ALUNOS: A LEXIA MAYARA DOS SANTOS, EDUARDA GOMES FERRARI,

GABRIEL AUGUSTO VILELA, JOÃO HENRIQUE PEREIRA CARDOSO,

LUCAS GUTHIERREZ DE SOUZA SOARES, ORLANDO HENRIQUE
LANGAME DE MELO, REBECA NATAL ZAGO, SUELLEN MATTOS CESAR
ESTEVAM.

TRABALHO DE BIOQUÍMICA: PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS

Londrina
2022
● Selecionando proteína

● Proteína 4 selecionada
● PAGE da mistura de proteínas

● IMUNOBLOT da proteína 4 mostrando seu ponto isoelétrico próximo a pH 6 e

seu peso próximo de 25K
● Selecionando o primeiro método de separação. O método consiste em Salting
In-Out através da saturação da solução proteica por sulfato de amônia. Este
processo permite diminuir a solubilidade da solução e precipitar as proteínas
presentes de acordo com a necessidade, sem ocasionar a desnaturação das
mesmas. Este processo foi selecionado pois além de não correr o risco de
desnaturar a enzima 4, é rápido, de baixo custo e bastante eficiente, então
começamos por ele.

● Porcentagem ótima de saturação para promover a precipitação de proteínas,

deixando a enzima 4 ainda presente na solução na forma solubilizada.
● Resultado da precipitação da solução proteica (35.1%), com a enzima 4 100%
solubilizada. Dessa forma, o precipitado foi descartado e permanecemos com
uma solução mais pura contendo a enzima 4.

● Conclusão da primeira purificação

● Resultado da primeira purificação: aumentou a pureza em aproximadamente
50% em curto período de tempo e baixo custo.

● Segundo processo de purificação: filtração por gel. Este método foi selecionado
pois permite a separação das proteínas através de um filtro por peso, sem
danificar ou desnaturar. O importante, então, é a escolha do filtro. Escolhemos
o filtro Sephadex G-100 pois sua faixa de filtração vai de 4k a 150k, fazendo
com que as proteínas fiquem devidamente espaçadas .
● Gráfico representando as proteínas presentes na solução. Como este filtro é
por peso, é possível inferir que a enzima 4, por possuir peso de
aproximadamente 25K (intermediário), se localizará na parte central do gráfico.

● Gráfico representando a presença da atividade enzimática da enzima 4

próximo ao centro do gráfico, como esperado.
● Selecionando a POOL que contém a enzima 4

● Resultado segundo método de purificação

● Resultado final da segunda purificação: Com apenas 2 métodos a pureza foi
aumentada em 6 vezes o seu valor original, com o custo e tempo baixos, outros
processos seriam mais custosos, pouco efetivos e com possibilidade de
danificar as proteínas (seja por pH ou temperatura). Dessa forma concluímos
que essa foi a maneira mais barata e simples de purificar a enzima 4.

● Prova da pureza da solução

● Selecionando o Immunoblot

● Immunoblot representando a proteína 4 purificada