoxi dibenzoil metano (avobenzona) (AVO) (figura 20).
HO
C
O
OCH3
Figura 15: Estrutura molecular do filtro solar benzofenona-3.

(CH3)2N
CH3
O
CH3
O
Figura 16: Estrutura molecular do octil dimetil PABA.
Materiais e Mtodos
H3CO
33
CH3
O
CH3
O
Figura 17: Estrutura molecular do filtro solar para-metoxicinamato de octila.
OH
CH3
CH3
O
Figura 18: Estrutura molecular do filtro solar salicilato de octila.
CH3
CH3
NC
O
Figura 19: Estrutura molecular do filtro solar octocrileno.

O
(H3C)3C
OCH3
Figura 20: Estrutura molecular do filtro solar butil metoxidibenzoil metano (ou
avobenzona).
As formulaes selecionadas para serem analisadas foram loes cremosas

encontradas no comrcio ou em farmcias com manipulao e suas composies, FPS e
origem esto descritas na tabela 2.
Materiais e Mtodos
Tabela 2: Formulaes analisadas:

Formulao
Composio
FPS
Origem
BZ3 5%
OCT 10%
AVO 4%
SO 5%
30
Indstria de cosmticos e produtos

dermatolgicos
AVO 3%
OCT 10%
15
Laboratrio farmacutico
BZ3 2,5%
MCO 7,5%
15
BZ3 1%
MCO 2%
BZ3 2%
MCO 7%
BZ3 4%
MCO 7,5%
15
BZ3 0,5%
MCO 4%
MCO 6,95%
Farmcia com manipulao
ODP 1,99%
MCO 6,95%
BZ3 2,96%
15
ODP 4,94%
MCO 6,95%
BZ3 2,96%
25
ODP 6,92%
MCO 6,95%
BZ3 2,96%
30
34
Materiais e Mtodos
35
4.2 MTODOS
4.2.1 Avaliao da separao cromatogrfica:

Pode ser descrita como um sistema de avaliao das amostras a serem analisadas e
do equipamento, partes eletrnicas e operaes analticas como um todo. Em
cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) pode ser verificada atravs do desvio
padro relativo das reas obtidas por vrias injees do padro, calculando a
reprodutibilidade das injees e a resoluo (seletividade ), fator de capacidade (k),
resoluo (R) e fator de cauda ou simetria do pico (T).
Para avaliar a separao da mistura de filtros solares pela CLAE, ser utilizada uma
mistura dos padres dos filtros solares para a construo da curva de calibrao. Para esta
mistura sero testados alguns solventes como fases mveis e cinco concentraes de cada
composto para o clculo da equao de calibrao e os coeficientes de correlao (r). O
objetivo conseguir a melhor separao dos componentes (k adequado), a melhor
resoluo (R), observando-se os tempos de reteno de cada componente e a presso
resultante no sistema.
Como uma avaliao prvia da separao cromatogrfica, considerando que muitas

das substncias avaliadas possuam estruturas semelhantes e, por isso, caractersticas
fsico-qumicas semelhantes, foi utilizada a tcnica da cromatografia em camada delgada
utilizando-se placas de fase reversa (C18), isto , apolar, para simular as condies de
afinidade que ocorre na CLAE por fase reversa.
Para o ensaio de CCD, colocou-se na cuba cromatogrfica a fase mvel e um papel

de filtro com dimenses de 19 x 19 cm, esperando por aproximadamente 30 minutos antes
de se proceder o ensaio, para que o ambiente interno ficasse saturado com a fase mvel.
Nas placas cromatogrficas de fase reversa, marcou-se a 1,0 cm do incio da placa uma
linha a lpis na qual ia ser aplicada a soluo amostra e tambm, 15cm acima desta
primeira linha, marcou-se uma linha final. Aplicou-se, na linha inicial, 10 L de uma
soluo a 1% de cada substncia (filtro solar) em acetonitrila, assim como uma soluo
Materiais e Mtodos
36
contendo mais de um filtro solar para avaliar a separao da mistura e o fator de reteno
(Rf).
A placa era acondicionada na cuba cromatogrfica e l permanecia at que a frente
da fase mvel atingisse a segunda linha marcada, a 15cm de distncia. As manchas (spots)
das substncias eram analisadas numa cmara com lmpada UV com comprimentos de
onda de 365 e 354 nm
Calculou-se o Rf (fator de reteno) pela frmula 5 descrita a seguir (BAUER et al,

1991).
Frmula 5: Clculo do fator de reteno.

Rf =
Distncia (zona inicial zona da substncia)

Distncia (zona inicial frente do solvente)
Rf = b/a
Esquema 1: Representao da determinao do valor do fator de reteno.
Materiais e Mtodos
4.2.2
37
Anlise do teor de filtros solares
Utilizando-se um cromatgrafo lquido de alta eficincia com detetor de arranjos de

fotodiodos (CLAE-DAD), quantificou-se os filtros solares das formulaes baseado na
determinao prvia da curva padro e formulao preparada para a validao.
Como foram analisadas formulaes de composio muito heterognea, tiveram

que ser desenvolvidos dois mtodos: mtodo I e mtodo II, cujos parmetros utilizados
esto descritos na tabela 3 e mostrados no esquema 2.
Tabela 3: Condies cromatogrficas.

Fase estacionria:
Coluna de fase reversa Shimpack 4.6 x 150 mm CLC-ODS

(Shimadzu) octadecil silano, granulao de 5 m
Fases mveis:
Dependendo da composio da formulao, foram utilizadas

duas fases mveis:
CH3CN : H2O pH=2,70 por H3PO4 (93:07) MTODO I
THF : H2O (60:40) MTODO II
Vazo:
1,0 mL/min
Injeo de amostra:
20 L
de quantificao:
304, 330 e 352 nm
Temperatura do forno
30 oC
de coluna:
Tempo de corrida
7 min
Materiais e Mtodos
38
Simadzu
SIL-10AD VP
Solvente 1
Solvente 2
Autoinjetor
Misturador
Prcoluna
TEMPERATURA DO
FORNO DE
COLUNA:
30OC
Coluna
cromatogrfica
Desgaseificador
Bomba de alta presso

Detetor
UV-Vis
fotodiodos
COLUNA:
Simadzu
Shimpack
4,6 x
150mm
CLC-ODS
Esquema 2: Esquema do equipamento utilizado.
4.2.2.1
Preparo da soluo padro:
As solues dos padres foram preparadas diluindo-se as substncias que possuam

o teor declarado na fase mvel. Para isso, foram utilizados solventes grau P.A., bales
volumtricos e pipetas volumtricas. Essas solues foram utilizadas para construir as
curvas padres para a validao e quantificao dos mtodos. As concentraes finais das
solues esto na tabela 4.
Materiais e Mtodos
39
Tabela 4: Concentrao dos padres das curvas de calibrao:

CURVA 1
Filtros solares
Concentrao
(g/mL)
BZ3
AVO
OCT
25,0; 37,5; 50,0; 20; 30; 40; 50; 60 50; 75; 100; 125;
62,5; 75,0
SO
25; 37,5; 50;
150
62,5; 75
CURVA 2
Filtros solares
Concentrao (g/mL)
BZ3
MCO
2,5; 10; 20; 35; 50
10; 30; 50; 75; 150
CURVA 3
Filtros solares
Concentrao (g/mL)
4.2.2.2
BZ3
MCO
ODP
10; 20; 30; 40; 50
35; 52,5; 70; 87,5; 105
10; 30; 50; 70; 90
Construo da curva padro
A soluo de padro foi feita em triplicata e cada diluio foi injetada 2 vezes no
cromatgrafo. A mdia das reas resultantes das injees 1 e 2 constituiu um ponto na
curva. A curva padro, ento, era construda por 15 pontos (triplicata de 5 concentraes)
para a verificao da linearidade.
4.2.2.3
Preparo da soluo da amostra:
O preparo das solues das amostras a serem quantificadas se deu de acordo com o
esquema 3. Esse procedimento foi seguido tanto para as formulaes comerciais analisadas
quanto para as formulaes do ensaio de recuperao de substncia ativa preparada para a
validao dos mtodos.
Materiais e Mtodos
1.
0,5000g da
formulao
2.
10 mL de
etanol p.a.
40
Agitao com ultrassom

por 12 minutos
BV 50,0 mL
Completar o volume final de

50,0 mL com a fase mvel
Alquota de 1,0 mL
BV 10,0 mL
Completar o volume final

de 10,0 mL com a fase
mvel
Esquema 3: Preparo da soluo das amostras.
4.2.2.4
Quantificao da amostra:
A soluo da amostra foi feita em triplicata e cada uma injetada 2 vezes no

cromatgrafo. A quantificao foi feita em cada injeo e o desvio padro e o desvio
padro relativo foram calculados com 6 (seis) resultados.
Para a conseqente validao do mtodo analtico desenvolvido para a

determinao do teor de filtros solares em formulao fotoprotetoras, sero calculados os
parmetros segundo a Resoluo RE no 899, de 29 de maio de 2003 (AGNCIA
Materiais e Mtodos
41
Como foram analisadas formulaes de composio muito heterognea, e por isso,

desenvolvidos dois mtodos de quantificao, tiveram que ser feitas 2 (duas) validaes:
validao para o mtodo I e validao para o mtodo II. Para a validao do mtodo I,
utilizou-se dois tipos de formulao para o ensaio de recuperao.
4.2.3.1 Formulaes para a validao dos mtodos:
As formulaes para o ensaio de recuperao foram feitas com 80, 100 e 120% da
concentrao dos filtros solares das amostras. Para analisar as formulaes A e B (pelo
mtodo I), o teste de recuperao foi feito com as formulaes descritas na tabela 8.
Tabela 5: Formulaes 1.1, 1.2 e 1.3 para validao do mtodo I:

Formulao 1.1
Formulao 1.2
Formulao 1.3
(80%)
(100%)
(120%)
1. BZ3
4,0 %
5,0 %
6,0 %
2. AVO
3,2 %
4,0 %
4,8 %
3. SO
4,0 %
5,0 %
6,0 %
4. OCT
8,0 %
10,0 %
12,0 %
4%
4%
4%
6. Phenova
0,5 %
0,5 %
0,5 %
7. Germal 115
0,2 %
0,2 %
0,2 %
8. BHT
0,10 %
0,10 %
0,10 %
qsp 100g
qsp 100g
qsp 100g
Ingredientes
5. Chembase
9. gua destilada
Chembase uma base auto-emulsionante, constituinte da fase oleosa da

formulao; Phenova uma mistura de parabenos (metil, etil, propil e butil parabenos),
compostos com atividade antifngica e bactericida (gram-positivos e gram-negativos) para
a preservao da formulao; Germal 115 uma soluo de imidazolinidil uria (ou
imiduria) (figura 21) que atua na conservao de cosmticos e formulaes tpicas
dermatolgicas, possuindo ainda, efeito sinrgico com os parabenos; BHT (butil hidrxi-
Materiais e Mtodos
42
tolueno) (figura 22) um composto fenlico com atividade antioxidante utilizado em

cosmticos, medicamentos e alimentos (WADE & WELLER, 1994).
H
O C
H
C
NH
CH2
O
O
NH
O C
N
H
C
H
H
N
C O
N CH2OH
.H2O
N CH2OH
H3C
CH3
OH
H3C
CH3
CH3
CH3
C O
CH3
Figura 21: Estrutura da imiduria
Figura 22: Estrutura do BHT
Os ingredientes 1, 2, 3, 4 , 5, 6 e 8 (fase oleosa da emulso) foram aquecidos em

recipiente de inox a 70oC, separadamente, dos componentes 7 e 9 (fase aquosa) que foram
aquecidos a 75oC, em outro recipiente de inox. Ao atingir essa temperatura, as duas fases
foram misturadas sob agitao mecnica a 1170 100 rpm, usando p tipo turbina para
uma melhor homogeneidade no tamanho das micelas da emulso.
Para validar o mtodo de quantificao das formulaes C, D, E, F, G e

H, foram utilizadas as formulaes 2.1 (equivalente a 80% da concentrao mais baixa),
2.2 (equivalente a mdia das concentraes da substncia nas formulaes amostras), e 2.3
(equivalente a 120% da concentrao mais alta), descritas na tabela 9. O modo de preparo
destas formulaes foi semelhante ao descrito para as formulaes anteriores. A principal
diferena foi a composio da fase oleosa devido menor quantidade e variedade dos
filtros solares.
Materiais e Mtodos
43
Tabela 6: Formulaes 2.1, 2.2 e 2.3 para validao do mtodo I:

Formulao 2.1
Formulao 2.2
Formulao 2.3
(80%)
(100%)
(120%)
1. BZ3
0,4 %
2,25 %
4,8 %
2. MCO
1,6 %
4,75 %
9,0 %
3. Chembase
4%
4%
4%
4. Phenova
0,5 %
0,5 %
0,5 %
5. Germal 115
0,2 %
0,2 %
0,2 %
6. BHT
0,10 %
0,10 %
0,10 %
7. gua destilada
qsp 100g
qsp 100g
qsp 100g
Ingredientes
Para validar o mtodo de quantificao das formulaes I, J e L, foram

utilizadas as formulaes 3.1 (equivalente a 80% da concentrao mais baixa), 3.2
(equivalente a mdia das concentraes da substncia nas formulaes amostras), e 3.3
(equivalente a 120% da concentrao mais alta), descritas na tabela 10. O modo de preparo
destas formulaes foi semelhante s formulaes anteriores, variando apenas na
composio dos filtros solares contidos.
Tabela 7: Formulaes 3.1, 3.2 e 3.3 para validao do mtodo II:

Formulao 3.1
Formulao 3.2
Formulao 3.3
(80%)
(100%)
(120%)
1. BZ3
2,4 %
3,0 %
3,6 %
2. MCO
5,6 %
7,0 %
8,4 %
3. ODP
1,6 %
5,0 %
8,4 %
4%
4%
4%
5. Phenova
0,5 %
0,5 %
0,5 %
6. Germal 115
0,2 %
0,2 %
0,2 %
7. BHT
0,10 %
0,10 %
0,10 %
qsp 100g
qsp 100g
qsp 100g
Ingredientes
4. Chembase
8. gua destilada
Materiais e Mtodos
44
4.2.4 Determinao do Fator de Proteo Solar (FPS)

Para a determinao do FPS de cada produto, foi utilizado o mtodo in vitro
espectrofotomtrico desenvolvido por Mansur (MANSUR, 1986) e utilizado por outros
autores (GARCIA & SANTOS, 1990; BARTH, 2000). Mede-se a absorbncia de uma
soluo da formulao feita em triplicata e preparada de acordo com o tem 4.2.4.1, em
vrios comprimentos de onda (descritos no tem 4.2.4.2) para depois calcular o FPS
correspondente atravs da frmula 2 e utilizando os valores da tabela 2.
4.2.4.1 Preparo da soluo:
Pesar exatamente cerca de 0,500g da amostra e transferir quantitativamente para

balo volumtrico de 100,0 mL, contendo cerca de 30 mL de etanol p.a; solubilizar e
completar o volume com o mesmo solvente. Tomar uma alquota de 1,0mL e transferir
para balo volumtrico de 25,0 mL. Completar o volume com o etanol p.a. e
homogeneizar. A concentrao final ser de 0,2 mg/mL, que a concentrao padronizada
para o clculo do FPS.
4.2.4.2 Anlise no espectrofotmetro:
A anlise foi feita em triplicata e as absorbncias das solues das amostras foram
medidas no espectrofotmetro aps o ajuste da abertura da fenda de 2,0 nm, com intervalo
de leitura de 1nm. O etanol p.a. foi utilizado como lquido de referncia e o espectro
registrado foi entre 220 a 450 nm. O FPS mdio foi calculado pela frmula 2 (Clculo do
FPS segundo Mansur).
FPS = FC .
320
. EE () . 2 . I () . Abs ()
290
Frmula 2: Clculo do FPS segundo Mansur (MANSUR, 1986).
Materiais e Mtodos
45
Onde, FC = fator de correo (igual a 10); EE () = efeito eritematognico da

radiao de comprimento de onda ; () = intensidade da luz solar no comprimento de
onda ; Abs () = leitura espectrofotomtrica da absorbncia da soluo da preparao no
comprimento de onda ().
Quadro 2: Relao entre o efeito eritematognico e a intensidade da radiao em cada
comprimento de onda: (MANSUR, 1986)
(nm)
EE () x I ()
290
295
300
305
310
315
320
0,0150
0,0817
0,2874
0,3278
0,1864
0,0839
0,0180
1,0000
Resultados e Discusso
5.1
AVALIAO DA SEPARAO CROMATOGRFICA POR CCD
As fases mveis testadas foram constitudas de diferentes misturas de gua,

acetonitrila (CH3CN), metanol (CH3OH), etanol (C2H5OH), tetraidrofurano (THF).
Utilizou-se tambm modificadores de fase mvel como o cido actico, um cido fraco, e o
cido fosfrico, um cido forte.
Baseada no trabalho de Barth (BARTH, 2000), uma fase mvel constituda de gua
e acetonitrila, em diferentes propores, foi a inicialmente testada.
Buscando-se uma fase mvel para a separao de BZ3 (figura 15), 3-4BC (figura
17), MCO (figura 18) e OCT (figura 20), testou-se CH3CN:H2O em diversas propores.
Em propores de solvente orgnico menor que 75%, no se consegue separar OCT
de MCO. Uma boa separao atingida com uma mistura de 80:20 CH3CN:H2O. Com esta
ltima mistura de solventes e adicionando-se outros filtros, como ODP (figura 16) e SO
(figura 19), no conseguimos uma boa separao desses novos filtros com o MCO. Devido
semelhana estrutural (vide figuras 16, 18 e 19, respectivamente), a separao dos filtros
ODP, MCO e SO, corresponde maior dificuldade de separao cromatogrfica.
Baseando-se no trabalho de DINUNZIO & GADDE (DINUNZIO & GADDE, 1990),
conseguiu-se esta separao com a seguinte fase mvel: THF : H2O (70:30). O THF
mostra-se mais seletivo para estas substncias, que apresentaram Rf's de 0,406 para BZ3;
0,320 para ODP; 0,293 para MCO e 0,273 para SO.
Para uma mistura de BZ3, OCT, AVO (figura17) e SO, esses trs ltimos filtros
solares tambm no geram boa separao na fase mvel de 80:20 CH3CN:H2O (Rf's de
0,480 para BZ3; 0,207 para OCT; 0,147 para AVO; e 0,147 para SO). Ento, foram
testadas outras fases mveis:
46
EtOH: H2O : AAG (70:29,5:0,5),
MeOH : H2O (80:20),
CH3CN : H2O : AAG (70:29:1),
CH3CN : H2O : AAG (80:19:1),
CH3CN : H2O : AAG (85:14,5:0,5),
CH3CN : H2O : AAG (70:20:10),
THF : H2O (70:30),
CH3CN : H2O pH 2,70 com H3PO4 (80:20) e
CH3CN : H2O pH 2,70 com H3PO4 (90:10).

Este ltimo resultou em boa separao dos constituintes, com Rf's de 0,627 para
BZ3; 0,420 para OCT; 0,333 para AVO; e 0,300 para SO. A fase mvel THF : H2O
(70:30) tambm resulta em separao dos constituintes. O esquema 4 mostra a avaliao da
separao cromatogrfica por CCD.
47
(60:40) e (70:30)
CH3CN : H2O
(75:25) e (80:20)
(80:20)
CH3CN : H2O : AAG

(70:29:1), (80:19:1) e (70:20:10)
EtOH : H2O : AAG

(70,0:29,5:0,5)
(85,0:14,5:0,5)
CH3CN : H2O (H3PO4 pH 2,7)

(90:10)
THF : H2O
(65:35) e (70:30)
Esquema 4: Comportamento da separao e Rf dos filtro solares em CCD.
48
5.2
PARMETROS CROMATOGRFICOS
Foram desenvolvidos dois mtodos cromatogrficos (conforme dito anteriormente)

para se avaliar o teor de filtros solares em formulaes comerciais: o primeiro mtodo
desenvolvido utilizando-se acetonitrila como o solvente orgnico da fase mvel para ser
utilizado quando a amostra no for constituda pela mistura dos filtros p-metoxicinamato
de octila com salicilato de octila e octil dimetil PABA concomitantemente, e um segundo
mtodo que utiliza THF e gua na fase mvel, para ser utilizado quando a amostra tiver a
mistura de p-metoxicinamato de octila e octil dimetil PABA. Das fases mveis testadas,
somente a fase mvel constituda de THF e gua capaz de separar uma mistura desses
filtros solares.
O cromatograma dos filtros solares benzofenona-3, avobenzona, salicilato de octila

e octocrileno est no apndice 9.7; o cromatograma dos filtros solares benzofenona-3 e pmetoxicinamato de octila est no apndice 9.8; e o cromatograma dos filtros solares
benzofenona-3, octil dimetil PABA e p-metoxicinamato de octila est no apndice 9.9.
As condies cromatogrficas referentes a essas separaes esto relacionados na

tabela 11.
Tabela 8: Condies cromatogrficas:

MTODO 1:
1.06
1.33
OCT
2.23
2.35
4.50
1.13
AVO
1.15
2.70
1.20
1.25
SO
1.28
3.42
2.35
1.25
BZ3
1.01
1.33
MCO
2.75
2.77
2.75
1.25
Filtros
Ordem de
Solares
eluio
BZ3
49
MTODO 2:
1.65
1.75
ODP
1.88
3.11
3.30
1.29
MCO
1.21
3.76
1.42
1.19
Filtros
Ordem de
Solares
eluio
BZ3
Frmulas, de acordo com USP 27 (UNITED STATES PHARMACOPEIA, 2004):

= (t2 t0) / (t1-ta)
onde, t2 e t1 so os tempos de reteno das substncias, e t0

o tempo de reteno de uma substncia no retida na coluna.
k = (t / t0) 1
onde, t o tempo de reteno da substncia e t0 o tempo de

reteno de uma substncia no retida.
R = 2 (t2 t1) / (W1 + W2)
onde t2 e t1 so os tempos de reteno das substncias em

anlise, e W1 e W2 so a largura da base dos picos.
T = W0,05 / 2f
onde W0,05 a largura da base a 5% da altura do pico e f a

metade frontal do pico, demonstrado esquematicamente na
figura 23.
Frente do
Pico
.
Cauda do pico
Figura 23: Pico cromatogrfico assimtrico (UNITED STATES PHARMACOPEIA,

2004).
50
5.3
DETERMINAO DO TEOR DE FILTRO SOLAR
5.3.1 Comprimentos de onda de quantificao
Os comprimentos de onda nos quais se fez a quantificao de cada composto esto

relacionados na tabela 12. Esses comprimentos de onda foram selecionados de acordo com
a absoro de cada composto. Os anexos 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7 mostram os grficos em 3D dos
compostos.
Tabela 9: Comprimentos de onda de quantificao:

Filtro solar
de quantificao
AVO
BZ3
OCT
SO
MCO
3,4BC
ODP
352
330
304
304
304
304
304
5.3.2 Curva de calibrao
A construo da curva de calibrao para BZ3 (grfico 1), AVO (grfico 2), OCT
(grfico 3) e SO (grfico 4) foi feita com 5 (cinco) concentraes, em triplicata, de cada
um dos filtros solares, e a seguir, construiu-se uma curva padro final com esses
resultados.
curva padro BZ3
CURVA PADRO AVO

8000000
7000000
3500000
3000000
2500000
2000000
1500000
1000000
500000
0
6000000
5000000
r = 0.9995
y = 42172x - 15181
20
40
60
80
100
Grfico 1: Curva padro da benzofenona-3.
4000000
3000000
r = 0.9984
2000000
y = 124973x - 140208
1000000
0
0
20
40
60
80
Grfico 2: Curva padro da avobenzona.
51
52
curva padro SO
CURVA PADRO OCT

1600000
7000000
1400000
6000000
5000000
1200000
1000000
4000000
3000000
r = 0.9990
800000
600000
r= 0.9992
2000000
1000000
y = 18772x + 8573.8
400000
y = 37595x + 60927
200000
50
100
150
Grfico 3: Curva padro do octocrileno.
200
20
40
60
80
Grfico 4: Curva padro do salicilato de octila
Com a curva padro da benzofenona-3 obteve-se coeficiente de correlao de

0,9995, demonstrando sua linearidade. Com a curva padro da avobenzona, o coeficiente
de correlao foi de 0,9984, demonstrando tambm sua linearidade. A mesma linearidade
foi conseguida para o octocrileno, com coeficiente de correlao de 0,9992; e, para o
salicilato de octila, a linearidade foi demonstrada com um coeficiente de correlao de
0,9990.
Para a validao, foram feitas 3 formulaes contendo os filtros solares para o

ensaio de recuperao como preconiza a resoluo RE 899/03. Para a validao do mtodo
I foram confeccionadas seis (6) formulaes, denominadas de 1.1, 1.2, 1.3, 2.1,
2.2 e 2.3 e, para a validao do mtodo II, trs formulaes tiveram que ser
produzidas: 3.1, 3.2 e 3.3. De cada uma dessas formulaes, retirou-se 3 alquotas e
procedeu-se o ensaio de quantificao por CLAE. Na tabela 13 descreve-se a quantidade
de cada substncia adicionada e a quantidade recuperada em massa e porcentagem, com os
respectivos desvios-padro e, em seguida, mostram-se os cromatogramas de cada
formulao (grficos 5 a 13).
100
Tabela 10: Formulaes para recuperao.

Adicionado na
Formulao
formulao (g%)
Recuperado
Recuperado
(g%)
(teor - %)
BZ3
4,01
4,10 0,05
102,2
AVO
3,36
3,45 0,05
102,7
SO
4,01
4,05 0,05
101,1
OCT
8,07
7,80 0,10
96,7
BZ3
6,01
6,12 0,04
100,4
AVO
4,39
4,53 0,03
103,2
SO
6,04
6,01 0,05
99,5
OCT
11,59
11,86 0,08
100,9
BZ3
6,01
6,18 0,12
102,5
AVO
5,04
5,18 0,10
102,6
SO
6,01
6,12 0,12
101,7
OCT
12,00
11,81 0,24
98,1
BZ3
0,37
0,36 0,09
99,2
MCO
1,37
1,39 0,37
101,5
BZ3
2,52
2,55 0,60
101.1
MCO
5,06
5,12 0,13
101.3
BZ3
5,24
5,43 0,13
103,7
MCO
9,85
9,74 0,24
99,0
BZ3
2,59
2,70 0,08
104,2
MCO
5,57
5,58 0,07
100,2
ODP
1,61
1.64 0,02
101,6
BZ3
3,00
3,13 0,05
104,3
MCO
7,11
7,24 0,09
101,8
ODP
1,99
2,05 0,02
103,1
BZ3
3,60
3,71 0,19
103,14
MCO
8,40
8,30 0,11
99,0
ODP
2,43
2,45 0,03
100,78
1.1
1.2
1.3
2.1
2.2
2.3
3.1
3.2
3.3
53
Cromatogramas das formulaes utilizadas para ensaios de recuperao:
2
1
Grfico 5: Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 1.1. O pico nmero 1

corresponde ao filtro solar BZ3, o 2, OCT, o 3, AVO e o 4, SO.
2
1
3
4
Grfico 6: Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 1.2. Da mesma forma

que o grfico 5, o pico nmero 1 corresponde ao filtro solar BZ3, o 2, ao OCT, o 3, AVO e
o 4, ao SO.
2
1
3
4

corresponde ao filtro solar BZ3, o 2, OCT, o 3, AVO e o 4, SO.
54
2
1
Grfico 8: Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 2.1. O pico de nmero 1

corresponde ao filtro solar BZ3 e o pico 2, ao MCO.
2
1
Grfico 9: Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 2.2. Da mesma forma

que o grfico 8, o pico de nmero 1 corresponde ao filtro solar BZ3 e o pico 2, ao MCO.

corresponde ao BZ3 e o pico 2, ao MCO.
55
Grfico 11: Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 3.1. O pico de nmero

1 deste grfico corresponde ao filtro solar BZ3; o pico 2, ao ODP; e o pico 3, ao MCO.
Grfico 12: Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 3.2. O pico de nmero

1 deste grfico, da mesma forma que o grfico 11, corresponde ao filtro solar BZ3; o pico
2, ao ODP; e o pico 3, ao MCO.
3
1

corresponde ao filtro solar BZ3; o pico 2, ao ODP; e o pico 3, ao MCO.
56
5.3.4 Formulaes comerciais
Os resultados da quantificao das formulaes A e B analisadas pelo mtodo I

esto relacionados na tabela 14. Esta tabela mostra o teor em relao ao declarado no
rtulo dos produtos, alm do desvio-padro (DP) e desvio padro relativo (DPR).
Tabela 11: Resultados das formulaes A e B.
BZ3
AVO
OCT
SO
teor
101,47%
103,82%
99,91%
107,72%
DP
1,18
1,07
1,31
1,29
DPR
1,16%
1,03%
1,31%
1,19%
97,71 %
103,80%
1,19
1,24
1,22%
1,19%
Formulao
teor
B
DP
DPR
No contm
No contm
Um desvio padro relativo menor que 2% considerado bom, enquanto valores

acima de 5% indicam problemas com erros aleatrios (HASWELL, 1992). A legislao
brasileira (Resoluo RE no 899 de 29 de maio de 2003) no admite-se valores superiores a
5% (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA, 2003). Ento, DPR abaixo
de 5% aceitvel.
Os resultados da quantificao das formulaes C, D, E, F, G e H,
tambm analisadas pelo mtodo I esto relacionados na tabela 15.
57
Tabela 12: Resultados das formulaes C, D, E, F, G e H.

BZ3
MCO
teor
108,86%
103,45%
DP
1,60
1,42
DPR
1,50%
1,37%
teor
101,95%
91,29%
DP
2,09
2,26
DPR
2,05%
2,47%
teor
103,71%
101,60%
DP
1,05
0,81
DPR
1,01%
0,79%
teor
100,44%
96,69%
DP
1,19
1,28
DPR
1,18%
1,32%
teor
92,62%
96,65%
DP
1,28
0,70
DPR
1,38%
0,72%
teor
107,96%
DP
1,19
DPR
1,11%
Formulao
No contm
Os resultados da quantificao das formulaes I, J e L analisadas pelo

mtodo II esto relacionados na tabela 16.
58
Tabela 13: Resultados das formulaes I, J e L.

BZ3
MCO
ODP
teor
108,23%
102,53%
109,52%
DP
2,54
2,44
2,61
DPR
2,34%
2,38%
2,38%
teor
115,78%
112,84%
112,64%
DP
2,10
2,21
2,22
DPR
1,81%
1,96%
1,97%
teor
109,32%
102,27%
104,49%
DP
0,32
0,12
0,10
DPR
0,30%
0,11%
0,09%
Formulao
59
5.4
DETERMINAO DO FPS DAS FORMULAES
O FPS rotulado e o FPS encontrado das formulaes estudadas pela metodologia in

vitro utilizada neste trabalho esto relacionados na tabela 17.
Tabela 14: FPS das formulaes analisadas.

FPS
FPS
Formulao
rotulado
Encontrado
30
34 0,66
15
8,6 0,54
15
15,0 0,61
4,4 0,23
14,4 0,46
15
16,1 0,18
7,1 0,42
11,6 0,67
15
18,8 0,65
25
23,5 0,19
30
25,5 0,74
Observando a grande diferena encontrada do FPS rotulado com o determinado

experimentalmente por este trabalho nas formulaes B, E, G, H, I, foi feito um
clculo terico do FPS resultante baseado no trabalho de BARTH et al, 1999 para indicar
se o mtodo in vitro utilizado estaria muito impreciso ou se eram as formulaes que
60
estavam com quantidades incoerentes do filtro solar para o FPS declarado. O clculo
feito somando-se a contribuio ao FPS de cada componente da formulao. As tabelas do
trabalho citado com os clculos realizados esto no anexo 9.10. Pode-se observar que a
concentrao de cada formulao daria FPS diferentes dos declarados, e prximos ao
encontrado experimentalmente neste trabalho (tabela 18).
Tabela 15: Clculo terico do FPS das formulaes B, E, G, H e I.

FPS
FPS encontrado
FPS calculado*
Formulao
rotulado
experimentalmente
15
8,6 0,54
7,0
14,4 0,46
11,9
7,1 0,42
6,4
11,6 0,67
10,3
15
18,8 0,65
16,3
30
25,5 0,74
24,4
*segundo BARTH et al, 1999.
61
Concluses 62
Concluses
A separao por cromatografia em camada delgada (CCD) mostrou-se eficaz como
indicao da separao dos filtros estudados, pois observou-se que o comportamento das
substncias era o mesmo na CCD e na cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE).
Realizando CCD ao invs de CLAE nesta etapa do estudo, economiza-se solventes, pois
so utilizados em menor quantidade, alm destes serem mais baratos (grau de pureza
menor). Alm disso, a tcnica da CCD mais simples, de preparao mais rpida, e de
interpretao imediata.
Foram desenvolvidos dois mtodos para a quantificao dos filtros solares por
CLAE. A maior diferena entre eles a composio da fase mvel, a qual possui
acetonitrila ou THF como solvente orgnico.
Os mtodos desenvolvidos mostraram-se especficos, precisos, exatos e

reprodutveis. Ambos os mtodos foram validados de acordo com a Resoluo 899/2003
do Ministrio da Sade / Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (MS/ANVISA).
Estes mtodos foram eficazes para a determinao de teor de filtros solares em

formulaes comerciais, podendo-se analisar formulaes de diferentes procedncias e
composies, tendo o cuidado de selecionar o mtodo que melhor separa a mistura
especfica da formulao.
As formulaes A, B, C, D, E, G, H, I e L mostraram resultados de teor filtro solar

entre 90 e 100% do declarado no rtulo. No existem especificaes de faixa de teor
recomendada para essas formulaes cosmticas. A faixa que foi utilizada e est sendo
proposta de 90 a 110% (para as formulaes).
A formulao J apresentou resultados superiores faixa de aprovao considerada

neste trabalho. A concentrao ficou entre 112 e 116% do declarado. Esta formulao foi
produzida numa farmcia com manipulao que ser notificada.
Concluses 63
O FPS das formulaes foi determinado. Em seis (6) produtos, o FPS encontrado
experimentalmente mostrou-se acima do rotulado. Estes dados foram confirmados quando
utilizou-se o clculo terico do FPS que mostrou a mesma diferena. Isso demonstra que o
FPS rotulado deve ser revisto.
O resultado do FPS da formulao J que obteve concentraes de filtros solares

entre 112 e 116% do rotulado foi satisfatrio (FPS 24).
Todas as formulaes estudadas apresentaram-se em conformidade com a resoluo

RDC n.161 de 11 de setembro de 2001, no estando com quantidades de filtros
ultravioleta acima do que se permite.
Perspectivas futuras
Perspectivas Futuras
A continuidade deste trabalho ser dada da seguinte forma:
na tentativa de estabelecer uma metodologia que abranja um maior nmero de filtros

solares. Tentar-se- utilizar pelo menos 7 (sete) filtros qumicos diferentes durante a
validao, para que se possa analisar composies mais heterogneas.
na anlise de maior nmero de produtos comerciais escolhidos aleatoriamente para se
conseguir uma estatstica que demonstre a qualidade dos produtos no comrcio.
no desenvolvimento e implantao de uma metodologia in vitro de determinao do
FPS de formulaes que contenham tambm filtros solares fsicos (chamados de
bloqueadores solares), j que uma grande quantidade de formulaes comerciais
possuem este tipo de substncia em sua composio. Esta metodologia ser por
espectrofotometria de reflectncia.
64
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72
Apndice
Apndice
73
Apndice
9.1
GRFICO 3D BENZOFENONA-3 (BZ3)
74
Apndice
9.2
GRFICO 3D AVOBENZONA (AVO)
75
Apndice
9.3
GRFICO 3D OCTOCRILENO (OCT)
76
Apndice
9.4
GRFICO 3D SALICILATO DE OCTILA (SO)
77
Apndice
9.5
GRFICO 3D p-METOXICINAMATO DE OCTILA (MCO)
78
Apndice
9.6
GRFICO 3D OCTIL DIMETIL PABA (ODP)
79
Apndice
9.7
80
CROMATOGRAMAS DA MISTURA DOS FILTROS SOLARES BZ3, AVO, OCT E SO

PELO MTODO I
CROMATOGRAMA EM 330 nm (quantificao da benzofenona-3)
Apndice
CROMATOGRAMA EM 304 nm (quantificao do octocrileno e salicilato de octila)
CROMATOGRAMA EM 352 nm (quantificao da avobenzona)
81
Apndice
9.8
82
CROMATOGRAMAS DA MISTURA DOS FILTROS SOLARES BZ3 E MCO PELO

MTODO I
CROMATOGRAMA EM 304 nm (quantificao do p-metoxicinamato de octila)
Apndice
9.9
83
CROMATOGRAMAS DA MISTURA DOS FILTROS SOLARES BZ3, ODP E MCO PELO

MTODO II
CROMATOGRAMA EM 304 nm (quantificao do octil dimetil PABA e p-metoxicinamato

de octila)
Apndice
9.10
CLCULO TERICO DO FPS DE FORMULAES
TABELA DE CONCENTRAO X FPS (baseadas em BARTH et al, 1999):
Filtro solar
Concentrao
MCO
4%
7%
2%
7%
0,5%
2%
3%
10%
ODP
BZ3
OCT
Contribuio ao FPS
(para emulses)
6,0
10,3
3,6
11,7
0,4
1,6
2,4
7,0
CLCULO DO FPS TERICO DAS FORMULAES B, E, G, H, I E L:
Formulao
Composio
FPS
Declarada
Declarado
Clculo terico do FPS
AVO 3%
OCT 10%
15
7,0 (referente ao OCT)*
BZ3 2%
OMC 7%
1,6 + 10,3 = 11,9
BZ3 0,5%
OMC 4%
0,4 + 6,0 = 6,4
MCO 6,95%
10,3
ODP 1,99%
MCO 6,95%
BZ3 2,96%
15
3,6 + 10,3 + 2,4 = 16,3
ODP 6,92%
MCO 6,95%
BZ3 2,96%
30
11,7 + 10,3 + 2,4 = 24,4
*Observao: No trabalho de Barth (BARTH et al, 1999), no foi avaliado o FPS do filtro
solar butil metxi dibenzoil metano (avobenzona) pois trata-se de um composto que
84
Apndice
absorve a energia na faixa do UVA (vide apndice 9.2) e, para o clculo do FPS,
considera-se apenas a faixa UVB. Isto ocorre tambm com os testes oficiais (mtodos in
vivo) que avaliam o FPS irradiando-se as costas de voluntrios com lmpadas que emitem
radiaes na faixa do UVB. No existe ainda uma metodologia oficial para anlise da
eficcia na regio do UVA para a ANVISA e FDA, a recomendao apenas que se avalie
esta proteo com uma metodologia validada (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA
SANITRIA, 2001).
85
Anexos
10
Anexos
TRABALHOS EM CONGRESSOS
86

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO

DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DA METODOLOGIA

RENATA PIETSCH RIBEIRO

RENATA PIETSCH RIBEIRO

Dissertao de Mestrado apresentada ao Programa de

Universidade Federal do Rio de Janeiro, como parte

Orientador: Prof. Adjunto Dra. Sheila Garcia

DESENVOLVIMENTO E VALIDAO DA METODOLOGIA DE

Renata Pietsch Ribeiro

Dissertao submetida ao programa de ps graduao em Cincias Farmacuticas

- rika Rosa Maria Kedor

- Ndia Maria Volpato

- Antnio Jorge Ribeiro da Silva

Ribeiro, Renata Pietsch

1. Filtros solares. 2. CLAE. 3. Validao. 4. FPS in vitro. 5. Formulaes cosmticas.

Aos meus pais, Nelson e Teresa,

Abstract da Dissertao de Mestrado submetida ao Programa de Ps-graduao em

Keywords: sunscreens, validation, HPLC, SPF in vitro, quality control, commercial

LISTA DE SIGLAS E ABREVIAES

UV/Vis: radiaes ultravioleta e visvel

Esquema 2: Esquema do equipamento utilizado

Esquema 3: Preparo da soluo das amostras

Esquema 4: Comportamento e Rf dos filtro solares em CCD

Curva padro da benzofenona-3

Curva padro da avobenzona

Curva padro do octocrileno

Curva padro do salicilato de octila

Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 1.1

Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 1.2

Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 1.3

Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 2.1

Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 2.2

Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 2.3

Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 3.1

Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 3.2

Cromatograma do ensaio de recuperao da formulao 3.3

Radiao Solar No-Ionizante

Espectro da Radiao Ultravioleta

Estrutura molecular do cido urocnico

Estrutura da pele humana

Estrutura do cido p-aminobenzico (PABA).

Ressonncia de eltrons no PABA

Estrutura geral de salicilatos

Estrutura geral dos parabenos

Esquema da estrutura molecular dos cinamatos

Figura 10: Ressonncia de eltrons na estrutura molecular de benzofenonas

Figura 11: Ressonncia eletrnica ocorrida no metil antranilato

Figura 12: Estrutura molecular dos dibenzoilmetanos

Figura 14: Estrutura molecular do cido 2-fenilbenzimidazol-5-sulfnico

Figura 15: Estrutura molecular do filtro solar benzofenona-3

Figura 16: Estrutura molecular do octil dimetil PABA

Figura 17: Estrutura molecular do filtro solar para-metoxicinamato de octila

Figura 18: Estrutura molecular do filtro solar salicilato de octila

Figura 19: Estrutura molecular do filtro solar octocrileno

Figura 20: Estrutura molecular do butil metoxidibenzoil metano (ou avobenzona)

Figura 21: Estrutura da imiduria

Figura 22: Estrutura do BHT

Figura 23: Pico cromatogrfico assimtrico

Filtros solares e algumas de suas propriedades

Concentrao dos padres das curvas de calibrao

Formulaes 1.1, 1.2 e 1.3 para validao do mtodo I

Formulaes 2.1, 2.2 e 2.3 para validao do mtodo I

Formulaes 3.1, 3.2 e 3.3 para validao do mtodo II

Comprimentos de onda de quantificao