PESQUISA Revista Brasileira de Cincias da Sade

Research DOI:10.4034/RBCS.2014.18.03.05 Volume 18 Nmero 3 Pginas 219-224 2014

ISSN 1415-2177

Anlise de Resduos de Diclofenaco Sdico

Veterinrio em Leite por Espectroscopia no
Infravermelho Prximo
Analisys Of Residues Of Veterinary Sodium Diclofenac in Milk through
Near Infrared Spectroscopy

LEANDRO DA CONCEIO LUIZ1*

MARIA JOS VALENZUELA BELL2
RONEY ALVES DA ROCHA3
THIAGO DE OLIVEIRA MENDES4
VIRGLIO DE CARVALHO DOS ANJOS5

RESUMO
Introduo: O leite um dos alimentos mais consumidos no mundo,
principalmente por crianas e idosos. Em 2007, a Polcia Federal
realizou uma operao que apontou um gigantesco esquema de fraudes
em leites comercializados no Brasil, constatou-se ainda que 1/3 do
leite consumido no Brasil no passava por fiscalizao. Muitas so as
adulteraes: adio de gua, soda custica, cloreto de sdio, entre
outros. No entanto, ainda h outro problema, o da contaminao por
frmacos veterinrios. Estes podem estar presentes em altas
concentraes no leite caso este tenha sido ordenhado dentro do
perodo de carncia da vaca. O leite contaminado pode causar srios
dados sade do consumidor ou ento causar prejuzos para a
produo de seus derivados. Objetivo: Desenvolver uma tcnica
complementar para detectar a presena de resduos de medicamentos
veterinrios em amostras de leites. Material e Mtodos: Atualmente,
com o desenvolvimento tecnolgico h muitas tcnicas de anlise
multielementar que permitem estudar os componentes qumicos de
determinadas amostras. O presente trabalho utiliza a tcnica de
Espectroscopia no Infravermelho Prximo por Transformada de Fourier
FT-NIR e a Anlise de Componentes Principais PCA para detectar a
presena de resduos do medicamento veterinrio em leites. Para
isto, simulou-se adulterao do leite com percentuais de (0,1; 0,5 e
10)% de frmaco no leite. Resultados: Crioscopia: 0,539 H com
0,18% de gua; leite no cido pelo teste do Alizarol; pH 6,71; Gordura:
3,25%; Protena: 3,01%; Lactose: 4,55%; Slidos: 10,80%. Resduos
do frmaco foram observados via derivada primeira de espectros de
refletncia, e anlise de PCA em nveis inferiores a 1%. Concluso:
o sistema FT-NIR pde detectar os resduos dos frmacos estudados
dentro dos percentuais simulados.
ABSTRACT
Introduction: Milk is one of most consumed food by human beings,
especially children and elderly. In 2007, the Federal Police conducted
an operation that showed an enormous fraud scheme in industrialized
milk in Brazil. In addition, they found out that 1/3 of the milk consumed
in Brazil did not pass by inspection. There are several ways to adulterate
milk, such as with addition of water, caustic soda, sodium chloride
and others. However, there is another issue, that is, milk contamination
with veterinary drugs. These drugs may be present in high
concentrations in milk, in case the cow was milked in the clearance
period. Contaminated milk can cause damages to consumers health
or injury to the production of derivates. Objective: To develop a
complementary technique to detect the presence of residues of
veterinary drugs in milk samples. Material and Methods: currently,
given the technological development, there are many techniques
based on multielement analysis for studying the chemical components
of different samples. This paper uses the technique of Fourier
Transform Near Infrared Spectroscopy and the Principal Components
Analysis (PCA) to detect the evidence of residues of veterinary
drugs in milk. To this end, we simulated adulteration in milk with
percentages of 0.1%, 0.5% and 10% drugs in milk. Results: cryoscopy:
0.539 H with 0.18% water; non-acid milk according to Alizarol test; pH
6.71; Fat: 3.25%; Protein: 3.01%; Lactose: 4.55%; Solids: 10.80%.
Drug residues were observed via the first derivative of reflectance
spectra and PCA analysis at levels below 1%. Conclusion: The result
was positive indicating that the FT-NIR system can detected the
residues of studied drugs within the simulated percentage.

DESCRITORES
DESCRIPTORS
Leite. Frmaco. Diclofenaco. Espectroscopia de Luz Prxima ao Milk. Drug. Diclofenac. Spectroscopy, Near-Infrared.
Infravermelho.

1 Professor Adjunto do Curso de Farmcia da Faculdade Bezerra de Arajo (FABA). Doutorando em Fsica pelo Departamento de Fsica da
Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), Juiz de Fora/MG, Brasil.
2 Professora Doutora Associada da Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), Juiz de Fora/MG, Brasil.
3 Ps-Doutorando em Fsica (Espectroscopia e Anlise de Fraudes em Alimentos) na Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), Juiz de Fora/MG,
Brasil.
4 Doutorando em Fsica na Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), Juiz de Fora/MG, Brasil
5 Professor Doutor Associado da Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), Juiz de Fora/MG, Brasil.

http://periodicos.ufpb.br/ojs2/index.php/rbcs
 CONCEIO LUIZ et al.
O
leite est presente na vida do ser humano desde
o seu nascimento, sendo, geralmente, o primeiro
alimento. Em sua composio ele apresenta
diversos componentes, tais como protenas, vitaminas,
gordura, carboidratos e sais minerais (principalmente o
clcio), sendo considerado uma das mais completas
fontes de nutrientes para os seres humanos1,2. Por ser
um alimento muito consumido, especialmente por
crianas e idosos, devido ao seu grande valor
nutricional, analis-lo de grande importncia tanto para
os consumidores quanto para as indstrias e
produtores. Em 2007, foi realizada pela Polcia Federal a
operao denominada Ouro Branco que teve como
objetivo combater crimes contra a sade pblica e
relaes de consumo 3 . A operao revelou um
gigantesco esquema de fraude na distribuio do leite
UHT constatando que 1/3 deste alimento to consumido
no Brasil no passava por fiscalizao 4 . Outra
preocupao em relao segurana do leite o uso de
frmacos ou drogas veterinrias nas vacas leiteiras.
Sempre que for necessrio administrar um medicamento
vaca leiteira, deve-se estar atento para a possibilidade
da presena de resduos no leite. A presena destes
preocupante, pois podem proporcionar consequncias
sade humana, tais como reaes alrgicas e txicas5,2.
O leite contaminado por substncias qumicas, como os
frmacos, considerado adulterado e imprprio para o
consumo6,2. Estudos mostraram que o uso inadequado
de anti-inflamatrios no somente podem provocar
efeitos colaterais txicos como tambm a exposio em
longo prazo de fenilbultazona provocou tumores renais
em cobaias7. rgos Pblicos se esforam para tal
fiscalizao e contam com o auxilio de pesquisas
adjacentes. No Brasil, h dois programas nacionais que
monitoram a presena de resduos de medicamentos
veterinrios em produtos de origem animal. O Plano
Nacional de Controle de Resduos e Contaminantes
(PNCRC) coordenado pelo Ministrio da Agricultura,
Pecuria e Abastecimento (MAPA) e inclui programas
setoriais para anlise de carne, leite, ovos, mel e
pescado. O Programa de Anlise de Resduos de
Medicamentos Veterinrios em Alimentos (PAMVet), da
Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA),
analisa leites: UHT, em p e pasteurizado8. H alguns
mtodos destinados a anlise da qualidade do leite,
contudo os testes microbiolgicos disponveis so
relativamente lentos e inespecficos para alguns
frmacos, como por exemplo, a tetraciclina, enquanto
os imunoensaios so muito caros. J os mtodos fsico-
qumicos (Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
HPLC e Espectroscopia de Massa) incluem passos
complexos, pequenas quantidades de amostras
analisadas por unidade de tempo e treinamento de
220
pessoal 9. Os mtodos empregados para anlise de
resduos de frmacos veterinrios em leite tendem a
priorizar a rapidez do resultado, pois necessrio
viabilizar a liberao do lote o mais rapidamente para o
processamento10. A espectroscopia por infravermelho
combinada com quimiometria permite analisar matria-
prima sem mtodo demorado de preparao de amostras.
Este trabalho apresenta um mtodo que permite analisar
a presena de resduos de medicamentos veterinrios
em leites. Para isto, simulou-se, em percentuais os
resduos dos medicamentos nas amostras de leite e
utilizou-se a tcnica de Espectroscopia no Infravermelho
Prximo por Transformada de Fourier (FT-NIR) para
detect-los. Finalizando, realizou-se uma Anlise de
Componentes Principais (PCA) com objetivo de analisar
estatisticamente, principalmente os resultados obtidos
abaixo de 1%. Pelo fato de ter um baixo percentual de
resduos de frmacos nas amostras analisadas, o que
acredita-se estar prximo do real. Esta anlise estatstica
fornece uma melhor observao distintiva dos leites
contaminados, quando comparado anlise dos
espectros.
Espectroscopia no Infravermelho
A espectroscopia no infravermelho (IR) uma
tcnica analtica muito comum usada em diversas reas.
A regio infravermelho foi detectada, em 1800 por Sir
William Herschell e est situada na faixa de nmero de
ondas entre 14290 e 200 cm -1 do espectro
eletromagntico. O IR pode ser subdividido de acordo
com seu comprimento de onda em: IR Prximo (14290-
4000 cm-1), IR Mdio (4000-400 cm-1), IR Trmico (400-
200 cm-1) e IR Longnquo (1-500 cm-1)11. Ao incidir sobre
uma molcula a radiao IR altera os modos rotacionais
e vibracionais da mesma. A absoro no infravermelho
ocorre quando a frequncia da radiao, multiplicada
pela constante de Planck, tem o mesmo valor da diferena
de energia entre dois estados vibracionais, ou seja, o
processo envolve uma ressonncia entre a diferena de
nveis de energia da molcula e a radiao
eletromagntica. A tcnica utilizada neste trabalho foi a
espectroscopia no Infravermelho prximo (NIR- Near
Infrared Spectroscopy). A NIR tem sido adotada e bem
aceita nas indstrias farmacuticas em processos de
monitoramento e controle de qualidade de produtos12.
MATERIAL E MTODOS
As anlises foram realizadas no Laboratrio de
Espectroscopia de Materiais (LEM) do Departamento
de Fsica da Universidade Federal de Juiz de Fora/MG.
R bras ci Sade 18(3):219-224, 2014
 Anlise de Resduos de Diclofenaco Sdico Veterinrio em Leite por Espectroscopia no Infravermelho Prximo
Amostras
Foi feito um levantamento bibliogrfico dos
frmacos veterinrios de uso frequentes em bovinos,
devido s patologias mais comuns, tais como a mastite13.
Verificou-se que h diversos frmacos disponveis, os
mais comuns so os antimicrobianos e anti-
inflamatrios14. Optou-se por escolher o diclofenaco
sdico 225,0 mg por estar entre os mais utilizados, ser
mais acessvel e por possuir reaes adversas severas7.
Para amostras, utilizou-se o leite pasteurizado tipo A
integral homogeneizado comercializado na regio de Juiz
de Fora-MG. Antes de iniciar as medidas no FT-NIR foi
feita uma anlise da qualidade do leite que seria
misturado ao frmaco. Ento, realizou-se os testes de:
crioscopia, alizarol, medida de pH, gordura, protena,
lactose e slidos com trs amostras de leites distintos,
porm do mesmo fabricante, com mesmo lote e validade.
A tabela I mostra os resultados obtidos. Aps verificar
que o leite estava em condies ideais, cada amostra foi
preparada com percentuais nas seguintes propores
(0,1 e 99,9; 0,5 e 99,5; 10 e 90) % de frmaco e leite,
respectivamente.
Anlise por Infravermelho
Para anlise qualitativa das amostras utilizou-se
o equipamento de Espectroscopia no Infravermelho
Prximo Analisador FT-NIR Multi Propsito MPA da
Bruker utilizando o software OPUS. Foram realizadas 3
medidas, no modo reflectncia, com 32 scans cada, para
cada amostra simulada, porm em cada medida as
amostras foram preparadas novamente. A anlise dos
espectros foi feita no software OriginPro 8.
R bras ci Sade 18(3):219-224, 2014
Anlise de Componentes Principais (PCA)
Com a capacidade dos instrumentos analticos
de produzirem conjuntos de dados cada vez maiores e
mais complexos e tambm com a evoluo dos
computadores que permitem trat-los agilmente, houve
a necessidade de aplicar mtodos estatsticos s anlises
de laboratrios, principalmente em problemas qumicos.
O PCA um algoritmo matemtico que permite reduzir a
dimensionalidade dos dados, mantendo a maior parte
da variao no conjunto de dados. Ele analisa essas
redues por instrues para identificar, chamados de
componentes principais, ao longo do qual a variao
nos dados mxima15,16. A anlise de componentes
principais foi feita atravs do software The
Unscrambler verso 9.2.
RESULTADOS E DISCUSSO
Anlise da qualidade do leite
A Tabela 1 mostra os resultados obtidos para
anlise preliminar feita nas 3 amostras de leite
pasteurizado a fim de verificar se os mesmos estavam
dentro dos limites esperados.
As figuras a seguir referem-se aos espectros de
Leite, Medicamento e Leite+Medicamento obtidos por
FT-NIR. Em determinados percentuais a anlise direta
atravs dos espectros no muito eficiente, ento fez-
se necessrio o uso da derivada primeira para que o
espectro se tornasse mais distintivo. Os eixos: horizontal
inferior e vertical esquerda se referem ao espectro de
reflectncia, j os eixos horizontal superior e vertical
direita se referem derivada primeira.
221
 CONCEIO LUIZ et al.

Leites e medicamentos puros

Figura 1. Espectro das amostras individuais de

leites e do frmaco puros.

90% de Leite adicionado 10% do frmaco

Figura 2. Espectro das amostras com 90% de leite

adicionado 10% do frmaco.

99,9% de Leite adicionado 0,1% do frmaco

Figura 3. Espectro das amostras com 99,9% de

leite adicionado 0,1% do frmaco.

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 Anlise de Resduos de Diclofenaco Sdico Veterinrio em Leite por Espectroscopia no Infravermelho Prximo
Observando as figuras acima possvel
identificar com clareza a presena dos resduos de
diclofenaco sdico nos percentuais analisados, at
mesmo em 0,1%, atravs da derivada primeira. No
entanto, em percentuais abaixo de 1% a anlise do
espectro deve ser mais minuciosa pelo fato das
alteraes nas linhas espectrais serem muito pequenas.
Sendo assim, foi feita uma anlise de componentes
principais (PCA) nos percentuais abaixo de 1%. A figura
4 mostra o grfico dos scores, com os dois componentes
principais (PC1 e PC2) correspondendo 100% da
varincia observada. Observa-se que os leites contami-
nados com resduos de diclofenaco sdico, mesmo em
percentuais pequenos, esto agrupados (marcados) na
parte superior do quadrante direito, enquanto o leite
pasteurizado puro no direito inferior. Esta distino
quase que imperceptvel no espectro das figuras 2 e 3, e
muito pouco no espectro da derivada primeira.
CONCLUSO
A anlise preliminar feita com as amostras de
leite, mostrou que todas elas estavam dentro do padro
aceitvel para um leite de tima qualidade, assim
qualquer alterao nos mesmos no prejudicariam as
medidas feitas posteriormente.
REFERNCIAS
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R bras ci Sade 18(3):219-224, 2014
Figura 4. Grfico da anlise
estatstica por PCA para as
amostras de leite pasteurizado
puro, diclofenaco sdico puro,
e leite adicionados ao frmaco
em percentuais (99,5 para
0,5)% e (99,9 para 0,1)%,
respectivamente.
A tcnica de FT-NIR acrescida da anlise
estatstica conseguiu alcanar o objetivo proposto, pois
os leites contaminados com o frmaco diclofenaco
sdico em diferentes percentuais, inclusive abaixo de
1% foram facilmente detectados. A tcnica apresentada
se destacou por ser uma tcnica rpida, feita em poucos
segundos e tambm de fcil operao. A PCA foi
fundamental para a identificao do leite contaminado
com o medicamento veterinrio, mesmo em percentuais
baixos (0,1 e 0,5)%, pois nestes percentuais, e
consequentemente tambm em menores, uma primeira
anlise por meio dos espectros no visualmente
distinguvel. Isto mostra que a tcnica de FT-NIR com
uma anlise estatstica, como a PCA, pode ser utilizada
como tcnica complementar s outras j utilizadas para
tal anlise. Este trabalho tratou-se de um mtodo
simulado, para treinamento de equipamento, software e
pessoal, mas posteriormente pretende-se utiliz-lo para
anlise de leites contaminados em vacas em perodo de
carncia. Espera-se com este trabalho apresentar mais
uma tcnica de anlise para tal estudo, oferecendo
opes para laboratrios que possuem instrumentos
diferentes daqueles usados como padro, aumentando
assim a fiscalizao para que, a qualidade deste alimento
amplamente consumido no Brasil, inclusive por crianas
e idosos seja cada vez melhor e confivel.
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Correspondncia
Leandro da Conceio Luiz
Estrada do Tingu, 3245, Condomnio Gara Branca, casa
15, Campo Grande
Rio de Janeiro Rio de Janeiro - Brasil
CEP 23065-010.
E-mails: mrleandroluiz@hotmail.com/
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