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Curso Espectrometria Massas PDF
Curso Espectrometria Massas PDF
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1.3.1 Analisadores de setor magnético e
setor magnético- elétrico ( dupla focalização)
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Em se utilizando somente um analisador magnético, os íons
serão separados de acordo com sua massa nominal (ou seja,
massa determinada por números inteiros), e por isso os
espectrômetros de massas compostos apenas de um setor de
análise m agnét ico são chamados de espectrômetros de
massas de baixa resolução. Já os espectrômetros de massas
que são constituídos por um setor de análise form ado por um
campo magnético acoplado a um setor elétrico pode separar
os íons de acordo com suas massas exatas, e por isso são
chamados de espectrômetros de massas de alta resolução.
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Quando os íons atravessam o setor magnético, atravessam
um campo magnético perpendicular ao seu movimento.
Como o campo magnét ico provoca a aceleração dos íons,
e a direção da aceleração é perpendicular ao seu movimento,
a velocidade dos íons permanecerá constante, mas estes
apresentarão uma trajetória circular. Consequentemente, a
geometria do setor magnético é semi- circular, para que os
íons possam atravessá- lo com uma velocidade constante.
Como os íons viajam à velocidade constante, será possível
separá- los de acordo com sua razão m/z.
V r Detector
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Quando os íons são “ capturados” no campo magnético
do analisador, eles irão realizar uma trajetória circular.
Para que os íons atinjam a placa coletora de íons no
detector, os íons devem realizar uma trajetória de raio
r que resulta do equilíbrio entre a força centrífuga do íon
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m B.r 2
z = 2.V
Por esta equação fica claro:
1. Porque o espectrômetro de massas não distingue
sinais de íons m + e 2m 2+
2. Que os parâmetros B, r e V é que determinam o
trajeto dos íons no analisador.
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De maneira a aumentar sua resolução, passaram a ser
construídos aparelhos de espectrometria de massas de
dupla focalização. Nestes, o setor de análise apresent a
um analisador de campo elét rico pós o analisador de
campo magnético. O analisador elétrico atua como um
filt ro de energia cinética, permitindo que apenas íons
com uma energia cinét ica específica possam
atravessá- lo, a despeit o de suas razões m/z. A
separação de íons no analisador eletrostático é explicada
pela combinação de duas equações: de força centrífuga ( 1)
e de energia potencial=cinética (2).
( 1)
Fcf = m.v2 = z.E ( 2) z.V = 1 m.v2
r 2
r = 2V
E = intensidade do campo E
eletrostático
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Vantagens
- Espectros de massas “tradicionais”, ou seja pode operar em baixa
(1.000) ou alta resolução (até 60.000).
- Excelente reprodutibilidade
- Melhor desempenho quantitativo entre todos os aparelhos
- Alta resolução
- Alta sensibilidade
- Alta precisão nas medidas de massas (5 ppm em alta resolução).
Desvantagens
- Inadequadas para técnicas de ionização pulsada
- Aparelhos muito maiores e mais custosos
- Íons precisam ser acelerados com alta energia cinética para compensar
dispersão de energia na fonte (8 kV).
- Varreduras relativamente lentas (efeito de esteresse de campo).
Aplicações
- Para todos os compostos orgânicos
- Para determinação de massa exata
- Medidas de distribuição isotópica
BE ou EB
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1.3.2 Analisadores de quadrupolo
Um analisador de quadrupolo consiste em quatro barras
paralelas, arranjadas em dois pares opostos. Um dos
pares apresenta um potencial elétrico aplicado de
( U+ Vcos( wt)) e o outro par apresenta um potencial
elétrico aplicado de - ( U+ Vcos( wt)), aonde U é uma
voltagem de corrente contínua e o termo Vcos( wt) é uma
voltagem de corrente alternada (ou de radiofrequência. A
aplicação destas duas voltagens afeta a trajetória centralizada
dos íons. Em se fazendo variar estas voltagens, somente íons
com uma razão m/z determinada irão atravessar no
centro do quadrupolo, enquanto que os outros íons
serão desviados da trajetória central. O espectro de
massas é obtido em se fazendo variar as voltagens do
quadrupolo, de maneira a se realizar uma varredura em
t oda a faixa de m / z desej ada. Pode- se ut ilizar 2 m étodos:
variando- se w e mantendo- se U e V constantes, ou
variando- se U e V (U/V) e mantendo- se w constante.
Quadrupolos Lineares : Q / q
Paul & Steinwedel 1953
Wolfgang Paul
Prêmio Nobel 1989
y
z
-
x +
+
-
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Vantagens
- Espectros de massa “tradicionais”
- Boa reprodutibilidade
- Aparelhos relativamente pequenos (20 cm), robustos, simples e baratos.
- Podem ser utilizados para gerar espectros do tipo “dissociações induzidas
por colisões de baixa energia” (Low-energy collision-induced dissociation,
CID MS/MS) em sistemas com quadrupolos triplos e espectrômetros de
massa híbridos, nos quais se analisa as fragmentações dos fragmentos.
-Varreduras rápidas
- Íons acelerados com baixas energias cinéticas (15 eV).
Desvantagens
- Resolução limitada
- Altura dos picos variável em função da massa, mas não função da
abundância dos íons.
- Inadequada para técnicas de ionização pulsadas (MALDI e ESI).
- Baixa sensibilidade
Aplicações
- Na maioria dos equipamentos de LC/MS e GC/MS
- Sistemas de quadrupolo triplo MS/MS
- Em sistemas híbridos magnético/quadrupolo MS/MS.
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Extrel Pentaquadrupole QqQqQ Mass Spectrometer (MS3)
M1 M2
Fonte Q1 q2 Q3 q4 Q5 Det.
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1.3.3 Analisadores de captura de íons (ion trap)
tridimensionais
Existem dois tipos de espectrômetros de massas de captura
de íons: captura de íons por quadrupolos tridimensionais
( t am bém chamada de captura dinâmica), e de ressonância
em cíclotron (captura estática). Ambas funcionam acumu-
lando íons no seu interior, em se manipulando correntes
alternada e de radiofrequência simultaneamente. A captura
permite a liberação controlada de íons, o que permite
analisar sua separação controlada e com uma resolução
muito grande. Além disso, é utilizada para experimentos
m últi- acoplados (MSn ), que permitem estudar mecanismo de
fragm ent ação de moléculas relativamente complexas, além
de fornecerem espectros com alta sensibilidade. A possibili-
dade de capturar íons por períodos que variam de
milissegundos a dias permite a análise de reações de
fragm ent ação extremamente incomuns, dando origem a
espectros de massas que não podem ser obtidos através
de nenhuma outra técnica.
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•"Bath gas": adiciona-se hélio a uma pressão típica de 10-3 Torr para
aumentar sensibilidade e resolução. A repulsão entre íons de mesma carga
confinados no centro do trap tende a desestabilizar suas trajetórias por
dispersão (efeito "space-charge"). Colisões com o "bath gas" resfriam os íons
(energia cinética), mantendo-os aprisionados com refocalização para o centro
do trap.
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QIT - Quadrupolos "Ion Traps Lineares”
Vantagens
- Alta sensibilidade: íons são pré-concentrados e sucessivamente analisados.
- Permite a realização de EM em multi-etapas
- Baixo custo, simples, robusto e pequeno: ~ 5 x 5 x 5cm.
- Permite experimentos MSn seqüenciais no tempo (ex: MS13).
Desantagens
- Ineficiente para se medir abundância relativa dos íons
- Baixa dinâmica
- Sujeito à interferência por espécies carregadas e reações inter-moleculares
- Energia de colisão entre partículas mal definida
- Deve-se otimizar vários parâmetros simultaneamente para a obtenção de
dados de boa qualidade
- Baixa resolução: resolução "unitária". Pode trabalhar em alta resolução em
varreduras lentas.
- Devido a possibilidade de ocorrer reações íon-molécula durante
aprisionamento, espectros de EI podem ser "contaminados" por CI.
Applicações
- Sistemas GC/MS, LC/MS e MS/MS
- Análise de íons específicos
- Estudo da química de íons
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1.3.4 Analisadores de tempo- de- vôo (time- of- flight)
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Aumento da Resolução em TOF
TOF's lineares apresentam baixa resolução devido a duração do pulso de
ionização e dispersão de energia cinética dos íons na fonte. Solução paliativa:
Aumento de L ou técnicas de aceleração "pós-ionização".
Reflectors (Espelhos Eletrostáticos): Uma série de grades ou eletrodos onde
se aplica um potencial repulsivo crescente. Os íons penetram angularmente no
reflector, são desacelerados por repulsão eletrostática, fazem uma curva, e
assim retornam para o tubo de vôo. Considere dois íons de mesma m/z mas
com diferentes velocidades, dispersos no tempo. O íon de maior energia
cinética, a frente em tempo de vôo, penetra mais profundamente no reflector
e ali permanece por mais tempo. O outro penetra menos profundamente,
e ali permanece por um tempo menor. A dispersão é corrigida, e os íons
são refocalizados em tempo de vôo, com conseqüente aumento da resolução
(largura do pico) ou poder de separação.
Aceleração ortogonal. o-TOF: Íons são produzidos de forma contínua na
fonte de ionização, e acelerados. O feixe de íons é focalizado com o auxílio
de lentes e quadrupolos/octapolos "rf-only". Uma aceleração pulsada e
ortogonal ao movimento do feixe de íons é aplicada. Íons então adquirem
velocidades "ortogonais" que não são influenciadas pelas suas velocidades
divergentes adquiridas pela aceleração na fonte.
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Vantagens
- É o espectrômetro de massas mais rápido
- Desenhado para técnicas de ionização pulsada (MALDI)
- Alta transmissão de íons
- Informação sobre MS/MS após fragmentação
- Permite a detecção de íons com a maior faixa (de pequena a altíssima).
- Alta sensibilidade
- Baixo custo, fácil manutenção.
- Varreduras extremamente rápidas.
- Ampla faixa de varredura > 106 u. Único analisador acoplável a MALDI de
macromoléculas.
- Hoje, uma das melhores relações custo/benefício.
Desantagens
- Requer técnica de ionização pulsada
- Requer detecção muito rápida, e digitalização dos sinais.
- Baixa seletividade na geração de precursores iônicos em MS/MS
- TOF's lineares: baixa resolução. TOF's com reflector: média resolução.
o-TOF's com reflector: alta resolução e alta precisão ( 5 ppm).
Applicações
- Todos os sistemas MALDI
- Sistemas de GC/MS muito rápidos
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1.3.5 Espectrometria de Massas com Ressonância
Ciclotrônica de Í ons (ICR) e Transformada de Fourier
( FT- MS)
wc = zeB/m
Para evitar que íons escapem da cela, uma baixa voltagem dc é aplicada aos
eletrodos de aprisionamento gerando um campo elétrico E perpendicular ao
campo magnético B.
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FTMS
c= c = zB m= B
2 2 m z 2 c
FTMS
Detector
plate
Trapping
plate Detection on
frequency spectrum
Excitation
plate
Magnetic
field, B
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I llustration of how the image current is
obtained. As the ion(s) in a circular orbit
approach the top plate, electrons are
attracted to this plate from ground. Then
as the ion(s) circulate towards the bottom
plate, the electrons travel back dow n to
the bottom plate. This motion of electrons
moving back and forth between the two
plates produces a detectable current.
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1.3.6 Espectrometria de massas em sequência (MS/MS,
ou Tandem Mass Spectrometry)
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MS/MS em determinação estrutural
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1.4.1 Multiplicadora de elétrons
Uma multiplicadora de elétrons é um dos meios mais simples
para se detectar íons, apresentando grande sensibilidade
fazendo uso do princípio do copo de Paraday. Na multiplicadora
se utiliza uma série de placas coletoras de íons em série,
mantidos em potencial crescente. Os íons atingem a súperfície
da primeira placa, resultando na transmissão de elétrons.
Estes elét rons são atraídos pela segunda placa aonde são
gerados novos elétrons, resultando em uma cascata de
elétrons. O ganho típico da amplificação da corrente gerada
pela cascata de elétrons é da ordem de 1.000.000 de vezes.
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1.4.1 Placa de conversão fotomultiplicadora
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