Streptococcus mutans JC 2 produzido principalmente lactato como produto da fermentação quando cultivada em nitrogênio

limitada cultura contínua na presença de um excesso de glicose e formiato produzidos, acetato e etanol, mas não de lactato, em
condições de glucose-limitada. Os níveis de lactato desidrogenase (LDH) nestes culturas foram da mesma ordem de grandeza, ea
atividade da LDH foi totalmente dependente da frutose-1 ,6-difosfato (FDP). O nível intracelular de FDP foi elevada e os níveis de
fosfoenolpiruvato (PEP) foi baixa nas condições de excesso de glicose. Nas culturas de glicose limitado, todos os intermediários
glicolítica estudados, com exceção de PEP, foram baixos. S. mutans FIL, que teve um FDPindependent LDH e níveis similares de
intermediários glicolítico de S. mutans JC 2, produzida principalmente lactato em glicose em excesso ou em glucose-limitada
condições. LDH de Streptococcus bovis ATCC 9809 foi dependente de FDP atividade a uma baixa concentração de piruvato, mas
teve uma importante actividade sem FDP de uma alta concentração de piruvato. Esta linhagem também produzido
principalmente lactato tanto em excesso de glicose e as condições de glucose-limitada. Os níveis e características destes HDLs
não foram alteradas as condições de cultura. Estes resultados indicam que as mudanças no nível intracelular de FDP regular LDH
atividade, que por sua vez, influencia o tipo de produtos produzidos por fermentação estreptococos. PEP, 5'-monofosfato de
adenosina, adenosina 5'-difosfato, e fosfato inorgânico, inibiu significativamente a atividade da LDH S. mutans JC 2 e também
podem participar na regulação da atividade da LDH em outros estreptococos.

Wolin (22) demonstraram que a lactato desidrogenase (LDH) de alguns estreptococos tem um
exigência absoluta e específicas para a frutose-1,6-difosfato (FDP) para a atividade catalítica.
HDLs semelhantes também foram encontrados em outros estreptococos (3, 20), em todas as espécies de Bifidobacterium (11,
17, 19), em Lactobacillus casei (11, 18), e em xylosus Lactobacillus (16). A LDH de L. casei e L. xylosus também necessitam de
manganês íons para a atividade catalítica. Da LDH estreptococos do grupo N (10, 14) e Acholeplasma laidlawii (15), também são
ativados pela FDP, apesar de podem, sob condições específicas, tem uma actividade significativa na ausência de FDP. Foi
sugerido (2, 21, 22), que este regulamento
atividade da LDH pela FDP poderia glicólise controle global do ácido homolática bactérias. Tem sido demonstrado que algumas
dessas bactéria também produz produtos de fermentação
além de lactato. Em glicose limitada contínua cultura, L. casei lactato produzido principalmente na 'Endereço Presente:
Laboratório de Bioquímica Oral, Tohoku Faculdade de Odontologia, Sendai, Japão 980. uma taxa alta diluição e formato
produzido, , etanol e acetato, a uma taxa de diluição baixas (18). Carlsson e Griffith (7) constatou que o Streptococcus sanguis
mutans e Streptococcus JC 2 NCTC 10.904 produzidas principalmente no âmbito de lactato condições limitadas de nitrogênio na
presença de excesso de glicose e formiato produzidos, acetato
e etanol, quando a glicose foi limitada. Em Streptococcus salivarius ATCC 13419 e Streptococcus bovis ATCC 9809 a fermentação
produtos foram, lactato e formiato, acetato,
e etanol, em condições de glicose limitada. O rendimento de massa bacteriana por mole de glicose utilizado foi
significativamente maior durante glicose limitada do que durante o nitrogênio limitada crescimento. Estes achados sugerem que
o regulamento atividade da LDH pela FDP controla apenas conversão de piruvato em produtos de fermentação e não glicólise
geral (7, 18). Isto implica que a acumulação intracelular de FDP ou a síntese de enzimas envolvidas na conversão de mudanças
piruvato com as condições de crescimento destes organismos. O objetivo deste estudo foi determinar os produtos de
fermentação, o intracelular piscina de intermediários glicolíticas e o nível e as características da LDH de S. mutans jc2 em
cultura contínua de glicose durante condições limitadas e glicose em excesso. Estes parâmetros foram também estudados em S.
bovis ATCC 9809 e em S. mutans FIL.
MATERIAIS E MÉTODOS Microorganismos. S. mutans, cepa JC 2 (4) e FIL, estirpe e S. bovis, American Type Culture Coleta cepa
(ATCC) 9809, foram utilizados. S. mutans FIL foi de uma cultura designada E 49 (8) e teve uma LDH FDP-independente (Yamada,
Endo e Araya, dados não publicados). Strain E 49, estudada por Wittenberger et al. (21), e tensão E 49, gentilmente cedida pela
D. Bratthall, da Universidade de Goteborg, não têm essa LDH FDP independente.
Produtos químicos. Casamino Ácidos triptose, mitis salivarius ágar e extrato de levedura foram obtidos a partir Difco
Laboratories, Detroit, Mich tetracyclohexylammonium FDP sal, fosfoenolpiruvato (PEP) tricyclohexylammonium e sais de
potássio, fosfato glicose-6-fosfato, adenosina 5-difosfato (ADP), 5'-monofosfato de adenosina (AMP), 3 ', 5'- AMP cíclico,
nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD), glicerol-2-fosfato, glicerol-3-fosfato,
L-lactato desidrogenase, glicose-6-fosfato (Grau II, EC 1.1.1.49), isomerase glucosefosfato
(CE 5.3.1.9) aldolase, frutose bifosfato (CE 4.1.2.13) desidrogenase, o glicerol-3-fosfato
(NAD +, EC 1.1.1.8), triosefosfato isomerase (Levedura, EC 5.3.1.1), piruvato quinase (CE 2.7.1.40), e L-lactato desidrogenase
(músculo de coelho, CE 1.1.1.27) foram obtidos da Boehringer, Mannheim GmbH, Alemanha. Cloranfenicol, reduziu NAD
(NADH), NAD, guanosina 5'-trifosfato de adenosina, e 5'-Tetrafosfato tris (hidroximetil) aminometano sal foram da Sigma
Chemical Co., St. Louis, Missouri cromosorb 101, 80/100 mesh, foi obtidos a partir de Johns-Manville, Denver, Colorado
polipropileno Glicol 2025 foi obtido a partir britânico
Casas de Drogas Ltd., do Reino Unido Os meios de cultura. Os meios de comunicação para a contínua culturas foram preparadas
conforme descrito por Griffith e Carlsson (9). O meio-glicose limitada contida 15 mM em D-glucose e 900 ml de triptose,
fermento extrato, e Casamino solução Ácidos / litro. A glicose- excesso de meio contido 55 mm D-glicose e
75 ml do extrato de levedura triptose-Casamino Ácidos solução / litro. O meio para a cultura do lote foi preparado como descrito
para o meio-glicose limitada mas continha 0,1 M tampão fosfato, pH 7,0 e 55 mM de glicose. condições de Cultura. As condições
para o contínuo
cultura foram semelhantes aos descritos por Carlsson e Griffith (7). Os volumes de trabalho de fermentadores (FG-500, Biotec
AB, Suécia) foram 220 e 240 ml, , respectivamente. Os meios foram entregues pelo peristaltismo bombas em uma taxa de
diluição de 0,120 + 0,005 por h. A
temperatura foi mantida a 37 ° C, eo pH foi continuamente ajustado para 7,0 com KOH 2 N. Carbono gás de dióxido de carbono,
esterilizada por filtração, foi entregue através da articulação principal topo da fermentadores a uma taxa de 50 ml / h. O meio
para a cultura do lote foi armazenadas em uma caixa de luva anaeróbio por mais de 24 h antes do uso. batelada foram
conduzidos a 37 º C em caixa anaeróbio. As culturas foram verificados para a pureza
por fazê-los crescer em aerobiose e anaerobiose sobre ágar sangue e placas de ágar mitis salivarius. Anaeróbio porta-luvas. Uma
caixa de luva anaeróbio semelhante ao descrito por Aranki et al. (1) foi feitas de folhas de ferro soldada. A caixa tinha quatro
luva portas, uma janela perpex, um resfriado (4 ° C) e quente (37 C) câmara, e um espaço de trabalho à temperatura ambiente.
O clima na caixa continha 85% Ng, 10% H2 e 5% de CO2, e foi continuamente circulada através de um catalisador de paládio de
alumínio revestido pellets (tipo D, Englehard Industries, do Reino Unido). A umidade foi mantida em 20 a 30% de saturação por
condensação de vapor de água sobre a placa de refrigeração no frio câmara. Uma solução 0,1% (wt / vol) de viologen benzílico
em 50 mM tampão fosfato de potássio, pH 7,0, foi reduzida quando armazenados na caixa. processos anaeróbios. As células
bacterianas e
preparações enzimáticas foram protegidos do oxigênio durante as várias fases deste trabalho. soluções de teste foram
preparadas na caixa anaeróbio de água armazenada na caixa de pelo menos 24 h. Soluções tampão foram preparados fora da
caixa e armazenados na caixa de
mais de 18 h antes da utilização. Quando as células foram lavadas, elas foram suspensas em tampão e colocados em tubos com
rolhas apertadas antes de serem levadas para fora do
a caixa de centrifugação. Os tubos foram sempre abriu na caixa. Para as células foram desintegração suspenso em tampão,
juntamente com pérolas de vidro e interposto fora do caixa em uma hermeticamente fechados agitação do frasco. Após a
desintegração do conteúdo do frasco foram transferidos para tubos de centrifugação na caixa. Todos
reagentes para a fotometria foram misturados em um quartzo cuvete com um braço lateral (tubo Thunberg Hellma não. 191-OS,
Beckman Instruments, Munique) na caixa. Os tubos foram Thunberg, em seguida, hermeticamente fechados antes de serem
levados para o fotômetro. Ensaio de intermediários glicolítico. Os estreptococos em 100 ml de culturas contínuas foram
removidos do fermentador em CO, gás em uma centrífuga tubo resfriado em banho de gelo. O tubo foi então fortemente
nivelado e centrifugado a 20.000 xg por 5 min a 4 C. Glycolytic intermediários nas células foram então extraídos com 2,5 ml de
7,5% (wt / vol) de ácido perclórico 30 min a 0 C. O resíduo das células foi removido por centrifugação a 30.000 xg por 10 min a 4
C. Em seguida, 0,5 1 ml de cloridrato de trietanolamina M foi adicionado
para o líquido sobrenadante, eo pH foi ajustado em 0 º C a 7,4 com 5 M K2CO. Glycolytic intermediários nos extratos foram
medidos em 1 h após a neutralização de acordo com Minakami et al. (13). A mistura de ensaio para a glicose-6-fosfato e frutose-
6-fosfato contido do extrato e 0,5 mg de fosfato de NAD em 1,0 ml. Extinção a 340 nm da mistura foi medida com um feixe
duplo espectrofotômetro equipado com um gravador, 5 ul de 1 mg de solução de glucose-6-fosfato por ml foi adicionado, e a
mudança de extinção a 340 nm foi seguida. Após o término da reação, 5 pl de 2 mg de isomerase glucosefosfato solução por ml
foi adicionado. As quantidades de glicose 6-fosfato e frutose-6-fosfato foram calculados
da extinção atingido a 340 nm, após a Além da enzima, utilizando-se uma extinção milimolar
coeficiente de 6,2 para o fosfato de NADH. Dihydroacetone fosfato, gliceraldeído-3-fosfato,
e PSV foram ensaiadas em uma mistura de reação contendo o extrato, 0,1 mg de NADH, e 5 umol de Na, ácido
etilenodiaminotetracético, pH 7,4, em 1,0 ml. Quando menos de 0,5 ml do extrato foi usado, 0.1 M tampão de cloridrato de
trietanolamina pH 7,4, foi acrescentou. desidrogenase glicerol-3-fosfato (NAD +), triosefosfato isomerase e frutose bifosfato
aldolase foram adicionados à mistura de reação em que da ordem. Oxidação do NADH foi medida espectrofotometricamente a
340 nm, e os montantes dos intermediários foram calculados através de uma milimolar coeficiente de extinção de 6,2 para
NADH a 340 nm.
Reação da mistura para o ensaio de PEP continha o extrato, 0,1 mg de NADH, 0,5 mg de ADP, e 50; mol de MgCl, em 1,0 ml. L-
lactato desidrogenase e piruvato quinase foram adicionados nessa ordem, e os 0montante do PEP foi calculado. Preparação do
extrato livre de células. A bacteriana células e extratos de células livres foram protegidos do oxigênio durante todos os
procedimentos. Estreptococos em 100 ml de cultura contínua foram retirados do fermentador
em CO, gás, colhidas por centrifugação a 20.000 x g por 5 min a 4 ° C, lavadas duas vezes com 0,04 M tampão fosfato de
potássio, pH 6,8, e suspenso em 3 ml do mesmo tampão com uma gota de polipropileno glicol. Em seguida, 2,5 ml de contas de
vidro (0,10 a 00,11 milímetros) foi adicionado, e as células foram desintegrados por 3 min em um homogeneizador (MSK tipo, B.
Braun, Melsungen, Alemanha), sob refrigeração de CO2. Estreptococos em 500 ml de crescimento exponencial da cultura foram
colhidas por centrifugação. As células foram lavadas
e depois se desintegrou em 10 ml de solução tampão com uma queda de polipropilenoglicol e 8 ml de contas de vidro. debris
celulares foi removido por centrifugação a 40.000 x g por 60 min a 4 C. O sobrenadante foi designado como o extrato livre de
células. Ensaio da atividade da LDH. LDH de S. mutans JC 2 foi parcialmente purificada durante a depuração de piruvato
quinase (24). Uma vez que a enzima purificada foi muito instável, atividade da LDH foi estudada em células livres extratos em
condições anaeróbias. A enzima em os extratos manteve-se estável por pelo menos duas semanas, quando armazenadas sob
condições anaeróbicas a -80 C. A sistema de ensaio norma contida extrato livre de células: 200
gmol de tris (hidroximetil) aminometano cloridrato de- tampão, pH 7,0; 0,33 gmol do NADH, 1 de Amol
FDP sal tetracyclohexylammonium e 100 mmol de piruvato de sódio em 3 ml. A reação foi iniciada por
adição de extrato livre de células do braço do lado da Thunberg tubo e foi executado em 25 de oxidação C.
NADH foi estimada a partir da diminuição da extinção a 340 nm. Uma unidade de LDH foi definida como a
quantidade de enzima que oxidado 1 umol NADH / min. O nível de atividade da LDH no extrato livre de células
foi determinada através de testes a actividade de quatro diferentes concentrações do extrato livre de células. A enzima
atividade foi sempre proporcional à concentração da enzima. Composição de álcool desidrogenase. A atividade foi estimado
como descrito por Brown e Patterson (2). A mistura de reação continha 0,1 M de glicina-NaOH (tampão pH 10,5), 2 mM de NAD,
0,1 M de etanol, e extrato livre de células. A reação foi correr a 25 º C sob
condições anaeróbias. Fermentação da glicose pelas células em repouso. S. mutans JC 2 em 100 ml de glicose limitada cultura
contínua foi colhido em CO, gás por centrifugação juntos com cloranfenicol (0,1 galiter) a 20.000 xg por 10 min a 4 C. As células
foram lavadas duas vezes em 0,04 M tampão fosfato de potássio, pH 6,8, que continha
0,1 g de cloranfenicol por litro, e ressuspendido em mesmo tampão. A suspensão de células em repouso contido
500 Amol de tampão fosfato de potássio (pH 7,0), 20 Mmol de MgCl, 0,5 mg de cloranfenicol, e as células
(5 mg de peso seco) em 4,8 ml. Após pré-incubação por 10 min a 37 º C, a reação foi iniciada pela adição de 0,2 ml
de 0,2 M de glicose. No controle, 0,2 ml de água foi adicionado ao invés de D-glucose. A reação foi executado em
37 º C por 15 e 30 min sob agitação constante e foi interrompida pela adição de 0,6 ml de preparada a 25% (Wt / vol) de ácido
metafosfórico. Todos estes procedimentos foram realizadas sob condições anaeróbicas. Depois
centrifugação do fluido sobrenadante foi analisado para produtos da fermentação. Análise dos produtos da fermentação. Para o
sobrenadante fluído da cultura utilizada na determinação do peso seco, volume de um nono do recém-preparada de 25% (peso /
ácido) vol metafosfórico foi adicionado. A fermentação produtos, exceto o ácido fórmico, foram determinados por injetar 0,5 ml
desta solução para um cromatógrafo a gás (Modelo 5751 G, a Hewlett-Packard GmbH, Wintemburg, Alemanha) com um
detector de chama de hidrogênio, um 1 mV gravador de extensão, e um integrador digital (3373 B, Hewlett-Packard). Uma
coluna de vidro enrolada (aproximadamente 1,8 m por 2 mm de diâmetro interno) empacotada com um polímero poroso
(Chromosorb 101) foi executado isotermicamente a 200 C, com a entrada de 200 º C e os detector a 240 ° C (6). ácido isovalérico
foi o interno
padrão. Para a análise de ácido fórmico, 3 ml de acidificados líquido sobrenadante foi injetado um gás
cromatógrafo (modelo 5710 A, Hewlett-Packard) com detectores de condutividade térmica. vidro em espiral
colunas (aproximadamente 1,9 m por 3 mm de diâmetro interno) embalado com cromosorb 101 foram executados
isotermicamente a 165 C, com a entrada em 165 C e os detector a 250 C. Nenhum padrão interno foi usado.
Standard curvas relacionando a área do pico de concentração foram obtidos pela injeção de doses de 0,5 e 3 ml de
soluções padrão de ácido metafosfórico. Outros métodos analíticos. A concentração de proteína do extrato livre de células foi
medido pelo método de Lowry et al. (12). O peso seco das células foi determinada como descrito por Carlsson (5).
RESULTADOS Intracelular nível de intermediários glicolítica e atividade da LDH em S. mutans JC 2
cultivado em cultura contínua. S. mutans JC 2 produzido principalmente lactato durante o estado estacionário
crescimento na presença de um excesso de glicose. FDP foi predominante entre os glicolítica intermediários estudados (Fig. 1).
De acordo com a glicose formiato limitação, acetato e etanol, mas não lactato, foram produzidos (Fig. 1). O intracelular nível de
PEP foi mais elevada eo nível de todos os
FIG. 1. intermediários intracelulares glicolítica, a fermentação
produtos e LDH de S. mutans
Jc2 cultivadas sob excesso de glicose e limitação de glicose.
Abreviaturas: G-6-P, a glicose-6-fosfato;
F-6-P, frutose-6-fosfato; DHA-P, dihidroxiacetona
fosfato; GAL-3-P, gliceraldeído-3-fosfato;
nd, não determinado. Dados de dois independentes
experimentos são mostrados. LDH foi
ensaiadas pelo sistema de análise padrão.

outros intermediários foi inferior em glicose limitação do âmbito de excesso de glicose. Determinação
do nível intracelular de piruvato foi não é possível porque piruvato estava presente como um
produto de fermentação no meio. No entanto, a quantidade de piruvato foi inferior a 1% do
outros produtos de fermentação. O nível de atividade da LDH em S. mutans JC 2 era a mesma em células cultivadas em glucose
prescrição e sob excesso de glicose (Fig. 1). produtos da fermentação das células em repouso de S. mutans JC 2. Células lavadas
após crescimento em glicose limitada cultura contínua e incubadas em solução de glicose no buffer da presença de cloranfenicol,
produzida principalmente
lactato (Fig. 2). Lactato foi também o principal produto da fermentação da glicose extracelular
quando cloranfenicol foi omitido. Quando a glicose foi omitido da suspensão de células, não
produtos de fermentação foram formados. níveis intracelulares de intermediários glicolítica e LDH em S. bovis ATCC 9809 e S.
mutans FIL. S. bovis 9809 formou lactato, principalmente quando cultivadas sob limitação de glicose ou excesso de glicose. No
entanto, as mudanças no pool intracelular dos intermediários glicolítica sob estas condições foram semelhantes aos aqueles
encontrados em S. mutans JC 2 (Fig. 3). O nível de atividade da LDH em S. bovis cultivadas em glucose excesso de glicose e
limitação era da mesma
ordem de magnitude (Fig. 3). S. mutans FIL, que tem um FDP independente LDH, lactato produzido principalmente no âmbito
condições de excesso de glicose ou limitação de glicose. As mudanças nos níveis de intermediários glicolítica e níveis de
atividade da LDH foram semelhantes para aqueles em S. mutans e S. JC 2 bovis ATCC 9809 (Fig. 4).
FIG. 2. produtos da fermentação do S. mutans JC 2
quando cultivado em cultura contínua da glicose em
limitação (crescimento de glicose limitada) e de lavada
células de uma cultura, quando incubadas em tampão
solução de glicose (incubação de células em repouso). Dados da
dois experimentos independentes são mostrados. A figura
mostra a concentração dos produtos da fermentação em
suspensão de células em repouso após 30 minutos de incubação.
ND, não determinado.

FIG. 3. Intracelular fermentação intermediários glicolítica

produtos e LDH de S. bovis 9809
cultivadas sob excesso de glicose e limitação de glicose.
Os símbolos são os mesmos que na fig. 1. atividade da LDH
foi analisada pelo sistema de ensaio padrão.

FIG. 4. intermediários intracelulares glicolítica, a fermentação

produtos e LDH de S. mutans
FIL cultivadas sob excesso de glicose e limitação de glicose.
Os símbolos são os mesmos que na fig. 1. LDH
atividade foi avaliada pelo sistema de ensaio padrão
sem FDP.

Características da LDH. S. mutans JC 2 tiveram LDH um dependente FDP. Em alta concentração (66,8 mM) de fosfato (Fig. 5), o
concentração de meia saturação para FDP foi 1,5 x 10-3 M, e foi similar ao relatado de LDH de outras linhagens de S. mutans
testadas em condições semelhantes (2, 21). A concentração por meia saturação para FDP anteriormente só foram estimados na
presença de um elevado concentração de fosfato (2). Na presença de uma baixa concentração (0,3 mM) de fosfato (Fig. 6), a
LDH de S. mutans JC 2 teve um halfsaturation valor de concentração para FDP de 6,7 x 10-5M. O efeito do FDP na atividade da
LDH foi também um função da concentração de piruvato. O halfsaturating concentração de piruvato foi de 6,7 x 10 - M, na
presença de 0,33 mM e 1,4 FDP x 10-2 M, na presença de 0,03 mM FDP. A efeito de alguns intermediários glicolítica e
compostos fosfatados sobre a atividade da LDH é apresentados na Tabela 1. PEP, AMP e ADP foram potentes inibidores da
atividade da LDH. A inibição pelo PEP foi especialmente eficaz em baixa concentração de FDP (Fig. 6). O pH ótimo da LDH de S.
mutans JC 2 foi cerca de 6,2. Em pH 7,0 a atividade foi reduzida em aproximadamente 10%. Para esclarecer as diferenças entre
LDH em S. mutans JC 2, S. mutans FIL, e S. bovis 9809, a atividade da LDH foi testada em quatro diferentes condições (Tabela 2).
A LDH de S. mutans 2 JC não teve nenhuma atividade sem FDP (Lo e Ho, Tabela 2). A LDH de S. bovis ATCC 9809 teve um
atividade significativa na ausência do FDP em um alta concentração (33 mM) de piruvato (Ho, Tabela 2). A esta concentração de
piruvato, a LDH de S. bovis foi maximamente ativado de 1,3 FDP GM. Em uma baixa concentração de piruvato, a LDH de S. bovis
foi altamente dependente em FDP para a atividade catalítica (Lf e Lo, a Tabela2). LDH de S. mutans FIL era ativo na
ausência de FDP mesmo em baixa concentração de piruvato (Lo). FDP não ativar essa enzima.As características da LDH destes
três linhagens não foram influenciados pelas condições de crescimento(Tabela 2).Álcool atividade desidrogenase. pouco de
álcool desidrogenase (EC 1.1.1.1) a atividade foiencontrados em S. mutans JC 2 crescido tanto em glucose-limitada e de glicose
em excesso, condições,Embora as células produziram uma grande quantidade de etanol durante o seu crescimento limitado da
glicose.
DISCUSSÃO
S. mutans JC 2 produzido fermentação diferentes produtos quando cultivados sob limitação de glicose ou excesso de glicose. A
diferença na cultura condições podem influenciar a síntese ou atividade das enzimas envolvidas na conversão de piruvato para
produtos de fermentação. Um similar nível de atividade da LDH foi encontrado em estado estacionário culturas de S. mutans JC
2 cultivadas em glucose prescrição e excesso de glicose (Fig. 1), mas não diferença entre as características da LDH de
estas culturas poderiam ser detectados (Tabela 2). Em Além disso, as células lavadas a partir de culturas de glicose limitada
produzido principalmente lactato quando incubadas em um buffer que contém uma alta concentração de glicose (Fig. 2). Esses
resultados excluem a possibilidade de que a mudança de fermentação produtos de resultados apenas a partir de um
regulamento do síntese de enzimas envolvidas na conversão de piruvato em produtos de fermentação. A diferença nos níveis
intracelulares de FDP em excesso de glicose e limitação de glicose (Fig. 1) parece ser a principal razão para a mudança dos
produtos da fermentação em S. mutans JC 2. LDH de S. mutans JC 2 foi absolutamente dependente em FDP para a atividade (Fig.
5 e 6), e os nível intracelular de FDP foi muito baixa em limitação de glicose. S. mutans FIL, que tem uma LDH independente do
FDP, tinham níveis semelhantes de intermediários como S. mutans glicolíticas JC 2 e lactato produzido sob excesso de glicose ou
sob limitação de glicose. O efeito do FDP como um modulador da LDH atividade de S. mutans JC 2 também é influenciada por
outros componentes intracelulares. Em alta concentração de fosfato, um muito maior concentração de FDP foi necessária para
ativar este LDH que a uma baixa concentração de fosfato (Fig. 5 e 6). A concentração de saturação do meio de FDP era quase
100 vezes maior na alta (66,8 mM) do que em níveis baixos (0,3 mm) concentrações de fosfato. Além disso piruvato modificaram
o efeito da FDP. Em uma baixa concentração de piruvato, FDP era muito menos eficaz para ativar a LDH de S. mutans JC 2 do que
em uma alta concentração de piruvato. Em contraste com outros intermediários estudados, o nível intracelular de PEP foi maior
no limitação de glicose do que sob o excesso de glicose.
TABELA 2. A atividade relativa da LDH na cela-livre
extratos de estreptococos do grupo cresceram em cultura contínua
sob limitação de nitrogênio em excesso e uma ofglucose
sob limitação de glicose
Outros componentes, um dos sistemas de ensaio foram os
mesmo que no sistema de análise padrão. Hf, Alto
concentração de piruvato (33 mm), com concentração ótima
do FDP (0,33 mM); Lf, baixa concentração de
piruvato (3,3 mm), com concentração ótima de
FDP (0,33 mM); Lo, a concentração de piruvato baixo (3,3
mM) sem nenhum FDP; Ho, alta concentração de piruvato
(33 mM) sem nenhum FDP.

(Fig. 1), e PEP foi relativamente forte inibidor da atividade da LDH em S. mutans JC 2 (Tabela 1). A inibição da atividade da LDH
por PEP foi particularmente acentuado em baixa concentração do FDP (Fig. 6). Isto poderia significar que PEP tem um efeito
significativo na atividade da LDH nas culturas de glicose limitada. AMP e ADP inibiu a atividade da LDH (Tabela 1) e isso pode
também ser importante para a regulação da conversão pyrvvate
em estreptococos. Uma mudança na conversão de piruvato a formiato, acetato e etanol em vez de lactato pode proporcionam
ao organismo com mais de adenosina 5'-trifosfato (7). Assim, a atividade da LDH FDP-dependente de S. mutans JC 2 parece ser
regulado por mudanças o nível intracelular de FDP. O efeito do FDP também pode ser significativamente modificado pela
intracelular níveis de PEP piruvato, AMP, ADP, e fosfato inorgânico. A presença de dois tipos de LDH em S. Bovis ATCC 9809, um
FDP-dependente e os outros FDP-independente, não pode ser excluída. No entanto, as características da LDH na cela-livre
extratos de S. bovis são semelhantes aos de um
parcialmente purificadas da LDH laidlawii A. (15). Ambos os HDLs são ativados por FDP em alta As concentrações de piruvato e
são altamente dependentes em FDP para a atividade em baixas concentrações de piruvato (Tabela 2).
As características da atividade de LDH em S. FIL mutans e S. bovis ATCC 9809 são únicos entre os estreptococos do grupo
estudado, enquanto HDLs que estão dependentes da FDP para a atividade LDH como de S. mutans JC dois foram encontrados
em estreptococos muitos (2, 20-22). A conversão de piruvato em produtos de fermentação é provavelmente regulamentado da
mesma forma nestes últimos estreptococos mutans como em S. JC 2.