Deteco de Vrus em

Mamferos Marinhos
Disciplina CBS 06008 Virologia
Bsica
M.Vet. Catarina Marcon Chiappetta
Quem so:
Mamferos marinhos
Cetceos
Odontocetos
Misticetos

Carnvoros
Pinipedes
Focdeos
Otarideos
Ursdeos
Musteldeos

Sirnios
Importncia:

Apesar de no existirem dados suficientes

que avaliem a extenso de ameaas a
diversas espcies de mamferos aquticos,
suas caractersticas biolgicas os tornam
mais vulnerveis que outros grupos
taxonmicos
 De um modo geral, so espcies com
baixas taxas reprodutivas, crescimento
lento e potencial bioacumulador

Diversas categorias de ameaa so

especialmente preocupantes,
considerando seu impacto sobre o
ambiente aqutico
 Cultura de no tratamento de efluentes
No RS, 85% do esgoto cloacal no tratado
Na ltima dcada houve um aumento de
estudos sobre a presena de vrus em guas
de esturios e fontes de esgoto possveis
fontes de contaminao do ambiente aqutico

Sobrepesca de espcies que servem de

alimento para mamferos marinhos
Insero de patgenos em
populaes de mamferos
marinhos:
Espcies domsticas como fonte de origem
Invaso de habitats por ao antrpica
Aumento do contato entre silvestres e domsticos
Ex: CDV em focas

Efeito rebote de tentativas de conservao

Condies do cativeiro
Reproduo assistida
Translocao de patgenos
Ex: Lepto em focas durante processo de reabilitao
 Alm disso, existem fenmenos naturais
como alteraes climticas que podem
afetar a proliferao e/ou transporte de
patgenos
Vetores
Espcies reservatrio
 O grande desafio da preveno da
propagao de uma determinada doena
no oceano baseia-se no fato que: uma vez
introduzida uma doena emergente seus
resultados podem ser devastadores
Fator Imunolgico

Adaptaes para um determinado

espectro de patgenos aquticos

Fatores imunodepressores constantes

Hipoxia
Presses hiperbricas
Baixas temperaturas
Viroses emergentes em cetceos

Papillomavrus
Morbillivrus dos botos
Morbillivrus dos golfinhos
Morbillivrus das baleias-piloto
Morbillivrus ainda no classificados
Arbovrus (Togaviridae)
Hapadnavrus (hepatite)
Viroses emergentes em pinpedes

Herpesvirus das focas tipo 1 e 2

Morbillivirus das focas
CDV
Morbillivirus das focas-monge tipo WA e G
Influenza B
Coronavrus
Viroses emergentes em manatis

Papilloma

Viroses emergentes em ursos-

polares
Morbillivrus endmico
Deteco viral
Anos 1990 aumento dos estudos impulsionado
pelos surtos de morbillivrus em cetceos e
pinpedes em diversos locais

Baseados em:
Isolamento cultivos primrios de clulas de
pinpedes e cetceos
Deteco de Ags com base em reaes cruzadas com
Acs humanos ou de animais domsticos
Morfologia
MOLECULAR
Principais viroses
Poxvrus

Maiores vrus de animais

Envelopado quando liberado por
brotamento
Genoma - uma mlcula de DNA fita-
dupla 140-280 kb
Replicao intracitoplasmtica
Varolas, Vaccnia, Ectima Contagioso,
Ausdik,...
Poxvrus
Leses vesiculares e crostosas na pele ou
mucosa podendo causar manifestaes
sistmicas
Resistentes no ambiente
Infectam a maioria dos vertebrados
Potencial zoontico
Animais silvestres atuando como possveis
reservatrios
Ex: VACV
Poxvrus
Associado com leses de pele em diversas
espceis de cetceos (Tursiops, Orcina,
Delphinus, Lagenorynchus,
Cephalorhynchus, Phocoena) e pinpedes
(Zalophus, Otaria, Phoca, Halichoerus,
Callorhynus)
Poxvrus
Identificado morfologicamente no tecido lesional
Tatoo lesions
Diagnstico costumava ser feito a partir da
visualizao de corpsculos de incluso
intracitoplasmtico eosinoflico e a confirmao
feita por M.E.
Em cetceos Orthopox
Morfologia
Em pinpedes Parapox
Poxvrus

Hicks & Worthy relataram um caso de

humanos que desenvolveram leses de
pele causadas por Pox aps manipulao
de focas infectadas
Papillomavrus
Famlia Papovaviridae
Vrus pequenos
Sem envelope
DNA circular de fita-dupla
Resistentes no ambiente
Replicao intranuclear
Potencial oncognico
Agentes etiolgicos da papilomatose ou verrugas
na pele e mucosas podendo causar tumores
malgnos
Ex: carcinoma de esfago em bovinos
Papillomavrus
Omikronpapillomavirus isolado de leses
genitais em botos (Phocoena)
Leses papilomatosas j forma descritas
em outros cetceos (Physeter,
Delphinapterus, Orcina, Monodon,
Balaenoptera) e tambm em manatis
Papillomavrus

Transmisso venrea e leses que causam

problemas reprodutivos e na dinmica
populacional
O diagnstico por M.E. nem sempre
possvel
Himunohistoqumica
Adenovrus
Vrions icosadricos grandes
Sem envelope
Genoma - uma molcula de DNA fita-dupla
36-44 kb
Replicao intranuclear
Alguns possuem potencial oncognico
Mecanismos que antagonizam RI Inata
Associados com sndrome respiratria,
enterite, pacreatite, vasculite, hepatite
Adenovrus
Isolados a partir de suabe retal
de baleia sei, intestino de
baleia-da-groelndia e de
beluga
Detectados por M.E. em fgado
de leo-marinho
Semelhana clnica de casos de
hepatite em lees-marinhos
com infeces causadas por
CAV-1
Adenovrus

Infeco em lees-marinhos e outros

carnvoros silvestres possivelmente
oriunda do CAV
Adenovrus so bioindicadores de poluio
ambiental
Herpesvrus

Envelopados
Com tegumento
Genoma - uma molcula DNA fita-dupla
120-250 kb
Capacidade de estabelecer infeco
latente
Herpesvrus

Relatados em inmeras espcies desde

1988
Por M.E., isolamento, sorologia, molecular
PhHV-1 em focas Varicellovrus similar ao
CaHV (alfa)
PhHV-2 em focas de outra localidade
(gama)
Herpesvrus
Exceto por um caso de encefalite em
cetceo, associado com leses
ulcerativas de pele e mucosa,
principalmente genital
problemas reprodutivos
Infeces fatais por PhHV-1 relatadas em
neonatos de pinpedes e abortos
PhHV-2 associado com leses de pele
recidivantes em lees-marinhos fmeas
quando em perodo reprodutivo
Morbillivrus

Famlia Paramyxoviridae
Envelopado
Genoma de RNA fita-simples de polaridade
positiva 15-19 KB
Replicao intracitoplasmtica
CDV, RPV, PPRV, PhDV, CeDV, MV
Morbillivrus

Desde 1987 surtos com altas taxas de

mortalidade relacionados a infeco por
morbilivrus tem sido relatados em
mamferos marinhos
Estudos sorolgicos demostram alta
prevalncia em cetceos, pinpedes, ursos-
polares, manatis
Morbillivrus
PhDV mais similar ao CDV
CeDV mais similar ao RPV e PPRV
Sintomatologia sistmica (pneumonia,
febre, descarga nasal, conjuntivite,
ceratite, diarria, aborto, sinais
neurolgicos, postura anormal, tolerncia
a humanos)
Transmisso interespecfica possvel
Infeco inaparente
Influenza

Famlia Orthomyxoviridae
Envelopados
Genoma de RNA linear fita-simples de
polaridade negativa segmentado:
8 segmentos FluAV
7 segmentos FluBV
6 segmentos FluCV
Replicao intranuclear
Influenza

A e B J foram detectados em mamferos

marinhos
Influenza A H13N9 e H13N2 em baleias-
piloto semelhante ao vrus circulante em
gaivotas origem aviria
Surtos relacionados com aquecimento
anormal das guas e aumento
populacional das focas
Influenza

Influenza B semelhante a cepa circulante

em humanos focas foram a segunda
espcie a ser detectado o FluBV
Calicivrus

Vrus pequeno
Sem envelope
Genoma - uma molcula de RNA linear
fita-simples e polaridade positiva 7,4-7,7
kb
Replicao intracitoplasmtica
FCV, VESV e SMSV
Calicivrus
SMSV j foi isolado de vrias espcies de
cetceos e pinpedes
Similar ao VESV
Pode infectar sunos, bovinos e humanos
Associado a leses vesiculares nas partes
mais frias do corpo, como nadadeiras,
falhas reprodutivas e mortalidade neonatal
E em sunos causa o mesmo quadro
clnico do VESV
Calicivrus

Permanece entre as populaes de

mamferos marinhos por infectar tambm
peixes que so alimento desses animais
Outros vrus:

Rhabdovrus Parvovrus
Coronavrus Rotavrus
Hepadnavrus Bocavrus
Retrovrus Norovrus Circovrus...
Anellovrus Sapelovrus
Picornavrus Dependovrus
Astrovrus Sapovrus
DETECO E CARACTERIZAO
MOLECULAR DE VRUS ENTRICOS EM
LOBOS-MARINHOS NO ESTADO DO
RIO GRANDE DO SUL

Arctocephalus spp
ordem Carnivora
superfamlia Pinnipedia
famlia Otariidea
Metodologia

Coleta de amostas de fezes ao exame de

necropsia de animais encontrados no litoral
norte do Rio Grande do Sul.

Anotaces a respeito do estado dos animais.

 Tratamento prvio das amostras de fezes
diluico em PBS
vortex com beads
centrifugao
filtragem do sobrenadante (0,45 m)
 Extrao dos cidos nuclicos
RNA por Trizol + sntese de cDNA com
primers randmicos por RT-PCR
DNA por Fenol
 Amplificao por PCR de genes virais
Morbili
Calici
Adeno
Circo
Corona

 Anlise da presena de material gentico
dos vrus em questo por EF en gel de
agarose 1.5%
associao com possveis sinais clnicos
Caracterizao molecular por
sequenciamento e anlise filogentica