UNEF-Unidade de Ensino Superior de Feira de Santana

Aluna: Cassiane de Oliveira Rios

Professora: Carla Pinheiro

Disciplina: Bromatologia Turma: 4º semestre Turno: Matutino

Curso: Farmácia

Métodos de Analise de Proteínas

Métodos de Dumas

Os recursos de automação dos equipamentos Dumas os tornam menos demorados em

comparação com a análise de Kjeldahl como, por exemplo, com a automação altamente
eficiente de lotes, o que permite que os operadores carreguem amostras e, em seguida,
realizem outras tarefas no laboratório. O Dumas também é mais rápido, sendo que o
resultado do teste fica disponíveis cinco minutos após a preparação. Uma das técnicas
padrão utilizadas para a determinação de nitrogênio e proteínas é o método Dumas, o
método Dumas realiza a combustão do material da amostra em altas temperaturas e, na
presença de uma superfície metálica de cobre, redução do óxido de nitrogênio a nitrogênio
elementar.

Desvantagens:

 Amostra muito pequena;

 Custo elevado;
 Mede N proteico e não proteico.

Vantagens:

 Mais rápido que o Kjeldahl (cerca de 4 min);

 Não requer compostos tóxicos nem catalisadores;
 Permite automatização (até 150 análises);
 Aplicável para todos os alimentos.

Resumo:

 Um método relativamente novo para a indústria agrícola e de alimentos, porém muito

popular para a indústria de rações e cada vez mais definido em normas.
  Determina o nitrogênio total, inclusive frações inorgânicas.
 Um método de combustão inventado em 1883 por Jean Baptiste Dumas, no qual
uma reação exotérmica transforma instantaneamente qualquer material orgânico em
seu elemento – sem o envolvimento de produtos químicos.
 Rápido e conveniente, com análises altamente automatizadas de lotes de até 117
amostras por vez, porém com um tamanho limitado da amostra devido ao método de
combustão utilizado.

Método por biureto

Princípio: Compostos com duas ou mais ligações peptídicas formam um complexo de

coloração roxa com sais de cobre em solução alcalina. A proteína é misturada com o
reagente de Biureto, que contém: sulfato de cobre, NaOH e tartarato de sódio e potássio.
Após 15-30 min mede-se a absorbância em 540 nm, cuja intensidade da cor será
proporcional a quantidade de proteína.

Vantagens:

 Específico;
 Simples, rápido e barato;
 Determina proteína.

Desvantagens:

 Necessita de uma curva de calibração tomada com um padrão conhecido de

proteína;
 A tonalidade de cor formada não é idêntica para todas as proteínas

Método por fenol

Princípio: Baseia-se na interação das proteínas com o reagente fenol e cobre em condições
alcalinas.

Envolve a oxidação, catalisada pelo cobre, de aminoácidos aromáticos por um reagente

heteropolifosfato (fosfotungsticofosfomolíbdico), desenvolvendo cor azul, cuja intensidade é
medida em comprimento de onda de 500-750 nm.

500 nm: determinação de concentrações proteicas elevadas.

750 nm: determinação de menores concentrações.

Vantagens:

 Alta sensibilidade e especificidade.

Desvantagens:

 A intensidade da cor varia com a composição de proteína e condições analíticas;

 Lento;
 Operações múltiplas;
 Necessita de curva padrão com proteína conhecida;
 Necessita de um tempo de incubação.

O método turbidimétrico

Apresenta como vantagens a rapidez, facilidade operacional, medida objetiva da resposta e

exatidão. As desvantagens incluem a necessidade de equipamento de leitura da resposta,
ausência da identificação de contaminação grosseira ou coloração da amostra que interfira
na leitura fotométrica.

Princípio: Baseia-se na turbidez causada pela proteína precipitada por algum agente
precipitante (ácido tricloroacético, ferrocianeto de potássio e ácido sulfossalicílico).

Vantagens:

 Rápido e simples para amostras em que a proteína encontra-se em solução.

Desvantagens:

 Não é vantajoso para amostras sólidas (necessita extração da proteína);

 Pode ocorrer precipitação de outras substâncias;
 Necessita calibração com padrões conhecidos.

Método Dye-Binding

Quando a amostra é tratada com corante em excesso, a proteína reage e forma substâncias
insolúveis, que podem ser separadas – excesso de corante é medido colorimetricamente.
Usado em amostras de grãos de cereais, sementes oleaginosas, produtos vegetais e
animais, lácteos.

Princípio: Baseia-se na reação entre proteína e excesso de um corante (Laranja G, laranja

12, vermelho A, preto búfalo, preto amino 10B), no qual o complexo formado é removido e
mede-se a quantidade de corante que não reagiu. O resultado é obtido por diferença.
Vantagens:

 Simples, rápido, exato e econômico.

Desvantagens:

 Necessita de equipamento específico.

 Cor varia de acordo com a proteína.
 Reage com cubeta de quartzo.