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Respostas s atividades da obra

a
Biologia Molecular da Clula, 5 Edio

Uma criatura do mar avistada entre as Antilhas e Nice, em 1562. Nunca saberemos exatamente o que a
pessoa que desenhou esta figura realmente viu, mas pouco provvel que esta criatura tenha sido totalmente
inventada. Qualquer um que tenha feito um curso de histologia sabe como difcil aprender a observar e cap-
tar detalhes relevantes e precisos a partir de uma cena no familiar. Isto importante para os bilogos celula-
res; muito fcil interpretar o que no familiar quando j se tem um conhecimento prvio, impossibitando a
percepo de algo novo.

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Clulas e Genomas 1
1-1 Falso. Os conjuntos de genes da hemoglobina se originaram nos humanos da du-
plicao a partir de um gene ancestral que codificava a protena globina; portanto,
eles so exemplos de genes parlogos. Os genes da hemoglobina humana e dos
chimpanzs so ortlogos, assim como os genes da hemoglobina de humanos
e de chimpanzs, etc. Todos os genes que codificam a protena globina, incluindo
o gene para a mioglobina, que apresenta uma relao evolutiva mais distante, so
homlogos uns aos outros.

1-2 Verdadeiro. Nos organismos unicelulares, o genoma tambm o material here-


ditrio, e qualquer modificao que ele sofra repassada para a prxima gera-
o. As clulas germinativas geralmente esto isoladas no interior dos organismos
multicelulares, minimizando o seu contato com clulas estranhas, vrus e DNA,
protegendo assim as espcies dos efeitos de uma possvel transferncia gentica
horizontal.

1-3 Verdadeiro. Os genomas das bactrias so reduzidos ao essencial: apenas uma pe-
quena poro se destina ao controle da expresso gnica. J no genoma humano,
apenas cerca de 1,5% das sequncias de DNA codifica protenas.

1-4 A resistncia a mutaes, observada no cdigo gentico, sugere que ele esteja su-
jeito s presses da seleo natural. Dessa maneira, a resistncia a mutaes
uma caracterstica favorvel do cdigo gentico, pois permite que os organismos
mantenham informaes suficientes para especificar fentipos complexos. Esta
lgica sugere que um evento aleatrio aproximadamente de um em um milho
tenha sido responsvel pelo surgimento de um cdigo gentico prova de erros
como o nosso.
Contudo, na prtica isto no to simples. Se a resistncia a mutaes for uma
caracterstica essencial de qualquer cdigo gentico, ento os nicos cdigos que
observaramos seriam aqueles prova de erros. Um evento evolutivo menos rgi-
do, que originasse um cdigo mais sujeito a erros, poderia limitar a complexidade
da vida.
Existem diversas provas de que o cdigo gentico no esttico e responde s
foras da seleo natural. Variantes do cdigo gentico j foram identificadas em
mitocndrias e no genoma nuclear de diversos organismos.

Referncia: Freeland SJ e Hurst LD (1998) The genetic code is one in a million. J.


Mol. Evol. 47, 238-248.

1-5 Algumas hipteses poderiam ser testadas:


1. Uma anlise do contedo de aminocidos poderia indicar se o conjunto de ami-
nocidos utilizado pelos organismos sendo caracterizados difere ou no daquele
utilizado pelos organismos da Terra. No entanto, mesmos organismos da Terra
podem apresentar aminocidos diferentes dos 20 mais comuns, como hidroxipro-
linas, fosfosserinas e fosfotirosinas.
2. O sequenciamento do DNA da amostra a ser caracterizada permitir a compara-
o da sua sequncia de nucleotdeos com a sequncia dos organismos da Terra.
Uma anlise cuidadosa da sequncia poderia resolver este problema.
3. A anlise do cdigo gentico do novo organismo pode ser uma boa abordagem.

1-6 Alimentar-se significa obter energia livre ou substratos a partir de, seja esta
fonte a luz solar ou compostos qumicos inorgnicos. No caso da fotossntese, os
ftons da luz solar so utilizados para excitar os eltrons de algumas molculas,

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4 Captulo 1 Clulas e Genomas

criando espcies instveis. Quando estes eltrons voltam ao seu estado natural, a
energia liberada aproveitada por mecanismos que direcionam a sntese de ATP.
De modo similar, os organismos litotrficos obtm energia livre pela oxidao de
uma ou mais molculas reduzidas obtidas das fendas termais (p. ex., H2S S +
2H+), utilizando alguma molcula comum presente no ambiente como aceptora
de eltrons (2H+ + O2 H2O). A energia liberada nestas reaes de oxidao-
reduo (transferncia de eltrons) utilizada em reaes que envolvam a sntese
de ATP.

1-7 So possveis quatro rvores filogenticas (Figura R1-1). Os trs grupos podem ter
divergido de um ancestral comum ao mesmo tempo. As eubactrias e as arque-
bactrias podem ter divergido dos eucariotos e ento se separado. As eubactrias
e os eucariotos podem ter divergido das arquebactrias e ento formado ramos
distintos. Ou ainda, as arquebactrias e os eucariotos podem ter divergido das
eubactrias antes de divergirem entre si. Apesar de os eventos de transferncia
horizontal tornarem a anlise filogentica mais complicada, acredita-se que as
arquebactrias e os eucariotos se separaram das eubactrias e ento as arquebac-
trias divergiram do grupo dos eucariotos.

1-8 pouco provvel que qualquer gene tenha se originado com as caractersticas
perfeitas para a sua funo. Assume-se que genes altamente conservados, como
os que codificam o RNA ribossomal, tenham sido otimizados por processos evo-
lutivos mais rpidos durante a evoluo do ancestral comum a arquebactrias,
eubactrias e eucariotos. Uma vez que RNAs ribossomais (e os produtos de outros
genes altamente conservados) participam nos processos fundamentais aperfei-
oados anteriormente, no houve presso evolutiva para mudana. J os genes
menos conservados ou seja, os que evoluem mais rapidamente esto cons-
tantemente sujeitos a ocupar novos nichos funcionais. Considere, por exemplo, a
evoluo dos diferentes genes da globina (veja a resposta da Questo 1.1).

1-9
A. Uma vez que os genes envolvidos nos processos de fluxo de informao esto
menos sujeitos transferncia horizontal, as rvores evolutivas derivadas destes
genes so mais confiveis para estimar as relaes evolutivas entre os organismos.
Portanto, provvel que as arquebactrias tenham se separado dos eucariotos de-
pois de ambos terem divergido do grupo das eubactrias.
B. A complexidade uma explicao lgica para as diferenas nas taxas de transfe-
rncia horizontal de genes. A transferncia bem sucedida de um gene relacionado
ao processo de fluxo de informao necessita que o seu produto gnico se encaixe
em um complexo funcional preexistente, talvez suplantando a protena original
presente no organismo. Para que esta protena se encaixe em um complexo pro-
teico, necessrio que ela apresente superfcies de ligao complementares ao
complexo, permitindo a sua interao correta. J um produto gnico que desem-
penhe uma reao metablica independente pode ser perfeitamente funcional
em qualquer organismo. Se esta reao metablica conferir alguma vantagem
adaptativa ao organismo que receber este gene (ou ao menos, no conferir des-
vantagens), o gene em questo pode ser acomodado no genoma do organismo
receptor.

Referncia: Jain R, Rivera MC e Lake JA (1999) Horizontal gene transfer among


genomes: The complexity hypothesis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96, 3801-3806.

A B E A B E A B E A E B

Figura R1-1 As quatro possveis relaes


evolutivas entre archaea (A), eubactrias
(B) e eucariotos (E) (Resposta 1-7).

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Captulo 1 Clulas e Genomas 5

1-10
A. A hiptese mais simples que a transferncia gnica tenha ocorrido no ponto in-
dicado na Figura R1-2. As linhagens alm deste ponto apresentam o gene Cox2
nuclear, enquanto as linhagens que se ramificam nos pontos anteriores no apre-
sentam.
B. Cinco gneros (Lespedeza, Dumasia, Pseudeminia, Neonotonia e Amphicarpa)
aparentemente possuem cpias funcionais dos genes mitocondrial e nuclear,
conforme indicado em cinza na Figura R1-2.
C. Dez gneros (Eriosema, Atylosia, Erythrina, Ramirezella, Vigna, Phaseolus,
Ortholobium, Psoralea, Cullen e Glycine) no apresentam o gene mitocondrial
funcional. O nmero mnimo de eventos de inativao quatro, conforme indica-
do pelos quadrados na Figura R1-2.
D. Seis gneros (Calopogonium, Pachyrrhizus, Cologania, Pueraria, Pseudovigna e
Teramnus) no apresentam a cpia funcional do gene nuclear. O nmero mnimo
de eventos de inativao cinco, conforme indicado pelos crculos na Figura R1-
2.
E. Estes dados sugerem que a transferncia de genes da mitocndria para o ncleo
no um processo de apenas uma etapa; isto , simultnea perda do gene mito-
condrial e aparecimento deste gene no ncleo. Este um cenrio bastante impro-
vvel uma vez que as verses nucleares dos genes mitocondriais devem adquirir
ainda sequncias sinalizadoras que permitam o transporte das protenas sinteti-
zadas para a mitocndria (veja o Captulo 12 da obra). Os dados apresentados na
Figura R1-2 indicam que o processo de transferncia iniciou com o aparecimento
do gene no ncleo. Esta primeira etapa no acompanhada pela perda do gene
mitocondrial. Uma vez que o gene nuclear esteja ativado, observado um est-
gio intermedirio onde as duas cpias do gene esto ativadas. Posteriormente,
uma das cpias inativada. Se o gene nuclear for inativado, o processo de transfe-
rncia do gene interrompido. Se o gene mitocondrial for inativado (geralmente
por mutaes pontuais), a transferncia gnica pode continuar. O estgio final da
transferncia a eliminao do gene mitocondrial no funcional, um processo
que ocorrer durante a replicao do genoma.

Referncia: Adams KL, Song K, Roessler OG, Nugent JM, Doyle JL, Doyle JJ e
Palmer JD (1999) Intracellular gene transfer in action: Dual transcription and
multiple silencing of nuclear and mitocondrial cox2 genes in legumes. Proc. Natl.
Acad. Sci. U.S.A. 96, 13863-13868.

1-11
A. Os dados da rvore filogentica (ver Figura 1-3, constante na obra, p. 43) indicam
que o gene da hemoglobina de plantas tenha se originado por transferncia hori-
zontal. As sequncias das hemoglobinas de plantas parecem ter divergido h mui-
to tempo na escala evolutiva, no mesmo momento, ou ainda antes, do surgimento
dos moluscos, insetos e nematoides. As relaes evolutivas indicadas na rvore
sugerem que o gene da hemoglobina surgiu a partir de algum ancestral comum.
B. Se o gene da hemoglobina de plantas tivesse se originado de transferncia hori-
zontal a partir de um parasita nematoides, a sua sequncia estaria agrupada com
as sequncias de genes de hemoglobina de nematoides na rvore filogentica da
Figura Q1-3.

1-12 Trs hipteses gerais podem ser propostas.


A hiptese do tempo de gerao prope que as diferenas nas taxas so conse-
quncia dos diferentes tempos de gerao. Espcies como o rato, com tempo de
gerao mais curto, passaro por um nmero maior de geraes e divises das
clulas germinativas, e consequentemente por mais ciclos de replicao do DNA.
Esta hiptese assume que os erros inseridos durante a replicao do DNA so a
maior fonte de mutaes.
A hiptese da taxa metablica afirma que espcies com maiores taxas de evo-
luo apresentam maiores taxas metablicas, gerando mais espcies reativas de
oxignio, a principal fonte de danos ao DNA. Isto particularmente relevante
quando consideramos genomas mitocondriais, uma vez que a mitocndria o

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6 Captulo 1 Clulas e Genomas

Figura R1-2 Resumo da distribuio


do gene Cox2 e seu transcrito, em um GENE RNA
contexto filogentico, mostrando os mt nuc mt nuc
locais mais provveis de transferncia Pisum + +
gnica e o nmero mnimo de eventos Clitoria + +
de inativao do gene mitocondrial
Tephrosia + +
(quadrados) e do gene nuclear (crculos) Galactia + +
(Resposta 1-10). O destaque em cinza Canavalia + +
indica os gneros que aparentemente
apresentam cpias funcionais dos ge- Lespedeza + + + +
nes mitocondrial e nuclear. Eriosema + +
Atylosia + +
Erythrina + +
Transferncia Ramirezzella + +
gnica e Vigna + +
ativao Phaseolus + +
Dumasia + + + +
Calopogonium + + +
Pachyrhizus + + +

Cologania + +
Pueraria + +
Pseudeminia + + + +
Pseudovigna + + +
Ortholobium + +
Psoralea + +
Cullen + +
Glycine + + +
Neonotonia + + + +
Teramnus + +
Amphicarpa + + + +

principal local de utilizao de oxignio e de gerao de radicais livres nas c-


lulas.
A hiptese da eficincia de reparo prope que a eficincia de reparo do DNA
danificado difere entre as linhagens. Espcies com mecanismos de reparo mais
eficientes reduziriam a proporo de erros que levariam a mutaes. Existem evi-
dncias experimentais de que estas diferenas nos sistemas de reparo existem, a
partir de clulas humanas e de ratos em cultivo, mas no est claro se estas dife-
renas existem tambm nas clulas germinativas destes organismos.

Referncia: Li WH (1997) Molecular Evolution, p. 228-230. Sinauer Associates,


Inc.: Sunderland MA.

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Qumica Celular e Biossntese 2
2-1 Verdadeiro. A cada meia-vida, metade da radiatividade restante diminui. Aps 10
meias-vidas (1/2)10, apenas 1/1.024 da radiatividade original se mantm.

2-2 Falso. O pH da soluo ser prximo ao neutro (pH 7,0), pois poucos ons H do

HCl iro exceder o nmero de ons H originados da dissociao das molculas
de gua. No importa o quo dissolvido esteja um cido, ele no originar uma
soluo bsica. Em concentrao igual a 108 M, o pH da soluo ser 6,98.

2-3 Falso. A maioria das interaes entre macromolculas depende da habilidade de


associao e dissociao rpidas, o que no possvel se estas molculas intera-
girem por ligaes covalentes. No entanto, em situaes onde uma grande esta-
bilidade estrutural necessria, como na formao da parede celular de plantas,
bactrias e fungos, ou na matriz extracelular das clulas animais, algumas macro-
molculas podem se encontrar unidas por ligaes covalentes.

2-4 Verdadeiro. A diferena entre animais e plantas o modo como obtm as molcu-
las que sero oxidadas para consumo de energia. As plantas utilizam as reaes de
fotossntese, e os animais precisam ingerir suas fontes de alimento.

2-5 Verdadeiro. As reaes de oxidao-reduo se referem s reaes nas quais ocor-


re transferncia de eltrons entre molculas. Uma reao de oxidao deve ser
acompanhada por uma reao de reduo, pois o nmero de eltrons deve ser
mantido constante.

2-6 Falso. A constante de equilbrio para a reao A B no alterada. O acoplamen-


to de reaes pode transformar uma reao desfavorvel em uma reao favor-
vel, por alterar a concentrao dos produtos da primeira reao em relao aos
seus substratos, mas no ir mudar o valor da sua constante de equilbrio, pois,
como o nome indica, este valor constante.

2-7 Verdadeiro. Uma reao com valor negativo de G no ir ocorrer esponta-


neamente caso a concentrao de produto exceda a concentrao esperada nas
condies de equilbrio. J uma reao com valor positivo de G ocorrer es-
pontaneamente em condies onde exista excesso de substratos em relao
concentrao esperada nas condies de equilbrio.

2-8 Falso. A gliclise a nica via metablica capaz de gerar ATP na ausncia de oxi-
gnio. Existem diversas situaes de anoxia em que as clulas dependem da gli-
clise para a obteno de energia. Por exemplo, em treinos intensos de corrida, a
circulao no capaz de manter condies adequadas de oxigenao nos ms-
culos das pernas, que dependem ento da gliclise, realizada a partir das molcu-
las de glicognio celular. Outro exemplo so as hemcias, que, por apresentarem
mitocndrias, no realizam metabolismo oxidativo.

2-9 Falso. Os tomos de oxignio da molcula de CO2 no so oriundos dos tomos


de oxignio consumidos durante a oxidao da glicose. As molculas de oxignio
utilizadas na fosforilao oxidativa originam molculas de gua.

2-10 A qumica orgnica realizada nos laboratrios raramente realizada em gua, de-
vido baixa solubilidade de alguns compostos e reatividade da gua com algu-
mas reaes. No entanto, a maior diferena entre a qumica orgnica das clulas

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8 Captulo 2 Qumica Celular e Biossntese

vivas e a realizada em laboratrio a complexidade. Um fator essencial em labo-


ratrio o uso de reagentes com alto grau de pureza; j nas clulas vivas, milha-
res de reaes distintas so realizadas simultaneamente e sem interferncias. a
habilidade das enzimas de isolar ambientes timos atravs de catalisadores que
permite a realizao de tantas reaes simultneas.

2-11
A. O etanol em uma cerveja com graduao alcolica igual a 5% est na concentra-
o 0,86 M. O etanol puro 17,2 M ([789 g/L]  [mol/46 g]).
B. No limite legal de 80 mg/100 mL, haver uma concentrao de etanol igual a 17,4
mM no sangue ([80 mg/0,1 L0  [mmol/46 mg]).
C. No limite legal (17,4 mM), o etanol de cervejas com graduao alcolica igual a
5% (0,86 M) estar diludo 49,4 vezes (860 mM/17,4 mM). Esta diluio repre-
senta 809 mL de cerveja em 40 L de gua corporal, o que equivale a 2,3 cervejas
de 355 mL.
D. Aproximadamente quatro horas. Com duas vezes o limite legal, uma pessoa ter
64 g de etanol ([0,16 g/0,1L]  [40 L]). Uma pessoa capaz de metabolizar 8,4 g de
etanol por hora, levando 3,8 horas para metabolizar 32 g de etanol (equivalente
quantidade que excede o limite legal).

2-12 Quanto menor a meia-vida, maior o nmero de tomos que diminuiro por uni-
dade de tempo, aumentando o nmero de dpm ou curies. Se tomos radiativos
estiverem presentes em quantidades equimolares, aqueles com meia-vida mais
curta apresentaro maior valor de dpm ou Ci/mmol uma atividade especfica
maior.

2-13
A. Uma soluo considerada neutra quando as concentraes de H e OH so
iguais. Isto ocorre quando a concentrao de cada um destes ons igual a 107 M,
e seu produto equivale a 1014 M2.
B. Em uma soluo de NaOH de 1 mM, a concentrao de OH 103M. Portanto, a
concentrao de H igual a 1011 M, o que corresponde a um valor de pH igual a
11.
KW
[H] 
[OH]
1014 M2
  1011 M
103 M
 5
C. Um valor de pH igual a 5,0 corresponde a uma concentrao de H igual a 10 M.
9
A concentrao de ons OH nesta mesma soluo ser igual a 10 M.

2-14 Os valores de pK, do menor para o maior, sero 4, 1, 2, 3. Considere o grupo carbo-
xila da cadeia lateral do aspartato, ou cido asprtico, na superfcie de uma pro-
tena, na ausncia de outros grupos ionizveis (condio 1). Nestas condies, o
seu valor de pK ser de aproximadamente 4,5, um valor maior do que o observado
no aminocido livre, pois no sofre a influncia do grupo amino carregado positi-
vamente. Se esta cadeia lateral se encontrar em um ambiente hidrofbico, no in-
terior de uma protena (condio 2), o seu valor de pK ser maior, pois a presena
de um grupo carregado em um ambiente hidrofbico desfavorvel. Havendo um
segundo grupo negativamente carregado neste ambiente hidrofbico (condio
3), o valor de pK da cadeia lateral do aspartato ser ainda maior devido repulso
eletrosttica. Caso exista um grupo de carga positiva neste ambiente (condio
4), a atrao eletrosttica favorecer a transferncia de um prton, diminuindo o
valor de pK da cadeia lateral do aspartato, mesmo quando comparado ao mesmo
aminocido exposto na superfcie de uma protena (1).

2-15 Se a atividade enzimtica for dependente de uma alterao no estado de proto-


nao de um resduo de histidina, esta histidina dever estar no seu estado pro-
tonado (carregado), e a enzima ser ativa em valores de pH menores que o pK da
histidina (geralmente entre 6,5 e 7,0).

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Captulo 2 Qumica Celular e Biossntese 9

2-16 Antes de uma corrida, o corredor deve respirar rapidamente. Como uma corrida O grupo
de curta distncia resultar em uma diminuio do pH do sangue, o objetivo antes
O P O carboxlico
da corrida aumentar o pH sanguneo, aumentando o tempo que o atleta levar fosfrico do
O cido andrico
para atingir o estado de fadiga. Segurar o flego ir aumentar a quantidade de CO2
dissolvido no sangue, deslocando o equilbrio da reao para a direita, aumentan- C O
do a [H] e diminuindo o pH do sangue. Ao respirar rapidamente, a concentrao hidroxila HO C H
de CO2 do sangue diminui e desloca o equilbrio da reao para a esquerda, dimi-
CH2
nuindo a [H] e aumentando o pH do sangue.
O
2-17 Os grupos funcionais das trs molculas esto indicados e devidamente denomi-
O P O fosforil
nados na Figura R2-1.
O
2-18 O clculo feito do seguinte modo (utilizando a molcula de gua como exem- 1,3-bifosfoglicerato
23
plo): massa da gua  3  10 g ([18g/mol]  [mol/6  10 molculas]).
23

v  (kT/m)1/2
O O carboxilato
v C
C carbonil
v  3,78  10 cm/seg
4
CH3
piruvato
As velocidades instantneas para as molculas de gua, glicose e mioglobina so:
3,8  104 cm/seg, 1,2  104 cm/seg e 1,3  103 cm/seg. Convertendo estes valo-
res em km/h, uma molcula de gua se desloca em uma velocidade igual a 1.360 SH sulfidril
km/h, a glicose a 428 km/h, e a mioglobina a 47 km/h.
CH2
Referncia: Berg HC (1993) Random Walks in Biology: Expanded Edition, p. 5-6, CH2
Princeton University Press. O
CH C carboxilato
2-19 A termodinmica considera o sistema como um todo, ou seja, inclui as molculas O
amino NH3 +

de gua. O aumento na entropia se deve principalmente ao efeito da polimeriza-


cistena
o das unidades de tubulina (hidrofbicas) sob as molculas de gua adjacentes
(que so ordenadas na proximidade dos microtbulos). Estas molculas de gua
Figura R2-1 Grupos funcionais nas mo-
no esto livres para interagir com as demais molculas de gua que as rodeiam, lculas de 1,3 bifosfoglicerato, piruvato
o que resulta em um aumento da entropia do sistema, excedendo a diminuio da e cistena (Resposta 2-17).
entropia causada pela polimerizao dos microtbulos.

2-20 Toda populao de molculas de ATP disponveis no corpo reciclada 1.800 vezes
por dia, um pouco mais de uma vez por minuto. A converso de 3 moles de gli-
cose em CO2 gera 90 moles de ATP ([3 moles de glicose] x [30 moles de ATP/mol
de glicose]). O corpo contm 5 x 102 mol de ATP ([2 x 103 mol/L] x 25 L). Como a
concentrao de ATP no muda, cada molcula precisa ser reciclada 1.800 vezes
por dia ([90 moles de ATP/dia] / [5 x 102 mol de ATP]).

2-21 O corpo humano consome cerca de 70 watts.

watts 109 ATP 5  1013 clulas mol 12 kcal 4,18  103 J


    
6  10 ATP
23
corpo 60 seg clula corpo mol kcal
69,7 J/seg 69,7 watts
 
corpo corpo

2-22 Escalar o monte Matterhorn a partir do topo do monte Zermatt, uma distncia
vertical de 2.818 m, requer 496 kcal:
9,8 m J kcal
trabalho  75 kg  2  2.818 m  
seg kg m2/seg2 4,18  103
 495,5 kcal
Este valor equivale a 1,5 barra energtica. Na realidade, o corpo humano no con-
verte energia em trabalho com 100% de eficincia, e sim com aproximadamente
25% de eficincia, o que aumenta a necessidade calrica para cerca de 6 barras.

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10 Captulo 2 Qumica Celular e Biossntese

Referncia: Frayn KN (1996) Metabolic Regulation: A Human Perspective, p. 179.


Londres: Portland Press.

2-23 Sob condies anaerbias, as clulas no so capazes de utilizar piruvato e NADH.


Os eltrons transportados pelo NADH so transferidos para a cadeia transporta-
dora de eltrons da fosforilao oxidativa; na ausncia de oxignio, contudo, estes
eltrons no so utilizados, assim como o piruvato, havendo ento acmulo de
piruvato e NADH. O processo de fermentao combina estas duas molculas em
lactato ou etanol, que so exportados pela clula para o ambiente extracelular.

Clulas que no realizam fermentao convertem rapidamente as suas molculas


de NAD em NADH, que se acumula e inibe a gliclise na etapa de converso de
gliceraldedo-3-fosfato em 1,3-bifosfoglicerato. A fermentao regenera as mol-
culas de NAD pela transferncia de eltrons das molculas de NADH para piru-
vato, permitindo a continuidade da gliclise.

2-24 Na ausncia de oxignio, a energia celular obtida pela fermentao, o que requer
um maior fluxo do ciclo glicoltico para gerar quantidades suficientes de ATP. Na
presena de oxignio, a clula capaz de gerar ATP pela fosforilao oxidativa,
que gera ATP de modo mais eficaz que a gliclise, e menos molculas de glicose
so necessrias para gerar a mesma quantidade de ATP.

2-25 No possvel reverter esta reao em condies fisiolgicas. O fluxo de reaes


ao longo de uma via metablica requer que os valores de G de todas as etapas
sejam negativos. Reverter a reao G6P  ADP glicose  ATP, com G  4,0
kcal/mol, requer uma proporo de [glicose] [ATP] / [G6P] [ADP] menor do que
102,84 (0,0015) para atingir o equilbrio da reao (G  0).
[glicose] [ATP]
G  G  1,41 kcal/mol log
[G6P] [ADP]
[glicose] [ATP]
0  4,0 kcal/mol  1,41 kcal/mol log
[G6P] [ADP]
[glicose] [ATP] 4,0 kcal/mol
log   2,44
[G6P] [ADP] 1,41 kcal/mol
[glicose] [ATP]
log  0,0015
[G6P] [ADP]
A concentrao de ATP no interior de uma clula sempre excede a concentrao
de ADP, impossibilitando a reverso da reao.

2-26 A remoo de fragmentos de dois tomos de carbono a partir da extremidade car-


boxlica a nica possibilidade que explica a diferena entre o metabolismo de
cidos graxos de cadeia par ou mpar. Os dois tomos de carbono terminais no
so removidos do cido fenilactico, pois o anel benznico interfere com o pro-
cesso de fragmentao atravs de alteraes induzidas no terceiro tomo, a partir
da extremidade carboxlica. Como este carbono faz parte do anel benznico no
cido fenilactico, ele no metabolizado.

Alm de explicar a diferena no metabolismo de cidos graxos de cadeia par e


mpar, os resultados de Knoop tambm indicaram a direo da degradao da
cadeia do cido graxo. Se a extremidade no cida nos cidos graxos fosse degra-
dada inicialmente, a adio do anel benznico impediria o seu metabolismo, ou o
anel benznico seria excretado sempre na mesma forma, independentemente do
nmero de tomos de carbono presentes na molcula de cido graxo.

Referncia: Knoop F (1905) Der Abbau aromatischer Fettsuren im Tierkrper.


Beitr. Chem. Physiol. 6, 150-162.

2-27 Os experimentos de alimentao cruzada indicam que as trs etapas controladas


pelos produtos dos genes TrpB, TrpD e TrpE esto arranjadas na seguinte ordem:
TrpE TrpD TrpB
X Y Z triptofano

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Captulo 2 Qumica Celular e Biossntese 11

Sendo X, Y e Z intermedirios no identificados da via metablica.

A habilidade da cepa TrpE de ser alimentada pelas outras duas cepas indica que

TrpD e TrpB acumulam intermedirios mais distantes da via metablica do que
a etapa controlada pelo gene TrpE. A habilidade da cepa TrpD de ser alimentada
por TrpB e no por TrpE situa este gene no meio da via. Como TrpB no capaz
de ser alimentada por nenhuma outra cepa, isso indica que este gene controla a
etapa mais prxima ao triptofano.

Referncia: Yanofsky C (2001) Advancing our knowledge in biochemistry, genetics,


and microbiology through studies on tryptophan metabolism. Anuu. Rev. Biochem.
70, 1-37.

Alberts-Resp_Book.indb 11 23.11.09 10:54:31


Alberts-Resp_Book.indb 12 23.11.09 10:54:31
Protenas 3
3-1 Verdadeiro. Em uma folha , as cadeias laterais dos aminocidos de cada uma
das fitas que a compem esto posicionadas, alternadamente, acima e abaixo do
plano da folha . Cada fita de uma folha  pode ser considerada uma hlice na
qual cada aminocido apresenta uma rotao de 180 em relao ao aminocido
adjacente.

3-2 Verdadeiro. As alas que se projetam e circundam as protenas geralmente apre-


sentam diversos grupos qumicos que permitem a interao de outras molculas
atravs de diversas ligaes qumicas fracas.

3-3 Verdadeiro. As enzimas apresentam nmeros fixos de stios de ligao. Quando


a concentrao de substrato for suficiente para que todos os stios de ligao de
uma protena estejam ocupados, a velocidade mxima de reao que esta enzima
catalisa no pode ser aumentada atravs do aumento da quantidade de substra-
to.

3-4 Falso. O nmero de turnover constante, pois ele corresponde ao valor de Vmx
dividido pela concentrao enzimtica. Por exemplo, um aumento de duas vezes
na concentrao da enzima induzir um valor de Vmx duas vezes maior, mas no
afetar o nmero de turnover: 2 Vmx/2 [E]  k3.

3-5 Verdadeiro. O termo cooperatividade indica que alteraes conformacionais so-


fridas por uma das subunidades que compem uma protena com estrutura qua-
ternria so comunicadas s outras subunidades idnticas da molcula, induzin-
do a mesma alterao conformacional em toda a protena.

3-6 Verdadeiro. Cada ciclo de fosforilao e desfosforilao hidrolisa uma molcula


de ATP; no entanto, isto no pode ser visto como desperdcio de energia. Os ciclos
de adio e remoo de fosfato permitem que as protenas tenham suas ativida-
des finamente reguladas em resposta a estmulos externos que exigem alteraes
rpidas no estado de metabolismo da clula.

3-7 Uma vez que cada posio em uma protena de 300 aminocidos pode ser ocupa-
da por um dos 20 aminocidos de ocorrncia natural, existem 20300 (o que equiva-
le a 10390) protenas possveis. A massa de uma destas possveis protenas seria:
110 d 300 a g
massa    10390 protenas 
a protena 6  1023 d
massa  5,5  10370 g
Portanto, a massa de protenas ultrapassaria a massa total observada no universo
(1080 g) em um fator de 10290!

3-8 Em termos gerais, uma identidade de pelo menos 30% suficiente para a identi-
ficao de protenas homlogas nas buscas em bancos de dados. As identidades
entre 20 e 30% so problemticas, pois as protenas identificadas como possveis
homlogas podem ser falso-positivas, uma limitao da tcnica. A busca por
sequncias de protenas homlogas de relacionamento evolutivo mais distante
facilitada pelo uso de sequncias de aminocidos mais curtas, pois quando se

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14 Captulo 3 Protenas

utiliza sequncias inteiras normalmente a identidade menor que 30%. Nestes


casos, com a sequncia completa, as pores no conservadas da protena sero
predominantes na comparao entre as sequncias de protenas dos bancos de
dados.

3-9 A justaposio das pores N-terminal e C-terminal do domnio kelch o identifica


como sendo do tipo encaixe. Os domnios do tipo em linha so caracterizados
pela posio das pores N-terminal e C-terminal em lados opostos do domnio.

3-10
A. Estes dados so consistentes com a hiptese de que o comportamento de mola da
molcula de titina se deve ao desenovelamento sequencial dos seus domnios Ig.
Inicialmente, o fragmento continha sete domnios Ig, havendo sete picos no grfi-
co resultante de fora versus extenso. Os picos resultantes observados correspon-
dem ainda ao esperado em uma perda sequencial da estrutura secundria dos
domnios da protena. A adio de um agente desnaturante elimina os picos do
grfico, pois a protena j ter perdido a estrutura dos seus domnios Ig, aumen-
tando a extenso que ela atinge por unidade de fora aplicada. Quando estes do-
mnios so estabilizados por ligaes entre eles e, portanto, se tornam incapazes
de se desenovelarem, os picos desaparecem do grfico e a extenso por unidade
de fora aplicada diminui.
B. O espaamento entre os picos, de aproximadamente 25 nm, corresponde quase
perfeitamente ao valor calculado para o desenovelamento sequencial dos dom-
nios Ig. Um domnio enovelado ocupa 4 nm, mas, quando desenovelado, os seus
89 aminocidos alinhados ocupam cerca de 30 nm (89  0,34 nm), um aumento
de 26 nm.
C. A presena de picos separados indica que cada domnio se desdobra quando sub-
metido a uma fora caracterstica, implicando que cada domnio apresenta uma
estabilidade definida. A coleo de domnios se desdobra na ordem do menos ao
mais estvel. Assim, necessrio um pouco mais de fora a cada vez para desdo-
brar o prximo domnio.
D. A quebra abrupta da fora reflete uma caracterstica importante das protenas: a
cooperatividade. As protenas tendem a perder a sua estrutura terciria e secun-
dria de um modo tudo-ou-nada. Um pequeno nmero de ligaes de hidrognio
responsvel por manter a estrutura de um domnio (Figura R3-1), e o rompi-
mento destas ligaes desencadeia o processo tudo-ou-nada de perda da estrutu-
ra tridimensional.

Referncia: Rief M, Gutel M, Oesterhelt F, Fernandez JM e Gaub HE (1997)


Reversible folding of individual titin immunoglobulin domains by AFM. Scien-
ce 276, 1109-1112.

3-11
A. Estima-se que a sntese de uma protena composta por 10.000 aminocidos ocorra
da maneira correta em 37% das vezes.
PC  (fc)n  (0,9999)10.000
 0,37

J a sntese de cada subunidade composta por 200 aminocidos apresentar uma


taxa de sucesso de 98% (PC  [fC]  [0,9999]  0,98). A formao de uma mis-
n 200

tura de subunidades em ribossomos corretos seguir a mesma equao (PC  [fC]n


Figura R3-1 Ligaes de hidrognio  [0,98]50  0,37). Portanto, a formao de um ribossomo a partir de subunidades
que mantm o domnio enovelado na tem a mesma taxa de sucesso que a sua formao a partir de uma nica protena.
sua conformao (Resposta 3-10). As
ligaes de hidrognio indicadas (linhas
em cinza), quando rompidas, induzem
perda da estrutura do domnio. Por
meio da comparao desta represen-
tao topolgica com a estrutura tridi- C
mensional na Figura Q3-2A (p. 151 da
N
obra), possvel identificar as duas pe-
quenas fitas  que esto envolvidas na
formao destas ligaes de hidrognio.

Alberts-Resp_Book.indb 14 23.11.09 10:54:31


Captulo 3 Protenas 15

B. A premissa apresentada em A de que subunidades corretas e incorretas so in-


corporadas ao ribossomo com igual probabilidade no verdadeira. Qualquer
erro que interfira no enovelamento correto de uma subunidade, ou na habilidade
desta subunidade de se ligar s demais, a elimina da formao do ribossomo. Por-
tanto, a vantagem da sntese de subunidades no est na maior taxa de sucesso de
sntese, e sim em permitir que um mecanismo de controle de qualidade rejeite as
subunidades incorretas eficientemente.

3-12
A. As concentraes relativas das protenas Src normal e mutante so inversamente
proporcionais ao volume em que elas esto distribudas. A protena mutante Src
est distribuda no mesmo volume celular, que :
Vclula  (4/3)r3  4(10  106 m)3/3  4,1888  1015 m3

A protena Src normal se encontra restrita camada de 4 nm adjacente membra-


na, que apresenta um volume igual ao da clula, menos o volume de uma esfera
com um raio 4 nm menor que o raio da clula:
Vcamada  Vclula  4 (r  4 nm)3/3
 Vclula  4 ([10  106 m]  [4  109 m])3/3
 (4,1888  1015 m3)  (4,1888  1015 m3)
Vcamada  0,0050  1015 m3

Portanto, o volume da clula 838 vezes maior que o volume da camada de 4 nm


adjacente membrana (4,1888  1015 m3/0,0050  1015 m3).
Mesmo considerando as regies internas da clula s quais a protena Src mu-
tante no tem acesso, como ncleo e organelas, a protena mutante ainda apre-
sentar concentrao algumas ordens de magnitude a menos que a protena Src
normal.
B. A protena mutante Src no causa a proliferao celular, pois est presente em
concentraes mais baixas na regio onde o seu alvo X se encontra. Esta afirmati-
va pode ser quantificada considerando-se o equilbrio de ligao de Src e seu alvo
X:

Src  X Src  X
K  [Src X]
[Src] [X]
A baixa concentrao da protena mutante nas regies adjacentes membrana ir
deslocar o equilbrio no sentido dos componentes livres, reduzindo a quantidade
de complexos formados, resultando na ausncia de efeito da protena mutante em
induzir a proliferao celular.

3-13 O anticorpo se liga segunda protena com uma constante de equilbrio, K, igual
a 5  107 M1.
Uma possvel soluo para este tipo de problema considerar o valor de G
relacionado ao valor do log K atravs de um fator ~2,3 RT, que equivale a 1,4
kcal/mol a 37C. Desta forma, um aumento de 10 na constante de equilbrio (um
aumento de 1 no valor de log K) corresponde a um decrscimo de 1,4 kcal/mol
no valor de G. Um aumento de 100 na constante de equilbrio corresponde a
um decrscimo de 2,8 kcal/mol no valor de G, e assim sucessivamente. Esta
relao permite uma estimativa rpida das alteraes induzidas na constante de
equilbrio por alteraes na energia livre, e vice-versa. No problema apresentado,
o aumento total no valor de G igual a 2,8 kcal/mol, o que requer uma dimi-
nuio de 100 vezes no valor de K, e a constante de equilbrio para a ligao da
segunda protena igual a 5  107 M1.
A soluo deste problema requer o clculo da variao da energia livre repre-
sentada pela ligao da primeira protena:
G  2,3 RT log K

Substituindo K:

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16 Captulo 3 Protenas

G  2,3 (1,98  103 kcal/K mol) (310 K) log (5 109)


G  1,41 kcal/mol  9,7
G  13,68 kcal/mol

A energia livre associada ligao da segunda protena obtida com a adio de


2,8 kcal/mol variao de energia livre para a ligao da primeira protena, com
valor igual a 10,88 kcal/mol. Portanto, a constante de equilbrio para a ligao da
segunda protena :
log K  (10,88 kcal/mol)/(1,41 kcal/mol)  7,7
K  5  107 M1

3-14 Os valores calculados para a frao ligada de tmRNA em funo da concentrao


de SmpB so mostrados na Tabela R3-1. Tambm so mostrados os valores arre-
dondados, mais fceis de memorizar.
Estas relaes so teis no apenas quando pensamos em valores de Kd, mas
tambm para a cintica enzimtica. A velocidade de reao expressa como uma
frao da velocidade mxima :
velocidade/Vmx  [S]/ ([S]  Km)

tendo a mesma forma da equao para a frao ligada. Portanto, quando a con-
centrao de substrato, [S], 10 vezes maior que a constante de Michaelis, Km,
a velocidade igual a 90% da velocidade mxima, Vmx. Quando [S] 100 vezes
menor que o valor de Km, a velocidade 1% da Vmx.
Estas relaes tambm so vlidas para a dissociao de grupos cidos, HA,
como funo dos valores de pH. Quando o valor de pH se encontra 2 unidades
acima do valor de pK, 99% dos grupos cidos esto ionizados. Quando o valor de
pH 1 unidade menor que o valor de pK, 10% destes grupos esto ionizados.

3-15 Quando [S]  zero, a velocidade igual a 0/Km e, portanto, igual a zero. Quando
[S]  Km, a razo de [S]/([S]  Km) igual a , e a velocidade igual a 1/2 Vmx. Em
valores infinitos de [S], a razo [S]/([S]  Km) igual a 1, e a velocidade igual a
Vmx.

3-16
A. Uma enzima composta inteiramente por D-aminocidos apresentar a mesma
conformao da enzima composta por L-aminocidos, sendo a sua imagem espe-
cular exata.
B. Espera-se que esta enzima correspondente imagem especular seja capaz de re-
conhecer a imagem especular do seu substrato. Desta forma, uma D-hexoina-
se adicionaria um fosfato a uma molcula de l-glicose, mas no molcula de
d-glicose.
Este experimento foi conduzido com a protease do HIV. A protease especular
capaz de reconhecer e clivar a estrutura especular do seu substrato.

Referncia: Milton RC, Milton SC e Kent SB (1992) Total chemical synthesis of


Tabela R3-1 Valores calculados a D-enzyme: the enantiomers of HIV-1 protease show reciprocal chiral substrate
para a frao ligada em funo specificity. Science 256, 1445-1448.
da concentrao de protena
(Resposta 3-14). 3-17 A hemoglobina capaz de ligar molculas de oxignio de maneira eficaz nos pul-
mes, pois ali a presso parcial de oxignio alta. Nos tecidos, a presso parcial
Frao
de oxignio mais baixa, pois ele est presente em concentraes menores, uma
Ligada Valores
vez que consumido constantemente no metabolismo. Em condies de menor
[Protena] (%) arredondados
presso parcial de oxignio, a hemoglobina libera estas molculas. Este fenmeno,
4
10 Kd 99,99 99,99 que causado pelo equilbrio de ligao, favorecido por interaes alostricas
103 Kd 99,9 99,9 entre as quatro subunidades que compem uma molcula funcional de hemoglo-
102 Kd 99 99 bina.
101 Kd 91 90
Kd 50 50 3-18 Uma hiptese vivel seria o excesso de AMP mediar a inibio por retroalimenta-
10-1 Kd 9,1 10 o da enzima que converte E em F, e o excesso de GMP mediar a inibio por re-
10-2 Kd 0,99 1 troalimentao da etapa que converte E em H. O intermedirio E, que acumularia
10-3 Kd 0,099 0,1 pela inibio destas enzimas, por sua vez mediaria a inibio por retroalimenta-
10-4 Kd 0,0099 0,01 o da etapa que converte R5P em A. Diversas vias metablicas, que se subdivi-

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Captulo 3 Protenas 17

Figura R3-2 Padro de inibio da via


metablica de sntese de nucleotdeos
100% F G AMP de purina (Resposta 3-18).
50%
R5P A B C D E
50%
100% H I GMP

dem em duas ou mais vias distintas, so reguladas desta maneira. No entanto, a


via de sntese de nucleotdeos de purina regulada de um modo distinto (Figura
R3-2). As molculas de AMP e GMP regulam as etapas de E para F e de E para H,
como descrito anteriormente, mas tambm regulam a etapa que converte R5P em
A. Para evitar que o excesso de um destes nucleotdeos seja capaz de inibir toda
a via, cada um deles, individualmente, capaz de inibir a enzima que converte
R5P em A em apenas 50% da sua atividade normal; somente quando os dois nu-
cleotdeos esto presentes em excesso que esta enzima e toda a via metablica
subsequente completamente inibida.

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Alberts-Resp_Book.indb 18 23.11.09 10:54:31
DNA, Cromossomos
e Genomas 4
4-1 Verdadeiro. Os homens possuem um total de 24 cromossomos diferentes (22 au-
tossomos, um X e um Y) e as mulheres 23 cromossomos diferentes (22 autosso-
mos e 2 cromossomos X).

4-2 Verdadeiro. Camundongos e humanos divergiram a partir de um ancestral co-


mum. Suas sequncias de DNA sofreram mutaes aleatrias. As regies que fo-
ram conservadas so aquelas com funes importantes. Quando as mutaes tm
efeitos deletrios, a seleo natural se encarrega da eliminao.

4-3 Verdadeiro. A carga negativa do esqueleto de DNA pode ser neutralizada pelas
cargas positivas das cadeias laterais bsicas de lisina e arginina, que so os amino-
cidos presentes no cerne das histonas.

4-4 Falso. O movimento dos nucleossomos ao longo do DNA ou mesmo entre seg-
mentos de DNA pode ser catalisado pelos complexos de remodelamento da cro-
matina utilizando a energia da hidrlise de ATP.

4-5 Verdadeiro. A duplicao gnica permite que um dos dois genes sofra divergncia,
isto , adquira funes diferentes, mas relacionadas.

4-6 O resultado no surpreenderia, pois o DNA do M13 de fita simples, onde no


ocorre o pareamento de A com T e G com C. J em DNAs de fita dupla vale a regra
de equivalncia de moles entre A-T e G-C.

4-7 Os carbonos na ribose so numerados no sentido horrio, iniciando com C1, o


carbono ao qual a base se liga, e terminando com C5.

4-8 Como C sempre forma par com G nos DNAs de fita dupla, ento a quantidade de
G igual a de C, ou seja, 20% em base molar. O restante a quantidade de A e T,
que tambm se equivalem, sendo de 30% cada.

4-9 O cromossomo intermedirio e os locais de inverso esto indicados na Figura


R4-1.

4-10 Um total de 1.360 nm de DNA dplex reduzido a 50 nm de fibra de cromatina ([20


nucleossomos] x [200 pb/nucleossomo] x [0,34 nm/pb] = 1.360 nm) representa
uma condensao de 27 vezes (1.360 nm/50 nm = 27,2). Esse nvel de empacota-
mento representa 0,27% (27/10.000) da condensao total que ocorre na mitose.

Primeira Segunda
inverso inverso

Figura R4-1 Inverses e cromossomo


intermedirio na evoluo do cromos-
somo 3 em orangotangos e humanos.
Orangotango Intermedirio Humano (Resposta 4-9).

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20 Captulo 4 DNA, Cromossomos e Genomas

4-11 Os efeitos biolgicos da metilao das histonas dependem do local da metilao


e dos aminocidos ao redor do stio. Isso determinar quais protenas efetoras se
ligaro e seus efeitos.

4-12 A presena de dois centrmeros torna o cromossomo instvel, pois os microtbu-


los de cada polo se ligariam aos cinetocoros que esto associados com cromtides
diferentes. Quando isso ocorre, cada cromtide ser puxada para os polos opostos
dos fusos com fora suficiente para quebrar os cromossomos.

4-13 Todas as protenas HP1 se ligam especificamente forma dimetilada na lisina 9


do peptdeo N-terminal H3. Essa associao sugere que esta forma seja encontra-
da na heterocromatina.

Referncia: Lachner M, OCarroll D, Rea S, Mechtier K e Jenuwein T (2001)


Methylation of H3 lysine 9 creates a binding site for HP1 proteins. Nature 410,
116-120.

4-14 Como os blocos dos gene Hox so ricos em segmentos no codificantes conser-
vados e, provavelmente, elementos reguladores, as inseres de elementos trans-
ponveis nesses blocos so eliminadas por seleo de purificao. Essas inseres
provavelmente interrompem a regulao apropriada dos genes Hox.

Referncia: Lander ES et al. (2001) Initial sequencing and analysis of the human
genome. Nature 409, 860-921.

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Replicao, Reparo e
Recombinao de DNA 5
5-1 Esta afirmao pode ser verdadeira. A cada diviso celular existe a chance de
ocorrerem mutaes (6,4 mutaes cada vez que o genoma copiado). Dessa for-
ma, normalmente duas clulas-filhas sero diferentes uma da outra e diferentes
da clula parental. Ocasionalmente, o genoma pode ser copiado perfeitamente e
dar origem a clulas-filhas idnticas.

5-2 Verdadeiro. Se a forquilha de replicao se mover 500 pares de nucleotdeos por


segundo, o DNA frente deve rotar a 48 revolues por segundo ou 3.000 revolu-
es por minuto.

5-3 Verdadeiro. Considerando uma fita-molde simples e o sentido da transcrio sem-


pre 5-3, a fita-lder sempre encontra uma fita descontnua, independentemente
da origem.

5-4 Falso. O reparo de um erro em ambas as fitas de um dplex requer a informao de


uma cromtide-irm ou de um homlogo, e o reparo de erro em uma fita simples
depende apenas da informao contida nas duas fitas do DNA de hlice dupla.

5-5 A variao na frequncia dos mutantes depende do momento em que ocorreu a


mutao. Culturas com apenas uma mutao a adquiriram na ltima gerao e
culturas com muitas mutaes a adquiriram na fase inicial do crescimento, antes
de se dividirem vrias vezes.

Referncia: Luria SE e Delbruck M (1943) Mutations of bacteria from virus


sensitivity to virus resistance. Genetics 28, 491-511.

5-6 Se as enzimas de reparo no distinguissem entre a fita-molde e a recm-sinte-


tizada, haveria uma chance de apenas 50% do erro ser corrigido, resultando em
50% de mutantes e 50% de no mutantes na prognie, nmero equivalente ao do
reparo indiscriminado.

5-7 A maioria dos nucleotdeos pareados incorretamente removida pela exonuclea-


se de reparo associada com a DNA-polimerase, mas as DNA-polimerases tambm
so capazes de estender um iniciador mal pareado.

Referncia: Johnson KA (1993) Conformational coupling in DNA polymerase fi-


delity. Annu. Rev. Biochem. 62, 685-713.

5-8 A forma de H representa a clivagem que ocorreu em um stio dentro da bolha. Se


as estruturas forem colocadas em ordem de acordo com o tamanho crescente da
bolha (Figura R5-1), poder ser visualizado um caso de replicao bidirecional a
partir de uma nica origem de replicao, provavelmente. No se pode descartar
a possibilidade de duas origens de replicao a pontos equidistantes do stio de
restrio usado. Isso pode ser esclarecido repetindo o experimento e utilizando
uma enzima de restrio diferente.

5-9 Em vrios locais nas clulas de vertebrados, a sequncia CG metilada. A desa-


minao espontnea do C metilado d origem a um T. Esse T removido por uma
DNA-glicosilase que o reconhece como mal pareado. Com o tempo, as mutaes
elevadas dos dinucleotdeos CG resultaram em sua perda preferencial, levando a Figura R5-1 Replicao bidirecional a par-
sua subrepresentao no genoma humano. tir de uma nica origem (Resposta 5-8).

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22 Captulo 5 Replicao, Reparo e Recombinao do DNA

5 3 5-10 Caso as quebras com reparo impreciso estejam distribudas aleatoriamente pelo
genoma, ento esperado que 2% alterem genes ou reguladores importantes.
5 3
Desta forma, as funes de cerca de 40 genes estariam comprometidas em cada
clula. Como o genoma humano diploide, para alguns loci o alelo no afetado
seria suficiente para a funo normal da protena, j para outros a funo poderia
ser afetada.

Referncia: Lieber MR, Ma Y, Pannicke U e Schwarz K (2003) Mechanism and


regulation of human non-homologous DNA end-joining. Nat. Rev. Mol. Cell Biol.
5 3 4, 712-720.

5-11 Duas verses da juno Holliday dupla resultante de uma invaso de fitas esto
mostradas na Figura R5-2.
5 3 5-12 A recombinao irrestrita entre sequncias repetidas rearranjaria rapidamente
ou o genoma, o que levaria a um grande nmero de descendentes inviveis, colo-
cando a espcie em risco. Essa calamidade evitada pelo sistema de reparo de
5 3 erros. As sequncias repetidas diferem um pouco umas das outras. Quando os
intermedirios da recombinao se formam entre essas sequncias, muitos erros
esto presentes nas regies de heterodplex. Esses erros em grande quantidade
5 3 so detectados pelo sistema de reparo, que aborta o processo de recombinao
assegurando que as sequncias em recombinao sejam bastante idnticas.
Figura R5-2 Juno Holliday dupla (Res-
posta 5-11). A nova sntese de DNA est
indicada por linhas onduladas.

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Como as Clulas Leem o
Genoma: Do DNA Protena 6
6-1 Verdadeiro. Quando ocorre um erro na duplicao do DNA, isso poder afetar to-
das as clulas que se originarem a partir da clula que carrega a alterao. No caso
de clulas mitticas, as clulas-filhas e as geraes celulares posteriores sero po-
tencialmente afetadas, e no caso de clulas da linhagem germinativa, o novo or-
ganismo que for gerado carregar a alterao em todas as suas clulas. Quando se
consideram erros de transcrio, apenas algumas molculas de RNA produzidas
vo conter estes erros. Como as molculas de RNA geralmente apresentam uma
meia-vida curta, sendo degradadas com relativa rapidez, e como tambm existem
outros mecanismos de controle de qualidade em pontos posteriores da cascata,
alteraes na transcrio so menos perigosas do que alteraes na duplica-
o do DNA. Entre as evidncias que apontam para esta diferena entre as con-
sequncias de alteraes sobre a duplicao e a transcrio salienta-se o fato de
RNA-polimerases apresentarem uma taxa de erro de aproximadamente um erro a
cada 104 nucleotdeos copiados, ao passo que as DNA-polimerases cometem um
erro a cada 107 nucleotdeos. Assim, em termos de seleo natural, parece que
erros cometidos por RNA-polimerases so mais tolerados do que erros cometidos
por DNA-polimerases.

6-2 Falso. As sequncias dos ntrons apenas so potencialmente menos importantes


se no for considerada a ocorrncia de splicing alternativo. Alm disso, os ntrons
devem ser removidos com total preciso para que no ocorram alteraes na fase
de leitura do mRNA resultante e consequente traduo de protenas alteradas. Um
outro fator associado aos ntrons tem relao com as sequncias de microRNAs,
que so sequncias reguladoras da expresso gnica. Como pode ser percebido, a
prpria afirmao de que os ntrons so lixo gentico est inadequada.

6-3 Falso. O pareamento oscilante ocorre entre a terceira posio do cdon e a primei-
ra posio do anticdon. Lembre-se sempre que a contagem dos nucleotdeos
feita na direo de 5 para 3 da fita de cidos nucleicos que est sendo considera-
da.

6-4 Falso. Este argumento sempre levou em considerao que poucos tipos de reaes
esto representados nas ribozimas das clulas atuais, mas sabe-se que muitos
processos catalticos nas clulas atuais so realizados por ribozimas (a traduo
o melhor exemplo). Alm disso, experimentalmente j foi possvel identificar
diversas ribozimas com capacidades de catlise relativas a uma ampla gama de
reaes biolgicas e to ou quase to eficientes quanto enzimas proteicas. Se as ri-
bozimas esto subrepresentadas nas clulas modernas isso provavelmente ocorra
devido disponibilidade de 20 aminocidos, em contrapartida s quatro bases.
Essa diferena entre os componentes de cidos nucleicos e protenas permite po-
tencialmente que as enzimas proteicas utilizem um nmero maior de estratgias
catalticas e lhes fornece maior possibilidade de ligao a diferentes substratos.

6-5 Na Figura Q6-1 (p. 409, do original), a RNA-polimerase deve estar se movimentan-
do da direita para a esquerda e no apresenta possibilidade de girar livremente
em torno da fita-molde, pois pode-se observar tanto supertores positivas, a sua
frente (representando uma compactao), quanto supertores negativas, atrs
dela (representando relaxamento da fita de DNA). Isso s est ocorrendo porque,

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24 Captulo 6 Como as Clulas Leem o Genoma: Do DNA Protena

como salientado anteriormente, algo impede que a RNA-polimerase gire livre-


mente em torno do molde medida que se movimenta sobre o DNA. Caso no
houvesse esse impedimento, a RNA-polimerase poderia girar sobre a fita de DNA
e no haveria nem compactao e nem relaxamento da fita e, consequentemente,
no haveria formao das supertores.

Referncia: Liu LF e Wang JC (1987) Supercoiling of the DNA template during


transcription. Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 84, 7024-7027.

6-6 A fosforilao do CTD permite o incio da transcrio, pois libera a RNA-poli-


merase das outras protenas, fazendo com que ela possa movimentar-se sobre a
fita-molde. Ao ocorrer a fosforilao do CTD, e a consequente dissociao destas
protenas, criam-se as condies para que um outro grupo de protenas se asso-
cie RNA-polimerase. Estas novas protenas associadas RNA-polimerase so de
extrema importncia para o processamento da fita de RNA que est sendo sin-
tetizada, e entre as funes que desempenham pode-se citar o capeamento da
extremidade 5, o splicing de ntrons e a poliadenilao da extremidade 3.

6-7 Para responder esta questo, deve-se inicialmente considerar que a fase de leitura
de qualquer um dos transcritos maduros originados dada pelo xon 1. Assim,
seja qual for a sequncia ou o nmero de nucleotdeos dos demais xons, impre-
terivelmente a fase de leitura j estar estabelecida quando a maquinaria de tra-
duo alcanar um ponto determinado qualquer. As afirmaes A e B podem
ser verdadeiras, mas no so obrigatoriamente verdadeiras. Tanto no caso dos
xons 2 e 3 quanto no caso dos xons 7 e 8, o importante que a fase de leitura de-
finida no seja alterada, visto que a sequncia proteica deve ser a mesma para os
segmentos do mRNA que correspondem aos xons 1 e 10. Assim, se for utilizado
o xon 2 ou o xon 3 (ou o 7 versus o 8), o importante que a entrada no xon
a seguir respeite a fase de leitura normal (ou padro) para aquele xon, e isso s
poder ocorrer seguindo-se obrigatoriamente a afirmao C, ou seja, os xons al-
ternativos devem possuir um nmero de nucleotdeos que, quando dividido por
trs (o nmero de nucleotdeos em um cdon), apresente o mesmo resto. Pode-se
testar este exerccio visto que a sequncia do gene da -tropomiosina conhe-
cida: tanto o xon 2 quanto o xon 3 contm o mesmo nmero de nucleotdeos
(126), que divisvel por trs, sem resto, e portanto permitem a entrada no xon
seguinte na mesma fase. Os xons 7 e 8 tambm contm o mesmo nmero de
nucleotdeos, que dividido por trs fornece um resto igual a um. Conforme salien-
tado anteriormente, apesar de conterem o mesmo nmero de nucleotdeos (o que
parece dar razo resposta A), este fato no obrigatrio. Se o xon 2 tivesse 126
nucleotdeos e o xon 3 possusse 129 nucleotdeos, a entrada no xon seguinte
ocorreria na mesma fase de leitura.

6-8 Como est sendo considerado que todas as mutaes envolvem uma nica altera-
o nucleotdica, consultando uma Tabela do cdigo gentico pode ser concludo
que s os seguintes cdons poderiam estar envolvidos: GUG para valina, GCG
para alanina, AUG para metionina e ACG para treonina. Para que houvesse isola-
mento de um mutante valina para treonina em um nico passo, seria necessrio
que dois nucleotdeos adjacentes sobre o cdon GUG (valina) fossem alterados
(o primeiro G para A e o U para C), originando o ACG que codifica para treoni-
na. Deve ser considerado que, apesar de estarmos trabalhando com mutagnese
induzida, cada uma das alteraes, individualmente, resultante de um evento
relativamente pouco frequente e que, portanto, a ocorrncia de dois eventos de
mutao em dois nucleotdeos adjacentes seria ainda menos frequente; ou seja,
um duplo mutante deve ser bastante raro.

6-9 A traduo depende do encaixe dos tRNAs carregados no stio adequado, encaixe
este determinado pelo pareamento correto entre cdon e anticdon. O EF-Tu po-
siciona um tRNA-aminoacil (o tRNA carregado) no stio aceptor do ribossomo e
sofre hidrlise do GTP ligado, o que faz com que ele deixe o stio, abandonando o
tRNA-aminoacil. Como a taxa de hidrlise do GTP mais rpida quando um pa-
reamento cdon-anticdon correto est formado, se um tRNA-aminoacil pareado
incorretamente encontra-se no stio aceptor, o GTP do EF-Tu demora mais tempo

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Captulo 6 Como as Clulas Leem o Genoma: Do DNA Protena 25

para ser hidrolisado e, consequentemente, h uma maior possibilidade de que o


tRNA-aminoacil deixe o stio aceptor sem que tenha depositado ali sua carga. Este
, portanto, o primeiro momento de parada para controle da exatido da sntese.
O segundo momento refere-se ao tempo existente entre a dissociao do EF-Tu
e a acomodao completa do tRNA no stio A. Este intervalo tambm menor
quando h um pareamento correto entre cdon-anticdon. Assim, tRNAs con-
tendo um pareamento correto se acomodam no stio A mais rapidamente (devido
ao maior nmero de ligaes de hidrognio entre cdon-anticdon), enquanto
tRNAs pareados incorretamente apresentaro um maior potencial para a disso-
ciao.

6-10 As protenas normais e adequadamente dobradas possuem a maior parte dos


aminocidos hidrofbicos no interior de sua estrutura, distante da gua. pos-
svel encontrar protenas com pores hidrofbicas expostas, mas em geral estas
protenas correspondem a subunidades cuja formao de complexos com outras
subunidades leva ao sequestro dos aminocidos hidrofbicos. Como geralmente
no se encontram pores hidrofbicas extensas na superfcie de protenas nor-
mais (o que parece ser bastante lgico devido necessidade de constante intera-
o das protenas com seu microambiente), a presena deste tipo de regio indi-
ca que algo est errado na conformao da protena em questo. Diversas so as
possveis razes para a presena de pores hidrofbicas extensas na superfcie
de uma protena, tais como um dobramento incorreto devido sntese truncada
da protena ou a ocorrncia de degradao ou outro incidente aps sua sada do
ribossomo. Pode-se imaginar tambm que esta uma subunidade que ainda no
encontrou seu par, seja devido a algum desequilbrio na taxa de expresso das
diferentes subunidades de um dado complexo proteico ou devido incapacidade
de interao com a subunidade adequada. Seja qual for a razo, estas protenas
sero identificadas pelas chaperonas.

6-11 As chaperonas so protenas que desempenham uma atividade biolgica pela


interao com outras molculas e consequentemente tambm devem ser dobra-
das sob uma conformao especfica e adequada para seu funcionamento. Como
qualquer outra protena, as chaperonas tambm so sintetizadas nos ribossomos.
Quando uma protena est sendo sintetizada nos ribossomos, ela entra em con-
tato com as chaperonas Hsp70 e semelhantes a Hsp60, que as auxiliam a adotar
um dobramento correto. As chaperonas que se encontram nos ribossomos no
selecionam as molculas que iro auxiliar de acordo com a funo que eventual-
mente desempenharo (seria impossvel para as protenas desempenharem suas
funes no ribossomo, mesmo antes de estarem adequadamente dobradas). As-
sim, sejam quais forem as molculas que esto sendo sintetizadas (mesmo chape-
ronas), elas sero auxiliadas no processo de dobramento por chaperonas Hsp70
e semelhantes a Hsp60 adequadamente dobradas que j esto presentes. Um im-
portante ponto a salientar que, na diviso celular, as clulas-filhas devem herdar
uma certa quantidade de molculas chaperonas funcionais da clula original para
que possam dar seus primeiros passos no processo de sntese de protenas ade-
quadamente dobradas.

6-12 O RNA capaz de atuar tanto no estoque da informao gentica, atividade que
ainda desempenha em certos organismos, como determinados vrus, quanto na
catlise de reaes qumicas, atividade representada pelas ribozimas. Ou seja, o
RNA apresenta caractersticas que o aproximam tanto do DNA quanto das prote-
nas. O somatrio destas caractersticas nos permite imaginar um processo original
de duplicao de molculas de RNA que aliasse a atividade cataltica manuteno
desta informao (referente capacidade cataltica) nas molculas-filhas. A con-
tinuidade deste processo de duplicao, a gerao de novas molculas-filhas e a
incorporao de novas informaes representariam os passos iniciais da evoluo
da vida naquele que chamado o mundo de RNA. Como ainda hoje molculas
de RNA podem ser observadas atuando como catalisadoras de diferentes reaes
fundamentais nas clulas, esta proposta bastante atraente e parece vivel.
Apesar de poder estocar informao, o RNA uma molcula muito mais fr-
gil que o DNA. Geralmente composta por uma fita simples, a molcula de RNA
mais sensvel a leses do que o DNA. No RNA, o grupo hidroxila no carbono 2 do

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26 Captulo 6 Como as Clulas Leem o Genoma: Do DNA Protena

C U acar ribose um agente para a catlise da ligao fosfodister 3-5, que une os
5 G C A C C G nucleotdeos adjacentes. Como o DNA usa desoxirribose, escapa deste mecanis-
U
3 C G U G G C mo de quebra da cadeia. Alm disso, como a hlice dupla do DNA composta por
A C duas fitas complementares, no caso de leso ou mesmo de incorporao de um
nucleotdeo errneo durante o processo de duplicao do DNA, h a possibilida-
de de que estes danos sejam reparados eficientemente pela comparao com a
sequncia da fita complementar. A prpria composio de bases do DNA torna-o
5 GCACUCCGUCGGCAUGC 3
mais eficiente como estoque mais estvel de informao. O uso de timina no DNA
3 CGUGAGGCAGCCGUACG 5 (no RNA usada a uracila) estabelece uma proteo contra os efeitos da deamina-
o. A deaminao de T d origem a uma base anormal (metil C), que facilmente
identificada como estranha aos cidos nucleicos, ao passo que a deaminao de U
d origem a um C, que uma base normalmente presente.
G
5 G C A U C C G 6-13 O sistema de complementaridade reversa faz com que uma molcula comple-
A
3 C G U G G G C mentar a este RNA possua uma sequncia que formar um grampo bastante se-
A melhante ao desta molcula, como ilustrado na Figura R6-1.
As estruturas destas duas molculas em grampo sero bastante semelhantes,
Figura R6-1 Estruturas em grampo sendo idnticas nas regies de fita dupla que envolvem pareamentos de base GC
formadas por uma fita de RNA, cuja se- e AU tradicionais. As regies de fita simples seriam distintas entre as duas mol-
quncia foi dada na Questo 6-13, e sua
culas em grampo. Alm dos pareamentos tradicionais de base (GC e AU), no RNA
fita complementar (sequncia inferida a
pareamentos GU tambm podem estar presentes e so estveis. Desta forma, a
partir da sequncia de RNA original for-
necida). Na parte central da figura esto molcula complementar sequncia de RNA que foi dada nesta questo formaria
ilustradas as sequncias de RNA de fita um grampo com um pareamento a mais do que o grampo da molcula original.
simples (emparelhadas para evidenciar Essa diferena est representada na Figura R6-1.
sua complementaridade), e acima e
abaixo esto ilustradas as respectivas
estruturas em grampo derivadas. O pa-
reamento incomum GU na estrutura em
grampo, abaixo do dplex, est salien-
tado em um quadro tracejado.

Alberts-Resp_Book.indb 26 23.11.09 10:54:32


Controle da Expresso Gnica 7
7-1 Verdadeiro. Tanto o motivo hlice-ala-helice quanto o motivo zper de leucina
so motivos estruturais que permitem a formao de dmeros de protenas regu-
ladoras, de maneira que cada subunidade do par possa se posicionar no sulco
maior da cadeia de DNA.

7-2 Falso. Apesar de existirem numerosos exemplos de rearranjos reversveis como


mecanismo regulador em procariotos, no existem evidncias de que o mesmo
ocorra em mamferos.

7-3 Verdadeiro. Nas regies no metiladas do genoma, a deaminao espontnea da


citosina em uracila pode ser prontamente reconhecida e reparada. No entanto, a
deaminao da base 5-metil-citosina origina uma timina, uma base de ocorrncia
normal no DNA, o que dificulta o reconhecimento deste dano pela maquinaria de
reparo celular. Consequentemente, dinucleotdeos CG metilados foram elimina-
dos da linhagem germinativa durante a evoluo, deixando as chamadas ilhas
CG associadas s sequncias de promotores ativados.

7-4 Cada fosfato adicionado altera a carga da protena em uma unidade, mas tem pou-
co efeito sobre a sua massa molecular. Como consequncia, as protenas que di-
ferem apenas no nmero de fosfatos adicionados iro apresentar a mesma massa,
mas diferentes pontos isoeltricos, formando um conjunto de bandas horizontais,
conforme mostrado na Figura R7-1. importante ressaltar que um conjunto de
bandas horizontais no prova que estas protenas estejam relacionadas por fos-
forilao; podem ser protenas de mesma massa molecular e pontos isoeltricos
distintos. Para resolver este problema, possvel tratar as amostras com fosfatase
antes da separao por eletroforese.

7-5 A expresso gnica de clulas concerosas varia em apenas alguns oncogenes e


genes supressores de tumores. Comparando a abundncia de centenas a milha-
res de mRNAs, como ocorre nos microarranjos de DNA, os padres de expresso
dos genes no alterados (a grande maioria) permitem a identificao do tecido de
origem do cncer.

7-6 Sob condies especficas (mesma concentrao de DNA e de protenas regulado-


ras), uma protena encontrar o seu stio de reconhecimento com a mesma efic-
cia no ncleo de uma clula eucaritica e no interior de uma bactria. Considere
o volume do ncleo de uma clula eucaritica, que diretamente comparvel ao
interior de uma bactria. Nestes volumes aproximados, a habilidade de uma pro-
maior

Figura R7-1 Protenas em um gel bidi-


mensional que podem diferir entre si
apenas pelo nmero de fosfatos ligados
(Resposta 7-4). Um pequeno conjunto
de bandas horizontais, que pode es-
menor

tar relacionado por fosforilao, est


destacado. Nem todos os conjuntos de
cido bsico protenas esto indicados.

Alberts-Resp_Book.indb 27 23.11.09 10:54:32


28 Captulo 7 Controle da Expresso Gnica

tena reguladora de encontrar o seu stio de ligao equivalente. Desde que as


concentraes de DNA e de protenas reguladoras sejam as mesmas, o volume
total da clula no far diferena.

Referncia: Ptashne M (1986) A Genetic Switch: Gene Control and Phage , p.


114. Oxford, UK: Blackwell Scientific Press.

7-7
A. Algumas das molculas de RNA-polimerase desviaram do fluxo principal, pois
se ligam ao DNA e deslizam antes de se desligarem e retornarem ao fluxo prin-
cipal das molculas. Esta ligao no deve ser especfica, pois as molculas de
RNA-polimerase se deslocam por longas distncias de DNA. Algumas regies da
molcula de RNA-polimerase, normalmente envolvidas na ligao a sequncias
promotoras, tambm esto envolvidas no seu deslocamento pela cadeia de DNA,
pois esta ligao no especfica eliminada quando a RNA-polimerase encontra
uma regio da cadeia de DNA que contenha uma sequncia promotora forte.
B. O deslocamento ao longo da cadeia de DNA permite que protenas que se ligam
ao DNA em locais especficos possam encontrar seus alvos muito mais rapida-
mente do que seria esperado atravs de uma difuso tridimensional, pois reduz
a dimenso de busca pela regio de ligao para apenas uma. Acredita-se que a
maior parte das protenas que se liga ao DNA em locais especficos acelere a sua
ligao por deslocamento pela cadeia de DNA e transferncia entre segmentos da
cadeia.
C. Se as sequncias-alvo estiverem presentes em molculas curtas de DNA, o tempo
de busca por estas sequncias ser lento e muito prximo ao de uma busca tridi-
mensional. Por outro lado, se estas sequncias-alvo estiverem presentes em lon-
gas molculas de DNA, esta busca ser acelerada pelo processo de deslocamento.
Desta forma, protenas que se ligam ao DNA em locais especficos encontraro
seus alvos mais rapidamente em uma populao de longas molculas de DNA.

Referncias: Kabata H, Kurosawa O, Arai I, Washizu M, Margarson SA, Glass RE e


Shimamoto N (1993) Visualization of single molecules of RNA polymerase sliding
along DNA. Science 262, 1561-1563.

Shimamoto N (1999) One-dimension diffusion of proteins along DNA. J. Biol.


Chem. 274, 15293-15296.

7-8 Um conjunto de clulas especializadas, localizadas no hipotlamo as clulas


do ncleo supraquiasmtico (SCN, do ingls suprachiasmatic nucleus) regula o
ritmo circadiano. Estas clulas recebem estmulos da retina, no dos cones e bas-
tonetes as clulas responsveis pela percepo da luz mas sim de um subcon-
junto de clulas do gnglio da retina, que tambm respondem luz. Estes sinais
originados na retina chegam s clulas do SCN, fornecendo informaes sobre o
ciclo de claro e escuro. Nas pessoas completamente cegas, estas informaes do
ciclo claro e escuro no chegam ao SCN, e estas clulas funcionam ento em um
ritmo prprio, um pouco mais longo que 24 horas, no reguladas por estmulos
externos. Pessoas cegas normalmente apresentam perodos de insnia ou de sono
durante o dia, consequncia de oscilaes no ritmo circadiano.

Referncia: Sack RL, Brandes RW, Kendall AR e Lewy AJ (2000) Entrainment of


free-running circadian rhythms by melatonin in blind people. N. Engl. J. Med. 343,
1114-1116.

7-9 Estes resultados indicam que a sntese tecido-especfica da ApoB100 nas clulas
do fgado e da protena ApoB48 nas clulas do intestino resultado da diferena
no processamento dos transcritos de RNA. Os resultados apresentados na Tabela
Q7-1 (p. 498 da obra) mostram que o DNA oriundo do fgado e do intestino apre-
senta a sequncia oligo-Q, mas no a sequncia oligo-STOP. Portanto, as diferen-
as observadas nos tecidos no podem resultar da presena de genes indepen-
dentes. Como o mRNA ApoB do intestino apresenta um cdon de parada onde
o mRNA ApoB do fgado apresenta um cdon da glutamina, as duas molculas
de mRNA no codificam a mesma protena. As protenas ApoB48 e ApoB100 no
esto relacionadas por clivagens tecido-especficas. Um destes dois tecidos altera

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Captulo 7 Controle da Expresso Gnica 29

um nucleotdeo especfico durante a expresso do gene ApoB. Os resultados da


Tabela Q7-1 mostram que as sequncias complementares de nucleotdeos com
o cdon de terminao (oligo-STOP) esto presentes apenas no RNA intestinal.
Portanto, o intestino altera especificamente um nucleotdeo na sequncia do
transcrito, o que marca uma das primeiras descobertas do processo de edio de
sequncias de RNA.

Referncias: Powell LM, Wallis SC, Pease RJ, Edwards YH, Knott TJ e Scott J (1987)
A novel form of tissue-specific RNA processing produces apolipoproteins-B48 in
intestine. Cell 50, 831-840.

Chen S-H, Habib G, Yang CY, Gu ZW, Lee BR, Weng S-A, Silbermann SR, Cai S-J.
Deslypere JP, Rosseneu M, Gotto AM, Li W-H e Chan L (1987) Apolipoprotein B-48
is the product of a messenger RNA with an organ-specific in-frame stop codon.
Science 238, 363-366.

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Manipulao de Protenas,
DNA e RNA 8
8-1 Falso. Um anticorpo monoclonal reconhece um stio antignico especfico, mas
isso no significa que ele se ligar apenas a uma protena especfica. Os stios an-
tignicos podem ser similares, mas no idnticos, podendo ligar o anticorpo com
afinidades diferentes. Tambm no incomum que diferentes protenas tenham
uma mesma sequncia de 5 a 6 aminocidos na sua superfcie, ou seja, o mesmo
stio antignico.

8-2 Falso. Nenhum instrumento capaz de detectar menos do que uma molcula, ou
seja, 1,7 yoctomol. Um yoctomol equivale a 0,6 molcula.

Referncia: Castagnola M (1998) Sensitive to the yoctomole limit. Trends Bio-


chem. Sci. 23, 283.

8-3 Falso. A determinao das velocidades de associao e dissociao permite o cl-


culo da constante de ligao por SPR, K = koff/kon

8-4 Verdadeiro. Se cada ciclo duplica a quantidade de DNA, ento 10 ciclos equivalem
a 210 amplificaes, 20 ciclos a 220 e 30 ciclos a 230.

8-5 A tripsina uma protease que cliva a maioria das protenas. A colagenase es-
2+
pecfica para o colgeno e o EDTA quela Ca , que necessrio para manter as
caderinas unidas nas ligaes entre as clulas. O tratamento no mata as clulas,
pois os danos ocorrem nos componentes extracelulares que as clulas podem res-
tabelecer.

8-6 Sim. Normalmente isso feito pela introduo de anticorpos de uma espcie em
uma segunda espcie, por exemplo, injetando anticorpos de camundongo em co-
bras. Tambm possvel obter anticorpos contra anticorpos em uma mesma es-
pcie. Nesse caso, a maior parte das molculas injetadas ser reconhecida como
prpria, mas a poro da molcula de anticorpo que se liga ao antgeno, idiotipo,
poder desencadear uma resposta imune.

8-7 A velocidade de sedimentao serve para separar componentes por tamanho ou


forma. Durante a centrifugao, os componentes se movero atravs de um gra-
diente (normalmente de sacarose) de acordo com seu tamanho e forma. O equil-
brio de sedimentao separa os componentes por sua densidade de flutuao. Os
componentes so centrifugados em um gradiente de sacarose at atingirem sua
densidade de equilbrio. Para separar duas protenas de diferentes tamanhos a
velocidade de sedimentao seria mais indicada.

8-8 A velocidade de sedimentao depende do tamanho e da forma da protena.


Como a hemoglobina tem uma forma mais esfrica comparada com a forma mais
alongada da tropomiosina, a hemoglobina tende a sedimentar mais rapidamente
por sofrer uma menor resistncia. A analogia deste efeito pode ser demonstrada
como duas folhas de papel idnticas, uma amassada e outra enrolada. Deixando-
as cair, a folha amassada atingir mais rapidamente o cho do que a enrolada, o
que fundamentado pelos mesmos princpios.

8-9
A. Como mostrado na Figura R8-1A, no incio o DNA est distribudo uniformemen-
te na soluo de CsCl de densidade uniforme. Aps a centrifugao, o CsCl em-
purrado para baixo no tubo, formando um gradiente linear em equilbrio (Figura

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32 Captulo 8 Manipulao de Protenas, DNA e RNA

Figura R8-1 Sedimentao de equil- (A) CONDIO INICIAL (B) APS CENTRIFUGAO
brio do DNA em uma soluo de CsCl
(resposta 8-9). (A) Densidade do CsCl e
1,76

Densidade do CsCl
distribuio do DNA no incio do experi-
mento. (B) Densidade de distribuio do
CsCl e DNA em equilbrio. CsCI
1,70
CsCI

1,64 DNA

R8-1B), onde o DNA vai se concentrando na sua densidade de flutuao, forman-


do uma banda.
B. No centro do tubo de centrifugao, a densidade da soluo de CsCl se iguala
densidade mdia. Como o DNA forma uma banda prximo ao centro, sua densi-
dade de flutuao de cerca de 1,71 g/mL.
C. A espessura da banda no gradiente de CsCl pode ser influenciada pela velocidade
de centrifugao. Quanto mais alta a fora centrfuga, mais estreita a banda. A
expessura tambm pode ser influenciada pela composio dos nucleotdeos. Nes-
se experimento, os fragmentos possuem composies diferentes, cada uma com
uma densidade levemente diferente, contribuindo para a espessura da banda ob-
servada. Alm desses dois fatores, ainda existe a difuso do DNA.

Referncia: Meselson M e Stahl FW (1958) The replication of DNA in Escherichia


coli. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 44, 671-682.

8-10 A tecnologia do hibridoma bastante trabalhosa e demorada. A tcnica de adi-


cionar um eptopo marcador e depois usar um anticorpo comercial muito mais
simples. A adio do eptopo na extremidade terminal N ou C da protena normal-
mente compatvel com a sua funo.

8-11 Como mostrado abaixo para clulas de mamferos, 100 g/mL correspondem a 5
 105 clulas de mamferos e 5 x 108 clulas bacterianas.
clulas 100
g mL clula mg (10
m)
4 3
cm3
   3   3 
gel gel 200 mg 1.000
m 1.000
g (cm) mL
 5  10 clulas/gel
5

Existem 5  1010 protenas de 120 kD em uma banda de 10 ng.


molculas 10 ng nmol 6  10 14 molculas
  
banda banda 120.000 ng nmol
 5  10 molculas/banda
10

Assim, se forem detectadas 5  1010 protenas em uma banda e aplicado o equiva-


lente a 5  105 clulas de mamferos por gel, ento deve haver 105 cpias da pro-
tena por clula (5  1010/5  105) para que ela seja detectada como uma banda
em um gel corado com prata. Para uma clula bacteriana, deve haver 100 cpias
da protena por clula (5  1010/5  108).

8-12 O iniciador 1 hibridizar com a fita inferior e realizar a sntese para a direita, en-
quanto o iniciador 8 hibridizar com a fita superior e realizar a sntese para a
esquerda. Os iniciadores 2, 3, 6 e 7 no hibridizariam com as fitas. Os iniciadores 4
e 5 hibridizariam, mas sintetizariam as fitas para as direes erradas.

8-13 Um fragmento de fita dupla de DNA do tamanho correto gerado no terceiro ciclo
da reao de amplificao (Figura R8-2).

8-14 Uma mutao de ganho de funo normalmente dominante, pois muitas vezes
tem uma consequncia fenotpica mesmo quando a protena est presente em
apenas metade da concentrao da protena do tipo selvagem. Essas mutaes
podem aumentar a atividade da protena tornando-a ativa em momentos inapro-

Alberts-Resp_Book.indb 32 23.11.09 10:54:33


Captulo 8 Manipulao de Protenas, DNA e RNA 33

Figura R8-2 Os produtos de PCR ge-


PRIMEIRO CICLO DA PCR
rados durante os trs primeiros ciclos
5 (Resposta 8-13). O DNA que foi sinteti-
zado durante um ciclo est mostrado
como uma linha em cinza. As posies
3 dos iniciadores nos produtos novos e
velhos esto indicadas. Os primeiros
produtos com tamanho correto esto
SEGUNDO CICLO
dentro do retngulo no ciclo 3.

TERCEIRO CICLO

priados. Uma mutao dominante negativa dominante, pois um nico alelo de-
fectivo capaz de determinar o fentipo, ou seja, mesmo na presena de um alelo
normal, o produto gnico mutante interfere com a funo do produto normal,
causando uma perda de funo.

8-15 Com certeza, assim como ocorreu com outras enfermidades, se a doena no exis-
tisse, o papel da insulina e de outras protenas no seria notado e a identificao e
o seu papel na fisiologia no seriam to bem estudados.

Alberts-Resp_Book.indb 33 23.11.09 10:54:33


Alberts-Resp_Book.indb 34 23.11.09 10:54:33
Visualizao de Clulas 9
9-1 Falso. Os cromossomos humanos condensados tem mais de 1 m de largura, sen-
do possvel visualiz-los por microscopia de contraste de fase ou por contraste de
interferncia diferencial Nomarski.

9-2 Verdadeiro. Comprimentos de onda mais longos correspondem a uma energia


mais baixa, que ocorre durante a absoro e re-emisso.

9-3 Verdadeiro. Um feixe de laser pode ser focado com preciso, e assim ativar mol-
culas encarceradas em um determinado momento e local preciso na clula.

9-4 As lentes de imerso no leo aumentam a largura do cone de luz que alcana a
objetiva, o que uma limitao-chave na resoluo.

9-5 A principal refrao no olho humano ocorre na interface entre o ar e a crnea. As


lentes servem como um ajuste fino para o foco, por causa das pequenas diferenas
no ndice de refrao entre a crnea e as lentes e entre as lentes e o humor vtreo.

9-6 Como o ndice de refrao da gua muito prximo ao da crnea, a principal for-
a refratria da crnea eliminada. culos melhoram a viso embaixo da gua,
pois colocam ar em frente da crnea, restaurando a diferena normal nos ndices
refratrios nessa interface.

9-7 Resoluo se refere habilidade de ver dois objetos pequenos como entidades se-
paradas, e magnificao se refere ao tamanho da imagem em relao ao tamanho
do objeto.

9-8 Ambos os tipos de anticorpos secundrios amplificam o sinal inicial, mas a am-
plificao por anticorpos que carregam enzimas ligadas pode ser at 1.000 vezes
mais eficiente e mais sensvel.

9-9 GFPs mutantes foram geradas com diferentes aminocidos em torno do cromfo-
ro, o que influencia a capacidade do cromforo de interagir com a luz. O compri-
mento de onda no qual o cromforo excitado e no qual ele emite fluorescncia
depende do seu ambiente molecular.

Referncia: Service RF (2004) Immune cells speed the evolution of novel protein.
Science 306, 1457.

9-10 O aumento na FRET depende da fosforilao da protena, uma vez que nenhum
aumento ocorre na ausncia de protena Abl ou ATP, ou quando o fosfato remo-
vido por uma tirosina-fosfatase. Assim, a fosforilao deve fazer com que CFP e
YFP se aproximem. Uma possvel explicao que a adio de um fosfato tiro-
sina no substrato permite que o segmento da protena se dobre para se ligar ao
domnio adjacente de ligao da fosfotirosina, diminuindo a separao dos dom-
nios CFP e YFP (Figura R9-1).

9-11

0,61
Resoluo 
n sin
0,61 (0,004 nm)
sin 
(0,1 nm)
 arcsin 0,0244 = 1,4

Alberts-Resp_Book.indb 35 23.11.09 10:54:33


36 Captulo 9 Visualizao de Clulas

Figura R9-1 Alterao conformacional (A) NO FOSFORILADA (B) FOSFORILADA


na protena reprter FRET aps fosfori-
434 nm
lao da tirosina (Resposta 9-10).
476 nm 434 nm
ET
FR

CF
Cinase + ATP

CF
Substrato

P
fosfatase
YF
P
526 nm
YFP
P
Protena de
ligao
fosfotirosina

Figura R9-2 Protuberncias e depres-


ses podem ser distinguidas, pois as depresses
protuberncias lanam sombras (Res-
posta 9-12).
protuberncias

= 1,4 cerca de 43 vezes (60/1,4) menor do que o para um microscpio


ptico tpico.

9-12 Estruturas protuberantes lanam uma sombra atrs delas mesmas, enquanto que
depresses no. Como mostrado na Figura R9-2, na microscopia a sombra parece
mais brilhante pela ausncia de metal.

Alberts-Resp_Book.indb 36 23.11.09 10:54:33


Estrutura da Membrana 10
10-1 Verdadeiro. Embora os fosfolipdeos difundam rapidamente no plano da membra-
na, os seus grupos polares no podem passar facilmente atravs do centro hidro-
fbico da bicamada, limitando a sua difuso nessa dimenso. Assim, este evento
ocorre muito raramente, e tipos especficos de molculas lipdicas inseridas em
uma monocamada ali permanecem, a menos que sejam transferidos ativamente
por translocadores de fosfolipdeos.

10-2 Falso. Nos compartimentos internos, os carboidratos das membranas internas


tambm esto voltados para o interior da bicamada, em direo ao lmen do
compartimento limitado por membrana.

10-3 Falso. As clulas ajustam a fluidez de suas membranas por meio da modificao
dos lipdeos que as compem. Exemplos clssicos incluem as balsas lipdicas e as
membranas apicais de clulas epiteliais polarizadas.

10-4 Qualquer ruptura na bicamada cria uma ponta exposta gua. Como isso ener-
geticamente desfavorvel, as molculas da bicamada rompida se arranjaro de
forma espontnea para eliminar a extremidade livre, pois a conformao de bica-
mada mais favorvel energeticamente do que a de micelas.

10-5 Este processo converte cido graxo insaturado em saturado, j que ocorre reduo
das ligaes duplas por hidrogenao. O leo vegetal convertido em margarina
porque as cadeias de cidos graxos das molculas lipdicas ficam bem prximas
umas das outras, aumentando a viscosidade. A margarina feita a partir de leos
vegetais hidrogenados, cujas ligaes duplas foram removidas pela adio de to-
mos de hidrognio, tornando-a mais slida temperatura ambiente.

10-6 Uma balsa lipdica composta somente por lipdeos dever possuir 19.000 molcu-
las de lipdeos por monocamada, portanto 38.000 molculas por balsa. O clculo
feito considerando que uma balsa de 70 nm de dimetro tem aproximadamente
3,8  103 nm2 de rea (3,14  352) e uma molcula lipdica de 0,5 nm de dimetro
tem 0,2 nm2 (3,14  0,252). Logo, o nmero de molculas dado por 3,8  103/0,2.
Cerca de 760 protenas devero estar presentes nessa mesma balsa (38.000/50).

10-7
A. Ocorre que o fosfolipdeo 1 est mais acessvel ao ascorbato que o fosfolipdeo 2,
sendo reduzido mais rapidamente. Mais detalhadamente, o radical nitrxido do
fosfolipdeo 1 est na cabea hidroflica que, por sua vez, est em contato direto
com o meio extracelular. Essa proximidade propicia uma rpida reao com o as-
corbato. J o radical nitrxido do fosfolipdeo 2 encontra-se ligado cadeia de ci-
do graxo, estando parcialmente enterrado no interior da membrana e, portanto,
menos acessvel ao ascorbato.
B. Percebe-se que no h alterao no perfil da perda de sinal da ESR dos eritrcitos
fantasmas, com relao ausncia ou presena de ascorbato, em comparao ao
perfil dos eritrcitos normais. provvel que exista algum agente redutor no ci-
toplasma dos eritrcitos normais que seja capaz de reduzir o fosfolipdeo 1 (mais
exposto), mas no o fosfolipdeo 2 (menos exposto). Em resumo, nos eritrcitos
normais, o fosfolipdeo 2 fica estvel na ausncia de ascorbato e o fosfolipdeo 1
fica instvel, pois os fosfolipdeos da monocamanda citoplasmtica so expostos
ao agente redutor citoplasmtico, eliminando metade do sinal.
C. Sim. possvel observar na Figura Q10-3 (p. 649 da obra) que a metade dos fos-
folipdeos 2 era sensvel ao ascorbato, quantidade esta equivalente ao marcador

Alberts-Resp_Book.indb 37 23.11.09 10:54:33


38 Captulo 10 Estrutura da Membrana

presente na monocamada externa; a outra metade era insensvel ao ascorbato,


indicando sua localizao na monocamada citoplasmtica. Outro indicativo o
fato de que o fosfolipdeo 1 apresentou uma sensibilidade de 50% para o agente
redutor citoplasmtico e tambm para o ascorbato.

Referncia: Rousselet A, Guthmann C, Matricon J, Bienvenue A e Devaux PF


(1976) Study of the transverse diffusion of spin labeled phospholipids in biological
membranes: 1. Human red blood cells. Biochim. Biophys. Acta 426, 357-371.

10-8 A sequncia A a candidata mais provvel a formar uma hlice transmembra-


na, visto que composta principalmente por aminocidos hidrofbicos, poden-
do, portanto, estar integrada bicamada lipdica de forma estvel. O fato desta
sequncia conter os aminocidos polares treonina e serina no excludente, j
que no so incomuns em domnios hlice . J a sequncia B contm trs pro-
linas, o que ocasionaria a interrupo da hlice , expondo os grupos polares ao
ambiente hidrofbico da bicamada lipdica. A sequncia C, por sua vez, possui
trs aminocidos carregados (cido glutmico, arginina e cido asprtico), que
seriam energeticamente desfavorveis no interior hidrofbico de uma bicamada
lipdica.

10-9 Essa sugesto considerou as diferenas significativas entre vesculas do avesso da


membrana plasmtica e vesculas da forma normal. Estas ltimas carregaro car-
boidratos na sua superfcie exposta e sero retidas em uma coluna de afinidade de
lecitina. O resultado ser a eluio apenas das vesculas do avesso.

10-10 Essa associao pode ser mediada por foras de van der Waals, as quais tm papel
fundamental em biologia estrutural. Embora sejam relativamente fracas, as foras
de van der Waals tornam-se importantes quando duas superfcies macromolecu-
lares so complementares e muitos tomos esto envolvidos, pois desta forma so
capazes de manter as molculas unidas.

Alberts-Resp_Book.indb 38 23.11.09 10:54:33


Transporte de Membrana
de Pequenas Molculas e as
Propriedades Eltricas das
Membranas
11
11-1 Verdadeiro. O transporte passivo caracterizado por desconsiderar diferenas
de concentrao e gradientes para que ons e molculas atravessem as membra-
nas. Os transportadores, que se ligam a molculas especficas e sofrem alteraes
conformacionais, podem transportar passivamente no sentido do gradiente ele-
troqumico, ou podem associar estas alteraes conformacionais a uma fonte de
energia metablica, como a hidrlise de ATP, para realizar um transporte ativo. Os
canais formam poros aquosos que podem ser abertos ou fechados em resposta a
diferentes sinais, mas que sempre transportam no sentido do gradiente, ou seja,
de forma passiva. Em comparao com os transportadores, os canais interagem
muito mais fracamente com o soluto a ser transportado e no sofrem alteraes
conformacionais que interfiram no transporte. Alm disso, os canais so incapa-
zes de associar uma fonte de energia ao transporte. Desta forma, os canais no so
capazes de nadar contra a corrente e limitam-se ao transporte passivo.

11-2 Falso. A saturao dos transportadores fcil de imaginar, pois eles devem ligar-se
molcula que ser transportada e, portanto, sua capacidade de carga limita-
da pela disponibilidade dos stios de ligao. No caso dos canais, pode-se fazer
uma analogia com uma autoestrada interrompida por um tnel estreito atravs do
qual os veculos devem passar em fila nica. Apesar de ainda no ser totalmente
compreendido como ocorre a passagem dos ons nos canais, acredita-se que ons
permeveis devem esconder a maior parte das molculas de gua associada a eles
para poder atravessar, em fila nica, a poro mais estreita o filtro de seletivida-
de do canal. Como no caso do tnel estreito com uma nica pista de passagem,
esta situao limita a passagem dos ons, e conforme as concentraes inicas
aumentam, o fluxo de ons atravs do canal tambm aumenta, at alcanar um
nvel de saturao devido ao efeito de gargalo da entrada do tnel (lembre-se que
a passagem deve ser feita em fila nica). Assim, tanto os transportadores como os
canais sofrem saturao.

11-3 Verdadeiro. O potencial de membrana, por suas prprias caractersticas, extre-


mamente sensvel a pequenas flutuaes no nmero de ons. Uma alterao de
um nmero bastante pequeno de ons suficiente para disparar o potencial de
membrana.

11-4 Se as molculas citadas fossem ordenadas em relao a sua capacidade de difuso


atravs de uma bicamada lipdica, isso resultaria naquela que atravessa mais facil-
mente at a que atravessa mais dificilmente:

CO2 (pequena e no polar)


etanol (pequena e fracamente polar)
H2O (pequena e polar)
glicose (grande e polar)
Ca2 (pequena e carregada)
RNA (muito grande e altamente carregada)
Observe que a sequncia da lista ditada pelo somatrio das duas proprie-
dades que governam a capacidade de difuso das molculas atravs de uma bi-

Alberts-Resp_Book.indb 39 23.11.09 10:54:33


40 Captulo 11 Transporte de Membrana de Pequenas Molculas e as Propriedades Eltricas das Membranas

camada lipdica: tamanho (pequena > grande) e polaridade (no polar > polar >
carregada).

11-5 Dois gradientes so determinantes para o equilbrio de distribuio de uma mo-


lcula atravs de uma membrana: o gradiente qumico e o gradiente eltrico, os
quais refletem, respectivamente, a concentrao da molcula e o potencial de
membrana. Ao considerar uma molcula no carregada, nota-se que ela no es-
tar sob a ao de um gradiente eltrico e que, portanto, seu equilbrio de distri-
buio depende unicamente da concentrao. Neste caso especfico, o equilbrio
ser alcanado quando a molcula estiver na mesma concentrao em ambos
os lados da membrana. Uma molcula carregada, no entanto, estar sob a ao
dos dois gradientes citados acima e se distribuir de acordo com esta situao. Se
tomarmos os ons K como exemplo, veremos que, mesmo que haja uma gran-
de diferena entre a sua concentrao no interior da clula e a sua concentrao
externa, eles estaro bastante prximos do seu equilbrio de distribuio atravs
da membrana plasmtica. Essa situao ocorre devido ao balanceamento da dife-
rena na concentrao pelo potencial de membrana (negativo no interior), que se
ope ao movimento de ctions para o exterior da clula.

11-6
A. Sim, eles podem normalizar tanto as concentraes de H quanto de Na. Para
cada trs ciclos de antiporte Na-H, que importa um Na e exporta um H, a
bomba de Na-K cicla uma vez, exportando trs ons Na em cada operao. A
cada ciclo da bomba de Na-K ocorrer tambm hidrlise de ATP. Esta hidrlise
de ATP por H2O gera ADP e H2PO4 (o qual possui um pK de 6,86). Assim, em
um pH intracelular de 7,2, aproximadamente 70% sero ionizados em HPO42 e
H. No h necessidade de preocupao com a ocorrncia de hidrlise e o conse-
quente possvel desbalano das concentraes de H, pois, em outros pontos da
clula, diferentes processos convertem os produtos de hidrlise novamente em
ATP e mantm uma concentrao basal.
B. A ao conjunta destas duas bombas promove o aumento tanto da concentrao
interna de K quanto do potencial de membrana, pois remove 3H a cada 2K que
so introduzidos na clula.

11-7 Para calcular o aumento na rea de superfcie devido presena de microvilosi-


dades, deve-se inicialmente calcular, de acordo com os dados da Figura Q11-1 (p.
693 da obra), as dimenses de cada microvilosidade, considerando que cada uma
destas estruturas corresponde a um cilindro de 0,1
m de dimetro e 1,0
m de
altura. A rea lateral do cilindro corresponde rea de superfcie nova que no
estaria presente em um tecido totalmente plano, e o topo do cilindro equivalen-
te membrana plasmtica que estaria presente mesmo que no houvessem mi-
crovilosidades. A rea dos lados de um cilindro (2rh, onde r o raio e h a altura)
de 0,31
m2 (2  3,14  0,05
m  1,0
m); a rea do topo do cilindro (r2)
de 0,0079
m2 (3,14  [0,05] 2). Assim, o aumento na rea de superfcie para uma
microvilosidade de 0,31
m2/0,0079
m2 ou 40. O valor obtido corresponde
razo entre a rea lateral e a rea do topo e, portanto, indica um acrscimo da
ordem de 40X na rea disponvel. No entanto, este valor s poderia ser considera-
do por completo se as microvilosidades recobrissem totalmente a superfcie, sem
que houvesse espaamento entre elas, o que no corresponde realidade. Ao ob-
servar a seco transversal na Figura Q11-1 (p. 693 da obra), pode-se estimar que
as microvilosidades ocupam aproximadamente metade da superfcie das clulas
intestinais e, portanto, deve-se dividir o valor obtido por dois, chegando con-
cluso que as microvilosidades so capazes de aumentar a rea da superfcie de
contato entre as clulas do intestino e o lmen em um fator de aproximadamente
20 vezes.

Referncia: Adaptada de Kristic RV (1997) Ultrastructure of the Mammalian Cell,


p.207. Berlin, Alemanha: Springer-Verlag.

11-8 Assim como h um paralelo entre um corpo em queda no vcuo e o deslocamento


de um on exposto a um campo eltrico tambm no vcuo, pode-se fazer um pa-
ralelo entre um corpo em queda no ar e o deslocamento de um on na gua. Assim

Alberts-Resp_Book.indb 40 23.11.09 10:54:33


Captulo 11 Transporte de Membrana de Pequenas Molculas e as Propriedades Eltricas das Membranas 41

como um corpo em queda no ar alcana uma velocidade final que dependente


do atrito com as molculas de ar, um on na gua tambm sofre a ao do atrito
(neste caso, com as molculas de gua) e sua velocidade ser limitada por este
fator. Um on na gua acelerar por um certo perodo, calculado como inferior a
10 nanossegundos, antes de atingir sua velocidade final.

11-9 Para calcular a concentrao relativa a uma bola neste hemisfrio, necessrio
inicialmente calcular o volume do hemisfrio que pode ser explorado pela bola
ligada a uma corrente que controla o canal. De acordo com os dados forneci-
dos na figura, este hemisfrio corresponde a 2,05  104 nm3 ([2/3]  3,14  [21,4
nm]3), o que corresponde a 2,05  10-20 litros ([2,05  104 nm3]  [cm/107 nm] 3 
[litro/1.000 cm3]). Uma nica bola ocupa este espao e, portanto, a concentrao
de uma bola neste volume equivale a 8,13  10-5 M ou 81,3
M (1 molcula/2,05
 10-20 litros)  (mole/6  1023 molculas)]. Assim, a concentrao local da bola
aproximadamente a mesma que a concentrao de peptdeos livres necessria
para inativar o canal.

Referncia: Zagotta WN, Hoshi T e Aldrich RW (1990) Restoration of inactivation


in mutants of shaker potassium channels by a peptide derived from ShB. Science
250, 568-570.

11-10 Usando a equao de Nernst e os dados apresentados na tabela Q 11-1 (p. 694 da
obra), podemos calcular o potencial de membrana esperado devido s diferenas
na concentrao de K atravs da membrana em repouso:
C0
V  58 mV  log
Ci
9 mM
V  58 mV  log
344 mM
V   92 mV
O mesmo raciocnio aplicado ao Na resulta em um valor de 48 mV. De acordo
com a questo, o potencial de membrana medido em um axnio gigante de lula
intacto (potencial de repouso) igual a 70 mV, valor este que se aproxima do
valor calculado considerando-se apenas o K. Ainda na questo, informado que,
quando o axnio, suspenso em gua do mar, estimulado para a conduo do im-
pulso nervoso, o potencial de membrana transientemente alterado e alcana um
valor de 40 mV (potencial de ao). Este valor bastante semelhante ao obtido
quando o potencial de membrana devido apenas ao Na considerado.
Para entender estas duas situaes (potencial de repouso com valor semelhan-
te ao potencial de membrana considerando-se apenas o envolvimento de K e
potencial de ao com valor semelhante ao potencial de membrana no momento
em que se considera apenas o envolvimento de Na), preciso lembrar que o K
responsvel majoritariamente pelo potencial de repouso e o Na responsvel
pelo potencial de ao. Uma membrana em repouso 100 vezes mais perme-
vel ao K do que ao Na, pois canais de liberao de K permitem a sada do K
at que o potencial de membrana seja suficientemente elevado para se opor ao
gradiente de concentrao de K. A entrada de Nacompensa a perda de cargas
positivas representada pela sada de K e reduz o gradiente mximo. Se no fosse
a bomba de Na-K, que continuamente remove Na, o potencial de repouso da
membrana seria completamente dissipado.
O canal de Na controlado por voltagem, por sua vez, controla o potencial de
ao. Quando a membrana estimulada, h a abertura deste canais, permitindo
que ons Na entrem na clula. A magnitude do potencial de membrana resultan-
te limitada pela diferena nas concentraes de Na atravs da membrana. O
influxo de Na reverte o potencial de membrana localmente, o que leva abertura
de canais de Na adjacentes e, em ltima instncia, faz com que um potencial de
ao se propague a partir do stio de estmulo original.
a
Referncia: Hille B (1992) Ionic Channels of Excitable Membranes, 2 edio, p.
23-58. Sunderland, MA: Sinauer.

Alberts-Resp_Book.indb 41 23.11.09 10:54:33


Alberts-Resp_Book.indb 42 23.11.09 10:54:33
Compartimentos Intracelulares
e Endereamento de Protenas 12
12-1 Falso. O ncleo circundado por uma membrana dupla (envelope nuclear) e se
comunica com o citosol pelos poros nucleares que atravessam esse envelope. As-
sim, o envelope nuclear permite a passagem livre de ons, nucleotdeos e outras
pequenas molculas, fazendo com que sua composio seja muito semelhante
do citoplasma. J o lmen do retculo endoplasmtico separado do citosol por
uma camada de membrana.

12-2 Verdadeiro. Os ribossomos livres e aqueles ligados membrana diferem apenas


em suas distribuies espaciais. O que define se um ribossomo ficar livre ou liga-
do a presena de uma sequncia-sinal na protena que est sendo sintetizada.

12-3 Falso. O trfego ocorre pelos poros em ambas as direes e no est claro como os
poros coordenam este trfego para evitar colises.

12-4 Falso. Todas as clulas eucariticas contm peroxissomos, os quais tm grande


importncia devido a sua capacidade de degradar compostos txicos para a clu-
la.

12-5 Falso. Seria verdadeiro se todas as protenas tivessem a poro N-terminal virada
para o citosol. No caso das protenas que possuem a poro N-terminal voltada
para o lmen, o segundo segmento transmembrana e os demais segmentos pares
atuaro como sinais de incio de transferncia e os segmentos subsequentes m-
pares atuaro como sinais de parada.

12-6 Sem um sinal de distribuio que a direcione para a organela onde requerida, a
protena permanece no citosol.

12-7
A. Neste caso, em que o sinal de importao ao RE est localizado na regio N-ter-
minal da protena e atua antes que o sinal interno de importao ao ncleo seja
sintetizado, a protena entrar no RE. Uma vez dentro do RE, a sequncia-sinal
de importao ao ncleo no funcionar mais, pois os receptores citoslicos de
importao nuclear estaro ausentes.
B. Como anteriormente, o sinal de importao ao RE atuar antes que o sinal interno
de importao ao peroxissomo seja sintetizado. Logo, a protena entrar no RE e o
sinal de importao ao peroxissomo no poder funcionar.
C. Para que o sinal de reteno no RE pudesse atuar, a protena deveria possuir tam-
bm o sinal de importao ao RE. Portanto, seu destino ser a mitocndria.
D. Neste caso, a protena iria alternar entre o citosol e o ncleo, pois os sinais respon-
sveis no so excludentes.

12-8 Considerando que, a cada 24 h, o equivalente a uma membrana plasmtica tran-


sita no RE e que as protenas de membrana permanecem no RE por 0,5 h, tem-se
que, em um dado momento, 0,021 equivalente de membrana plasmtica est pre-
sente no RE (0,5 h/24 h). J que a rea da membrana plasmtica do RE 20 vezes
maior que a rea da membrana plasmtica, a frao de protenas de membrana
no RE de 0,001 (0,021/20). Logo, de cada mil protenas presentes na membrana
plasmtica do RE, apenas uma est em trnsito para a membrana plasmtica.

Alberts-Resp_Book.indb 43 23.11.09 10:54:34


44 Captulo 12 Compartimentos Intracelulares e Endereamento de Protenas

12-9
A. As cabeas foram as nicas formas que no se acumularam no ncleo quando
injetadas no citoplasma, logo a poro da nucleoplasmina responsvel pela loca-
lizao no ncleo deve estar presente na cauda.
B. Os resultados a partir de nucleoplasmina completa ou de seus fragmentos con-
tendo a cauda no so suficientes para distinguir entre difuso passiva e trans-
porte ativo; eles apenas mostram que a cauda carrega uma poro importante da
nucleoplasmina, podendo ser um sinal de localizao ou um stio de ligao. J
os resultados com as cabeas de nucleoplasmina so mais determinantes e corro-
boram contra a possibilidade de difuso passiva. As cabeas no difundem para
o citoplasma quando injetadas no ncleo e vice-versa, sugerindo que so muito
grandes para passar pelos poros nucleares.

Referncia: Dingwall C, Sharnick SV e Laskey RA (1982) A polypeptide domain


that specifies migration of nucleoplasmin into the nucleus. Cell 30, 449-458.

12-10 Aproximadamente uma histona deve ser transportada por cada poro nuclear a
cada segundo:

32.000.000
octmeros 8 histonas dia 1
n de molculas de histona   4 
dia octmero 8,64 x 10 s 3.000 poros
 0,99 histonas/segundo/poro
durante a fase S do ciclo celular que as histonas so sintetizadas e importadas ao
ncleo. Esta fase normalmente dura 8 h. Logo, a taxa de transporte fica a 3 histo-
nas por segundo e restrita fase S do ciclo celular.

12-11
A. Isso se deve ao fato de RanQ69L no ser capaz de hidrolisar GTP eficientemente.
Se fosse utilizado Ran-GTP, parte dele seria convertida em Ran-GDP, deixando os
resultados inconclusivos. Utilizando uma forma de Ran que no hidrolisa GTP,
pode-se assumir que a forma de Ran presente no ensaio ser Ran-GTP.
B. A protena candidata est entre as presentes na canaleta 1, entre 7 kD e 14 kD (ver
Figura Q12-3 (p. 747 da obra)), j que o fator de importao nuclear foi eludo a
partir da coluna de afinidade por Ran-GDP e no RanQ69L-GTP. Esta, por sua vez,
capturou um conjunto de protenas entre 97 kD e 116 kD que a coluna de Ran-
GDP no capturou. Trata-se de receptores de importao nuclear, os quais no
possuem envolvimento algum na internalizao de Ran-GDP no ncleo.
C. Outra protena qual o fator de importao de Ran-GDP liga-se a NTF2 (Fator
de transporte nuclear 2). Aps se ligar fortemente a Ran-GDP, a NTF2 se liga s
regies repetidas de FG (fenilalanina-glicina) das nucleoporinas do complexo
de poro nuclear. O complexo NTF2-Ran-GDP cursa a trilha de FG at entrar no
ncleo, onde Ran-GDP convertido em Ran-GTP por Ran-GEF. Assim, o com-
plexo se desfaz e NTF2 retorna ao citoplasma para trazer uma nova molcula de
Ran-GDP.
D. Poderiam ser utilizadas formas de NTF2 contendo mutaes em regies crticas
para sua interao com Ran-GDP. Se a protena portadora de uma substituio
de aminocido impedir a formao do complexo, ela no ser mais capaz de pro-
mover a captao de Ran-GDP para o ncleo, comprovando sua participao no
processo.

Referncia: Ribbeck K, Lipowsky G, Kent HM, Stewart M e Grlich D (1998) NTF2


mediates nuclear import of Ran. EMBO J. 17, 6587-6598.

12-12 As clulas normais com o gene Ura3 modificado no cresceram na ausncia de


uracila, porque a modificao inserida sinalizava para que Ura3 fosse importada
para dentro da mitocndria. J as clulas que so defectivas para a importao
mitocondrial so capazes de crescer sem suplementao de uracila, pois o sinal
de importao inserido no interpretado e Ura3 permanece no citosol para par-
ticipar da via metablica de sntese de uracila.

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Captulo 12 Compartimentos Intracelulares e Endereamento de Protenas 45

Referncia: Maarse AC, Blom J, Grivell LA e Meijer M (1992) MPI1, an essential CONFORMAO ORIGINAL
gene encoding a mithocondrial membrane protein, is possibly involved in protein
import into yeast mitochondria. EMBO J. 11, 3619-3628. COOH
1 3 5
12-13 Para que a DHFR possa entrar na mitocndria, ela precisa desdobrar-se. Ocorre Citosol
que o metotrexato se liga fortemente ao stio ativo da enzima, que impede a atua-
o de chaperonas e consequentemente qualquer modificao de conformao.
Lmen
Referncia: Eilers M e Schatz G (1986) Binding of specific ligand inhibits import do RE
2 4 6
of a purified precursor protein into mitochondria. Nature 322, 228-232.
NH2
12-14 Os poros formados pelas porinas permitem a passagem de todos os ons e inter-
medirios metablicos, porm seu tamanho no comporta protenas maiores que NOVA CONFORMAO
10 kD.
NH2
12-15 Nas clulas sem peroxissomos, a catalase est localizada no citosol, como mostra
a colorao uniformemente distribuda fora do ncleo (Figura Q12-4B, p. 747 da
obra). Nas clulas normais, a catalase aparece como pequenos pontos, justamen-
te por estar internalizada nos peroxissomos. COOH
1 3 5
Referncia: Kinoshita N, Ghaedi K, Shimozawa N, Wanders RJA, Matsuzono Citosol
Y, Imanaka T, Okumoto K, Suzuki Y, Kondo N e Fujiki Y (1998) Newly identified
Chinese hamster ovary cell mutants are defective in biogenesis of peroxisomal
membrane vesicles (peroxisome ghosts), representing a novel complementation Lmen
group in mammals. J. Biol. Chem. 273, 24122-24130. 2
do RE
4 6
12-16 Se o primeiro segmento hidrofbico transmembrana fosse convertido em um
Figura A12-1 Conformao da pro-
segmento hidroflico, o segmento N-terminal ficaria no citosol, pois o primeiro
tena de mltiplas passagens e da nova
segmento transmembrana que serviria de sinal de incio de transferncia estaria
protena resultante da transformao
ausente. No entanto, a eliminao desse sinal no afetaria a funo do segundo do seu primeiro segmento hidrofbico
sinal de transferncia, o qual iniciaria a transferncia dos segmentos C-terminais, em um segmento hidroflico (Resposta
mantendo-os na conformao original da protena (Figura A12-1). 12-16).

12-17 A assimetria da membrana plasmtica estabelecida na sua produo. As novas


molculas de fosfolipdeos so sintetizadas pelo RE e liberadas na monocamada
citoslica da bicamada lipdica. Para que a membrana cresa por igual, uma parte
dos fosfolipdeos recm-sintetizados precisa ser transferida para a camada opos-
ta, o que realizado por enzimas denominadas flipases. Algumas flipases transfe-
rem seletivamente molculas especficas de fosfolipdeos, fazendo com que cada
monocamada tenha uma concentrao diferente de fosfolipdeos especficos. Na
membrana do RE, os fosfolipdeos equilibram-se por meio de um translocador
de fosfolipdeo no especfico quase cem mil vezes mais rpido que o flip-flop
espontneo. Assim, os diferentes tipos de fosfolipdeos ficam simetricamente dis-
tribudos entre as duas lminas da membrana do RE.

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Alberts-Resp_Book.indb 46 23.11.09 10:54:34
Trfego Intracelular
de Vesculas 13
13-1 Verdadeiro. Se no fosse esse padro de fuso, a topologia das protenas de mem-
brana no seria mantida e os domnios proteicos poderiam mudar de face (ci-
toslica ou no citoslica) a cada mudana de compartimento. Logo, as lminas
citoslicas das duas bicamadas so sempre as primeiras a entrar em contato e fu-
sionar.

13-2 Verdadeiro. As protenas processadas de forma incorreta e as protenas dimricas


ou multimricas que tenham falhas de montagem so retidas no RE pela ligao a
chaperonas como BiP e calnexina. A interao com as chaperonas retm as prote-
nas no RE at que elas sejam processadas apropriadamente; caso contrrio, elas
so degradadas.

13-3 Verdadeiro. As cadeias de oligossacardeos so adicionadas nos lumens do RE e


do aparelho de Golgi. Como os lumens em questo possuem topologia equivalen-
te do exterior celular, essas cadeias estaro topologicamente sempre voltadas
para o exterior celular.

13-4 Falso. Em clulas polarizadas, como as epiteliais, o movimento de materiais pode


ser em qualquer direo, apical para basolateral, ou ao contrrio, dependendo do
tipo de carga e do contexto particular do processo.

13-5 O fluxo de membrana entre compartimentos de clulas que no se dividem


intenso e balanceado para assegurar que mantenham tamanhos relativamente
iguais, condio essencial para o funcionamento dessas clulas. J em uma clula
epitelial do intestino, que est se dividindo ativamente, h sntese de membrana
para suprir a montagem dos compartimentos das clulas-filhas geradas. Assim,
haver um favorecimento do fluxo de sada.

13-6 A prpria clatrina no participa na captura de molculas especficas para trans-


porte. Esta a funo de uma segunda classe de protenas de revestimento as
protenas adaptadoras as quais mantm a capa de clatrina membrana da ves-
cula e ajudam a selecionar as molculas a serem carregadas no transporte. As mo-
lculas de transporte carregam sinais de transporte especficos, que so reconhe-
cidos por receptores de carga localizados na membrana do compartimento. Dessa
forma, um conjunto selecionado de molculas-carga, ligadas aos seus receptores
especficos, incorporado ao lmen de cada vescula.

Referncias: Kirchhausen T (2000) Clathrin. Annu. Rev. Biochem. 69, 699-727.

Pearse BMF, Smith CJ e Owen DJ (2000) Clathrin coat construction in endocytosis.


Curr. Opin. Struct. Biol. 10, 220-228.

13-7 Assim que ocorre a fuso, os complexos trans-SNARE resultantes unem as duas
membranas, inativando as v-SNAREs e as t-SNAREs. Quando os complexos so
dissociados pela NSF, as v-SNAREs podem permanecer inativadas, ligando-se a
protenas inibidoras. possvel que o acmulo de v-SNAREs igual ou maior que a
populao de t-SNAREs nas membranas-alvo seja prevenido por vias de recupe-
rao de v-SNAREs que as retornam para a membrana doadora.

13-8 Como abordado na resposta Questo 13-1, as lminas citoslicas das duas bica-
madas so sempre as primeiras a entrar em contato e fusionar, e todas as SNAREs

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48 Captulo 13 Trfego Intracelular de Vesculas

ligam-se superfcie citoslica. Os vrus envelopados no podem utilizar as SNA-


REs da clula porque precisam fusionar sua superfcie externa com a superfcie
externa da membrana. Por isso, codificam suas prprias protenas de fuso, as
quais so glicoprotenas que contm uma sequncia de aminocidos com grande
nmero de resduos hidrofbicos e glicinas, capaz de interagir com a membrana-
alvo, conhecida como peptdeo de fuso.

13-9 Aproximadamente 88 molculas de gua poderiam permanecer entre as mem-


branas. Considerando que o cilindro tem um volume de 2,65  1024 (3,14  [0,75
nm]2  1,5 nm) e que a gua 55,5 M, tem-se:

molculas de gua 2,65  1024 55,5 mol 6  10 molculas


23
  
cilindro cilindro L mol
 88,2
Cerca de 9 fosfolipdeos deveriam estar presentes em cada uma das monocama-
das opostas no local da fuso (3,14  [0,75 nm]2  [PL/0,2 nm2]  8,8). Conse-
quentemente, haveria em torno de 5 molculas de gua para cada grupo-cabea
hidroflico, sendo menor do que a quantidade normalmente associada nessas
circunstncias.

Referncia: Meuse CW, Krueger S, Majkrezak CF, Dura JA, Fu J, Connor JT e Plant
AL (1998) Hybrid bilayer membranes in air and water: infrared spectroscopy and
neutron reflectivity studies. Biophys. J. 74, 1388-1398.

13-10 No experimento 1, a alta atividade de fosfatase alcalina foi gerada porque as ves-
culas de cada linhagem carregavam tanto v-SNAREs quanto t-SNAREs. No caso de
alguma das vesculas no possuir v-SNAREs ou t-SNAREs, a atividade reduz para
30-60%, como pode ser visto nos experimentos 3, 4, 6, 7, 8 e 9. Nos experimentos
2 e 5, nos quais ambas as vesculas no apresentam vSNAREs ou t-SNAREs, res-
pectivamente, a atividade da fosfatase to baixa quanto a detectada para uma
vescula que no possui as duas SNAREs (experimentos 10 e 11). Logo, na fuso de
vesculas vacuolares, no importante qual tipo de SNARE est em que vescula,
e sim que a vescula correspondente esteja portando uma SNARE complementar.

Referncia: Nichols BJ, Undermann C, Pelham HRB, Wickner WT e Haas A (1997)


Homotypic vacuolar fusion mediated by t-and v-SNAREs. Nature 387, 199-202.

13-11 Sem o sinal de recuperao, a PDI seria enviada para fora da clula. Isso aconte-
ceria porque o fluxo de PDI do RE para o Golgi seria unicamente de ida devido
ausncia do sinal de recuperao e, a partir do Golgi, a PDI seria secretada assim
como o restante das protenas que no possuem sinal de localizao.

Referncia: Munro S e Pelham HR (1987) A C-terminal signal prevents secretion


of luminal ER proteins. Cell 48, 899-907.

13-12 O receptor tem uma alta afinidade pela sequncia KDEL nos agrupamentos tu-
bulares das vesculas e do aparelho de Golgi, de forma que captura protenas resi-
dentes no RE que escaparam ou que estejam presentes em baixas concentraes,
e apresenta uma baixa afinidade pela sequncia KDEL no RE, para descarregar a
carga, apesar da altssima concentrao de protenas residentes do RE que contm
KDEL. Acredita-se que este controle de afinidade esteja relacionado s diferentes
condies inicas e de pH estabelecidas nos diferentes compartimentos.
Como mencionado anteriormente, o receptor de KDEL tem como principal
funo capturar protenas que escaparam do RE. Logo, o sistema ideal o que
concentra os receptores de KDEL no aparelho de Golgi. No seria esperado que o
receptor de KDEL apresentasse um sinal de recuperao para o RE, j que ele deve
ficar o maior tempo possvel no aparelho de Golgi. Porm, ele possui um sinal
condicional capaz de se ligar COPI e, assim, pode ser internalizado em vesculas
que tm o RE como destino.

Referncia: Teasdale RD e Jackson MR (1996) Signal-mediated sorting of


membrane proteins between the endoplasmic reticulum and the Golgi apparatus.
Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 12, 27-54.

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Captulo 13 Trfego Intracelular de Vesculas 49

13-13 Todas as enzimas hidrolticas dos lisossomos possuem atividade tima em con-
dies cidas (pH ~5). A membrana dos lisossomos normalmente mantm essas
enzimas destrutivas fora do citosol (cujo pH em torno de 7,2), mas sua depen-
dncia de um pH cido protege o contedo do citosol contra danos, mesmo que
ocorra um vazamento.

13-14 As protenas adaptadoras selecionam a carga a ser internalizada nas vesculas re-
vestidas por clatrina. Assim, fica claro que a perda de AP3 resulta em um defeito
na rede trans de Golgi. Logo, o transporte de pigmento do Golgi para os lisosso-
mos fica prejudicado, resultando no fentipo apresentado. Em humanos, acredi-
ta-se que a sndrome de Hermansky-Pudlak seja decorrente de uma deficincia
na produo de lisossomos especializados. Portadores dessa sndrome possuem
alterao de pigmentao similar do camundongo Mocha, com tendncia he-
morrgica e doena pulmonar.

Referncias: Kantheti P, Qiao X, Diaz ME, Peden AA, Meyer GE, Carskadon SI,
Kapfhamer D, Sufalko D, Robinson MS, Noebels JL e Burmeister M (1998) Muta-
tion in AP-3 delta in the mocha mouse links endosomal transport to storage defi-
ciency in platelets, melanosomes, and synaptic vesicles. Neuron 21, 111-122.

Zhen L, Jiang S, Feng L, Bright NA, Peden AA, Seymour AB, Novak EK, Elliot R,
Gorin MB, Robinson MS e Swank RT (1999) Abnormal expression and subcellular
distribution of subunits proteins of the AP-3 adaptor complex lead to platelet sto-
rage pool deficiency in the pearl mouse. Blood 94, 146-155.

13-15
A. Como as clulas Hurler suplementam a enzima que falta nas clulas Hunter e
vice-versa, pode-se concluir que os fatores corretivos so as prprias enzimas
lisossomais. Essas enzimas vo para o meio provavelmente porque escapam da
via lisossomal e so secretadas. Aps serem internalizadas pela clula, as enzimas
chegam aos lisossomos via endocitose mediada por receptor (M6P) e ali perma-
necem, pois o local de atuao dessas enzimas de degradao.
B. A protease degrada as enzimas diretamente. O periodato e a fosfatase alcalina ina-
tivam o receptor M6P, que crucial para a entrada das enzimas na clula.
C. Dificilmente um programa de compensao como esse funcionaria para enzimas
citoslicas. Mesmo que conseguissem atravessar a membrana, as protenas exter-
nas ficariam retidas em algum compartimento e, finalmente, seriam levadas aos
lisossomos para serem degradadas.

Referncia: Kaplan A, Achord DT e Sly WS (1977) Phosphohexosyl components


of a lysosomal enzyme are recognized by pinocytosis receptors on human fibro-
blasts. Proc. Natl Acad. Sci. U.S.A. 74, 2026-2030.

13-16 A membrana deve ser retornada a uma taxa de 100% a cada meia hora, pois o
macrfago mantm sua rea de membrana relativamente constante ao longo do
tempo.

13-17
A. Os formatos das curvas de HRP e EGF so diferentes porque s EGF se liga a um
receptor especfico para ser internalizado. O HRP entra por endocitose de fase
fluida. Assim, sua taxa de internalizao contnua e depende apenas da sua con-
centrao no meio. J a taxa de captao de EGF depende do nmero de recepto-
res presente nas clulas, sendo passvel de saturao.
B. Tem-se que a taxa de captao de EGF de 16 pmol/h na concentrao de 40 nM
e que HRP capturado a uma taxa de 2 pmol/h na concentrao de 40
M. Logo,
a taxa de captao de HRP na concentrao de 40 nM de 2  103 pmol/h, j que
ocorre uma diluio de 1.000 vezes. Comparando-se as duas taxas na concentra-
o de 40 nM, o EGF seria internalizado 8.000 vezes mais rpido do que o HRP
(16/2  103).
A 40
M, tanto EGF como HRP seriam captados por pinocitose a uma taxa de
2 pmol/h. A diferena que o EGF tambm seria internalizado por endocitose
mediada por receptor a uma taxa de 16 pmol/h, o que faria sua internalizao ser
9 vezes mais rpida do que a do HRP (216/2).

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50 Captulo 13 Trfego Intracelular de Vesculas

C. Uma vescula de 20 nm (2  10-6 cm) de raio contm 3,4  10-17 mL de fluido:

Volume  4r3
3
 (4/3)  3,14  (2  10 cm)
-6 3

17
 3,4  10 cm (mL)
3

Uma soluo de 40
M de HRP contm 2,4  1016 molculas HRP/mL:

6  10 molculas
17
40 mol HRP L
HRP   
L 1.000 mL
mol
 2,4  10 molculas/mL
16

O nmero de molculas de HRP por vescula dado por 2,4  1016  3,4  10-17
 0,8.
D. Os cientistas quiseram enfatizar que, ao utilizar receptores especficos, a clula
consegue captar molculas do seu meio a taxas muito maiores do que por endoci-
tose de fase fluida. O receptor aumenta as chances de uma molcula ser internali-
zada, levando em considerao as baixas concentraes em que essas molculas
se encontram nos fluidos biolgicos.

Referncia: Haigler HT, McKanna JA e Cohen S (1979) Rapid stimulation of pino-


cytosis in human A-431 carcinoma cells by epidermal growth factor. J. Cell Biol.
83, 82-90.

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Converso de Energia:
Mitocndrias e Cloroplastos 14
14-1 Falso. Os dois componentes que carregam eltrons entre os trs principais com-
plexos enzimticos da cadeia respiratria ubiquinona e citocromo c difundem-
se rapidamente no plano da membrana mitocondrial interna. A taxa de colises
aleatrias entre os carreadores mveis e os complexos enzimticos explica as taxas
de transferncia de eltrons. Assim, no h necessidade de postular uma cadeia
estruturalmente ordenada na bicamada lipdica; na verdade, os trs complexos
enzimticos existem como entidades independentes no plano da membrana in-
terna, e a transferncia ordenada de eltrons devida inteiramente especificida-
de das interaes funcionais entre os componentes da cadeia.

14-2 Falso. De fato, os cidos lipoflicos so desacopladores da fosforilao oxidativa.


No entanto, o transporte de eltrons aumenta, o que reflete a existncia de um
controle respiratrio. Quando o gradiente sofre um colapso, o transporte de el-
trons est livre para transcorrer sem controle, em velocidade mxima. medida
que o gradiente aumenta, o transporte de eltrons torna-se mais difcil, e o proces-
so reduz a velocidade.

14-3 Verdadeiro. Mitocndria e cloroplastos possuem genomas que no apresentam


herana mendeliana, logo mutaes herdadas dessa forma dificilmente afetariam
genes nucleares.

14-4 A queda no consumo de glicose na presena de O2 ocorre porque as leveduras


precisam processar cerca de 15 vezes menos molculas de glicose para suprir suas
necessidades energticas, uma vez que as leveduras podem gerar cerca de 15 ve-
zes mais ATP a partir de cada molcula de glicose.

14-5 Aproximadamante 10 prtons encontram-se na matriz de mitocndrias em respi-


rao no fgado:

H 8  
3,16  10 mol H 6  10 H (4/3)(3,14)(0,5
m)
23 3
L
     15
10
m
3
mitocndria L mol H mitocndria
 9,9
Considerando que a matriz da mitocndria iniciou com pH 7 (10-7 M H), ela de-
veria conter aproximadamente 31 prtons (31,4), e teria de bombear para fora cer-
ca de 21 prtons para alcanar o pH 7,5.

14-6 Tem-se que cada par de eltrons reduz um tomo de oxignio. Logo, 12 pares re-
duziriam 6 tomos de oxignio e, consequentemente, 30 ATPs seriam gerados.
Como no estado estacionrio a taxa de produo de ATP igual de consumo, o
corao levaria 6 segundos para consumir uma quantidade de ATP igual aos seus
nveis de estado estacionrio:

Tempo 5
mol ATP 6 O2 min g 60 s
  
g 30 ATP 10
mol O2 min
6s
14-7 A ordem dos carreadores de eltrons na cadeia respiratria pode ser determinada
pela taxa de oxidao: quanto mais prximo o carreador estiver do oxignio, mais
rapidamente ele ser oxidado. Assim, teremos:
citocromo b citocromo c1 citocromo c citocromo (a  a3) O2

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52 Captulo 14 Converso de Energia: Mitocndrias e Cloroplastos

14-8 O denitrofenol no mais prescrito pois seu uso levou vrias mortes. Esse desa-
coplador da fosforilao oxidativa reduz a eficincia da fosforilao oseidativa e
com isso no h ATP suficiente para suprir todas as funes celulares.

14-9
A. Considerando que a energia de um mol de ftons dada pela energia de um fton
vezes o nmero de Avogadro (N), a energia a 400 nm ser:

E  Nhc/
6  10 ftons 1,58  10-37 kcal/s 3  1017 nm
23
1
   
mol fton s 400 nm
 71 kcal/mol
Para os comprimentos de 680 nm e 800 nm, tem-se 42 kcal/mol e 36 kcal/mol,
respectivamente.
B. Levaria 140 segundos para que um mol de ftons atingisse um metro quadrado.
Considerando que um metro quadrado recebe 0,3 kcal de uma luz cujo compri-
mento de onda gera 42 kcal/mol, o clculo dado por:
s 42 kcal
Tempo  
0,3 kcal mol
 140 s/mol
C. Uma planta de tomate com uma folha de um metro quadrado de rea levaria me-
nos de duas horas para fazer um mol de glicose a partir de CO2:
140 s 8 moles de ftons 6 moles de CO2
Tempo   
mol de ftons mol de CO2 mol de glicose
 6.720 s (112 min)
Na realidade, a eficincia de captura de ftons pelas plantas est longe de ser
100%. Mesmo sob condies timas de luz solar, gua e temperatura, a eficincia
fica em torno de 5%. Na maioria dos casos, no chega a 1%, como o caso da be-
terraba, que fica em 0,02%.
D. A eficincia da converso de energia luminosa em energia qumica, aps a captu-
ra dos ftons nas condies dadas, de 33%.
mol de CO2 mol de ftons 112 kcal
Eficincia   
8 moles de ftons 42 kcal mol de CO2
 0,33 ou 33%
14-10 Como as duas plantas fixam CO2, a concentrao de CO2 na cmara diminuir. Em
termos de competio por CO2, o milho leva vantagem, pois sua enzima de fixao
de CO2 de alta afinidade. J a enzima do gernio-ribulose-bifosfato-carboxilase ,
alm de possuir uma afinidade mais baixa por CO2, ir capturar oxignio quando
o CO2 estiver em baixas concentraes. A consequncia dessa via (fotorrespira-
o) a liberao de CO2, sem a produo de estoques de energia til, o que
extremamente favorvel ao milho.

14-11 A variegao um fentipo decorrente da mistura de cloroplastos normais e de-


fectivos, produzindo um padro de manchas verdes e amarelas nas folhas. Nas
regies verdes, existem clulas que ainda podem ser portadoras de cloroplastos
deficientes, alm dos funcionais. Por ocasio da diviso celular, essas clulas po-
dem dar origem a uma ilha de clulas s com cloroplastos deficientes, resultando
na mancha amarela circundada por verde. No entanto, no existem manchas ver-
des circundadas por amarelo, porque clulas com cloroplastos defectivos no so
capazes de dar origem a clulas com cloroplastos funcionais.

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Mecanismos da
Comunicao Celular 15
15-1 Falso. Os receptores envolvidos em diferentes tipos de sinalizao possuem afi-
nidades distintas a seus ligantes. Esta situao pode ser inferida a partir da con-
centrao dos diferentes tipos de ligantes. Por exemplo, a concentrao de um
neurotransmissor em uma fenda sinptica bastante elevada e muito maior do
que a concentrao de um hormnio na circulao sangunea ou a de um me-
diador local na vizinhana de uma clula sinalizadora. Pode-se dizer que recep-
tores de neurotransmissores possuem, em geral, uma afinidade mais baixa por
seus ligantes em comparao aos receptores de hormnios e aos receptores para
mediadores locais. A combinao destas duas caractersticas (alta concentrao
de neurotransmissor e baixa afinidade de seus receptores) permite uma rpida
dissociao do complexo neurotransmissor receptor e favorece respostas rpidas
a um dado estmulo.

15-2 Falso. Na biologia sempre possvel encontrar excees. Apesar da maioria dos
segundos mensageiros, incluindo o AMP cclico, o Ca2+ e o IP3, ser solvel em gua
e difundir livremente pelo citosol, existem segundos mensageiros como o diacil-
glicerol que so solveis em lipdeos e difundem no nvel da membrana.

15-3 Falso. Assim como na questo anterior, na biologia existem regras gerais, mas no
necessariamente universais. Se podemos dizer que as protenas de ligao a GTP
esto uniformemente ativas quando esto ligadas a GTP e inativas quando esto
ligadas a GDP, de forma que GEFs ativam protenas ligadas a GTP e GAPs as ina-
tivam, o mesmo raciocnio no verdadeiro para protena-cinases e fosfatases.
Dependendo do stio de ligao de fosfato que est sendo usado, poder mesmo
ocorrer ativao ou inativao de uma dada protena. Alm disso, a ligao de um
fosfato pode ativar algumas protenas-alvo e inativar outras, ou seja, comutadores
moleculares acionados por protena-cinases podem responder tanto por ativao
quanto por inativao.

15-4 Verdadeiro. As cascatas catalticas de mediadores intracelulares que envolvem


enzimas ou canais inicos podem amplificar de forma significativa um sinal, em
contraste ao que ocorre com receptores nucleares, onde o ligante associa-se dire-
tamente a sequncias de DNA no genoma em uma relao de um-para-um e ativa
ou inibe um gene especfico. No caso de cascatas catalticas, h a possibilidade
de uma nica molcula de protena-cinase ativada, por exemplo, fosforilar vrias
molculas de sua protena-alvo.

15-5 Falso. Ao invs de induzir uma mudana conformacional direta, a interao de


ligantes extracelulares geralmente faz com que um receptor tirosina-cinase se as-
socie em dmeros. Neste ponto, a proximidade de dois receptores tirosina-cinase
permite que os domnios cinases sejam ativados, os receptores se autofosforilam e
ento a cascata de sinalizao intracelular iniciada. Assim, pode-se considerar a
dimerizao como fator inicializador do processo, mas, em alguns casos (o recep-
tor de insulina, p. ex.), j ocorre sob a forma de dmero e provavelmente a ligao
do ligante seja importante na induo de um rearranjo das cadeias do receptor,
que ento leva aproximao dos domnios cinase.

15-6 Verdadeiro. As protenas tirosina-fosfatases removem grupos fosfato apenas de


fosfotirosinas selecionadas em um subgrupo de protenas tirosina-fosforiladas,
diferentemente das protenas serinatreonina-fosfatases, que efetivamente apre-
sentam uma especificidade ampla.

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54 Captulo 15 Mecanismos da Comunicao Celular

15-7 Falso. Plantas e animais lidam de forma diferente com as questes de sinalizao
clula-clula, apesar de existir uma certa sobreposio nas molculas de comuni-
cao. Algumas das famlias de receptores nucleares como Ras, JAK, STAT, TGF,
Notch, Wnt ou Hedgehog so exclusivas de animais, no estando presentes em
plantas.

15-8 Sob uma concentrao circulante de hormnio igual a 10-10 M e considerando o


Kd da ligao ao seu receptor igual a 10-8 M, aproximadamente 1% dos receptores
est ligado a uma molcula de hormnio {[R-H]/[R]TOT = 10-10 M/(10-10 M + 10-8 M)
= 0,0099}. A metade dos receptores possuir uma molcula de hormnio ligada
quando a concentrao de hormnio for igual ao Kd; ou seja, em 10-8 M {[R-H]/[R]
-8 -8 -8
TOT = 10 M/(10 M + 10 M) = 0,5}. Para uma discusso sobre as relaes entre a
concentrao do ligante (neste caso o hormnio), o Kd e a frao ligada, ver Res-
posta 3-14.

15-9 A analogia dos diversos tipos de comunicao entre seres humanos e sinalizaes
celulares bastante esclarecedora.
A. Uma conversa telefnica uma comunicao entre duas pessoas que ocorre de
maneira privada e que pode envolver a troca de informaes a uma grande dis-
tncia. Assim, podemos considerar esta conversa como anloga sinalizao si-
nptica, apesar de a sinalizao sinptica ser unidirecional, enquanto uma con-
versa telefnica envolve um dilogo.
B. A conversa entre pessoas que esto presentes em um coquetel diferencia-se da
anterior no apenas por envolver um conjunto de indivduos, mas tambm por
estar restrita localmente, o que a coloca como anloga sinalizao parcrina.
C. Um anncio pelo rdio pode ser comparado a um sinal endcrino, pois enviado
para todo o organismo, mas recebido apenas pelas clulas-alvo que possuem
um receptor especfico. Em outras palavras, o sinal de rdio emitido e est dispo-
nvel para todos, mas apenas ser recebido pelos ouvintes sintonizados naquela
estao de rdio.
D. Finalmente, quando uma pessoa fala consigo mesma ela est fazendo algo seme-
lhante a um sinal autcrino, ou seja, ela simultaneamente quem envia e quem
recebe a mensagem.

15-10 As respostas de sinalizao que envolvem alteraes em protenas j presentes


nas clulas so extremamente rpidas e ocorrero em milissegundos, pois a pro-
tena em questo j est disponvel e, como consequncia, sua atividade ser al-
terada imediatamente. No entanto, se houver uma dependncia de uma alterao
na expresso gnica, o primeiro passo ou os passos iniciais da sinalizao ocor-
rero to rapidamente quanto na situao anterior, e aps haver um intervalo
de tempo correspondente ao tempo necessrio para que mRNA e protena sejam
sintetizados. Alm disso, ser necessrio que os nveis celulares da protena sejam
alterados o suficiente para evocar a resposta desejada, e este processo pode envol-
ver um perodo igual ou superior a uma hora.

15-11 Mesmo que se considere que a recepo do sinal em nvel da membrana celular
o evento primordial para que uma dada clula responda a um estmulo, a sinali-
zao completa depender do processamento deste sinal inicial pela maquinaria
intracelular. Desta forma, clulas com receptores idnticos, mas associados a dis-
tintas maquinarias ou cascatas internas de sinalizao, respondero de diferentes
formas a uma mesma molcula sinalizadora. Mesmo que as cascatas de sinaliza-
o disparadas sejam muito semelhantes, basta a ocorrncia de protenas efeto-
ras distintas no final das cascatas para que a resposta seja diferente. Alm disso,
fatores como a quantidade de receptores presentes na superfcie celular tambm
podem interferir na resposta celular a um dado ligante.

15-12 A passagem de um sinal ou informao atravs de uma via de sinalizao depende


da interao sequencial dos diversos componentes (protenas) que a compem.
As diferentes protenas devem ser capazes de receber o sinal, alterar sua estrutura
de forma que possam perceber este sinal e, rapidamente, transmitir o sinal para
o prximo membro da cascata, retornando, elas mesmas, ao estado anterior. Esta

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Captulo 15 Mecanismos da Comunicao Celular 55

necessidade de alteraes entre os estados ativo e inativo, em um curto espao


de tempo, um requerimento essencial para que a transmisso de sinal ocorra
eficientemente. A fosforilao/desfosforilao uma resposta eficiente e simples
para a questo do controle da atividade proteica. A ligao de um fosfato negativa-
mente carregado a uma protena uma forma eficiente de alterar sua conforma-
o e sua atividade, e esta alterao facilmente reversvel. Alm disso, o processo
de fosforilao e desfosforilao pode ser considerado uma soluo geral, pois
uma atividade a de protena-cinase pode ser usada para ligar um fosfato, e uma
segunda atividade uma protena-fosfatase pode ser usada para a remoo do
fosfato. Acredita-se que as protena-cinases encontradas no genoma humano (e
que correspondem a aproximadamente 2% de nossos genes) tenham se originado
a partir de duplicao gnica. Assim, pode-se inferir que uma soluo desenvol-
vida para a utilizao em uma determinada cascata de sinalizao pode ter sido
facilmente adaptada para outras cascatas. A facilidade para a alocao de alvos
tambm deve ter contribudo para a expanso do uso do sistema de fosforilao/
desfosforilao, pois serinas, treoninas e tirosinas so aminocidos comuns na
superfcie de protenas. Uma ltima vantagem que os processos de fosforilao/
desfosforilao permitem tanto respostas rpidas como alteraes de durao
mais longa.
Em contrapartida, a ativao e a inativao de protenas mediadas pela ligao
alostrica de pequenas molculas, apesar de possveis e teoricamente eficientes,
no seria um processo universal. Se molculas pequenas fossem reguladoras, mo-
lculas especficas teriam que ser desenhadas para cada protena-alvo, o que
envolveria necessariamente a evoluo de uma via metablica de sntese e de-
gradao para cada molcula reguladora. Diferentes solues teriam que ser em-
pregadas para cada via metablica, e o processo de duplicao gnica que talvez
tenha ocorrido na multiplicao das protena-cinases humanas e o que deve ter
facilitado a evoluo destas complexas vias de sinalizao seria intil nesse caso.
Alm disso, a regulao atravs de ligao a pequenas molculas extremamente
sensvel concentrao do regulador, sendo portanto a amplitude de variao da
concentrao do regulador mais uma limitao para a utilizao de ligao alos-
trica de pequenas molculas como estratgia de regulao.

15-13 Ambos os tipos de organizao traro vantagens e desvantagens especficas. Se for


considerado inicialmente o uso de uma protena de suporte para manter as trs
cinases em um complexo de sinalizao, esta organizao acelerar a velocidade
de transmisso do sinal, direcionando-o e mantendo as diferentes cinases prxi-
mas e disponveis para contato. O direcionamento do sinal reduz a interligao
entre vias, mas limita o potencial de amplificao do sinal, pois estabelece uma
relao quase que individual entre os componentes da via. Quando a estratgia
de cinases livres utilizada, a grande vantagem que aparece exatamente a pos-
sibilidade de uma maior amplificao do sinal, pois a primeira cinase pode fosfo-
rilar muitas molculas da segunda cinase, que, por sua vez, pode fosforilar muitas
molculas da terceira cinase. Em contrapartida, a velocidade de transmisso do
sinal, a menos que as cinases estejam em alta concentrao e que a amplificao
do sinal compense seu distanciamento, ser mais lenta. A organizao usada em
uma via de sinalizao especfica dependente da tarefa que se espera que a via
de sinalizao desempenhe; por exemplo, cinases livres podem proporcionar a
difuso do sinal para outras vias de sinalizao e para outras partes da clula, uma
situao que pode ser vantajosa em vias que devem abranger grandes espaos ou
alvos, ou desvantajosa se quisermos respostas mais restritas.

15-14 So diversos os cenrios imaginveis em termos de respostas do tipo tudo-ou-


nada em sistemas de resposta sinalizao extracelular. a) Se for necessria a li-
gao de duas ou mais molculas efetoras para ativar uma nica molcula-alvo,
sob baixas concentraes de molculas efetoras, a maioria das protenas-alvo
estar inativa, pois possuir uma nica cpia efetora ligada a ela. Conforme hou-
ver aumento na concentrao de molculas efetoras, o nmero de protenas-alvo
ligadas (com o nmero necessrio de efetoras para proporcionar a ativao) au-
mentar rapidamente, gerando um forte e correspondente aumento na resposta

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56 Captulo 15 Mecanismos da Comunicao Celular

RESPOSTA GRADUAL celular. b) Se a efetora simultaneamente ativar uma enzima e inibir outra que ca-
talisa a reao reversa, a reao direta responder fortemente a um aumento gra-
dual da concentrao da efetora. Esta uma estratgia comum muito utilizada em
vias metablicas envolvidas na produo e no consumo de energia. c) Apesar de
RESPOSTA TUDO-OU-NADA as duas proposies anteriores serem capazes de gerar respostas abruptas, uma
resposta verdadeiramente do tipo tudo-ou-nada ocorrer se a molcula efetora
induzir uma retroalimentao positiva envolvendo uma molcula-alvo ativada,
o que contribuir para sua prpria ativao futura. Isso acontece, por exemplo,
100 quando o produto de uma enzima ativada liga-se enzima para ativ-la.
MAP-cinase ativa (%)

15-15 Quando os ocitos de sapo so analisados individualmente, possvel determinar


que a resposta progesterona do tipo tudo-ou-nada, mesmo apresentando-se
50 como uma resposta gradual em termos populacionais. Ou seja, no h ocitos que
apresentem MAP-cinase parcialmente ativada. Portanto, diferentes misturas de o-
citos imaturos ou completamente maduros respondendo de forma tudo-ou-nada
0 do origem aos nveis intermedirios de ativao MAP-cinase observados na Figura
0,001 0,01 0,1 1 10 R15-1. Mesmo considerando que existem diferenas entre os ocitos em termos de
Progesterona (M) idade e tamanho e provavelmente tambm em relao ao nmero de receptores
de progesterona e concentrao de componentes do mdulo de sinalizao da
Figura R15-1 Respostas graduais ou MAP-cinase e de alvos da cascata subsequente, no possvel determinar por que
tudo-ou-nada em ocitos individuais ocitos individuais respondem de forma distinta a diferentes concentraes de pro-
que resultam em respostas graduais na
gesterona. Em diversos contextos biolgicos, a observao de uma resposta gradual
populao (Resposta 15-15).
em termos de populao celular pode indicar a ocorrncia tanto de uma resposta
gradual em cada uma das clulas que compem a populao quanto uma mistura
de respostas tudo-ou-nada.

Referncia: Ferrell JE e Machleder EM (1988) The biochemical basis of an all-or-


none cell fate switch in Xenopus oocytes. Science 280, 895-898.

15-16 Quando a subunidade cataltica no est ligada a uma subunidade reguladora,


ela est ativa. Assim, para que haja uma PKA permanentemente ativa, basta que
ocorra uma mutao que torne uma subunidade reguladora incapaz de se ligar
a uma subunidade cataltica. A recproca, ou seja, uma PKA permanentemente
inativa, poder ser obtida por mutaes que evitem a dissociao das subuni-
dades reguladora e cataltica. Se ocorrer uma mutao que no interfira na liga-
o entre as subunidades reguladora e cataltica, mas que faa com que no haja
posterior ligao ao AMP cclico, no haver liberao da subunidade cataltica,
e a PKA permanecer inativa. Ainda, caso haja ligao entre o AMP cclico e uma
subunidade reguladora mutante incapaz de sofrer a alterao conformacional
necessria para a liberao da subunidade cataltica, a PKA tambm ficar per-
manentemente inativa.

15-17 A fosforilase-cinase composta por trs subunidades reguladoras e uma subuni-


dade cataltica. O grau de modificao das subunidades reguladoras determi-
nante para definir quanto tempo a subunidade cinase cataltica permanecer em
sua conformao ativa. Cada modificao por fosforilao ou por ligao a Ca2+
sobre as subunidades reguladoras impele o equilbrio rumo conformao ativa
da subunidade cinase; ou seja, cada modificao aumenta o tempo despendido
no estado ativo. Assim, pela soma dos impulsos provenientes de mltiplas vias, a
fosforilase-cinase integra os sinais que controlam a degradao do glicognio.

15-18 Para que a ativao de Ras dependa da inativao de uma GAP, tanto GAP quanto
GEF devem ser ativas na ausncia do sinal. Desta forma, a GEF ir constantemen-
te carregar Ras com GTP, e a GAP ir manter a concentrao de Ras-GTP baixa
via induo constante de hidrlise de GTP, para fazer com que Ras retorne a seu
estado ligado a GDP. Sob estas condies, a inativao de GAP resultaria em um
rpido aumento nos nveis de Ras-GTP, permitindo uma rpida sinalizao. Ape-
sar de ser efetivo em termos de regulao dos nveis de Ras ativo, este processo
tambm leva a um grande desperdcio de energia. Para manter Ras em seu estado
inativo, o GTP deve ser constantemente hidrolisado para GDP, o qual deve ento
ser reconvertido em GTP (por ATP) via energia desviada do metabolismo energ-
tico celular. A regulao via ativao de uma GEF evita este problema.

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Captulo 15 Mecanismos da Comunicao Celular 57

15-19 Uma hiptese de trabalho provvel e bastante simples consiste em postular que
clulas de Drosophila com gentipo heterozigoto Dsh/+ expressam apenas a me-
tade da quantidade normal de Dishevelled. Como as clulas com baixa expresso
(presumida) de Dishevelled apresentam um fentipo normal, pode-se imaginar
que Frizzled esteja antes de Dishevelled na cascata. Se Frizzled est sendo su-
perexpressa, mas Dishevelled atua como gargalo, ento o defeito corrigido. A
hiptese acima apoiada pelas funes conhecidas dos produtos dos genes em
questo: Frizzled um receptor Wnt e Dishevelled uma protena de sinalizao
intracelular. Optando por uma hiptese simples e apoiada pelo conhecimento da
funo dos produtos gnicos, se as funes de Dishevelled e Frizzled fossem des-
conhecidas e fssemos guiados apenas pelas interaes genticas, poderamos
imaginar relaes bem mais complexas nas quais Dishevelled atuaria na cascata
antes de Frizzled.

Referncia: Winter CG, Wang B, Ballew A, Royou A, Karess R, Axelrod JD e Luo L


(2001) Drosophila Rho-associated kinase (Drok) links Frizzled-mediated planar
cell polarity signaling to the actin cytoskeleton. Cell 105, 81-91.

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Alberts-Resp_Book.indb 58 23.11.09 10:54:35
Citoesqueleto 16
16-1 Verdadeiro. No entanto, importante salientar que a hidrlise de ATP nos fila-
mentos de actina ou a hidrlise de GTP nos microtbulos no promove a despo-
limerizao, mas direciona o equilbrio rumo despolimerizao. Isso acontece
porque, quando ocorre a hidrlise de ATP ou GTP, dependendo de estarmos fa-
lando de actina ou microtbulos, grande parte da energia livre liberada pela cliva-
gem da ligao de alta energia estocada na estrutura do polmero. Assim, a ener-
gia livre de polmeros que contm ADP (ou GDP) maior do que a de polmeros
que contm ATP (ou GTP). Esta maior energia livre direciona o equilbrio rumo
despolimerizao, como comentado anteriormente, e faz com que os filamentos
de actina que contm ADP dissociem mais rapidamente do que os filamentos de
actina que contm ATP. O mesmo raciocnio se aplica aos microtbulos contendo
GDP ou GTP.

16-2 Falso. O principal arranjo de microtbulos na maioria das clulas animais o


centrossomo, o qual pode ser representado, em termos gerais, como uma estrela
tridimensional, com microtbulos partindo do centro rumo periferia celular. Na
parte central desta estrela, e portanto na regio central da clula, esto imersas as
extremidades menos (-) dos microtbulos, e na periferia celular encontram-se as
extremidades mais (+) dos microtbulos. Esta orientao constante e precisa do
centrossomo faz com que sejam utilizados motores direcionados para as extremi-
dades mais (+) para o transporte de cargas rumo periferia da clula e motores
direcionados para as extremidades menos (-) para o transporte de cargas em dire-
o ao centro da clula.

16-3 Falso. Apesar de estar parcialmente correta no que se refere entrada de Ca2+ atra-
vs de canais de Ca2+ sensveis voltagem nos tbulos T, a afirmao est incorreta
ao definir que este estmulo suficiente, per se, para gerar uma contrao muscu-
lar rpida. Para que essa contrao muscular rpida ocorra, e para que a contrao
seja organizada, a entrada inicial de Ca2+ deve atuar abrindo canais de liberao
de Ca2+ no retculo sarcoplasmtico. Estes canais de liberao de Ca2+ permitem
um rpido e organizado fluxo de Ca2+ no citoplasma, o que ento propiciar uma
contrao muscular rpida e coordenada atravs de sua ligao troponina C.

16-4 Para responder a esta questo, deve-se partir do comprimento referente a um d-


mero de -tubulina (8 nm de comprimento). Assim, uma taxa de crescimento de
2 m/min (2.000 nm/60 s = 33 nm/s) corresponde a uma adio de 4,2 dmeros de
-tubulina ([33 nm/s] X [-tubulina/ 8 nm] = 4,17 dmeros/s) a cada um dos 13
protofilamentos, ou seja, 54,21 dmeros de -tubulina/s (4,17 dmeros por fila-
mento X 13 protofilamentos) s extremidades de um microtbulo.

Referncia: Detrich WH, Parker SK, Williams RC, Nogales E e Downing KH (2000)
Cold adaptation of microtubule assembly and dynamics. J. Biol. Chem. 275, 37038-
37047.

16-5 A Figura R16-1 ilustra tanto a possibilidade de crescimento de microtbulos de


forma linear como o crescimento por associao lateral. Ao observarmos esta
figura, fcil imaginar que o crescimento de microtbulos atravs de uma as-
sociao lateral parece mais estvel do que o crescimento linear. Efetivamente,
aps a primeira associao lateral, o prximo dmero pode se ligar muito mais
facilmente, pois ser estabilizado pelos contatos tanto laterais quanto longitudi-
nais. Como os contatos laterais fortalecem o processo de estabilizao tanto do

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60 Captulo 16 Citoesqueleto

protofilamento preexistente quanto do novo protofilamento, uma rpida adio


de novos dmeros de -tubulina tanto para a formao de protofilamentos ad-
jacentes quanto para a extenso dos j existentes favorecida. Aps a montagem
de um conjunto determinado de protofilamentos, o arranjo plano de tubulinas se
curvar, dando origem a um tubo que formar o microtbulo.

Referncia: Leguy R, Melki R, Pantaloni D e Carlier M-F (2000) Monomeric


-tubulin nucleates microtubules. J. Biol. Chem. 275, 21975-21980.

16-6 a partir do centrossomo que se estende um arranjo tridimensional de microt-


bulos, em forma de estrela em crescimento (como discutido na Resposta 16-2).
Os microtbulos esto permanentemente sob a ao do fenmeno de instabili-
dade dinmica e em geral estendem-se at que um obstculo, frequentemente
representado pela membrana plasmtica, interponha-se em seu caminho. Neste
momento, e devido instabilidade dinmica, o microtbulo exerce um impulso
sobre o obstculo em questo. Considerando-se que o centrossomo lana micro-
tbulos em crescimento em todas as direes, o impulso exercido pelos diferen-
tes microtbulos em crescimento sobre a membrana celular tende a posicionar o
centrossomo no centro da clula. O centrossomo sabe que ali seu lugar, pois
as diferentes foras exercidas pelos microtbulos em crescimento sobre a mem-
brana, em direes opostas, so somadas e tendem a se anular (microtbulos de
comprimentos iguais, crescendo em sentidos opostos a partir do centrossomo,
devem exercer foras iguais, mas opostas). O equilbrio alcanado e o centrosso-
mo posicionado.

16-7 As clulas devem manter um estoque de subunidades livres de actina para que
exista a possibilidade de um crescimento rpido em resposta a um estmulo es-
pecfico em um local determinado. Nas clulas, as subunidades de actina no se
encontram sob a forma de actina pura, mas, em grande parte, ligadas timosina.
A timosina atua bloqueando a actina sob uma forma que no pode hidrolisar o
ATP ligado, o que consequentemente a impede de ser adicionada s extremidades
de um filamento. A concentrao de subunidades livres de actina nas clulas
portanto, reduzida pela timosina e se aproxima da concentrao crtica. Para que
sejam incorporadas em um filamento, as subunidades de actina devem ser resga-
tadas deste pool inativo pela profilina. Como a atividade da profilina altamente
regulada, a polimerizao ocorrer tambm sob um controle severo.

16-8
A. A cinesina apresenta movimento unidirecional sobre um microtbulo. Este mo-
vimento unidirecional ditado pela ligao e pela hidrlise de ATP, etapas que
esto associadas a alteraes conformacionais na cabea de cinesina. Estas alte-
raes conformacionais so finamente coordenadas e resultam no deslocamento
dos domnios motores da cinesina sobre o microtbulo.
B. Os pequenos traos que, em conjunto, indicam a caminhada da cinesina refletem
os movimentos desta molcula sobre um microtbulo. possvel observar que
a cinesina locomoveu-se 80 nm em 9 s, o que resulta em uma velocidade mdia

Crescimento linear Associao lateral

Figura R16-1 A adio rpida de d-


meros de -tubulina para a nuclea-
o estrutural (Resposta 16-5).

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Captulo 16 Citoesqueleto 61

de 9 nm/s. A velocidade in vivo da cinesina 100 vezes mais rpida. Nesse expe-
rimento, as condies de concentrao de ATP e a fora exercida pelo padro de
interferncia foram ajustadas para facilitar a observao dos passos individuais da
cinesina.
C. Contando os passos da molcula de cinesina na Figura Q 16-2 (p. 1.051 da obra),
chega-se a um total de 10 passos em um percurso de 80 nm de comprimento, o
que indica um comprimento mdio de cada passada individual de aproximada-
mente 8 nm.
D. Tanto o comprimento dos passos da cinesina, apresentado na resposta anterior
(letra C), quanto o intervalo entre as subunidades de cada -tubulina sobre um
protofilamento de microtbulo igual a 8 nm. Visto que a cinesina possui dois
domnios que podem se ligar -tubulina, pode-se imaginar um movimento
sequencial de cada domnio, ou seja, ela provavelmente mantm um dos dom-
nios ancorados e d uma passada com o outro domnio rumo ao prximo stio
de ligao da -tubulina. Assim, uma cinesina parece se mover saltando de uma
-tubulina para a prxima sobre o protofilamento, como se fosse uma pessoa que
atravessa um riacho sobre pedras.
E. No so fornecidos dados sobre o nmero de ATPs hidrolisados a cada passada.
Experimentos realizados pelos mesmos pesquisadores sugerem que a hidrlise
de um ATP no capaz de induzir vrios passos: uma menor concentrao de ATP
foi capaz de promover o mesmo padro de passos, mas estes foram realizados em
uma escala de tempo mais longa. Ou seja, se a hidrlise de um nico ATP pudesse
gerar vrios passos sob estas condies experimentais, deveriam ter sido obser-
vados agrupamentos de passos. Nenhum dos experimentos realizados conseguiu
eliminar a possibilidade de que a hidrlise de um ATP necessria para a realiza-
o de cada passo.

Referncia: Svoboda K, Schimidt CF, Schnapp BJ e Block SM (1993) Direct


observation of kinesin stepping by optical trapping interferometry. Nature 365,
721-727.

16-9 O movimento unidirecional de um lamelipdio segue um processo de nucleao


e crescimento de filamentos de actina na borda anterior da clula (filamentos re-
centes) e de despolimerizao da rede de actina mais antiga e mais distante. Para a
identificao dos filamentos mais recentes ou mais antigos de actina, necessria
3,6
a ajuda da cofilina, a qual se liga de forma cooperativa e preferencial a filamentos
de actina que contm ADP-actina. Filamentos com ADP representam filamentos
antigos e esto predominantemente presentes na regio mais distante da borda 1,0 1,6 1,0
do lamelipdio, em contraposio aos filamentos novos, que contm ATP-actina I
disco Z
e que so resistentes despolimerizao mediada pela cofilina. Estes filamentos 2,2
recentes de ATP-actina encontram-se predominantemente na borda anterior do
lamelipdio em crescimento. A hidrlise de ATP em ADP ocorre conforme ocorre
o envelhecimento dos filamentos, permitindo que a cofilina possa dissociar de
forma eficiente e preferencial os filamentos velhos. Este processo direciona, por- II
2,0
tanto, o movimento do lamelipdio.

16-10 A Figura R16-2 ilustra como devem estar estendidos os sarcmeros em cada um
dos pontos indicados pelas setas da Questo 16-3. No segmento I, o aumento na
tenso associado diminuio no comprimento do sarcmero deve-se ao incre- III
mento no nmero de interaes entre as cabeas de miosina e a actina. No seg- 1,6
mento II, a actina comea a se sobrepor zona nua da miosina, gerando um plate-
au no qual o nmero de interaes com cabeas de miosina permanece constante.
No segmento III, os filamentos de actina comeam a se sobrepor, o que interfere
na interao tima entre actina e miosina e produz um relaxamento na tenso. IV
No segmento IV, o espaamento entre os discos Z menor do que o comprimento 1,3
dos filamentos espessos de miosina, fazendo com que eles se deformem. Isto gera
uma sbita queda na tenso muscular.

Referncia: Gordon AM, Huxley AF e Julian FJ (1966) The variation in isomet- Figura R16-2 Diagramas esquemticos
ric tension with sarcomere length in vertebrate muscle fibres. J. Physiol. 184, 170- de sarcmeros nos pontos indicados por
setas na Figura Q16-3 (Resposta 16-10).
192.
Os nmeros referem-se ao comprimento
em micrmetros.

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Ciclo Celular 17
17-1 Falso. Vrias clulas do corpo humano adulto so substitudas por novas a cada
trs anos, mas nem todas so substitudas mesma taxa. As clulas sanguneas e
aquelas do epitlio intestinal, por exemplo, so repostas a taxas elevadas, mas as
clulas da maioria dos rgos so repostas mais lentamente. Os neurnios rara-
mente so repostos.

17-2 Falso. A regulao dos complexos de ciclina-Cdk no depende somente de me-


canismos de fosforilao e desfosforilao, pois os complexos tambm podem
ser regulados pela ligao de protenas inibidoras de Cdk (CKIs), que suprimem
a atividade das Cdks. Deve-se tambm considerar que as taxas de sntese e degra-
dao (protelise) das subunidades de ciclinas so fundamentais regulao da
atividade de Cdk.

17-3 Verdadeiro. A durao do ciclo celular deve, de fato, condizer com o tempo que a
clula leva para dobrar de tamanho. Se a durao do ciclo celular fosse diminuda
(ou aumentada) em relao ao tempo requerido pela clula em proliferao para
dobrar de tamanho, a clula se tornaria gradativamente menor (ou maior) a cada
ciclo de diviso, levando a problemas de multiplicao.

17-4 Verdadeiro. Nas clulas eucariticas, as protenas do complexo de reconhecimen-


to da origem permanecem constantemente ligadas ao DNA e constituem um im-
portante ponto de apoio nas origens de replicao, permitindo que vrias outras
protenas sejam agrupadas e ativadas durante a replicao do DNA.

17-5 Falso. Se foras iguais e opostas puxassem os cromossomos em direo aos dois
polos opostos do fuso, eles no seriam posicionados na placa metafsica, mas sim
em locais aleatrios entre os polos. Acredita-se que trs foras principais sejam
importantes ao movimento dos cromossomos nos microtbulos do fuso mittico:
a fora em direo aos polos gerada pelo cinetocoro, a fora em direo aos polos
gerada pelo fluxo de microtbulos (em alguns tipos celulares) e a fora de ejeo
polar. Cada cromossomo submetido a uma fora em direo aos polos que
contrabalanada por uma fora de ejeo polar, isto , que afasta os cromossomos
do polo. Quando um cromossomo se aproxima do fuso, a fora de ejeo polar
aumenta de intensidade. Isso temporariamente diminui a fora em direo aos
polos, fazendo com que o cromossomo seja afastado do polo e posicionado exata-
mente no equador dos polos, dando origem placa metafsica.

17-6 Falso. O processo denominado senescncia do organismo (envelhecimento)


diferente da senescncia celular replicativa, que ocorre na ausncia da enzima
telomerase. O processo de envelhecimento causado, entre outros fatores, pelos
contnuos danos oxidativos sofridos pelas macromolculas como o DNA e en-
zimas, por exemplo. A diminuio da produo de espcies reativas de oxignio,
por meio da reduo da atividade metablica do organismo ou pela ingesto de
molculas antioxidantes, pode aumentar a expectativa de vida em certos modelos
experimentais animais.

17-7 Tal fato pode ser considerado notvel porque os genes e as protenas do ciclo ce-
lular, diferentemente das enzimas da maioria das reaes metablicas (que em
geral funcionam bem isoladamente, ou seja, na ausncia de outras protenas
essenciais sua atividade), devem necessariamente interagir com vrias outras
protenas. A formao de complexos proteicos entre os diferentes componentes
do ciclo celular uma caracterstica importante e crtica progresso do ciclo,

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64 Captulo 17 Ciclo Celular

sendo que o funcionamento de genes humanos em clulas de levedura indica que


as sequncias de aminocidos responsveis por essas interaes nas superfcies
de cada componente foram preservadas ao longo da histria evolutiva dos dois
organismos que so distantemente relacionados.

17-8 A fim de isolar o gene selvagem correspondente ao gene defeituoso no mutan-


te Cdc, deve-se, inicialmente, crescer as clulas do mutante Cdc temperatura
de 25C. Essas clulas sero transfectadas com a biblioteca de DNA preparada a
partir de clulas selvagens de levedura e crescidas a 37C. As clulas que forem
transformadas com um plasmdeo contendo um DNA que no corresponde ao
gene mutante no sero viveis e no formaro colnias na temperatura restritiva.
Por outro lado, as clulas que receberem o plasmdeo contendo um DNA que cor-
responde ao alelo selvagem do gene mutante sero viveis, completando o ciclo
celular normal e formando colnias na temperatura restritiva. Assim, o DNA plas-
midial dessas colnias pode ser extrado e sequenciado, determinando-se preci-
samente a sequncia de bases do gene isolado.

17-9
A. O ponto de execuo do mutante sensvel temperatura est indicado na Figura
R17-1. Quando a temperatura foi aumentada, as clulas que no haviam alcan-
ado o ponto de execuo no ciclo celular se multiplicaram e formaram brotos
grandes, mas no se dividiram. Paralelamente, as clulas que haviam ultrapas-
sado o ponto de execuo no ciclo celular se dividiram e ento interromperam
sua multiplicao, originando a morfologia-marco caracterstica do prximo ciclo
celular.
B. A morfologia-marco define o momento exato em que a clula pra sua progresso
ao longo do ciclo celular. No caso deste mutante sensvel temperatura, como in-
dicado na Figura R17-1, a morfologia-marco claramente distinta da morfologia
no ponto de execuo. Portanto, o ponto de execuo e o ponto de parada do ciclo
celular no so equivalentes no mutante que foi isolado.

Referncia: Hartwell LH (1978) Cell division from a genetic perspective. J. Cell


Biol. 77, 627-637.

17-10 Para que as clulas se dividam normalmente, as coesinas devem estar presentes
durante a fase S, pois a identificao das cromtides-irms pelos componentes da
maquinaria celular responsveis por sua unio somente pode ser realizada quan-
do o DNA est sendo replicado. Como as coesinas no apresentam especificidade
de ligao ao DNA, torna-se impossvel distinguir quais cromossomos so efeti-
vamente irmos aps a separao das cromtides-irms. Portanto, as cromtides-
irms devem ser mantidas unidas aps sua formao, a fim de que sejam correta-
mente segregadas s duas clulas-filhas durante a mitose.

ponto de
execuo
aumento do
tamanho do
broto com a
mudana de
temperatura

Figura R17-1 O ponto de execuo e


o ponto de parada do produto gnico ponto de
afetado no mutante isolado (Resposta parada no
17-9). ciclo celular

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Captulo 17 Ciclo Celular 65

Referncia: Uhlmann F e Nasmyth K (1998) Cohesion between sister chromatids


must be established during DNA replication. Curr. Biol. 8, 1095-1101.

17-11 Isso possvel porque a maior parte das molculas de coesina liberada dos bra-
os cromossmicos no incio da mitose, quando, ento, as molculas de conden-
sina comeam a efetuar a condensao dos cromossomos. Assim, na ausncia de
uma grande quantidade de molculas de coesina, as condensinas compactam as
cromtides-irms como domnios separados, sendo que a pequena quantidade
de molculas de coesina restante suficiente para que as cromtides-irms se
mantenham unidas at o estgio de anfase.

17-12 Os mdicos ainda no emitiram alerta sobre o consumo excessivo de cafena por-
que a dose necessria para a interferncia no mecanismo do ponto de verificao
da replicao do DNA extremamente alta, muito maior que a quantidade ingeri-
da por pessoas que consomem muito caf (ou caf forte) e bebidas base de cola.
Considerando que uma xcara de caf tpica (150 mL) contm 100 mg de cafena
(196 g/mol), chegamos concluso de que a concentrao de cafena em uma
xcara de caf de cerca de 3,4 mM, estando, portanto, abaixo dos 10 mM necess-
rios para a interferncia no mecanismo do ponto de verificao da replicao do
DNA. Devemos levar em considerao, ainda, que a cafena ingerida ser diluda
no volume de gua (cerca de 40 L) presente no corpo de um adulto tpico. Assim,
supondo que a cafena ingerida no ser metabolizada ou excretada pelo orga-
nismo, seriam necessrias 784 xcaras de caf (contendo 100 mg de cafena cada
xcara) para que se alcanasse a concentrao de 10 mM.

17-13 A ordem : prfase (Figura Q17-3E), prometfase (Figura Q17-3D), metfase (Fi-
gura Q17-3C), anfase (Figura Q17-3A), telfase (Figura Q17-3F) e citocinese (Fi-
gura Q17-3B), ver p. 1.113 da obra.

17-14 Como existem 46 cromossomos na espcie humana e cada um possui dois cineto-
coros, existem, no total, 92 cinetocoros em uma clula humana em mitose.

17-15
A. Basicamente, os microtbulos do cinetocoro so estveis porque suas duas extre-
midades no so desagregadas, o que possvel pela ligao do centrossomo em
uma extremidade e do cinetocoro na outra.
B. A desagregao dos microtbulos astrais ocorre quando as molculas de tubu-
lina esto abaixo da concentrao celular mnima necessria montagem des-
sas estruturas, uma vez que a taxa de adio no equilibra a taxa de dissociao.
Desse modo, os microtbulos se tornam cada vez mais curtos. Devido presena
e estabilidade dos microtbulos do cinetocoro, o destacamento do centrossomo
e a desintegrao ao acaso dos microtbulos no so explicaes plausveis ao
desaparecimento dos microtbulos astrais aps a diluio.
C. O nmero e o comprimento dos microtbulos possibilitariam a identificao dos
provveis mecanismos de desaparecimento dos microtbulos astrais operantes
ao longo do tempo. Na hiptese de destacamento dos microtbulos, o nmero de
microtbulos por centrossomo diminuiria, mas seu comprimento permaneceria
igual. Na hiptese de despolimerizao dos microtbulos, o nmero de micro-
tbulos por centrossomo permaneceria constante, mas seu comprimento dimi-
nuiria uniformemente. Na hiptese de desintegrao aleatria dos microtbulos
(isto , ao longo de sua extenso), o nmero de microtbulos por centrossomo
permaneceria constante, mas seu comprimento seria varivel.

Referncia: Mitchison TJ e Kirschner MW (1985) Properties of the kinetochore in


vitro. II. Microtubule capture and ATP-dependent translocation. J. Cell. Biol. 101,
766-777.

17-16 As duas mquinas citoesquelticas montadas nas clulas animais para a execu-
o dos processos de mitose e citocinese so o fuso mittico e o anel contrtil.
O fuso mittico responsvel pela segregao e distribuio dos cromossomos
s clulas-filhas durante a mitose, sendo composto de microtbulos e uma srie
de outras protenas, incluindo protenas motoras. O anel contrtil responsvel

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66 Captulo 17 Ciclo Celular

pela diviso de uma clula animal em duas clulas-filhas durante a citocinese e


composto de filamentos de actina e miosina.

17-17 Os fatores de sobrevivncia promovem a sobrevivncia celular, suprimindo a


apoptose. Os fatores de crescimento estimulam um aumento de massa celular,
promovendo a sintese de protenas e outras macromolculas e inibindo sua de-
gradao. J os mitgenos estimulam a tona de diviso celular pela atenuao dos
controles intracelulares negativos que, de outra maneira, bloqueariam a progres-
so pelo ciclo celular.

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Apoptose 18
18-1 Verdadeiro. Em tecidos adultos normais, as taxas de morte celular geralmente so
contrabalanadas pelas taxas de diviso celular, pois o tamanho dos tecidos se
mantm constante e estvel.

18-2 Verdadeiro. O citocromo c um mediador de apoptose que atua na via intrnse-


ca da apoptose, dependente da liberao no citoplasma de protenas mitocon-
driais que ativam a cascata proteoltica de caspases. A gerao de fibroblastos
embrionrios de camundongos deficientes na produo de citocromo c sustenta
a afirmao de que clulas de mamferos que no possuem citocromo c podem
ser resistentes apoptose induzida por luz UV. Quando cultivados sob condies
especiais, esses fibroblastos embrionrios so resistentes a uma srie de agentes
indutores da via intrnseca da apoptose.

Referncia: Li K, Li Y, Shelton JM, Richardson JA, Spencer E, Chen ZJ, Wang X


e Williams RS (2000) Cytochrome c deficiency causes embryonic lethality and
attenuates stress-induced apoptosis. Cell 101, 389-399.

18-3 A superexpresso da protena secretada que se liga ao ligante Fas poderia contri-
buir sobrevivncia dessas clulas tumorais protegendo-as contra o ataque de
linfcitos T citotxicos. No momento em que se liga ao ligante Fas presente na
superfcie dos linfcitos T citotxicos, a protena secretada impede o ligante Fas
de se ligar ao Fas presente na superfcie das clulas tumorais. Desta maneira, as
clulas tumorais estariam protegidas contra a atividade indutora de morte celular
dos linfcitos T citotxicos.

Referncia: Pitti RM, Marsters SA, Lawrence DA, Roy M, Kischkel FC, Dowd P,
Huang A, Donahue CJ, Sherwood SW, Baldwin DT, Godowski PJ, Wood WI, Gurney
AL, Hillan KJ, Cohen RL, Goddard AD, Botstein D e Ashkenazi A (1998) Genomic
amplification of a decoy receptor for Fas ligand in lung and colon cancer. Nature
396, 699-703.

18-4 Em princpio, o citocromo c no parece ser necessrio apoptose em C. elegans.


Contudo, o fato de nenhum mutante para o gene do citocromo c ter sido encontra-
do nesse organismo simplesmente reflete o papel essencial e indispensvel de seu
produto ao funcionamento da cadeia transportadora de eltrons nas mitocn-
drias, resultando, portanto, na inviabilidade de mutantes de C. elegans deficientes
na produo de citocromo c.

Referncia: Ellis HM e Horvitz RH (1986) Genetic control of programmed cell de-


ath in the nematode C. elegans. Cell 44, 817-829.

18-5 Os dois tipos celulares (selvagem e duplamente deficiente na produo de Bax e


Bak) entrariam em apoptose aps a microinjeo de citocromo c em seu citoplas-
ma. A presena de citocromo c no citoplasma sinaliza o incio da montagem dos
apoptossomos e de todos os eventos subsequentes que levam apoptose. Embora
as clulas deficientes na produo de Bax e Bak no sejam capazes de liberar cito-
cromo c das mitocndrias, elas so inteiramente capazes de responder aos sinais
posteriores da via, que so ativados pela presena de citocromo c no citoplasma.

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68 Captulo 18 Apoptose

Referncia: Wei MC, Zong W-X, Cheng EH-Y, Lindsten T, Panoutsakopou-


lou V, Ross AJ, Roth KA, MacGregor GR, Thompson CB e Korsmeyer SJ (2001)
Proapoptotic BAX and BAK: A requisite gateway to mitochondrial dysfunction and
death. Science 292, 727-730.

18-6 Apesar de Apaf1 e Casp9 funcionarem na mesma via apopttica, as diferenas


observadas entre camundongos deficientes na produo de Apaf1 (patas anor-
mais, com reteno de clulas das membranas interdigitais) e camundongos de-
ficientes na produo de Casp9 (patas normais) indicam que a atividade de Apaf1
essencial apoptose de clulas das membranas interdigitais, ao passo que a ati-
vidade de caspase-9 no necessria ao processo. possvel, por exemplo, que
Apaf1 interaja com uma caspase diferente nas clulas das membranas interdigi-
tais de camundongos.

Referncia: Earnshaw WC, Martins LM e Kaufmann SH (1999) Mammalian


caspases. Annu. Rev. Biochem. 68, 383-424.

18-7 As duas clulas na Figura Q18-2 (p. 1.129 da obra) liberaram a protena de fuso
citocromo c-GFP de suas mitocndrias dentro de alguns minutos: 6 minutos para
a clula na Figura Q18-2A e 8 minutos para a clula na Figura Q18-2B. O tem-
po aps a exposio luz UV em que a liberao ocorreu variou muito entre as
duas clulas, o que indica que as clulas individuais liberam citocromo c de suas
mitocndrias muito rapidamente, mas que a liberao acionada em diferentes
intervalos de tempo, sendo, portanto, dependente de cada clula.

Referncia: Goldstein JC, Waterhouse NJ, Juin P, Evan GI e Green DR (2000) The
coordinate release of cytochrome c during apoptosis is rapid, complete and kine-
tically invariant. Nat. Cell Biol. 2, 156-162.

Alberts-Resp_Book.indb 68 23.11.09 10:54:35


Junes Celulares, Adeso
Celular e Matriz Extracelular 19
19-1 Falso. No provvel que as adeses clula-clula dependentes de Ca2+ sejam re-
guladas por alteraes nas concentraes de Ca2+, uma vez que as clulas no so
capazes de modular a concentrao externa de Ca2+ do meio.

19-2 Verdadeiro. As junes compactas so importantes organizao dos epitlios


nos vertebrados. Trata-se de um tipo de juno clula-clula formado entre c-
lulas epiteliais adjacentes que impede a difuso das macromolculas, de muitas
molculas pequenas e de ons no espao entre as clulas, assim como a difuso de
algumas protenas de membrana (e lipdeos) entre os domnios apicais e basola-
terais da membrana plasmtica.

19-3 Verdadeiro. As integrinas constituem uma grande famlia de protenas heterodi-


mricas transmembrana que promovem a ligao das clulas matriz celular e
tambm fazem as importantes adeses clula-clula. Basicamente, as integrinas
podem existir em duas conformaes: uma forma de baixa afinidade (inativa) e
uma forma de alta afinidade (ativa), que se refletem na conformao dos domnios
que compem o stio de ligao e no posicionamento das caudas citoplasmticas.
A ligao de certas molculas da matriz extracelular (assim como a aplicao de
certos sinais mecnicos) integrina faz com que a molcula assuma uma posio
estendida (ativa) e, assim, separe as caudas citoplasmticas. Isso percebido por
molculas sinalizadoras intracelulares, que se ligam ou se dissociam das integri-
nas. As mudanas observadas nessas molculas sinalizadoras podem, ento, alte-
rar o citoesqueleto e ativar ou inibir diversas vias de sinalizao intracelular.

19-4 Falso. A elastina composta principalmente por dois tipos de pequenos segmen-
tos que se alternam na cadeia polipeptdica: segmentos hidrofbicos (respons-
veis pelas propriedades elsticas da molcula) e segmentos de hlice ricos em
lisina e alanina (que formam ligaes cruzadas entre as molculas adjacentes). A
elasticidade da elastina essencialmente devida falta de estrutura secundria.

19-5 A citao de Warren Lewis est correta, pois as propriedades de adeso das clulas
(entre si e com a matriz extracelular) so fundamentais estruturao e manuten-
o dos diferentes tecidos do corpo. Contudo, deve-se ressaltar que uma grande
frao do corpo constituda de tecido conjuntivo (ossos e tendes) e, nesse caso,
a coeso e a integridade dependem primordialmente da qualidade da matriz ex-
tracelular, e no das clulas l presentes.

19-6 Os fragmentos Fab, derivados da digesto de anticorpos IgG com papana (que se-
para os dois stios de ligao do anticorpo), foram utilizados no bloqueio da agre-
gao celular porque os dois stios de ligao dos anticorpos IgG so idnticos.
Isso gera a possibilidade de ligaes cruzadas entre as molculas reconhecidas
por esses anticorpos. Assim, se os anticorpos intactos fossem utilizados no blo-
queio da agregao celular, poderiam ocorrer ligaes cruzadas entre as molcu-
las de superfcie das clulas em estudo, que no seriam adequadamente separa-
das (Figura R 19-1).

Referncia: Beug H, Katz FE e Gerisch G (1973) Dynamics of antigenic membrane


sites relating to cell aggregation in Dictyostelium discoideum. J. Cell Biol. 56, 647-
658.

19-7

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70 Captulo 19 Junes Celulares, Adeso Celular e Matriz Extracelular

Figura R19-1 Os fragmentos Fab de


anticorpos bloqueiam a adeso celular
(Resposta 19-6).
LAVAR,
TRIPSINA, ADICIONAR
EDTA Fab

A. Os dois filamentos nas junes compactas podem permanecer mesmo aps o


desaparecimento de toda a claudina-4, pois as clulas continuam expressando a
claudina-1, cuja atividade no foi afetada pela presena da toxina.
B. H vrias possibilidades para a desintegrao dos filamentos de claudina-4 oca-
sionada pela ligao da toxina de Clostridium perfringens. A toxina pode alterar
diretamente a conformao das molculas de claudina-4, desestabilizando sua
interao com outras molculas de claudina-4 (no mesmo filamento). A toxina
tambm pode desestabilizar as interaes entre as molculas de claudina-4 em fi-
lamentos adjacentes. A toxina pode, ainda, se ligar aos monmeros de claudina-4,
deslocando, assim, o equilbrio para a forma dissociada.
C. A principal funo das junes compactas impedir a difuso de molculas no
espao entre as clulas dos epitlios. Assim, quando a toxina adicionada por-
o basolateral da camada epitelial, ela tem acesso a apenas um lado da juno. O
fato de a toxina no ter efeito quando adicionada poro apical sugere que seus
stios de ligao nas molculas de claudina-4 somente so acessveis a partir da
poro basolateral.

Referncia: Sonoda N, Furuse M, Sasaki H, Yonemura S, Katahira J, Horiguchi Y


e Tsukita S (1999) Clostridium perfringens enterotoxin fragment removes specific
claudins from tight junction strands: evidence for direct involvement of claudins
in tight junction barrier. J. Cell Biol. 147, 195-204.

19-8 Os camundongos homozigotos nocauteados para o gene do nidognio-1 ou para


o gene do nidognio-2 so saudveis e apresentam fentipo normal, pois as duas
formas de nidognio so equivalentes, podendo compensar a eventual ausncia
de um dos componentes. Por outro lado, os camundongos que possuem uma mu-
tao definida no gene da laminina-1 (eliminando o stio de ligao do nidog-
nio) apresentam fentipo anormal, pois no h stio ao qual tanto o nidognio-1
como o nidognio-2 possam se ligar na laminina, levando a defeitos severos na
formao dos pulmes e dos rins. Da mesma forma, espera-se a ocorrncia de um
fentipo anormal semelhante em camundongos homozigotos nocauteados para
os dois genes do nidognio.

Referncia: Sasaki T, Fassler R e Hohenester E (2004) Laminin: the crux of


basement membrane assembly. J. Cell Biol. 164, 959-963.

19-9 Tal afirmao remete atual percepo dos diversos papis desempenhados pela
lmina basal das fibras musculares, que no se restringem sustentao estrutu-
ral de clulas e tecidos. As clulas podem, de fato, deixar mensagens qumicas na
lmina basal, as quais dirigem a diferenciao e a funo das clulas subjacentes,
como no caso da regenerao de msculos e neurnios motores. Molculas es-
pecficas contidas na lmina basal, por exemplo, definem o local exato da juno
neuromuscular e orientam sua reconstituio, o que tambm pode ocorrer e ser
importante durante o desenvolvimento embrionrio e fetal do organismo.

Referncia: Sanes JR (2003) The basement membrane/basal lamina of skeletal


muscle. J. Biol. Chem. 278, 12601-12604.

19-10 Como a substituio de uma alanina por D723 na cadeia e por R995 na cadeia
levou a altos nveis de ativao espontnea da integrina IIb3, isso sugere que

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Captulo 19 Junes Celulares, Adeso Celular e Matriz Extracelular 71

esses resduos so importantes manuteno da molcula em seu estado inativo.


J a comparao entre as mutaes D723R e R995D indica que esses dois resduos
provavelmente estabeleam uma interao eletrosttica (atravs de uma ponte de
sal) que mantm a integrina IIb3 em seu estado inativo. Portanto, a integrina
IIb3 parece manter seu estado inativo por meio da formao dessa ponte de sal
especfica.

Referncia: Hughes PE, Diaz-Gonzalez F, Leong L, Wu C, McDonald JA, Shattil SJ


e Ginsberg MH (1996) Breaking the integrin hinge: A defined structural constraint
regulates integrin signaling. J. Biol. Chem. 271, 6571-6574.

19-11 A resina incha devido a efeitos osmticos. Como o polmero negativamente car-
regado, ele aprisiona um nmero equivalente de ctions (presentes no gel ainda
seco) para manter a neutralidade eltrica. Devido a foras eletrostticas, essas car-
gas (negativas e positivas) esto confinadas ao volume ocupado pelo polmero. A
Sephadex incha rapidamente quando em contato com a gua porque a concen-
trao de partculas no volume do gel maior que na gua, o que faz com que a
gua, para equilibrar as concentraes dentro e fora das unidades da estrutura,
flua para dentro do gel. O efeito osmtico contrrio ocorre quando o tampo con-
tendo 50 mM de NaCl adicionado ao gel inchado: a concentrao de partculas
muito maior na soluo salina que no gel inchado, o que faz com que a gua, para
equilibrar a concentrao de ons, flua para fora do gel.

19-12 A maioria das protenas do organismo possui nveis baixos de d-aspartato em sua
composio, pois o processo de racemizao de l-aspartato a d-aspartato ocorre
lentamente. Assim, as protenas que possuem uma meia-vida curta (com um tem-
po de reciclagem rpido) apresentam nveis baixos de d-aspartato em sua compo-
sio, ao passo que as protenas que possuem uma meia-vida mais longa (com um
tempo de reciclagem lento) apresentam nveis mais altos de d-aspartato em sua
composio. O fato de a elastina possuir nveis relativamente altos de d-aspartato
(e que aumentam com o passar do tempo) sugere que essa protena sintetizada
muito cedo durante o desenvolvimento do organismo e degradada muito lenta-
mente. Isso foi comprovado em seres humanos que incorporaram o radioistopo
14
C em suas molculas de elastina devido contaminao ambiental gerada em
testes com armas nucleares.

Referncia: Shapiro SD, Endicott SK, Province MA, Pierce JA e Campbell EJ (1991)
Marked longevity of human lung parenchymal elastic fibers deduced from preva-
lence of d-aspartate and nuclear weapons-related radiocarbon. J. Clin. Invest. 87,
1828-1834.

19-13 A melhor opo simplesmente deixar a alface murcha de molho em gua pura:
devido osmose, a alface absorver gua e ficar mais fresca. Se a alface murcha
for deixada de molho em gua salgada ou gua com acar, o efeito osmtico con-
trrio ocorrer e ela ficar mais flcida, pois mais gua ser retirada dela. A luz
clara e intensa tambm no ajudar a melhorar o aspecto da alface murcha, uma
vez que a fotossntese no est mais ativa aps um certo perodo de tempo. Assim,
com a luz, a alface ficar ressecada.

19-14 A condutividade hidrulica de um nico canal de gua presso atmosfrica de


0,1 MPa 4,4 x 10-23 m3/s ([4,4 x 10-22 m3/s MPa] x 0,1 MPa = 4,4 x 10-23 m3/s). Assim,
preciso definir quantas molculas de gua esto presentes em 4,4 x 10-23 m3.
Existem 3,33 x 1028 molculas de gua por m3 ([55,5 moles/L] [103 L/m3] [6 x 1023
molculas de gua/mol]). Portanto, 1,5 x 106 molculas de gua fluem atravs de
um canal de gua por segundo presso atmosfrica de 1 atm ([4,4 x 10-23 m3/s]
[3,33 x 1028 molculas de gua/m3]).

Referncia: Tyerman SD, Bohnert HJ, Maurel C, Steudle S e Smith JAC (1999)
Plant aquaporins: their molecular biology, biophysics and significance for plant
water relations. J. Exp. Bot. 50, 1055-1071.

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Cncer 20
20-1 Falso. Para que o cncer se desenvolva, existe um patamar timo de instabilidade
gentica. A clula cancerosa deve ser mutvel apenas at um certo ponto, pois
um nvel muito alto de mutabilidade leva ao acmulo excessivo de mutaes e
inviabilidade celular.

20-2 Verdadeiro. provvel que a terapia anticncer direcionada somente elimina-


o das clulas que se dividem rapidamente em um tumor no elimine o cncer
de muitos pacientes, porque muitos tipos de cncer so mantidos por um peque-
no grupo de clulas-tronco. Em comparao s clulas de multiplicao rpida,
as clulas-tronco que mantm o tumor em geral se dividem mais lentamente e
so mais resistentes ao das drogas anticancergenas, exigindo um tratamento
especfico para serem eliminadas.

20-3 Falso. Existem poucas evidncias que sustentam tal afirmao, com exceo de
casos bastante especficos, como 2-naftilamina e asbestos.

20-4 Falso. O DMBA no um agente mutagnico especfico, uma vez que ocasiona
mutaes em todo o genoma do organismo. Como o gene Ras ativado sua ver-
so cancergena por uma alterao especfica de A para T, levando a uma altera-
o especfica de aminocido, somente aquelas mutaes induzidas pelo DMBA
nesse stio do gene Ras daro origem a clulas cancerosas.

20-5 Verdadeiro. Os produtos dos oncogenes apresentam propriedades estimuladoras


e os produtos dos genes supressores de tumor apresentam propriedades inibido-
ras. Assim, quando mutados, os produtos dos oncogenes tendem a aumentar ain-
da mais o crescimento e a proliferao celular, e os produtos dos genes supresso-
res de tumor tendem a perder suas funes de bloqueio e represso dessas vias.

20-6 A incidncia de osteossarcoma no mostra o mesmo tipo de idade-dependncia


que o cncer de colo devido s diferenas existentes entre o nmero de clulas
em cada tecido em perodos especficos da vida. O nmero de clulas no colo
relativamente constante ao longo da vida do organismo, o que implica que, com
o passar do tempo, as clulas podem acumular um maior nmero de mutaes,
aumentando, assim, a incidncia desse tipo de cncer medida que o corpo enve-
lhece. J as clulas responsveis pelo osteossarcoma esto em seu maior nmero
durante a adolescncia (em comparao com crianas e adultos), quando se d
o incremento da massa ssea. Portanto, nessa idade que se observa a maior in-
cidncia desse tipo de cncer, sendo o nmero relativo de clulas em risco de de-
senvolver a doena o fator determinante s diferenas observadas na incidncia
de osteossarcoma.

Referncia: Knudson AG (2001) Two genetic hits (more or less) to cancer. Nat.
Rev. Cancer 1, 157-162.

20-7 Em mulheres com mais de 50 anos, as taxas de morte por cncer de mama e cr-
vice se reduzem devido menopausa, quando a produo de hormnios (prin-
cipalmente estrognio) diminui. O estrognio promove a proliferao de clulas
nos seios e no tero. Portanto, com a diminuio da produo de estrognio, a
populao de clulas em proliferao nesses rgos tambm diminui, o que reduz
o risco de desenvolvimento de cncer.

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Referncia: Armitage R e Doll R (1954) The age distribution of cancer and a multi-
stage theory of carcinogenesis. Br. J. Cancer 8, 1-12. Reimpresso em (2004) Br. J.
Cancer 91, 1983-1989.

20-8 Os oncogenes equivalem a aceleradores estragados, uma vez que, em sua forma
mutada, induzem a proliferao celular anormal, no respondendo aos controles
normais de multiplicao. Os genes supressores de tumor equivalem a freios que-
brados, pois normalmente funcionam inibindo etapas das vias de sinalizao que
regulam o crescimento e a proliferao celular. Sem a ao inibidora dos genes
supressores de tumor, as vias de sinalizao perdem o controle. Os genes de ma-
nuteno do DNA equivalem a maus mecnicos. Como esses genes so respon-
sveis pela manuteno adequada dos cromossomos no genoma (durante sua
replicao e em resposta a danos causados ao DNA), haver, se forem mutados,
um aumento do nmero de mutaes genticas deletrias, o que pode levar a al-
teraes nos proto-oncogenes e genes supressores de tumor.

Referncia: Vogelstein B e Kinzler KW (2004). Cancer genes and the pathways


they control. Nat. Med. 10, 789-798.

20-9 A base biolgica dos dados observados est relacionada noo de que o desen-
volvimento do cncer pode ser encarado como um processo microevolutivo no
qual o acmulo crescente de mutaes em determinados genes leva perda dos
controles que regulam o crescimento e a multiplicao celular. No caso dos ho-
mens que continuaram a fumar aps os 50 anos, o risco de acmulo dessas muta-
es aumentado devido contnua exposio aos efeitos txicos das substncias
presentes no cigarro. O contrrio ocorre naqueles que pararam de fumar aos 30
anos, nos quais a taxa de acmulo de mutaes bastante diminuda e compar-
vel de pessoas que nunca fumaram, reduzindo, assim, o risco de ocorrncia de
neoplasias.

Referncia: Peto R, Darby S, Deo H, Silcocks P, Whitely E e Doll R (2000) Smoking,


smoking cessation, and lung cancer in the UK since 1950: combination of national
statistics with two case-control studies. Br. Med. J. 321, 323-329.

20-10 Como os caritipos das clulas tumorais analisadas so altamente rearranjados


em relao aos do animal selvagem, de se esperar que as clulas cancerosas es-
tejam sendo transmitidas de um animal ao outro. No provvel que esse tipo de
tumor maligno tenha surgido em consequncia de uma infeco por um vrus ou
microrganismo, pois esses agentes no so capazes de dar origem a um conjunto
semelhante de rearranjos complexos em animais diferentes. Alm disso, o fato de
um dos animais apresentar uma inverso no cromossomo 5 que no est presente
em seu tumor oral-facial sugere que os tumores no esto sendo endogenamente
gerados. possvel, portanto, que esse tipo de cncer tenha surgido de uma linha-
gem de clulas cancerosas que adquiriu a capacidade de transmisso e persistn-
cia parastica.

Referncia: Pearse A-M e Swift K (2006) Transmission of devil facial-tumour


disease. Nature 439, 549.

20-11
A. Neste estudo, seis filtros de seleo foram aplicados para eliminar as alteraes de
sequncias que aparentemente no contribuem para o tumor.
1. Filtros para mutaes silenciosas que geram cdons sinnimos (eliminao
de 163.006 alteraes).
2. Filtros para alteraes tambm presentes no DNA dos indivduos normais (eli-
minao de 163.006 alteraes).
3. Filtros para alteraes que correspondem a polimorfismos conhecidos (elimi-
nao de 11.004 alteraes).
4. Filtros para alteraes de sequncias que no podem ser confirmados aps
reamplificao e novo sequenciamento (eliminao de 9.295 alteraes).
5. Filtros para alteraes que tambm esto presentes nos tecidos normais do
mesmo indivduo com tumor (eliminao de 4 alteraes).

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6. Filtros para alteraes nas sequncias que possuem sequncias intimamente


relacionadas em outras regies do genoma (eliminao de 265 diferenas).
Ao final, resultaram 1.307 mutaes potencialmente implicadas nos cnce-
res.
B. Uma abordagem possvel investigar os genes mutantes sejam encontrados em
mltiplos tumores de mama e colorretais, a fim de estabelecer um perfil caracte-
rstico que revele eventuais conjuntos similares das mutaes atuantes em tipos
similares de tumor.
C. A estratgia de sequenciamento usada no estudo em questo envolveu a ampli-
ficao e o sequenciamento de xons, tendo sido projetada para a deteco de
pequenas alteraes de sequncia, como mutaes pontuais e delees peque-
nas. Delees maiores e rearranjos gnicos no seriam detectados por esse mto-
do, pois h um limite para a amplificao de fragmentos de DNA pela tcnica de
PCR.

Referncia: Sjoblom T et al. (2006) The consensus coding sequences of human


breast and colorectal cancers. Science 314, 268-274.

20-12 Os pr-mielcitos da leucemia pr-mieloctica aguda (APL) esto bloqueados em


um estgio intermedirio de seu desenvolvimento celular, no qual se dividem sem
controle. Desse modo, o nmero de clulas aumenta e surge o cncer. A alterao
no estgio de diferenciao das clulas cancerosas da APL, promovida pelo trata-
mento com cido trans-retinoico, ajuda o paciente na medida em que, com a con-
verso dos pr-mielcitos em neutrfilos terminalmente diferenciados (que no
se multiplicam mais), o processo de proliferao celular anormal interrompido.

Referncia: Warrell RP Jr, de The H, Wang Z-Y e Degos L (1993) Acute promye-
locytic leukemia. N. Engl. J. Med. 329, 177-189.

20-13 Nesse caso, os produtos dos oncogenes so os nicos alvos moleculares possveis
para essas pequenas molculas. Como o produto de um oncogene exibe um fen-
tipo dominante, que promove o crescimento e a proliferao celular, sua inibio
pode fazer com que a clula cancerosa retorne a um estado mais normal de ativi-
dade. J os produtos dos genes supressores de tumor e dos genes de manuteno
do DNA no so alvos moleculares viveis busca e ao desenvolvimento de dro-
gas anticancergenas, pois essas classes de genes causam cncer pela ausncia de
produo de suas respectivas protenas inibidoras.

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