Proteínas totais e albumina

Método do biureto
Reação colorimétrica de ponto final - Quimica

• Reação colorimétrica altamente especifica para proteínas e péptidos

• Deteta a presença de ligações peptídicas
• Ocorre em meio básico

Albumina

Reação colorimétrica de ponto final - Quimica

Quantificação da albumina
É possível a deteção específica de albumina através da ligação com os seguintes corantes:
• azul de bromofenol
• laranja de metila
• ácido hidroxibenzenoazobenzônio (haba)
• púrpura de bromocresol
• verde de bromocresol – muito utilizado nos analisadores automatizados

Pré-albumina
• Análise Laboratorial:
• Feita por métodos automatizados de ligação a corantes, usando os corantes verde de bromocresol ou
púrpura de bromocresol.
Ácido úrico
Reação colorimétrica de ponto final

• O ácido úrico é o maior produto do catabolismo das purinas;

• A sua síntese ocorre no figado e a sua excreção é feita a nível renal;
• A determinação do ácido úrico é usada no diagnóstico e tratamento de diversas patologias renais e
metabólicas, tais como insuficiência renal, gota, leucemia, psoríase, subnutrição ou outras doenças que
provocam fraqueza geral;
• É um parâmetro de elevado relevo na monitorização de doentes a fazerem terapêutica com citotóxicos.

Metodologia analítica

1- Métodos enzimáticos- uricase (Praetorius e Poulsen)

• São mais específicos que as abordagens PTA;
• Este método elimina as interferências intrínsecas à oxidação química;
• A uricase pode ser utilizada em métodos que envolvam a medição por UV do consumo do ác. úrico ou
em associação com outras enzimas num teste colorimétrico.
• A uricase é utilizada como etapa única ou inicial para oxidar o ácido úrico, produzindo alantoína, H2O2 e
CO2.

Fundamento teórico
Ensaio colorimétrico enzimático

Valores teóricos
• Homens 3,4-7,0 mg/dl
• Mulheres 2,4 – 5,7 mg/dl

De acordo com Tietz (2006)

Ureia

Metodologias analíticas: métodos enzimáticos

Fundamento teórico
Teste cinético (30seg, 90seg) com urease e glutamato desidrogenase

A ureia presente na amostra consome, segundo as reações abaixo descritas, NADH que se quantifica
espectrofotometricamente.

Valores teóricos
Adultos: 16,6 – 48,5 mg/dl

Azoto ureico / BUN (Blood Urea Nitrogen)

BUN = [Ureia] / 2,14 mg/ dl.

Valores teóricos:
Adultos (18-60 anos): 6-20 mg/dl
Adultos (60-90 anos): 8-23 mg/dl

Creatinina

Reação colorimétrica cinético - Quimico

Métodos químicos: Método de Jaffé
A creatinina reage com o picrato alcalino para resultar num complexo laranja- avermelhado.

É atualmente o método mais amplamente utilizado para a quantificação de creatinina.

• O método está sujeito a interferências de outras substâncias:

• POSITIVAMENTE (reagem dando cor idêntica): Ácido Ascórbico, Cefalosporinas, Glicose, Corpos
Cetónicos, Piruvato, Frutose e Ácido Úrico.
• NEGATIVAMENTE: Bilirrubina, Hemoglobina, Amostras Lipémicas
• ESTRATÉGIAS
• Adição da Terra de Fuller (Reagente de Lloyd)
• Adsorvem os materiais não-creatinina das amostras (desvantagem: trabalhoso!)
• A correção do valor obtido com o branco é capaz de eliminar a interferência da bilirrubina.

Método de Jaffé compensado

A creatinina presente na amostra reage com o picrato em meio alcalino, originando um complexo colorido.

Mede-se a velocidade de formação de tal complexo em períodos iniciais curtos, para se reduzir a
interferência de outros compostos.

As amostras de soro e plasma contêm proteínas que reagem de forma não específica; no entanto, os
resultados podem ser corrigidos diminuindo um valor fixo.

A utilização desta correção é conhecida como método de Jaffé compensado.

Valores teóricos (método de Jaffé compensado)

• Homens 0,70-1,20 mg/dl
• Mulheres 0,50 – 0,90 mg/dl

Colesterol
Enzimática ponto final – Trinder - colestrolesterase, colesterol oxidase e peroxidase

Trigliceridos

Enzimático ponto final – Lipase, glicerolkinase, G-3-P-oxidase, peroxidase

Depende da alimentação

Glucose

Enzimatica ponto final – Trinder – Glucose oxidase e peroxidase

Bilirrubinas
Ponto final - Quimica – 3.5- DPD

Fazer 4 brancos
Branco A
Branco R
Branco c1
Branco c2