Ciências Biomédicas Laboratoriais

Ano Curricular: 2º
Ano Letivo 2022-2023

PL10: DOSEAMENTO DE PROTEÍNAS TOTAIS

E ALBUMINA EM SORO

Fernando Oliveira, ffo@ess.ipp.pt

 PROTEÍNAS PLASMÁTICAS
Proteínas totais

• Conjunto total da diversidade de proteínas circulantes

– Intervalo de referência (adultos): 6,0-7,8 g/dL

• Podem ser quantificadas por grupos (frações)

• Apenas algumas frações estão presentes em quantidade suficiente para serem

detetadas pelos métodos utilizados na rotina laboratorial

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 PROTEÍNAS PLASMÁTICAS
Separação eletroforética
Globulinas

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 PROTEÍNAS PLASMÁTICAS
Separação eletroforética
Globulinas

Fração Concentração
Proteínas totais 6,0-7,8 g/dL
Albumina 3,5 to 5,2 g/dL
𝝰1-globulinas 0,1 to 0,3 g/dL
𝝰2-globulinas 0,6 to 1,0 g/dL
β-globulinas 0,7 to 1,2 g/dL
γ-globulinas 0,7 to 1,6 g/dL

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS E
ALBUMINA EM SORO
Utilidade clínica

• Quantificação de proteínas totais é útil na avaliação da síntese e manutenção de

proteínas em circulação

• Hipoproteinemia: ↓ proteínas totais

1. Devido a uma síntese diminuída

• Patologias hepáticas (maioria das proteínas são sintetizadas pelo fígado)

• Desnutrição (síntese proteica requer aminoácidos provenientes da dieta

(aminoácidos essenciais, não sintetizados pelo organismo))

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS E
ALBUMINA EM SORO
Utilidade clínica

• Quantificação de proteínas totais é útil na avaliação da síntese e manutenção de

proteínas em circulação

• Hipoproteinemia: ↓ proteínas totais

2. Devido a uma perda de proteínas

• Patologias renais (p.e., síndrome nefrótica = perda de proteínas através da urina)

• Enteropatia perdedora de proteínas: entidade rara, caracterizada por perda

proteica pelo trato gastrointestinal (p.e., doença inflamatória intestinal, doença
celíaca, entre outras)

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS E
ALBUMINA EM SORO
Utilidade clínica

• Quantificação de proteínas totais é útil na avaliação da síntese e manutenção de

proteínas em circulação

• Hiperproteinemia: ↑ proteínas totais

• Desidratação (<volume sanguíneo = relativa)

• Sobreprodução proteica (+ comum = absoluta; aumento de imunoglobulinas:

infeções, neoplasias hematológicas)

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS E
ALBUMINA EM SORO
Utilidade clínica
• Um resultado anormal de proteínas totais requer análises adicionais
• Identificação da proteína em particular cuja concentração se encontra alterada

• Rácio albumina/globulinas (A/G)

• A/G = [albumina]/([proteínas totais]-[albumina])
• Intervalo de referência: 0,8 - 2,0

• Rácio A/G diminuído

• Produção excessiva de globulinas (p.e., doenças autoimunes, neoplasias hematológicas)
• Défice de produção de albumina (p.e., doença hepática: cirrose, ...)
• Perda de albumina (p.e., doença renal)

• Rácio A/G aumentado

• Défice de produção de imunoglobulinas

• Parâmetros alterados requerem análises adicionais para diagnóstico

• Avaliação de enzimas hepáticas
• Eletroforese de proteínas séricas (EPS)
• ...

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Método do biureto (colorimétrico)

Em meio alcalino:

Cu2+ forma complexos multivalentes com as

ligações peptídicas presentes nas proteínas

Ligação
peptídica

Leitura de absorvância a 546 nm

Aumento da A546 é proporcional à concentração de proteínas na amostra

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Método do biureto (colorimétrico): reagentes

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Método do biureto (colorimétrico): protocolo

Calibração pontual
Padrão de albumina:
4,0 g/dL

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Método do biureto (colorimétrico):
Cálculo da concentração de proteínas totais e valores de referência

Calibração pontual
Padrão de albumina:
4,0 g/dL

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Método do biureto (colorimétrico): controlo de qualidade interno

SERUM HN: SERUM HP:

Valor alvo: 6,88 g/dL Valor alvo: 4,50 g/dL
Intervalo admissível: 6,19 – 7,57 g/dL Intervalo admissível: 4,05 – 4,95 g/dL

Estes valores são determinados pelo fabricante

(recomenda-se que cada laboratório defina os seus próprios valores)

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 DETERMINAÇÃO DE ALBUMINA
Método do verde de bromocresol (colorimétrico)

Em meio ácido:

Albumina liga-se ao verde de bromocresol

(BCG, bromocresol green) com formação de
complexos albumina-BCG e alteração de cor
(amarelo-verde → verde-azul)

Leitura de absorvância a 630 nm

Aumento da A630 é proporcional à concentração de albumina na amostra

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Método do verde de bromocresol (colorimétrico): reagentes

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Método do verde de bromocresol (colorimétrico): protocolo

Calibração pontual
Padrão de albumina:
4,0 g/dL

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Método do verde de bromocresol (colorimétrico):
Cálculo da concentração de proteínas totais e valores de referência

Calibração pontual
Padrão de albumina:
4,0 g/dL

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 DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS
Método do biureto (colorimétrico): controlo de qualidade interno

SERUM HN: SERUM HP:

Valor alvo: 4,31 g/dL Valor alvo: 3,04 g/dL
Intervalo admissível: 3,88 – 4,74 g/dL Intervalo admissível: 2,74 – 3,34 g/dL

Estes valores são determinados pelo fabricante

(recomenda-se que cada laboratório defina os seus próprios valores)

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