Coleta

e
Diluição de amostras
 Coleta de amostra
Coleta de água (Silva et al., 1997) :
A coleta deve ser feita em frasco limpo e esterilizado
fornecido pelo laboratório e convenientemente tampado.
Em caso de torneira ou bomba:

• deve-se limpar a área externa da saída com álcool 70% e

flambar se o material for resistente ao fogo, deixar correr
as primeiras águas (2 a 3 minutos).
 Coleta de amostra
• Amostras com cloro residual devem ter o cloro residual
neutralizado imediatamente após a coleta (0,1mL de
solução a 10% de tiossulfato de sódio para cada 100mL de
amostra).

• São coletados 100mL de amostra.

• A amostra deve ser mantida sob refrigeração e analisada

no máximo 30 horas após a coleta, não devendo ser
congelada.
 Coleta de amostra

Amostras de água engarrafada:

• podem ser transportadas a temperatura ambiente se
mantidas em sua embalagem original, fechada e intacta
(caso contrário devem ser refrigeradas e analisadas em no
máximo 12h) (Silva, 2005).
• antes da abertura as embalagens devem ser higienizadas
com álcool 70%.
 Coleta de amostra
Coleta de alimentos (Silva et al.,1997)

Coleta de mostra de alimentos acondicionados em

embalagens individuais :
• Sempre que possível devem ser coletadas e
encaminhadas ao laboratório em sua embalagem comercial
original, fechada e intacta.

• Se a embalagem contiver quantidade inferior do que

duas vezes o peso ou volume de uma unidade analítica
recomenda-se coletar várias embalagens unitárias.
 Coleta de amostra
Coleta de amostra de alimentos acondicionados em
embalagens não individuais:

• Em caso de alimentos contidos em tanques ou grandes

embalagens, impossíveis de serem transportados ao
laboratório, deve-se transferir porções representativas da
massa total para frascos ou sacos estéreis, sob condições
assépticas.
 Coleta de amostra
Coleta de alimentos envolvidos em surtos de toxinfecções
alimentares:
• Tentar coletar e analisar amostras das refeições
suspeitas o mais cedo possível.
• Se não houver sobras das refeições suspeitas pode-se
tentar uma das seguintes alternativas:
• coletar os vasilhames onde as refeições se encontravam
acondicionadas;
• coletar amostras do lote de ingredientes e matéria-prima
utilizadas na preparação das refeições;
• coletar amostras de refeições similares preparadas
posteriormente sob as mesmas condições.
 Preparação da amostra
Amostras de alimentos (Silva et al.,1997)

1- A retirada de unidade analítica deve ser feita de forma a

garantir que a porção coletada seja representativa de todo
o conteúdo da unidade da amostra.
• A unidade analítica utilizada na análise da maioria dos alimentos é de
25g ou mL.

2- Preparação de diluições decimais da unidade analítica,

para inoculação nos meios de cultura.
• No caso de alimentos sólidos ou líquidos concentrados a
primeira diluição deve ser acompanhada de uma
adequada homogeneização (agitação, trituração em
liquidificador ou dispersão e “Stomacher”)

• No caso de alimentos embalados, antes da abertura as

embalagens devem ser higienizadas com álcool 70%.
 Diluição seriada decimal:
quantificação de microrganismos
 Contagem total de microrganismos
heterotróficos

• Objetivo:
quantificar “todos” os microrganismos
presentes em uma amostra de alimento.

• Também conhecida como:

• Contagem total em placas;
• Contagem de mesófilos totais;
• Contagem total.
 Contagem total de microrganismos
heterotróficos

• Não é obrigatória segundo a RDC 12/2001

– ANVISA.

• Umas das técnicas mais utilizadas em

indústrias de alimentos.
Ex. água, superfícies, ar, mãos, entre outros.
 Contagem total de microrganismos
heterotróficos

• Vantagens: relativamente rápida e barata;

• Desvantagem: não identifica o tipo de

microrganismo quantificado.
 Primeiro passo: diluição da amostra

Espalhamento
ou
pour plate

Fonte: adaptado de Tortora... UFC

 As técnicas:
Pour-plate ou
Espalhamento

Fonte: adaptado de Tortora...

 Meios de cultura e
Incubação das placas
• Plate Count Agar (PCA)

• Bactérias mesófilas: 37o C, por 24-48 horas;

• Bactérias psicrotróficas: 7o C, por 10 dias;

• Ágar Batata Dextrosado (ác. tartárico)

• Fungos: 25o C, por 5 dias;

 Contagem
• Após a incubação, são contadas as Unidades
Formadoras de Colônia (UFC) nas placas:

• Bactérias: placas com 25 a 250 UFC

• Fungos: placas com 50 a 150 UFC

• Resultado:
Número de UFC X diluição ao inverso (ex. placa da diluição 10-2
= 102)

Ex. 25 UFC na placa 10-2= 25 x 102 = 2,5 x 103 UFC/g