Ministério da Educação

Universidade Tecnológica Federal do Paraná

Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
Bioquímica de microrganismos

Teste de Vermelho de Metila

Aula 03

Cristiane Ferreira de Lara

Emilly Dias Martini
Rafaela Sayuri Tezuka

Ponta Grossa
2023/1
Bioquímica de microrganismos
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Universidade Tecnológica Federal do Paraná
Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia

1. Introdução (máximo 2 páginas)

O teste vermelho de metila é capaz de identificar as características de um

microrganismo em produzir ácidos orgânicos através da fermentação da glicose. A
fermentação da glicose pode resultar diferentes produtos finais serão formados,
dependendo da via metabólica utilizada.
Essa diferença metabólica pode ser caracterizada pela adição do corante vermelho
de metila para encontrar produtos ácidos.
O metabolismo fermentativo é um processo de respiração anaeróbica, ou seja,
ocorre sem a presença de oxigênio, que consiste na síntese de ATP onde as células
obtêm energia química para realizar atividades metabólicas.
A fermentação ácido-mista é formada a partir de uma mistura de ácidos que
diminuem o pH do meio para menor que 4,5. Entretanto, os produtos finais variam
de acordo com as enzimas presentes na bactéria.( DA SILVA,1996),
O sistema tampão é um sistema de misturas de ácidos e bases fracas que impedem
as variações de pH. No entanto, a diminuição do pH ultrapassa a capacidade do
fosfato presente no tampão.
Portanto, para realizar essa prova é necessário adicionar algumas gotas da solução
de vermelho de metila, que identifica a presença de concentrações elevadas de
ácidos, um indicador de pH com ponto de viragem 4,5. Se o pH for 4,5, o vermelho
de metila se torna vermelho e a reação é positiva. Porém se o pH for 6 o indicador
muda para amarelo e é uma reação negativa apesar de continuar ácida, mas é
devido a menor quantidade de hidrogênio.

2 . Objetivo
Observar se o microrganismo é capaz de produzir taxas elevadas de produtos
ácidos através da fermentação da glicose. E também verificar se o tipo de
metabolismo da bactéria é ácido-misto.
Além disso, é capaz de identificar o crescimento das bactérias que realizam
fermentação através da glicose por meio das vias metabólicas.
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3. Materiais e métodos

Materiais:

● Alça de inoculação estéril;

● Pipeta;
● 5 ponteiras de 1000 uL estéreis;
● 2 tubos de ensaio;
● Meios de cultura são:
● TSI, TSA ou NA ( preparo do inoculo);
● Caldo VM-VP e solução hidroalcoólica de vermelho de metila (prova
bioquímica);

Métodos:

Preparação:
● Caldo VM-VP: Dissolver a solução em água destilada, corrigir o pH em 6,9 e
distribuir 5 mL em tubos e esterilizar a 121°C/ 15 min.
● Vermelho de metila: dissolver o vm no etanol e completar o volume de 500
mL com água destilada. Reservar em um frasco sob refrigeração, para
finalizar é necessário um tubo de ensaio e ponteiras de 1000 uL estéreis.

Início da prática

1. Preparamos o inóculo com os meios de cultura e realizar uma reativação com

24 horas de antecedência em 35-37C°.
2. Utilizamos a alça de inoculação para pegar o microrganismo do meio de
cultura utilizado e inocular os tubos com caldo VM-VP
3. Produzimos um tubo de controle com o caldo, sem o microrganismo
4. Levamos os tubos para incubação entre 35-37 C° com 96 horas com tampas
desroqueadas.
5. Colocamos 2,5 mL do meio inoculado e 5 gotas do vermelho de metila.
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Resultados:

● A Figura 1 nos mostra a imagem do o tubo antes de ser

aplicado o teste de vermelho de metila.

Data: 31/03/2023
Figura 01

● Depois das 96 horas da inoculação, foi adicionado 5 gotas do

vermelho de metila, resultado na coloração alaranjada

Figura 02
Data: 31/03/2023.
● Como podemos ver, não ocorreu turbidez, a solução está bem
nítida.
● Não ocorreu formação de gases devido a reação do
butanodiol
● Produziu uma grande quantidade de ácidos.
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Discussão:

- No experimento realizado para provar o teste de vermelho de metila, não

ocorreu fermentação mista ou seja o microrganismo não foi capaz de realizar
duas fermentações ao mesmo tempo, como por exemplo fermentação
alcoólica e lática.
- O microrganismo utilizou uma fonte de carbono, não sendo capaz de
fermentar a glicose mas pode realizar a fermentação em outros
açúcares.Além disso, o dioxido de carbono é produzido somente pela
produção do ácido fórmico por meio de uma enzima.
- Analisamos que não houve a formação de gases presentes na solução
devido a presença da fermentação de butanodiol.
- Comparando os resultados com o item 2, o teste vermelho de metila detectou
uma grande concentração de ácidos. Portanto, o microrganismo conseguiu
produzir uma grande quantidade de ácidos.
- Não ocorreu turbidez, porque não houve crescimento microbiano.
- Depois de 96 horas foi adicionado 5 gotas do vermelho de metila, resultando
na mudança de coloração para alaranjada, assim ficando evidente que é uma
reação negativa.
- A cor laranja pode ser relacionada ao pH porque se a coloração for vermelha
o pH vai ser abaixo de 4,5. No entanto, se for acima de 6 resulta na cor
amarela e se tiver um pH intermediário a coloração fica laranja.
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Referências:

FOGAÇA, Jennifer Rocha Vargas. "Solução-tampão no sangue humano"; Brasil

Escola. Disponível em: https://brasilescola.uol.com.br/quimica/solucaotampao-
no-sangue-humano.htm. Acesso em 03 de abril de 2023.

Microbiologia Brasil,01/03/2009. Disponível em

http://microbiologiabrasil.blogspot.com/2009/01/prova-vermelho-de-metila-
mr.html. Acesso no dia 02/04/2023.

Provas de identificação de enterobactérias, 2021. Disponível em

https://educapes.capes.gov.br/bitstream/capes/704405/2/Guia_Ident_Enterobact
%C3%A9rias%202021%20Karla%20Tereza.pdf

Vermelho metílico: características, preparação e aplicações. Disponível em

https://maestrovirtuale.com/vermelho-metilico-caracteristicas-preparacao-e-
aplicacoes/.