Quim. Nova, Vol. 29, No.

5, 1114-1120, 2006

DETERMINAO DE NITRITO EM GUAS UTILIZANDO EXTRATO DE FLORES

Educao

Luiz Antnio Ramos, Carla Cristina Schmitt Cavalheiro e der Tadeu Gomes Cavalheiro*
Instituto de Qumica de So Carlos, Universidade de So Paulo, CP 780, 13560-970 So Carlos - SP

Recebido em 7/4/05; aceito em 4/11/05; publicado na web em 31/3/06

DETERMINATION OF NITRITE IN WATER USING A FLOWER EXTRACT. Aspects of visible spectrophotometry can be
presented to students using simple experiments in which the color of the crude extract of Macroptilium lathyroides (L.) Urb. is
bleached in the presence of nitrite ions in acidic medium. The dependence of the absorption intensity with time, the reaction
completeness and the Beer law can be demonstrated. Quantitative results for mineral water samples contaminated with nitrite
ions were obtained from a method based on the Griess reaction and a procedure based on the bleaching reaction between the crude
extract and NO2- ions. Both the Griess and the bleaching reactions were found to be time dependent. Recoveries of about 100 -
104% were obtained with these procedures. The use of natural dyes attracted students interest enhancing the teaching process.
Experiments performed by the teaching staff suggested that the proposed methodology can be performed in a 4 h class, with relative
errors ranging from 0.19 to 1.86% in relation to the Griess method.

Keywords: acid-base chemistry; instrumental methods; water/water chemistry.

INTRODUO de sulfito em amostras de vinho branco17, baseada na reao de

O uso de extratos brutos de flores no ensino de qumica foi relata-
do em diversas oportunidades1-8, uma vez que tal abordagem pode
ajudar o estudante a estabelecer uma conexo entre a qumica e as
substncias encontradas no seu cotidiano. As antocianinas so flavo-
nides presentes em um grande nmero de tecidos vegetais incluindo
flores e frutas, conferindo-lhes as cores vermelha e azul9,10. Quando
extradas do meio natural, usualmente apresentam molculas de a-
car ligadas aos grupos hidroxila nas posies 3 e/ou 4. Quando livres
destas molculas de acar so chamadas antocianidinas, cuja estru-
tura genrica apresentada na Figura 1 com atribuio usual dos to-
mos de carbono10. Dependendo dos substituintes, nas posies R e R,
define-se uma antocianidina diferente.
Figura 1. Estrutura de uma antocianidina genrica, mostrando as posies
dos tomos de carbono. Dependendo dos substituintes R e R so definidas,
antocianidinas diferente
A primeira aplicao da mudana da cor dos extratos brutos de
flores no ensino de qumica foi relatada por Geissman11 e foi rela-
cionada com as mudanas de cor em funo do pH. Estas mudan-
as de cor ao mudar o pH foram usadas para ilustrar os princpios
bsicos de equilbrio qumico12,13; suas aplicaes como indicado-
res em titulaes cido-base14; nos fundamentos dos mtodos ti-
cos de anlise15 e em cromatografia em camada delgada16, usando
extratos brutos de flores e da casca de feijo preto. A determinao
*e-mail: cavalheiro@iqsc.usp.br
descoramento da soluo contendo o extrato bruto de flores, tam-
bm foi proposta. O baixo custo e a facilidade de preparao des-
tes extratos permitem seu uso em qualquer escola. Em adio, qual-
quer espcie vegetal contendo antocianinas pode ser usada.
Neste trabalho, prope-se o uso do extrato bruto extrado das
flores de Macroptilium lathyroides (L.) Urb. na demonstrao de
princpios de espectrofotometria na regio do visvel e sua aplica-
o na determinao de nitrito artificialmente adicionado em amos-
tras de gua minerais. Os principais objetivos didticos so a de-
monstrao dos princpios bsicos do desenvolvimento de um novo
mtodo tico de anlise, o uso de materiais alternativos em anlise
qumica e a comparao do novo mtodo com procedimentos cls-
sicos. A sensibilidade e a dependncia das reaes qumicas em
relao ao tempo tambm podem ser exploradas. O conjunto de
experimentos aqui descrito poderia ser usado em projeto didtico
inserido em um curso de anlise instrumental e/ou partes dele po-
deriam ser usadas em uma nica aula, para demonstrao de con-
tedos mais especficos.
Os corantes naturais foram extrados das flores de Macroptilium
lathyroides (L.) Urb., (Phaseolus lathyroids (L.), Phaseolus semi-
erectus (L.) D.C., Phaseolus crotalaroides Mort.), que uma
leguminosa de clima tropical originria da Amrica do Sul. Trata-
se de uma planta de ocorrncia anual encontrada no sul dos Esta-
dos Unidos, (Wilde bushbean, Phasey bean), nas Amricas Central
e do Sul (Frijol de monte/Venezuela, Frijol de los arrozales/
Colombia, Feijo de pombinha ou Feijo do campo/Brasil), Aus-
trlia (Murray phasey bean) e no Hava (Wild pea bean). Informa-
es adicionais sobre esta espcie podem ser encontradas na litera-
tura especializada e na internet18.
Uma fotografia da flor do Macroptilium lathyroides (L.) Urb.
apresentada na Figura 2.
Outras espcies contendo antocianinas podem ser usadas como
fonte dos extratos naturais, por ex. a Rhododendron simsii, azlea,
uma planta de origem asitica, cuja flor conhecida em todo mun-
do. Entretanto, a espcie sugerida inicialmente apresenta maior
sensibilidade na anlise, devido maior quantidade de corantes
em suas ptalas.
Vol. 29, No. 5 Determinao de nitrito em guas utilizando extrato de flores
Figura 2. Flor de Macroptilium lathyroides (L.) Urb, popularmente conhecido
como feijo do campo ou feijo de pombinha, encontrada no campus da
UFSCar em So Carlos/SP
FUNDAMENTAO
Consideraes sobre a importncia da determinao do
nitrito
A determinao de nitrito um assunto importante, uma vez
que ele um aditivo alimentcio muito usado na conservao de
carnes e cura de embutidos. O nitrito tambm um potencial agen-
te poluidor de guas naturais, nas quais pode estar presente devido
decomposio de matria orgnica nitrogenada.
O nitrito a base conjugada do cido nitroso, um cido fraco
com pKa = 3,2919. A concentrao de anions nitrito em guas natu-
rais raramente superior a 0,1 mg L-1. Entretanto, adicionado
gua usada em processos industriais, como inibidor da corroso
podendo, assim, estar presente em esgotos19. Por outro lado, sendo
o nitrito um produto da reduo do nitrato, estar freqentemente
presente em sistemas nos quais o on nitrato atue como um oxidante.
Neste sentido, o aumento da concentrao do nitrato carregado pela
lixiviao do solo de propriedades agrcolas para cursos dguas,
vem causando preocupao do ponto de vista ecolgico. Neste caso,
as principais fontes artificiais de nitrato so dejetos animais e ni-
trato de amnio no absorvido dos fertilizantes.
Embora o nitrito seja um poluente de guas, muito til quan-
do usado como agente de cura, fixador de cor e conservante do
flavor em diferentes produtos derivados de carne. O nitrito tam-
bm importante na proteo destes produtos contra microorga-
nismos que podem causar o envenenamento, tal como Clostridium
botulinum20,21, que causa o botulismo. Neste caso, o nitrito segu-
ro se usado nos nveis recomendados, sendo importante o controle
da sua concentrao.
O excesso de nitrito em guas representa um potencial risco
para a sade, pois pode causar a meta-hemoglobinemia (sndrome
do beb-azul) em recm-nascidos e mesmo em adultos com parti-
cular deficincia enzimtica. A quantidade de nitrito deve tambm
ser controlada devido possvel formao de nitrosaminas carci-
nognicas, pela sua reao com aminas secundrias presentes no
estmago de mamferos22. O nitrato pode tambm ser convertido a
nitrito pela ao de algumas enzimas da saliva e bactrias especfi-
cas, de acordo com a reao23:
NO3- + 2H+ + 2e- NO2- + H2O
A sndrome do beb-azul ocorre porque o nitrito oxida os ons
ferrosos da hemoglobina a ons frricos gerando a meta-hemoglo-
1115
bina, que menos eficiente na absoro e transferncia de oxignio
para as clulas. De acordo com o grupo KY Water Watch24, o limi-
te mximo de nitrito em guas ingeridas por bebs de 1,0 mg L-1.
A reao de Griess
O mtodo oficial para determinao do nitrito envolve, geral-
mente, os procedimentos espectrofotomtricos baseados na reao
de Griess25-27, na qual o nitrito reage com a sulfanilamida em meio
cido. O diazo composto formado reage com o cloridrato de N-(l-
naftil)etilenodiamina (NED), gerando um composto de colorao
vermelha intensa, de acordo a Equao 2. A reao controlada
pelo tempo, e o produto deve ser determinado entre 10 min e 2 h
aps a mistura dos reagentes.
A Equao 2 representa um mecanismo de reao usada no
mtodo de Griess, que foi proposto por Sawicki et al. aps investi-
garem 52 sistemas diferentes25-27.
(2)
PARTE EXPERIMENTAL
Instrumentao
Todas as medidas podem ser realizadas em um espectrofot-
metro convencional capaz de realizar leituras na regio do visvel.
No caso deste trabalho, as medidas foram realizadas com auxlio de
um espectrofotmetro Genesis 20 (Spectronic, EUA), usando cubetas
de plstico (polimetacrilato) com caminho tico de 1,0 cm.
Preparao da soluo padro de nitrito 100 mg L-1 (100 ppm)
A soluo padro de ons nitrito 100 mg L-1 (100 ppm) foi pre-
parada dissolvendo-se 0,1500 g de NaNO2 (0,1000 g do on nitrito)
em um balo volumtrico de 1,00 L, completando-se o volume
com gua destilada. O sal foi previamente seco em estufa 105 C
durante 1 h e resfriado em dessecador. Nesta etapa, recomenda-se
rigor ao preparar esta soluo, pois a mesma servir de padro e
estoque para todas as diluies feitas durante todo o experimento.
As solues do nitrito devem ser preparadas recentemente (no
mais que 6 h) e o uso de um reagente PA recm-adquirido e de boa
procedncia fortemente recomendado.
As amostras de gua contaminadas
As amostras contaminadas podem ser preparadas adicionan-
do-se nitrito de sdio em amostras de gua mineral comercial. O
clculo e os resultados descritos aqui so para 5 ppm do on nitrito
(1) e permitem que os resultados permaneam dentro dos limites ana-
lticos da curva para o mtodo proposto e de Griess. Isto pode ser
obtido dissolvendo-se 5,00 mL de uma soluo 100 ppm de nitrito
(0,1500 g de NaNO2 em 1,00 L) em 95,00 mL de gua mineral. Se
1116 Ramos et al.
houver disponibilidade de tempo, trs amostras de gua de dife-
rentes fontes podem ser preparadas permitindo executar clculos
estatsticos. A equipe instrutora pode executar esta etapa. Neste
trabalho, a amostra de nmero 3 foi uma gua mineral com gs,
desgaseificada em banho de ultra-som por 20 min.
Preparao do extrato bruto de flores
Dependendo da disponibilidade de tempo, os estudantes po-
dem preparar os extratos brutos de flores antes do experimento ou,
alternativamente, a equipe instrutora pode prepar-los e fornecer
aos estudantes no incio da aula. O extrato pode ser preparado com
as ptalas recm-colhidas ou congeladas com cuidado. Para obten-
o do extrato bruto foram utilizadas aproximadamente 25 g de
ptalas de Macroptilium lathyroides (L.), ou outra espcie que con-
tenha antocianinas, tais como o de Rodhodendron simsii - azlea,
imersas em 100 mL de etanol. O tempo de extrao estabelecido
foi de 48 h, mantendo-se o material em um frasco de vidro envol-
vido em papel alumnio e temperatura ambiente12,17. Aps filtra-
o, o lquido resultante foi diludo para 250,0 mL com etanol
anidro.
Obteno do espectro de absoro e determinao do
comprimento de onda no mximo de absoro para os
extratos brutos de flores
Para obter os espectros de absoro sugere-se usar uma solu-
o preparada transferindo-se 3,0 mL do extrato bruto para um
balo volumtrico de 25,0 mL e completando-se o volume com
uma soluo de HCl 0,1 mol L-1. Recomenda-se medir o espectro
15 min aps a preparao da soluo, para determinar o compri-
mento de onda do mximo absorbncia (max), uma vez que a
absorbncia aumenta com o tempo, tendendo a um valor constante
aps 15 min. Sugere-se obter o espectro ponto-a-ponto com inter-
valos de 10 nm entre 400-490 nm, de 4 nm entre 490-550 nm,
depois novamente intervalos de 10 nm entre 550-700 nm. A partir
do espectro (grfico da absorbncia em funo do comprimento de
onda), deve-se determinar o comprimento de onda do mximo de
absoro. Alternativamente, pode-se medir a absorbncia no max
para espectros de solues contendo quantidades diferentes de ex-
trato bruto e verificar a obedincia Lei da Lambert-Beer12.
Determinao do nitrito usando o extrato bruto de flores
Uma curva analtica pode ser obtida colocando-se 0,00 (bran-
co), 200, 400, 600, 800 e 1000 L da soluo padro de nitrito 100
ppm e 1000 L do extrato bruto em 5 bales volumtricos diferen-
tes de 25,0 mL e completando-se o volume com uma soluo de
HCl 0,1 mol L-1.
A absorbncia no max (determinado como descrito acima) deve
ser medida 10 min aps preparar a soluo. A reao de descora-
mento dependente do tempo (como a reao de Griess). Assim, o
tempo e as concentraes devem ser controlados com cuidado. Para
obter uma curva analtica do nitrito entre 1,0-4,0 ppm, recomenda-
se que a absorbncia para a soluo do branco em pH 1 aps 10
min seja da ordem de 0,3 unidades. Os resultados obtidos devem
ser lanados na Planilha 1.
Anlise da amostra usando o extrato bruto de flores
A soluo de trabalho pode ser preparada diluindo-se 10,0 mL
da amostra de gua contaminada e 1000 L do extrato bruto com
HCl 0,10 mol L-1 em um balo volumtrico de 25,0 mL. A concen-
Quim. Nova
trao resultante do on do nitrito na soluo de trabalho fica em
torno de 2,0 ppm. A absorbncia no max medida 10 min aps
preparar esta soluo. Os resultados obtidos tambm devem ser
lanados na Planilha 1.
Planilha 1. Resultados obtidos nas determinaes de nitrito em
amostras de gua mineral contaminadas, utilizando o mtodo
proposto com a reao de descoramento do extrato bruto de flores
Solues* Absorbncia em _________ nm
Replicatas
a a
1 2 3a Mdia SD
-
NO2 0,00 ppm
NO2- 0,80 ppm
NO2- 1,60 ppm
NO2- 2,40 ppm
NO2- 3,20 ppm
NO2- 4,00 ppm
Amostra 1
Amostra 2
Amostra 3
*Solues obtidas respectivamente pela diluio de 0,00; 200; 400;
600; 800; 1000 L da soluo padro 100 ppm de nitrito
Determinaes analticas com a reao de Griess
Inicialmente uma soluo de 3,5 ppm em ons nitrito deve ser
preparada pela diluio de 35,00 mL da soluo estoque padro
contendo 100 ppm do on nitrito em 1,00 L. Outras duas solues
devem ser preparadas para a determinao, de acordo com o mto-
do de Griess. Soluo A: deve ser recm-preparada, dissolvendo-
se 0,5 g da sulfanilamida em uma mistura de 5,00 mL de HCl con-
centrado e 30,0 mL da gua. A soluo resultante deve ser diluda
com gua destilada, para 50,0 mL, em balo volumtrico. Soluo
B: deve ser recm-preparada, dissolvendo-se 0,05 g do cloridrato
de N-(1-naftil)etilenodiamina (NED), em gua e diluda para 50,0
mL em balo volumtrico. Esta soluo tem que ser armazenada
em um recipiente escuro. A curva analtica pode ser obtida diluin-
do-se 1,00; 2,00; 3,00; 4,00; e 5,00 mL da soluo padro 3,5 ppm
do on nitrito para 100,0 mL em cinco bales volumtricos dife-
rentes, resultando nas seguintes concentraes 0,80; 1,59; 2,39;
3,19; 3,99 ppm (mg L-1). Ento, 25,0 mL de cada padro devem ser
transferidos para bqueres (gua para o branco) com 0,50 mL da
soluo A (sulfanilamida). Depois da mistura, a soluo deixada
por 2-8 min a fim de completar a reao de diazotao (Equao
1). Finalmente, 0,50 mL da soluo B (NED) so adicionadas
mistura resultante e homogeneizadas. A formao da cor depen-
dente do tempo e a absorbncia em 543 nm foi medida aps 15 min
para o branco e os padres. Os resultados obtidos devem ser lana-
dos na Planilha 2.
Anlise das amostras usando o mtodo de Griess
A anlise das amostras deve ser feita transferindo-se 600 L da
gua mineral contaminada para bales volumtricos de 25,0 mL
e completando-se o volume com gua destilada. Estas solues
so transferidas para bqueres e misturadas s solues A e B exa-
tamente como descrito acima, para os padres. A formao da cor
dependente do tempo e a absorbncia deve ser medida em 543
nm, aps 15 min. Os resultados obtidos tambm devem ser lana-
dos na Planilha 2.
Vol. 29, No. 5 Determinao de nitrito em guas utilizando extrato de flores 1117

Planilha 2. Resultados obtidos nas determinaes de nitrito em O cloridrato de N-(1-naftil)etilenodiamina (NED) irritante
amostras de gua mineral contaminadas, utilizando o mtodo aos olhos, ao sistema respiratrio e pele. Em caso de contato com
de Griess olhos, deve-se enxaguar imediatamente com grande quantidade de
gua e procurar auxlio mdico32.
Solues* Absorbncia em _________ nm
Replicatas RESULTADOS ESPERADOS E DISCUSSO
a a a
1 2 3 Mdia SD
Os resultados descritos a seguir foram obtidos pelos autores
-
NO2 0,000 ppm deste trabalho. Inicialmente, pensou-se no uso de embutidos de
NO2- 0,035 ppm carne como fonte de nitrito. Entretanto, o preparo de amostra re-
NO2- 0,700 ppm quer um nvel de treinamento e habilidade, que levaria a uma de-
NO2- 0,105 ppm mora muito grande no desenvolvimento dos trabalhos.
NO2- 0,140 ppm Desta forma, uma prtica semelhante, visando determinao
NO2- 0,175 ppm de nitrito em guas, foi proposta a 20 alunos do curso de Engenha-
Amostra 1 ria de Produo Qumica da UFSCar. Os aspectos didticos foram
Amostra 2 bastante satisfatrios quanto motivao e ao interesse dos alunos
Amostra 3 pelos resultados obtidos, principalmente em relao ao uso de in-
*Solues obtidas respectivamente pela diluio de 0,00; 1,00; 2,00; dicadores naturais, o que levou a uma facilitao da discusso do
3,00; 4,00; 5,00 mL da soluo padro 3,5 ppm de nitrito. contedo envolvido: espectrofotometria, cintica de reao, deter-
minao usando curva analtica, estatstica de resultados, reao
de Griess, reao de descoramento e qumica de antocianinas, com-
Resumos das atividades a serem desenvolvidas pelos alunos parao de resultados entre mtodos analticos, entre outros. O
desenvolvimento dos trabalhos experimentais e sua discusso fo-
Deve ser solicitado aos estudantes que executem as seguintes ram feitos em duas aulas de 4 h de durao.
atividades: Optou-se por usar as unidades em ppm (mg L-1), por serem
a. traar o espectro de absoro para a soluo do extrato bruto muito usuais nas anlises de gua, inclusive nos rtulos das amos-
de flores e determinar o comprimento de onda no mximo de tras empregadas.
absoro;
b. traar a curva analtica com o extrato bruto de flores e calcular Espectros de absoro na regio do visvel
o teor de nitrito nas amostras, usando os dados da Planilha 1.
As medidas podem ser realizadas em triplicata; Um espectro de absoro tpico do extrato de Macroptilium
c. traar curva analtica com o mtodo de Griess e calcular o teor lathyroides (L.) Urb. (feijo de pombinha) apresentado na Figura
de nitrito nas amostras, usando os dados da Planilha 2. As me- 3, com max em 526 nm. A insero nesta figura mostra em detalhe o
didas podem ser realizadas em triplicata; comportamento da absorbncia para diferentes quantidades: 1,0 -
d. verificar se os resultados esto de acordo com regulamentos 5,0 mL do extrato bruto em 25,0 mL de HCl 0,1 mol L-1 (pH 1,0).
ambientais e com nveis definidos pela legislao local, caso Um aumento linear da absorbncia observado, de acordo com a
haja tais recomendaes; Lei de Lambert-Beer. Resultados similares foram observados para o
e. se executar a experincia com replicatas, determinar o valor extrato bruto da Rodhodendron simsii (azlea), com pequenas mu-
mdio e o desvio padro; danas na posio do max (resultados no apresentados. Ver ref. 12).
f. se for realizado o projeto completo, comparar os resultados do
mtodo de Griess e do extrato bruto de flores usando estatsti-
ca de comparao de mdias28;
g. comparar os resultados com os colegas de classe, que tenham
desenvolvido o mesmo projeto.

Cuidados com os reagentes utilizados

A ingesto freqente de pequenas doses de nitrito pode levar

hipotenso (diminuio na presso sangunea), taquicardia (acele-
rao do pulso), dor de cabea e distrbios visuais. A ingesto oral
de grandes quantidades de nitrito pode causar nusea, vmito e,
em casos extremos, coma. Os compostos carcinognicos, como
nitrosaminas, so sintetizados pela reao de nitritos com alguns
produtos qumicos presentes em alimentos, no estmago. O FDA,
(Food and Drug Administration - rgo do governo norte-ameri-
cano, que regula alimentos e produtos farmacuticos), indica que a Figura 3. Espectro de absoro do extrato bruto das flores de Macroptilium
adio de vitamina C diminui a formao das nitrosaminas29. Ape- lathyroides (L.) Urb. obtido aps 20 min da diluio com HCl 0,10 mol de L-1.
sar destes problemas, o nitrito pode ser usado como antdoto na Em detalhe a demonstrao do aumento na absorbncia com a quantidade
ingesto de cianeto. Tambm atua como vasodilatador, diminuin- do extrato, que demonstra a obedincia Lei de Lambert-Beer em 526 nm
do a presso sangunea e alivia espasmos musculares.
A sulfanilamida, alm de ser um bactericida30, pode ser preju- Dependncia da absorbncia com o tempo, no max
dicial se ingerida ou inalada, podendo agir como um irritante e
provocar anemia31. A cor do extrato muda rapidamente de roxo para vermelho,
1118
Figura 4. Equilbrios cido-base envolvendo as antocianinas em diferentes pH
com a adio de HCl. Por outro lado, a intensidade da absorbncia
aumenta lentamente com o tempo. Brouillard et al.33,34 propuseram
que um salto de pH de 5 para 1 causa uma reao rpida de proto-
nao das antocianinas presentes no extrato. Tais equilbrios ainda
esto sob investigao e um conjunto de reaes propostas para
explicar tais mudanas da cor foi descrito por Epp35 e so apresen-
tados na Figura 4.
A mudana na absorbncia em 526 nm quando o extrato bruto
diludo com o HCl 0,1 mol L-1 mostrada em Figura 5, que ilus-
tra um comportamento assinttico, que tende a alcanar o equil-
brio aps 15 min de reao. Na presena de ons nitrito o extrato
colorido descorado, entretanto a reao ainda no foi totalmente
elucidada.
Figura 5. Mudanas na absoro do extrato bruto em uma soluo contendo
1,0 mL do extrato bruto das flores de Macroptilium lathyroides (L.) Urb. e
10,0 mL de HCl 0,25 mol L-1 em um volume de 25,0 mL, (pH final ~1.0) em
funo do tempo. = 526 nm
No caso do sulfito, o nion reage com a antocianina provocan-
do seu descoramento17. A adio do SO32- na posio C-4 do on
flavlio bloqueia a delocalizao eletrnica na molcula de
antocianina, provocando diminuio na intensidade de cor da solu-
o.
Ramos et al. Quim. Nova
Apesar de Iacobucci e Sweeny36 terem descrito reaes das
antocianinas com diversos oxidantes, redutores, nuclefilos e
eletrfilos, nenhuma referncia foi encontrada sobre reaes com
nitrito e outros ons normalmente presentes em guas naturais, tais
como o Cl-, SO42-, NO3-, o HCO3- e outros que poderiam interferir
no procedimento proposto.
Fichtner et al.37 descreveram que a reao de nuclefilos na
posio C-4 ocorre mais rapidamente que na posio C-2 e investi-
garam a cintica das reaes de ons flavlio com -nuclefilos
diferentes do nitrito. Com base em tais resultados, os autores con-
cluram que as substituies ocorrem principalmente na posio
C-4. No presente estudo observou-se que o descoramento das
antocianinas pelo nitrito mais eficiente em pH 1,0.
A exemplo do que ocorre com o hipoclorito38, a reao poderia
ser representada por:
antocianidina + NO2- + H+ produto incolor desconhecido (3)
Esta reao causar uma diminuio contnua na absorbncia,
enquanto compete com o equilbrio cido-base, como representa-
do pelas curvas de absorbncia em funo do tempo, para diferen-
tes concentraes de nitrito, apresentadas na Figura 6. Pode-se
observar nesta figura que, para baixas concentraes de nitrito,
somente aps aproximadamente 5 min a reao de descoramento
superar o aumento de absorbncia, devido formao da forma
vermelha da antocianina. Este fato influencia marcadamente os
parmetros das curvas analticas para o sistema extrato bruto -
nitrito, cuja reao tambm dependente do tempo.
As melhores correlaes lineares para curvas analticas foram
obtidas quando as absorbncias foram lidas 5 ou 10 min aps a
mistura dos reagentes, como ilustrado na Figura 6. Quando o ex-
trato de Rodhodendron simsii (azlea) foi usado, um comporta-
mento similar foi observado. Para tempos de reao menores que 5
e maiores que 10 min, as curvas analticas apresentam piores coe-
ficientes de correlao linear, apesar de que as medidas tomadas
aps longos tempos de reao melhorem a sensibilidade, provo-
cando maior descoramento da soluo de corante natural.
Com base nestas observaes, sugere-se o uso de 10 min uma
vez que melhor sensibilidade pode ser obtida, com coeficiente de
Vol. 29, No. 5 Determinao de nitrito em guas utilizando extrato de flores 1119

dres. importante observar que, devido magnitude das concen-

Figura 6. Dependncia da absorbncia com o tempo na reao de
descoramento para diferentes concentraes de nitrito. Extrato bruto das
flores de Macroptilium lathyroides (L.) Urb. = 1,0 mL, pH 1,0. = 526 nm
correlao indicando boa linearidade, pois a reao de descoramento
se torna mais significativa que o equilbrio cido-base a partir de
ento.
As curvas analticas obtidas aps 1, 5, 10 e 15 min de reao,
sob as mesmas circunstncias so apresentadas na Figura 7, e re-
presentam a mdia de trs determinaes para cada um dos pa-
traes de nitrito usadas neste trabalho, se sugere que a absorbncia
da soluo do extrato bruto (branco) deva ser ao redor 0,3 unidades
aps 10 min e que a regio linear de resposta para o on do nitrito
foi observada para concentraes acima de 1,0 ppm.
Uma curva analtica obtida sob as mesmas condies, mas usan-
do o extrato bruto da Rodhodendron simsii (azlea), 10 min aps
misturar os reagentes obedeceu relao linear: Abs = 0,868
0,00605 [NO2-] (R = -0,9992, n=5), sugerindo que o extrato bruto
de qualquer outra espcie contendo antocianinas pode ser usado
neste tipo de determinao. Entretanto, a sensibilidade pode variar
devido aos diferentes teores de corantes em cada espcie.
Os resultados para as amostras de gua mineral contamina-
das com 5,00 ppm de ons nitrito, determinados aps 10 min de
reao so apresentados na Tabela 1. Esta tabela compara tambm
os resultados para o mtodo proposto com os aqueles obtidos usan-
do a reao de Griess, a qual tambm dependente do tempo. Os
resultados de ambos os mtodos esto de acordo, com erros relati-
vos menores que 2% em relao aos dois mtodos e concordam
entre si com 95% de confiana, de acordo com o teste t-Student
para comparao de mdias (Tabela 1)28.
As medidas realizadas aps 5 min de reao, permitiram au-
mentar a freqncia analtica, porm com ligeira perda de sensibi-
lidade.
DESTAQUES DIDTICOS

a) O uso dos produtos qumicos extrados dos materiais do cotidi-

Figura 7. Curvas analticas para nitrito determinadas em diferentes tempos
aps mistura dos reagentes. Extrato bruto de Macroptilium lathyroides (L.)
Urb. = 1,0 mL, pH 1,0, = 526 nm. Os dados da regresso linear so: 1 min:
A = 0,273 0,0057 [NO2-] (R = -0,8097, n = 5); 5 min: A = 0,281 0, 0165
[NO2-] (R = -0,9992, n = 5); 10 min: A = 0,281 0,0283 [NO2-] (R = -0,9999,
n = 5); 15 min: A = 0,280 0,0369 [NO2-] (R = -0,9945, n = 5)
ano, como as flores, reala a viso da importncia da qumica
na vida. Adicionalmente, a anlise de nitrito por um mtodo
alternativo representa uma conexo desejvel da qumica com
a contaminao das guas e outros assuntos ambientais.
b) Antes de executar as anlises do nitrito, foi solicitado aos estu-
dantes que obtivessem o espectro de absoro dos extratos co-
loridos da flor, e determinassem o comprimento de onda no
mximo de absorbncia. Isto representa uma conexo desej-
vel entre as cores e os espectros de absoro visualizados. A
determinao ponto-a-ponto do espectro dar melhor compre-
enso do funcionamento do espectrofotmetro, em relao ao
uso de instrumentos computadorizados, geralmente dispon-
veis nas etapas mais avanadas da carreira. Alm disso, nem
sempre se dispe de espectrofotmetros sofisticados nos cur-
sos de graduao.
c) A dependncia do tempo da protonao, representada na Figu-
ra 5, pode ser explorada em classe, conduzindo a uma discus-
so interessante da dependncia dos mtodos de anlise em
relao cintica qumica, associada com o esquema da rea-
o de Brouillard et al.33,34.
d) As diferentes curvas analticas, mostradas na Figura 7, impli-

Tabela 1. Resultados da determinao do on nitrito obtidos com a reao de descoramento do extrato bruto de flores e pela reao de
Griess para as mesmas amostrasa de gua mineral contaminada
NO2- / mg L-1
Amostras Mtodo proposto Griess Recuperaof / % |%E| b
tcalcg
1d 5,25 0,25c 5,35 0,07 100 1,86 0,667
2d 5,45 0,34 5,39 0,03 104 1,11 0,304
3e 5,33 0,17 5,34 0,05 102 0,19 0,098
a
Estes resultados foram obtidos para as amostras que continham 5,25 ppm de nitrito; b |%E| = [(Griess - proposto) / Griess] x 100; c mdia
de trs determinaes desvio padro; d gua mineral sem gs; e gua mineral desgaseificada em banho de ultra-som durante 20 min;
f
recuperao: [Proposto / 5,25] x 100; g valores calculados para o teste t-Student, para 95% de confiana, t = 4,303 (n = 3)28.
1120
cam que um menor tempo de anlise necessrio, quando as
determinaes so executadas aps 5 min. Por outro lado, a
sensibilidade do mtodo melhor quando a anlise feita aps
10 min de reao, pois a competio entre as reaes qumicas
envolvidas menor. Uma discusso interessante pode ser rea-
lizada sobre o compromisso entre um tempo mais curto de an-
lise e uma maior sensibilidade.
e) O trabalho pode ser estendido e ampliado na sua abrangncia
abordando-se outros aspectos, tais como a cintica de reao
de protonao, tratando-se os dados obtidos na Figura 4. O me-
canismo envolvido nas mudanas estruturais tambm pode ser
abordado. Tratando-se de uma qumica muito rica envolvida,
muito se pode explorar do trabalho, a cargo e considerando os
objetivos didticos de sua aplicao.
AGRADECIMENTOS
Ao Prof. Dr. M.G. Neumann (IQSC-USP) pelos comentrios e
sugestes, FAPESP pelo suporte financeiro (projetos 98/13873-
0, 00/14486-2 e 04/00407-4) e ao Programa PROCONTES/USP.
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