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ARTIGO INDITO

Clulas-tronco em Odontologia

Ana Prates Soares*, Lugya Amorim Henriques Knop*, Alan Araujo de Jesus **, Telma Martins de Arajo***

Resumo

Introduo: existe um grande interesse no desenvolvimento de tcnicas para a manipulao


de clulas-tronco, no intuito de instituirem-se tratamentos restauradores de tecidos e rgos.
Para que a bioengenharia seja eficaz, faz-se necessria a presena de trs fatores: as prprias
clulas-tronco, uma matriz extracelular e fatores de crescimento. Existem inmeros fatores de
crescimento envolvidos no desenvolvimento do rgo dentrio. Por isso pesquisadores ainda
no foram capazes de formar um rgo completo, embora existam diversos estudos eviden-
ciando a formao de esmalte e dentina a partir de clulas-tronco isoladas da polpa dentria.
Recentemente, tambm foram isoladas clulas-tronco da polpa dos dentes decduos. Sabe-se
que estas clulas so altamente proliferativas, sendo de grande importncia para o cirurgio-
dentista o conhecimento do seu comportamento biolgico e tcnicas de obteno. Objetivo:
este estudo teve como objetivo realizar uma reviso de literatura acerca das atuais tendncias
das pesquisas com clulas-tronco na Odontologia, alm de discorrer sobre os fatores implica-
dos para o sucesso na utilizao prtica dessas clulas.

Palavras-chave: Clulas-tronco. Bioengenharia. Pesquisa em Odontologia.

INTRODUO de mecanismos para a utilizao de clulas-tronco


A perda dentria e dos tecidos periodontais na reposio de tecidos bucais12.
pode resultar em movimento dos dentes remanes- Para a bioengenharia essencial uma trade
centes, dificuldade na mastigao, fonao, dese- composta por clulas-tronco ou progenitoras, uma
quilbrio na musculatura e comprometimento da matriz que funcione como arcabouo e protenas
esttica dentria e do sorriso, comprometendo a sinalizadoras, denominadas fatores de crescimento,
auto-estima. Atualmente existem diversas terapias como estmulo para diferenciao celular (Fig. 1).
para substituio dos rgos dentrios, todas elas O objetivo desta reviso de literatura foi dis-
baseadas em tcnicas no-biolgicas e sujeitas a correr acerca das tcnicas da bioengenharia e re-
falhas26. Apesar desta condio ser uma anormali- latar os resultados obtidos nos experimentos com
dade comum e no ameaar a vida do paciente, es- clulas-tronco, bem como suas reais tendncias na
foros tm sido dirigidos para o desenvolvimento aplicao em Odontologia.

* Acadmicas do Curso de Graduao em Odontologia - UFBA.


** Especialista em Prtese Dental (ABO/Ba). Mestre em Odontologia (FOUFBA). Doutorando em Biotecnologia UEFS/FIOCRUZ.
*** Doutora e Mestre em Ortodontia UFRJ. Professora Titular de Ortodontia UFBA. Diplomada pelo Board Brasileiro de Ortodontia e Ortopedia Facial.

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Clulas-tronco em Odontologia

CLULAS-TRONCO OU PROGENITORAS J as clulas-tronco adultas apresentam a van-


Clulas-tronco so definidas como clulas in- tagem de serem autognicas, no incorrendo em
diferenciadas com grande capacidade de auto-re- limitaes morais, e responsivas aos fatores de
novao e de produzir pelo menos um tipo celular crescimento inerentes ao hospedeiro. No entanto
altamente especializado. Existem duas categorias tambm apresentam desvantagens, como o fato
de clulas-tronco: as clulas-tronco embrionrias de no serem pluripotentes, a dificuldade de obt-
pluripotentes e a linhagem de clulas unipoten- las, purific-las e cultiv-las in vitro, alm de sua
tes ou multipotentes, denominadas clulas-tronco presena em menor quantidade nos tecidos24. A
adultas, que residem em tecidos diferenciados22. principal fonte de clulas-tronco adultas a me-
A maior vantagem do uso de clulas-tronco dula ssea. Estas clulas tm a capacidade de se
embrionrias a sua capacidade de proliferao e diferenciarem em clulas dos tecidos sseo, adipo-
de diferenciao em diversos tipos celulares. Mas so, cartilaginoso e muscular, o que demonstra sua
existem desvantagens, como a sua instabilidade alta plasticidade9.
gentica, a obrigatoriedade de sua transplantao Inmeros estudos tm isolado clulas alta-
para hospedeiros imunocomprometidos, o risco de mente proliferativas, derivadas da polpa dent-
formao de teratocarcinomas e de contaminao ria3,8,18,19,20,27.Constatou-se que tais clulas so
atravs do seu cultivo em fibroblastos de ratos22, multipotentes e possuem a capacidade de auto-
alm da questo tica18. A viabilidade do uso de renovao e de diferenciao em diversos tipos
clulas-tronco adultas na regenerao e reconstru- celulares. Foi observada uma converso fenotpi-
o de tecidos tem suscitado grande interesse na ca destas clulas, atravs da expresso de prote-
comunidade cientfica, dado o aumento de leis em nas adiposas (PPAR 2, sigla do ingls peroxisome
diversos pases que probem o uso de clulas-tron- proliferator activated receptor 2, e a lipopro-
co embrionrias em pesquisas24. tena lipase), aps o estmulo por um meio de

matriz

clulas-tronco fatores de crescimento

FIGURA 1 - Fatores necessrios para a bioengenharia na Odontologia.

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cultura com alto potencial indutivo adipognico. formao de tecido sseo fibroso autlogo a partir
Ademais, as clulas-tronco da polpa dentria ex- de clulas-tronco provenientes de polpas de indi-
pressaram nestina e protena glial fibrilar cida vduos com idades acima de 30 anos, assim como a
(GFAP, sigla do ingls glial fibrilar acid protein), diferenciao dessas clulas em odontoblastos11.
que so marcadores de precursores neurais e c- Os marcadores para as clulas-tronco so de ex-
lulas gliais, respectivamente7. trema importncia, pois estas clulas residem em
Existem evidncias de que clulas-tronco de diferentes locais dentro do tecido26. So necess-
dentes decduos so similares quelas encontradas rios mais estudos sobre marcadores especficos que
no cordo umbilical. Quando comparadas s clu- possam identificar nichos de clulas-tronco presen-
las-tronco provenientes da medula ssea e da pol- tes na polpa dentria in situ e sobre como se d
pa de dentes permanentes, notou-se que as SHED o desenvolvimento desses nichos9. possvel que
(stem cells from human exfoliated deciduous te- as clulas-tronco da polpa humana e do ligamento
eth) apresentam uma maior taxa de proliferao. periodontal estejam associadas com a microvascu-
Alm disso, os dados desse estudo indicam que as latura8,25. Atualmente so utilizados os seguintes
SHED possuem habilidade de se diferenciarem marcadores microvasculares, para localizao de
em clulas odontoblsticas funcionais, adipcitos tais clulas: STRO-1 (marcador de clulas do estro-
e clulas neurais, alm de estimularem a osteog- ma), Fator Von Willebrand e CD146 (molcula da
nese aps transplantao in vivo (Fig. 2)16. superfcie de clulas endoteliais)18,25,26. A expresso
Pesquisas demonstraram que clulas-tronco da da telomerase celular em tecidos normais pare-
polpa requerem um meio indutor apropriado e um ce estar associada presena de clulas-tronco.
arcabouo composto por hidroxiapatita/triclcio- Tcnicas de deteco in situ dessa ribonucleo-
fosfato para induzir a formao de osso, cemento e protena tm a possibilidade de atuarem como
dentina in vivo3,8. Alguns autores demonstraram a marcadores celulares9.

clulas-tronco
isoladas

adipcitos

odontoblastos
clulas neurais

FIGURA 2 - Clulas-tronco isoladas do tecido pulpar de dentes decduos tm alta capacidade proliferativa e so capazes de se diferenciarem em odontoblastos
maduros, adipcitos ou clulas neurais.

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Clulas-tronco em Odontologia

Pesquisadores cultivaram clulas-tronco da plexo dentino-pulpar, sugerindo que protenas de-


medula ssea e da polpa humana, provenientes de rivadas da matriz extracelular desempenham uma
terceiros molares impactados, e analisaram a ex- funo essencial na diferenciao odontoblstica.
presso gentica dessas clulas, atravs do mtodo Fibroblastos isolados a partir da polpa dentria
cDNA Microarray. Foi demonstrado um padro foram cultivados em matriz composta por fibras
gnico altamente similar entre esses dois tipos ce- de cido poligliclico e, aps 60 dias, exibiram ce-
lulares, com exceo de alguns genes, incluindo o lularidade similar encontrada na polpa humana
IGF-2 (fator de crescimento insulnico-2, sigla do normal, indicando que esta matriz apresenta boas
ingls insulinic growth factor-2) e colgeno tipo propriedades para a bioengenharia17.
XVIII 1, no entanto ainda desconhecida a ex-
presso dessa diferena27. FATORES DE CRESCIMENTO
A morfognese dentria envolve uma srie de
MATRIZ interaes dinmicas e recprocas entre o ectoder-
Para bioengenharia de tecidos, uma matriz es- ma e o mesnquima29. Os fatores de crescimento
sencial, pois fornece o arcabouo necessrio para o so protenas secretadas extracelularmente que
transporte de nutrientes, oxignio e resduos meta- governam a morfognese durante tais interaes e
blicos. Esse arcabouo deve ser biocompatvel, no compreendem cinco famlias proticas: protenas
irritante e resistente. A matriz composta por ma- morfogenticas sseas (BMPs, sigla do ingls bone
teriais sintticos ou naturais18. Os componentes da morphogenetic protein); fatores de crescimento
matriz funcionam ativando morfogenes das clulas para fibroblastos (FGFs, sigla do ingls fibroblast
implantadas19,20, enquanto esta gradualmente de- growth factor); protenas Hedgehog (Hhs), prote-
gradada e substituda pelo tecido regenerado19. Para nas wingless e int-related (Wnts) e fator de necrose
a formao de tecido dentrio tm sido utilizadas tumoral (TNF, sigla do ingls tumor necrosis fac-
as matrizes PGA (cido poligliclico, sigla do ingls tor)19. Apesar destas famlias distintas estarem en-
polyglycolic acid)6,10 e PLGA (cido poli co-glico- volvidas no desenvolvimento dentrio, as BMPs so
ldeo copolmero, sigla do ingls poli co-glycolide suficientes para a formao de dentina terciria20.
copolymer), ambas apresentando similaridade no Alguns autores demonstraram ainda que a
suporte de crescimento de tecidos dentrios alta- regenerao da polpa induzida por hidrxido de
mente organizados6. clcio mediada pela sinalizao Notch clula-c-
Tambm pode ser usado um sistema de matriz lula. Os resultados foram consistentes para afirmar
com a configurao tri-dimensional, a partir do co- que esta sinalizao controla o destino de clulas-
lgeno tipo I, para o cultivo de clulas-tronco em tronco provenientes da polpa, durante a regenera-
experimentos, visando sua diferenciao em odon- o da mesma15.
toblastos5. Neste estudo objetivou-se avaliar a res- A famlia BMP faz parte da super-famlia
posta de clulas-tronco provenientes do primeiro TGF- , composta de 25 fatores moleculares15. As
arco branquial de ratos ao estmulo por TGF- 1 BMPs podem ser divididas em 4 sub-famlias dis-
(sigla do ingls transforming growth factor 1) e tintas: a primeira BMP-2 e 4; a segunda BMP-3
DNCP (protena no-colagnica da matriz extrace- e BMP-3B, esta ltima tambm conhecida como
lular dentria, sigla do ingls dentin non colagenic fator de crescimento/diferenciao 10 (GDF-10,
protein) atravs da expresso de protenas caracte- sigla do ingls growth/differentiation factor); a
rsticas de odontoblastos. Apenas no grupo tratado terceira BMPs 5, 6, 7 e 8 e a quarta GDFs 5, 6 e 7,
somente com fator de crescimento TGF- 1 no tambm conhecidas por protenas morfogenticas
houve a formao de tecido semelhante ao com- 1, 2 e 3 derivadas da cartilagem20.

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Em um estudo observou-se a expresso de BMP- desenvolvimento dentrio at a formao da ltima


2, BMP-4, BMP-7, BMP-8, GDF-5 e GDF-6 atravs cspide29. FGFs regulam a expresso de diversos
do mtodo de hibridizao e posterior anlise com genes e induzem a proliferao do mesnquima20.
PCR nas polpas dentrias de incisivos de ratos. Os Dentre os trs membros da famlia Hedgehog
autores afirmaram que tais fatores so crticos para (Hh) presentes nos vertebrados, Shh (sigla do in-
o desenvolvimento dentrio e reparo pulpar. No gls Sonic Hedgehog) o nico ligante Hh ex-
foi detectada a expresso de BMP-3 neste tecido21. presso nos dentes, sendo expresso durante o de-
As BMPs tambm so expressas no epit- senvolvimento inicial do germe dentrio29.Com o
lio estrelado do rgo do esmalte durante a fase objetivo de investigar a funo da protena Shh,
de capuz e esto associadas com a diferenciao pesquisadores bloquearam sua sinalizao atravs
dos ameloblastos e odontoblastos20. O hormnio de anticorpos neutralizantes e observaram que
de crescimento pode induzir a expresso dessas Shh possui duas funes no incio da odontognse.
BMPs durante a formao dentria12. A primeira durante a formao do boto dent-
No incio da morfognese dentria, BMP-2, BMP- rio, ao estimular a proliferao epitelial, e a segun-
4 e BMP-7 agem como importantes sinalizadores epi- da o aumento da sobrevida da clula epitelial
teliais que regulam a diferenciao do mesnquima durante o estgio de capuz4.
derivado da crista neural em uma linhagem odonto- A maioria dos genes Wnt expressa pelo epit-
gncia12, 28. Tais sinalizadores ainda determinam o n- lio dentrio. Sugere-se que o Wnt7b interaja na si-
mero e a posio das cspides dos dentes29. nalizao Shh para estabelecimento dos limites en-
Clulas da polpa dentria de porcos, cultiva- tre o ectoderma oral e dentrio, posicionando assim
das e tratadas com BMP-2, foram transplantadas os locais de formao das estruturas dentrias29.
para dentes despolpados de ces, com o objetivo Sabe-se que os fatores de necrose tumoral
de observar a diferenciao odontoblstica e a for- (TNF) so cruciais na formao das cspides dos
mao de dentina. A expresso do RNAm de sia- molares29.
lofosfoprotenas da dentina (Dspp, sigla do ingls
dentin sialophosphoprotein) e de metaloproteina- APLICAES EM ODONTOLOGIA
ses-20 da matriz (MMP-20, em ingls matrix me- A terapia com clulas-tronco adultas geralmente
talloproteinases-20) confirmou a diferenciao de precedida pela compreenso de todas as suas pro-
clulas pulpares em odontoblastos. Tal resultado priedades, o controle de sua proliferao e os fatores
comprovou o efeito estimulatrio da BMP-2 para que determinam sua diferenciao. A regenerao de
a formao de dentina10. um rgo dentrio no simples, pois seu desenvol-
Foi demonstrado que a BMP-4 expressa pe- vimento determinado por interaes complexas e
los pr-odontoblastos da bainha epitelial da raiz. inmeros fatores de crescimento29 e, ainda, a diferen-
Ademais, BMP-2 e BMP-7 so observadas em ciao celular est ligada a mudanas morfolgicas
pr-odontoblastos e em odontoblastos durante no decorrer da formao do germe dentrio9. Tem
um perodo relativamente curto de diferenciao, sido proposta a utilizao de clulas-tronco adultas
estando ausentes em odontoblastos maduros loca- em diversas reas da Odontologia.
lizados na superfcie da dentina coronria e radi- Em um estudo in vitro2, clulas-tronco me-
cular. BMP-3 foi localizada em ambas as clulas na senquimais obtidas da medula ssea de ratos
rea da raiz, mas no em odontoblastos diferencia- foram isoladas e induzidas a se diferenciarem
dos e secretores presentes na coroa dentria21. em clulas condrognicas e osteognicas atravs
Os membros da famlia FGF agem em diferen- de estmulo com fator de crescimento tumoral
tes momentos da odontognese, desde o incio do (TGF-1). As mesmas foram encapsuladas em

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Clulas-tronco em Odontologia

duas camadas de matriz composta por hidrogel de implicam em uma possvel funo das clulas-tron-
polietilenoglicol, moldadas em forma de cndilo de co na regenerao tecidual periodontal, sendo ne-
humanos. Esses moldes de acrlico foram implantados cessrios estudos mais aprofundados.
em dorsos de ratos imunodeficientes. Foi observada a O objetivo da Odontologia conservadora restau-
formao de uma estrutura condilar aps 8 semanas rar ou regenerar os tecidos dentrios para manter a
da implantao. Tal achado representa uma ferramen- vitalidade, a funo e a esttica do dente. Gronthos
ta til para um futuro desenvolvimento de cndilos et al.8 iniciaram estudos para isolar clulas-tronco da
mandibulares atravs da engenharia tecidual2. polpa dentria a partir de terceiros molares humanos
Em outra pesquisa, clulas-tronco mesenqui- impactados. Em meio de cultura composto por L-as-
mais provenientes de porcos foram isoladas, culti- corbato-2-fosfato, glicorticide e fosfato inorgnico,
vadas em matriz de cido poli-dl-lctico-coglic- foi observada a capacidade de tais clulas formar em
lico e incubadas por 10 dias em meio de cultura depsitos clcicos in vitro. Aps transplantao em
com suplemento osteognico. Posteriormente a ratos imunocomprometidos, as clulas-tronco pul-
este perodo, as amostras foram transplantadas para pares exibiram habilidade de formar uma estrutura
defeitos sseos mandibulares induzidos cirurgica- semelhante ao complexo dentina-polpa, composto
mente e aps 6 semanas realizou-se a anlise his- de uma matriz de colgeno tipo I altamente organi-
tolgica, clnica e radiogrfica. Observou-se que os zada, perpendicular camada tipo odontoblstica, e
defeitos foram preenchidos com um tecido denso, tecido fibroso contendo vasos sanguneos, anlogo
semelhante ao osso, apresentando osteoblastos, os- polpa encontrada em dentes humanos normais. Ou-
tecitos, vasos sanguneos e osso trabeculado1. tros pesquisadores14 cultivaram o mesmo tipo celular
Inmeros esforos tm sido direcionados para a em meio indutor de mineralizao semelhante e ob-
regenerao periodontal. Laino et al.11 demonstra- servaram a formao de hidroxiapatita com pequenas
ram a presena de clulas tronco-adultas no liga- quantidades de carbonatos, caractersticos de apatitas
mento periodontal, com propriedade clonognica e biolgicas.
alta taxa proliferativa. Essas clulas foram estimu- A matriz extracelular fosfoglicoprotica no-co-
ladas in vitro a diferenciarem-se em clulas tipo ce- lagnica (MEPE, sigla do ingls matrix extracellular
mentoblastos, atravs de um meio rico em L-ascor- phosphoglycoprotein) foi identificada recentemente
bato-2 fosfato, dexametasona e fosfato inorgnico; no tecido dentrio, tendo o peptdeo Dentonina de-
aps 4 semanas observou-se acumulao clcica, rivado de sua seqncia gnica. A ao da Dentonina
embora em menor proporo quando compara- sobre as clulas-tronco da polpa foi avaliada13. Obser-
da com as clulas-tronco provenientes da medula vou-se um aumento na taxa de proliferao dessas
ssea e da polpa dentria. A anlise imunohisto- clulas, sendo possvel o uso deste peptdeo na rege-
qumica e Western blotting demonstraram que as nerao da polpa em resposta a injrias como traumas
clulas-tronco do ligamento periodontal expressa- e cries. So necessrios mais estudos para aplicao
ram uma variedade de marcadores cementobls- in vivo desta terapia.
ticos/osteoblsticos. Ao serem transplantadas para Em um estudo23, foi testada a capacidade do epi-
ratos imunocomprometidos as clulas formaram tlio odontognico de estimular clulas-tronco em-
uma estrutura semelhante ao cemento/ligamento briognicas e mesenquimais, provenientes dos tecidos
periodontal. Em defeitos criados cirurgicamente na neural e medula ssea, a expressarem genes do desen-
rea periodontal dos molares inferiores dos ratos, as volvimento dentrio e, assim, substiturem o mesn-
clulas se integraram ao ligamento periodontal em quima dentrio na bioengenharia. Em amostras com
duas das seis amostras e, ocasionalmente, uniram a clulas embriognicas e neurais, observou-se a ex-
superfcie do osso alveolar ao dente. Esses achados presso de Dspp, gene expresso por odontoblastos,

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sugerindo que apesar de no haver formao dentria, adultos, foi desenvolvido um experimento23. Verifi-
h o estmulo para a diferenciao celular. cou-se que aps 26 dias da transplantao houve for-
Um modelo de aplicao clnica da terapia endo- mao de um dente ectpico, histologicamente nor-
dntica foi proposto por Nakashima18, baseado no mal, com presena de dentina, esmalte e um tecido
cultivo, proliferao e diferenciao de clulas-tron- similar ao ligamento periodontal. Sendo identificada
co pulpares em odontoblastos, sua insero em uma pelos autores uma possibilidade de transplantao de
matriz moldada do preparo cavitrio que apresente primrdios dentrios e seu subseqente desenvolvi-
exposio pulpar e o posicionamento da matriz no mento em humanos. Tal possibilidade leva a discus-
dente. Assim haveria a proliferao dos odontoblastos ses sobre a tica na experimentao com embries
e formao de dentina tubular funcional. em desenvolvimento23.
Na busca pela formao de um rgo dentrio
completo, foram desenvolvidos experimentos em ra- CONSIDERAES FINAIS
tos, utilizando primrdios da lmina dentria ao in- Existe um grande avano nos experimentos com
vs de populaes de clulas-tronco isoladas6,23. Isto clulas-tronco adultas provenientes de tecidos bu-
evidencia uma dificuldade na manipulao de todos cais. O seu fcil acesso e o fato de no serem rgos
os fatores envolvidos no desenvolvimento de um r- vitais constituem um atrativo para testes de prati-
go dentrio. Alm desta problemtica evidente a cidade e viabilidade de tcnicas da bioengenharia.
necessidade da insero e funcionabilidade do rgo possvel que, num futuro prximo, se utilize da
formado, de maneira que possa se integrar ao sistema bioengenharia na terapia endodntica e periodon-
estomatogntico. tal, apesar de, atualmente, a cincia se encontrar
Pesquisadores observaram que clulas dentrias distante de desenvolver rgos dentrios completos
no estgio de boto, obtidas de ratos recm-nascidos, a partir de clulas-tronco, devido aos mecanismos
cultivadas in vitro durante 6 dias e transplantadas para complexos da formao dentria.
dorsos de ratos imunocomprometidos, apresentaram
resultados timos na formao de coroas dentrias AGRADECIMENTOS
maduras, com caractersticas muito semelhantes aos Os autores agradecem SempToshiba, pelo apoio
dentes formados naturalmente6. Para determinar se constante ao Centro de Ortodontia e Ortopedia
rudimentos dentrios em fase de campnula pode- Facial Prof. Jos dimo Soares Martins FOUFBA.
riam formar um rgo dentrio, quando transplanta-
Enviado em: abril de 2006
dos para uma regio desdentada da maxila em ratos Revisado e aceito: junho de 2006

Stem cells in Dentistry

Abstract
Introduction: there is great interest in developing techniques for manipulation of stem cells for the use in restor-
ing organs and tissues. The effectiveness of bioengineering is based on the existence of stem cells, an extra cellular
matrix and growth factors. Innumerous growth factors are involved in the development of dental organs, and this
complexity of factors makes it extremely difficult to grow a complete organ, even though there are multiple essays
reporting the formation of enamel and dentin from isolated stem cell, originating from dental pulp tissues. More
recently, deciduous teeth have been used to extract stem cells from their pulp tissues. We know that these cells are
highly proliferate. The recognition of the biological behavior of these cells and techniques used to isolate them is
of great interest to dentists. Aim: the aim of this study was to review the current trends of research with stem cells
in Dentistry and the factors implied for their practical and successful use.

Key words: Stem cells. Bioengineering. Dentistry research.

R Dental Press Ortodon Ortop Facial 39 Maring, v. 12, n. 1, p. 33-40, jan./fev. 2007
Clulas-tronco em Odontologia

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Endereo de correspondncia
Ana Prates Soares
Rua Arajo Pinho n. 62, 7 andar, Bairro Canela
CEP: 40.110-150 - Salvador/BA
E-mail: prates_ana@yahoo.com.br

R Dental Press Ortodon Ortop Facial 40 Maring, v. 12, n. 1, p. 33-40, jan./fev. 2007

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