Resultados

Separacin de aminocidos de jugos de frutos por cromatografa bidimensional

en capa fina
Tabla.1. Clculos de los Rf de la cromatoplaca de los aminocidos por Fase 1 y
por Fase II.
Clculos de los Rf de la cromatoplaca de
A.A. por Fase I

Clculos de los Rf de la cromatoplaca de

A.A. por Fase II

Rf =

2.1
=0.2625Glut mico
8

Rf =

3.1
=0.3924 Glut mico
7.9

Rf =

1.5
=0.1898 Prolina
7.9

Rf =

2.8
=0.35 Prolina
8

Rf =

0.5
=0.0625 Histidina
8

Rf =

0.1
=0.012 Histidina
8.1

Rf =

2.2
=0.2682 Al anina
8.2

Rf =

3.5
0.448 Alanina
7.8

Rf =

0.3
=0.0370 Lisina
8.1

Rf =

0.1
=0.0125 Lisina
8

Rf =

4.5
=0.5696 Tript fano
7.9

Rf =

2.3
=0.2839 Tript fano
8.1

Rf =

2.2
=0.2682Valina
8.2

Rf =

4.9
=0.6282
7.8

Rf =

0.5
=0.0617 Arginina
8.1

Rf =

0.1
=0.012 Arginina
8

Rf =

4.2
=0.525 Tirosina
8

Rf =

2.8
=0.35 Metionina
8

4
Rf = =0.5Tirosina
8
Rf =

3.6
=0.4556 Metionina
7.9

Tabla.2. Clculos de los Rf de la cromatoplaca bidimensional de los

aminocidos.
Clculos de los Rf de la
cromatoplaca
bidimensional de A.A. por
Fase I

Clculos de los Rf de la
cromatoplaca
bidimensional de A.A. por
Fase II

Rf =

0.9
=0.1139
7.9

Rf =

0.8
=0.0941
8.5

Rf =

4.3
=0.5443
7.9

Rf =

2.3
=0.2674
8.6

Rf =

3.8
=0.4810
7.9

Rf =

2.7
=0.3139
8.6

Rf =

1.1
=0.1392
7.9

Rf =

2.1
=0.2470
8.5

Rf =

5.5
=0.6962
7.9

Rf =

3.5
=0.4022
8.7

Rf =

1.2
=0.1518
7.9

Rf =

3.3
=0.3882
8.5

Rf =

2.6
=0.3291
7.9

Rf =

4.6
=0.5348
8.6

Rf =

1.2
=0.1518
7.9

Rf =

4.7
=0.5529
8.5

Rf =

1.2
=0.1518
7.9

Rf =

5.2
=0.6117
8.5

Tabla.3.Clculos de los Rf de las cromatoplacas unidimensionales de

las Frutas por Fase I.
F
F

Rf

Rf 1=

2.8
2.1
1.5
0.2
=0.354
Rf 2=
=0.265
Rf 3= =0.189 Rf 4= =0.025
7.9
7.9
7.9
7.9

Rf 1=

5.5
2.7
=0.696
Rf 2=
=0.341
7.9
7.9

Rf 1=

4.5
2.7
1.7
0.1
=0.562
Rf 2=
=0.337
Rf 3=
=0.212 Rf 4= =0.012
8
8
8
8

Rf 1=

3.8
2.8
1.8
0.1
=0.475
Rf 2=
=0.35Rf 3= =0.225 Rf 4= =0.012
8
8
8
8

Rf 1=

2.7
1.9
0.1
=0.337
Rf 2=
=0.237
Rf 3= =0.012
8
8
8

Rf 1=

2.7
1.7
=0.337
Rf 2=
=0.212
8
8

Rf 1=

4.9
3
2.3
1.7
=0.604
Rf 2=
=0.370
Rf 3= =0.283 Rf 4= =0.209
8.1
8.1
8.1
8.1

Tabla .4. Clculos de los Rf de las cromatoplacas unidimensionales de

las Frutas por Fase II.
F
F

Rf

Rf 1=

3.9
0.513
7.6

Rf 1=

6.4
0.1
=0.842 Rf 2=
=0.013
7.6
7.6

Rf 1=

7.3
5.4
=0.960 Rf 2=
=0.710
7.6
7.6

Rf 5=

1.9
=0.25
7.6

Rf =

5.6
=0.756
7.4

Rf =

0.1
=0.013
7.4

Rf =

Rf 2=

Rf 6=

2.6
=0.342
7.6

Rf 3=

1.9
=0.25
7.6

Rf 4=

0.1
=0.013
7.6

Rf 3=

3.8
=0.5
7.6

Rf 4=

2.6
=0.342
7.6

0.1
=0.013
7.6

Rf =

3.9
=0.527
7.4

Rf =

2.6
=0.351
7.4

Rf =

2
=0.272
7.4

6.4
=0.853
7.5

Rf =

0.1
=0.013
7.5

Rf =

5
=0.666
7.5

Rf =

4
=0.533
7.5

Rf =

2.6
=0.346
7.5

Rf =

1.7
=0.226
7.5

Rf =

0.1
=0.013
7.5

Rf =

6.5
=0.866
7.5

Rf =

2.5
=0.333
7.5

Rf =

1.7
=0.226
7.5

Rf =

0.5
=0.066
7.5

Rf =

0.1
=0.013
7.5

Tabla .5. Clculos de los Rf de la cromatoplaca bidimensional de la

fruta problema (pera).
Fase I

Frente del disolvente

Frente del soluto

Rf

7.5

2.7

0.36 Lys

7.6

2.2

0.2894 Glu/Ala

7.6

0.1

0.0131----

7.5

1.5

0.2 Glu

0.9

0.1 ----

7.3

0.811 ---

7.8

0.866 ----

Fase II

Los aminocidos que se pudieron identificar en el jugo de la pera

fueron : lisina, alanina y cido glutmico.
Tabla 6. Clculos de los Rf de la cromatoplaca bidimensional de la
fruta naranja.
Fase I

Frente del disolvente

Frente del soluto

Rf

8.4

2.8

0.333

8.1

3.1

0.3827 Lys

8.3

2.6

0.3132

8.3

2.1

0.2530

0.3

0.033

1.6

0.177 Lys

8.9

7.9

0.8876

8.9

8.1

0.9101

Fase II

El aminocido que se identific en el jugo de naranja fue la lisina con

el Rf de 0.3827 y 0.177, los dems no se pudieron identificar.
a) Determinar los valores de Rf de cada aminocido en los
cromatogramas unidimensionales y enlistarlos en orden creciente de
Rf en la primera fase mvil como se indica en la tabla 1.
Tabla 7. Cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2
fases mviles.

1 Fase mvil

2 Fase mvil

A.A.

Frente del
Disolvente

Frente del
Soluto

Rf

Frente del
Disolvente

Frente del
Soluto

Rf

Glutmico

2.1

0.2625

7.9

3.1

0.3924

Prolina

7.9

1.5

0.1898

2.8

0.35

Histidina

0.5

0.0625

8.1

0.1

0.012

Alanina

8.2

2.2

0.2682

7.8

3.5

0.448

Lisina

8.1

0.3

0.0370

0.1

0.0125

Triptfano

7.9

4.5

0.5696

8.1

2.3

0.2839

Valina

8.2

2.2

0.2682

7.8

4.9

0.6282

Arginina

8.1

0.5

0.0617

0.1

0.012

Tirosina

0.5

4.2

0.525

Metionina

7.9

3.6

0.4556

2.8

0.35

b) Determine los valores del Rf de las manchas del cromatograma

bidimensional tipo y acomodarlos en orden creciente de Rf en la
primera fase mvil, como se indica en la tabla 2, e identificar por
comparacin con los valores de Rf de los cromatogramas
unidimensionales a que aminocido corresponde cada mancha.
Tabla 8. Comatograma bidimensional tipo desarrollado en las 2 fases
mviles.
#

1 Fase mvil
Frente del
Disolvente

2 Fase mvil
Frente del
Soluto

Rf

Frente del
Disolvente

A.A
corresp.
Frente del
Soluto

Rf

1
2

7.9

1.2

0.151
8

8.5

3.3

0.3882

Histidin
a
Alanina

4
5
6
7

Glutmi
co
Prolina

Lisina
7.9

4.3

0.544
3

8.6

2.3

0.2674

Triptofa
no
Valina

Arginina

9
1
0

Tirosina
7.9

3.8

0.481
0

8.6

2.7

0.3139

Metioni
na

c) Determinar los Rf de las manchas del cromatograma bidimensional

problema, acomodar en orden creciente de Rf en la primera fase
mvil como se indica en la tabla 3, comparar con los Rf del
cromatograma bidimensional tipo e identificar los aminocidos que
contiene la muestra problema.

Tabla 8. Cromatogramas unidimensionales problema desarrollado en

las 1 fase mvil.
F

FD

FS1

Rf1

AA

FS2

Rf2

AA

FS3

Rf3

AA

FS4

Rf4

AA

7.9

2.8

0.354

----

2.1

0.265

glu

1.5

0.189

Pro

0.2

0.025

----

7.9

5.5

0.696

----

2.7

0.341

----

4.5

0.562

trp

2.7

0.337

---

1.7

0.212

Glu-

0.1

0.012

Lys-

3.8

0.475

met

2.8

0.35

---

1.8

0.225

Glu-

0.1

0.012

Lys-

2.7

0.337

----

1.9

0.237

glu
-

0.1

0.012

Lys-

2.7

0.337

----

1.7

0.212

----

8.1

4.9

0.604

-----

0.370

---

2.3

0.283

Val-

1.7

0.209

---

Tabla 9. Cromatogramas unidimensionales problema desarrollado en

las 2 fase mvil.
F

FD

FS1

Rf1

AA

FS2

Rf2

AA

FS3

Rf3

AA

7.6

3.9

0.513

tyr

2.6

0.342

Pro/met

1.9

0.25

trp

7.6

6.4

0.842

---

0.1

0.013

His/arg/
lys

7.6

7.3

0.960

----

5.4

0.710

----

3.8

0.5

tyr

7.4

5.6

0.756

----

3.9

0.527

tyr

2.6

0.351

Pro/met

7.5

6.4

0.853

----

0.1

0.013

His/arg/
lys

7.5

0.666

Val-

0.533

tyr

2.6

0.346

pro/met

7.5

6.5

0.866

---

2.5

0.333

pro/met

1.7

0.226

trp

Compare los resultados de la tabla 3 con los de la tabla 2 construir la

tabla 4, numerando las manchas en orden creciente de su Rf en la
primera fase mvil. Indique cual fue su muestra y que aminocido
contiene.
Tabla 10. Cromatograma bidimensional problema (IV) desarrollado en
las 2 fases mviles.
Rf creciente en la 1 Fase mvil

Rf creciente en la 2 fase mvil

Aminocido
correspondiente

F: 1- 0.354
2-0.265
3- 0.189
4-0.025

F: 1- 0.513
2-0.342
3- 0.25
4- 0.013

----Glu
Pro
-----

G: 1-0.696
2- 0.341

G: 1- 0.842
2-0.013

---------

5
3
6

N: 1-0.562
L: 1-0.337
2-0.337
2-0.212
3-0.212
4-0.012

P: 1-0.337
2- 0.237
3-0.012

P: 1- 0.475
2- 0.35
3-0.225
4- 0.012
7

M: 1- 0.604
2- 0.370
3- 0.283
4- 0.209

P: 1- 0.853
2-0.013
N: 1-0.960
L: 2-0.710
1-0.666
2-0.533
3-0.5
3-0.346
40.342
4- 0.226
5-0.25
5- 0.013
6-0.013
P: 1-0.756
2-0.527
3- 0.351
4-0.272
5-0.013
M: 1-0.866
2- 0.333
3-0.226
4-0.066
5-0.013

------------------------Pro/met
-----Trp
His/Arg
His/Arg
------------His/Arg
----------His/Arg

Investigar en la literatura los aminocidos que contiene el

jugo empleado como problema.
Jugo Problema: Pera
Tabla 11. Aminocidos presentes en el jugo problema experimental y
terico.
Aminocido reportado en literatura
cido asprtico
Lisina
cido glutmico
Metionina
Alanina
Prolina
Arginina
Serina
Cistena
Tirosina
Glicina
Triptfano
Histidina
Valina
Isoleucina
Leucina

Aminocido encontrado
Rf Fase I: 1- 0.36 Lisina
2- 0.2894 Glu/Ala
3. 0.0131 ----4. 0.2 Glu
Rf Fase II:
2- 0.1 ---3- 0.8111 ---4-0.8666 -----

Figura 10. Aminocidos tericos presentes en el jugo problema (pera).

Los aminocidos que fueron identificados en nuestras cromatoplacas

de nuestra fruta problema (pera) fueron: lisina, alanina y el cido
glutmico.

Figura 11. Aminocidos tericos presentes en el jugo de la naranja.

El aminocido que se identific en el jugo de naranja fue la lisina.
Escriba la reaccin completa y con nombres de la ninhidrina
con un aminocido.

Es posible cambiar el orden de las fases mviles? Explique su

respuesta.
Si se pueden intercambiar las fases mviles porque la separacin de
la sustancias se da en cuanto a su polaridad, pero se debe dejar secar
la primera fase mvil para que no haya interferencia con la segunda
fase mvil.
Mencione 3 aplicaciones de la cromatografa en capa fina,
diferentes al utilizado, explique uno.

Determinar el grado de pureza de un compuesto, se puede

determinar la efectividad de una etapa de purificacin
Anlisis de medicamentos para ver que composicin tienen.
Identificacin de algunas sustancias conocidas en una mezcla por
comparacin con un patrn de la sustancia pura.
Indique las posibles fuentes de error de esta tcnica.

Que las cromatoplacas estn limpias, no tocarlas si no se usa

guantes, ya que puede interferir a la hora del revelado.

Dejar mucho tiempo las fases mviles

Mala preparacin de los disolventes.

Que en el revelado con la ninhidrina no se cubra totalmente la

cromatoplaca y no se revelen las separaciones de los
aminocidos.

Explique cmo se podra cuantificar el analito y cules seran

las ventajas y desventajas de utilizar una curva de calibracin
o un estndar de concentracin.
Mtodo
Curva de
calibracin

Estndar de
concentracin

Ventajas
Nos permite obtener la
concentracin del analito en
una muestra.
Obtener la ecuacin de la
recta.
En un anlisis cuantitativo.
Se compara la propiedad del
analito.
Se utiliza para un anlisis
volumtrico.

Desventajas
La tcnica que debe utilizarse debe
de ser precisa para que los
resultados salgan bien.
Puede haber contaminantes.

No se conoce la cantidad del

analito.