POP – PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO

Eletroforese em Gel de Agarose

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Objetivo:
Materiais

Para preparo do Gel de Agarose

- Quantidade necessária para 2 géis pequenos ou 1 grande:

 Agarose
 TBE a 0,5%
 Erlenmeyer
 Proveta
 Cubeta para o gel

Métodos

Para a Preparação do Gel de Agarose:

1. Em uma balança de precisão pesar 0,975g de agarose, dentro do erlenmeyer;

2. Medir na proveta 65mL de TBE a 0,5% e colocar no erlenmeyer junto com a agarose;
3. Tampar o erlenmeyer com gase e levar ao microondas de 15 em 15 segundos, nos intervalos retirar
o erlenmeyer e misturar o líquido, repetir o procedimento até que o líquido esteja transparente.
OBS.: Não deixar ferver!
4. Após retirar do microondas, deixar em uma sala fria até esfriar um pouco;
5. Despejar cuidadosamente o líquido na cubeta e colocar o pente com o tamanho de poço desejado.
Assim o gel solidificará. Se houverem bolhas, retirá-las com a colher, com cuidado pois o gel já estrá
endurecendo;
6. Após solidificado, retirar o pente do gel e armazená-lo a -20 oC, em um recipiente contendo TBE
0,5%;

Aplicando as Amostras no Gel para a Eletroforese:

1. Levar o gel de agarose para a cuba de eletroforese;

2. Adicionar à cuba TBE a 0,5% até cobrir o gel. OBS.: Colocar o gel na cuba de forma que os seus poços
fiquem do mesmo lado que o pino preto (negaivo), do lado esquerdo da cuba, pois o gel irá correr
para o lado do pino vermelho (positivo).
3. Levar as amostras que serão utilizadas para a sala de eletroforese;
4. No primeiro ou no último poço do gel colocar o Marcador de Peso Molecular;
5. Em um eppendorf reutilizado misturar 20uL de amostra, 1uL de gel red e 5uL de loading, e
aplicar lentamente no poço, para que a amostra não saia. Repetir o procedimento com cada
uma das amostras.
6. Após aplicar todas as amostras no gel, colocar a tampa da cuba de maneira que fique
negativo com negativo e positivo com positivo;
7. Ajustar em: V=90 , I=200mA, P=035w;
8. O tempo de duração aproximado da eletroforese é de 1 hora.;

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9. Após passado o tempo, retirar o gel e levá-lo para a sala de Imunoflorescência, onde o gel
será revelado;
10. Salvar a imagem do gel no computador.

Fonte: 10.1007/978-1-4939-3618-2_9