Distribuição de sinapses elétricas no cérebro

Com base na distribuição da expressão da Cx36 sozinha, parece provável que sinapses elétricas
ocorram em todas as principais regiões do sistema nervoso central, embora dados funcionais e
morfológicos convincentes tenham sido coletados apenas em algumas áreas. Aqui destacamos
exemplos para os quais a evidência é mais forte e as funções prospectivas são mais
interessantes (Figura 1).

legenda- (A) Dois tipos de interneurônios inibitórios do neocórtex: células fastspiking (FS) e células low
threshold-spiking (LTS). Traços são médios de dez e oito pares de neurônios, respectivamente, e as
linhas tracejadas são ±SD (J.R. Gibson, M. Beierlein, B.W. Connors, relatório não publicado). (B)
Gravações de um par de neurônios reticulares talâmicos em modo de pico tonicamente (esquerda) e
modo de explosão (direita). Os potenciais de ação são truncados (de Long et al. 2004). (C) Neurônios
olivares inferiores (MA Long, relatório não publicado). (D) Todos os neurónios amócrinos da retina (Veruki
& Hartveit 2002a). (E) Interneurónios cerebelares (Mann-Metzer & Yarom 1999).

Núcleo Olivar Inferior

Muitos neurônios olivares inferiores têm uma propensão incomum de gerar grandes,
flutuações sub-limiares, synchronous, espontâneas, da tensão da membrana a 2–8 Hz (Figura
2A). Evidências indiretas implicam que esses ritmos emergiram de uma rede eletricamente
acoplada de neurônios que, quando desacoplados, são inerentemente inativos.

Isso foi testado recentemente em ratinhos com uma mutação nula para Cx36. Tanto a
prevalência quanto a força das sinapses elétricas foram drasticamente reduzidas em Cx36
knockout mice, como esperado, mas os ritmos sublimiares espontâneos foram semelhantes
em tamanho, forma e frequência aos wild type (ver Figura 2A, B, C). Os ritmos sublimiares e os
spikes que eles evocavam estavam fortemente sincronizados entre as células vizinhas da wild
olive; no entanto, a sincronia foi abolida no Cx36 knockout mouse (Figura 2D).

Estes resultados implicam que as sinapses elétricas são necessárias para a sincronização, mas
não a geração, dos olivary rhythms. Uma interpretação alternativa é que os neurônios
olivares desacoplados do knockout Cx36 em desenvolvimento expressam um complemento
anormal de canais iônicos que produz ritmicidade intrínseca em neurônios individuais.

Núcleo Reticular Talâmico

O TRN é uma fina camada de neurônios GABAérgicos que circundam e inibem os núcleos relay
do tálamo dorsal. O TRN recebe sinapses excitatórias de colaterais talamocorticais e
corticotalâmicas. Pode influenciar a atividade de todo o sistema talamocortical e participa na
atividade do prosencéfalo rítmico. Os neurônios TRN têm conexões mutuamente inibitórias,
mas as evidências sugerem que essa não é a história toda. Os neurônios TRN possuem feixes
dendríticos e contatos dendrodendríticos especializados. A hibridização in situ mostrou
marcação pesada para Cx36 mRNA no TRN mas não em núcleos de revezamento. A
imunorreatividade do tipo Cx36 foi observada em todos os neurônios do TRN, mas as junções
comunicantes permanecem elusivas.

A evidência mais definitiva para sinapses elétricas foi obtida a partir de gravações
simultâneas de pares vizinhos de neurônios TRN de ratos (Figura 1B).
A prevalência, força, propriedades biofísicas e dependência de Cx36 de conexões elétricas entre os
neurônios TRN são quase indistinguíveis daquelas entre interneurônios inibitórios do neocórtex.
O acoplamento elétrico no TRN parece estar restrito a células não separadas por mais de 40 μm. Nesse
sentido, o acoplamento no TRN assemelha-se ao acoplamento espacialmente localizado no núcleo olivar
inferior.
Além disso, quando ritmos subliminares de ~ 10 Hz foram induzidos em neurônios TRN com um
agonista de receptores metabotrópicos de glutamato, os ritmos foram sincronizados apenas entre
pequenos aglomerados adjacentes de neurônios acoplados.
Sinapses elétricas podem coordenar grupos locais de neurônios TRN, enquanto interações mais
distantes dentro do TRN podem ocorrer via conexões inibitórias.

….

What cell types form electrical synapses?

Em 1972, Sloper publicou um relatório sobre seus estudos de gap juctions dendrodendríticas
no neocórtex dos primatas.

Antes disso, foi demonstrado que sinapses elétricas e seus structural correlate (gap junctions)
estão presentes no sistema nervoso de vertebrados inferiores e invertebrados, mas se essa
forma de sinalização é usada ou não no córtex de mamíferos é desconhecida. Neste artigo, e
numa publicação posterior com Powell, Sloper mostrou claramente, usando a microscopia
eletrônica, que certas células neocorticais fazem "apêndices próximos(close appositions)
dendrodendríticas ou dendrosomáticas" (Fig. 1a). Estas posições próximas tinham a estrutura
de sete camadas das gapjunctions (FIG. 1b). Além disso, essas junções neocorticais foram
encontradas principalmente em contatos entre células pertencentes a uma classe específica;
por exemplo, grandes células de cesto. Os autores argumentaram que essas células eram
inibitórias porque recebiam SINAPSES ASSIMÉTRICAS em seus somatos.

Com melhores técnicas que permitem a seleção de células individuais, gravações duplas de
pares de tipos específicos de neurônios inibitórios tornaram-se práticas. FIG. 2 descreve o
procedimento geral que tem sido usado por vários grupos. Aqui, duas células da camada
neocortical 5 que não possuem uma dendrite apical são selecionadas e os seus padrões de
pico são examinados (FIG. 2Aa). Trabalhos anteriores mostraram que, em resposta à injeção de
corrente próxima ao limiar, um tipo específico de neurônio neocortical inibitório, a célula de
fast-spiking (FS), exibe uma descarga de alta frequência de picos sem ADAPTAÇÃO DE SPIKE-
FREQUÊNCIA.

Quando duas células são selecionadas desta maneira, a maioria dos pares de células de FS
julgavam-se acoplados eletricamente; injeção de corrente numa célula produz uma resposta
atenuada na célula não-injetada (FIG. 2Ab). Em contraste, as células piramidais (isto é, as
células principais) que exibem descargas de baixa frequência e mostram adaptação de
frequência de pico (FIG. 2Ba) não são acopladas (FIG. 2Bb). Achados semelhantes indicaram
que as células FS estão interconectadas via sinapses elétricas em L4 E L6, e em L2/3. Assim,
esses dados indicam que um subtipo específico de interneurônio GABA - células FS nas
camadas 2 a 6 - forma uma rede elétrica altamente conectada.

Os dados fisiológicos obtidos usando este tipo de registo duplo revelam que as sinapses
elétricas estão presentes de forma proeminente entre as células FS. Além de apresentarem
características de fast-spiking, esses neurônios contêm PARVALBUMIN e representam células
da cesto.

Esses achados correspondem aos achados anatômicos de Sloper e Powell? Para responder a
esta pergunta, procuraram evidências anatômicas relacionadas à parvalbumina e à expressão
da conexina (BOX 1) no hipocampo e no neocórtex (FIG. 3). Usando a detecção
imunohistoquímica, tem sido demonstrado que as gap junctions estão realmente presentes
entre as dendrites de células imunorreativas de parvalbumina. (FIG. 3).

É importante notar que as células FS não parecem estabelecer sinapses elétricas com outras
células, incluindo neurônios piramidais, glia ou outros tipos de células não pirâmides18.
Esses dados, portanto, levantam a possibilidade de que as sinapses elétricas sejam formadas
exclusivamente entre neurônios de uma classe específica. Esta é uma idéia interessante
porque pode fornecer insights sobre a organização de circuitos de diferentes áreas cerebrais,
e levar à identificação de células que pertencem à mesma classe funcional.
As sinapses elétricas podem atuar como FILTROS LOW-PASS, refletindo sua localização
eletrotónica e os CONSTANTES DE TEMPO MEMBRANa de ambas as células. As características
de filtragem das sinapses elétricas do interneurônio foram estudadas através da injeção de
correntes senoidais sublimiares de diferentes frequências numa célula (FIG. 4Aa). À medida
que a frequência da onda senoidal injetada aumenta, a eficácia da conexão elétrica diminui
(FIG. 4Ab). Assim, a sinalização através de conexões elétricas favorece a transmissão de
mudanças lentas de potencial.

Os picos em células não pirâmidais são geralmente mais rápidos do que em células piramidais
e são seguidos por uma after- HIPERPERPOLARIZAÇÃO (AHP) proeminente.
Consequentemente, o sinal transmitido para a célula pós-sináptica também é bifásico, com
umabreve componente despolarizante refletindo o próprio pico e uma componente
hiperpolarizante mais lenta refletindo o AHP (FIG. 4B). A latência média entre o pico do pico do
pico do pico pré-sináptico e o pico da resposta despolarizante pós-sináptica, comumente
referida como pico, tem sido relatada como 300-500 μs para pares FS-FS e para pares de
células do núcleo reticular talâmico (TABELA 2).

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Oscilações de rede e sinapses elétricas. Experiências in vivo e in vitro têm sugerido que redes
de neurônios inibitórios podem sincronizar a atividade neuronal. Modelos teóricos têm
apoiado essa proposta, porém a sincronização dependeu de restrições específicas quando os
interneurônios foram interconectados apenas pelas sinapses GABA.

A existência de sinapses elétricas poderia fornecer um mecanismo adicional para facilitar o

spiking síncrono preciso dessas células e contribuir para o controlo da atividade no córtex.
Além disso, tem sido sugerido que o curso temporal da resposta inibitória mediada por GABA
determina a frequência das oscilações. Como ilustramos, os spikes podem ser seguidos por
uma hiperpolarização prolongada que reflete o AHP pré-sináptico (FIG. 4B). Assim, a
hiperpolarização mediada por sinapses elétricas representa uma forma de inibição e
também pode influenciar a frequência de oscilação.
Coexistência de sinapses elétricas e químicas

Muitos pares de células FS neocorticais são conectadas simultaneamente por sinapses elétricas
e químicas. Em alguns casos, a conexão mediada por GABA é recíproca (FIG. 5). Quando
sinapses elétricas e químicas coexistem, um pico pré-sináptico produz uma resposta complexa
no neurônio pós-sináptico. Esta resposta inclui um componente elétrico bifásico independente
de tensão e um componente mediado por um receptor GABAA dependente de tensão. Este
último é normalmente hiperpolarizante (FIG. 5), mas uma resposta elétrica pura pode ser
registada perto do potencial de reversão do cloreto. O single-axon, hiperpolarização inibitória
pós-sináptico potencial (IPSP) entre células FS tipicamente picos 2-3 ms após o pico pré-
sináptico. As sinapses inibitórias mostram depressão a curto prazo e as sinapses elétricas não
(FIG. 5). Assim, a interação entre sinapses elétricas e químicas de diferentes polaridades,
dependência de voltagem e plasticidade de curto prazo pode adicionar um grau adicional de
sofisticação às capacidades integrativas das redes interneuronais inibitórias.

figuraa - a | Um conjunto de potenciais de ação (20 Hz) na célula 1 (verde) produz uma
resposta complexa na célula pós-sináptica 2 (azul). Quando a célula 2 é mantida em -
53 mV, a resposta pós-sináptica inclui uma despolarização inicial u(mediada
eletricamente) seguida de uma hiperpolarização (mediada por GABA). Em contraste,
se a célula pós-sináptica é mantida a -87 mV, ambos os componentes eléctricos e
químicos estão a despolarizar. No traço registrado a -53 mV, note-se que a amplitude
da componente mediada por GABA para picos consecutivos é reduzida (depressão de
curto prazo), enquanto que o componente elétrico permanece inalterado. b |
Resultados semelhantes são obtidos quando picos são gerados na célula 2.
Paper do calcio

Na retina de mamíferos, os terminais sinápticos RBC recebem sinapses inibitórias de vários

tipos de células amácrinas, incluindo células amácrinas GABAergic A17 , que recebem entrada
excitatória de RBCs e fazem sinapses imediatamente adjacentes de volta aos mesmos
terminais. Para investigar como as células A17 transduzem a entrada de RBC na libertação
recíproca de GABA, registaram respostas sinápticas de ambos os tipos de células em fatias
agudas da retina, começando com as RBCs (Fig. 1a).

A despolarização das RBC voltage clamped provocou correntes de cálcio internas sustentadas,
sobre as quais foram sobrepostas correntes transitórias, inibitórias de feedback pós-sinápticas
(IPSCs) que foram reduzidas apenas ligeiramente pelo antagonista do receptor GABAC
(GABACR) (1,2,5,6-tetrahidropyridin-4-yl) ácido metilfosfínico, mas foram bloqueados pelo
antagonista SR95531 ( Fig. 1b, d). Estes IPSCs (vIPSCs) voltage step evoked foram quase
completamente resistentes à tetrodotoxina do bloqueador de canal de sódio (TTX, Fig. 1c, d),
que elimina a inibição de feedback de muitas células amacrinas. TTX tem sido relatado para
exercer efeitos variáveis sobre o feedback recíproco em RBCs, mas não afeta condutâncias de
voltage gated em RBCs de rato e células A17. As vIPSCs foram abolidas por 5,7-di-
hidroxitriptamina (Fig. 1c, d), que mata células acumuladoras de indoleamina quando
absorvidas e oxidadas por monoamina oxidase (MAO) e ablata seletivamente células A17
quando injetadas intravitrealmente várias semanas antes da enucleação. Aqui, a DHT aplicada
em banho atuou rápida e especificamente (ver Figura Suplementar 1): A DHT eliminou as
correntes pós-sinápticas excitatórias (EPSCs) em células A17 em 5 minutos, mas dificilmente
afetou as EPSCs em células AII amacrinas, que também recebem entrada sináptica de RBC; a
DHT reduziu as correntes de cálcio apenas ligeiramente e não afetou as respostas das RBC ao
GABA. Os efeitos agudos da DHT em EPSCs A17 foram bloqueados pelo inibidor da MAO
fenelzina (10 mM; veja a Figura Suplementar 1d-f).

IPSCs também foram eliciados em RBCs estimulando dendrites de células amacrinas

diretamente com breves puffs de glutamato (50 mM,25 ms) entregues à camada plexiforme
interna (IPL), onde RBCs, células A17 e outras células amacrinas fazem contato sináptico (Fig.
1e, f). IPSCs evocadas por glutamato (gIPSCs) reverteram perto do potencial de equilíbrio de
cloretos calculado (Fig. 1f inset) e continham componentes mediados por GABACRs e GABAARs
que foram bloqueados por TPMPA (50 mM) e SR95531 (10 mM), respectivamente (Fig. 1f, h).

Os puffs de glutamato na camada plexiforme externa (OPL) não obtiveram resposta nas RBC
(ver Figura Complementar 2), indicando que as gIPSCs refletiram libertação de GABA na IPL.

TTX parcialmente bloquearam gIPSCs (Fig.1g, h), confirmando que as células amacrinas
sensíveis a TTX também fornecem inibição (não recíproca) às RBC. O componente não sensível
à TTX do gIPSC requereu a libertação de GABA das células A17, uma vez que foi abolido pelo
DHT ( Fig. 1g, h). DHT aplicado sozinho bloqueou apenas uma fração do gIPSC (Fig. 1h),
indicando que ele não eliminou a transmissão de células GABAergic amacrinas diferentes das
células A17. O componente TTX-insensível do gIPSC foi parcialmente sensível ao
TPMPA,consistente com as evidências anteriores de que a ativação de células A17 por
múltiplas RBC -ou ativação melhorada de células A17 por uma única RBC,- recruta um
componente GABACR no feedback IPSC. Para isolar o componente mediado A17 do gIPSC,
todos os experimentos subsequentes foram realizados na presença de TTX, exceto quando
indicado.
Nas sinapses recíprocas no bulbo olfativo, os receptores NMDA (N-metil-Daspartato)
(NMDARs) ativados pelo glutamato libertado das células mitrais ajudam a ativar o feedback
GABAergico. Em contraste, descobrimos que o feedback das células A17 para as RBC requer a
ativação de AMPARs mas não NMDARs. Os IPSCs de feedback foram bloqueados por
filantotoxina 433 (PhTx, 1 mM), um antagonista específico de AMPARs20 permeáveis ao cálcio
(vIPSC: P ¼ 5 £ 1025; gIPSC: P ¼ 0.0003; Fig. 2a, b, g). PhTx não agiu bloqueando a acetilcolina
nicotínica (nAChRs), pois o antagonista nAChR d-tubocurarina (dTC, 20 mM) não reduziram as
vIPSCs (P ¼ 0,16; Fig. 2g). vIPSCs também foram eliminados pelo antagonista do receptor
AMPAR/kainate 2,3-di-hidroxi-6-nitro-7-sulfamoílo-benzo(f)quinoxalina (NBQX,Fig. 2g) e
aAntagonista AMPAR GYKI 53655 ((Fig. 2g), mas o antagonista NMDAR ácido 3-(2-
carboxipiperazina-4-il)propil-1-fosfônico (CPP, 10 mM) não reduziu o feedback IPSCs (; Fig. 2c,
d, g).

Os EPSCs registrados em células A17, evocados pela despolarização de uma população de

células bipolares ON (incluindo RBCs) com aplicação puff do antagonista mGluR do grupo II/III
(RS) - um ciclopropil-4- fosfonofenilglicina (CPPG, 600 mM, 100 ms)21 na OPL foram
bloqueados pelo PhTx (P ¼ 0,009; Fig. 2e, g) e mostraram retificação inward.(Fig. 2f), indicando
que foram mediadas por AMPARs calcium permeable. Esses resultados corroboram dados
fisiológicos prévios indicando que as AMPARs, e não as NMDARs, mediam inputs sinápticos
para células A17 na retina de ratos, em contraste com a retina teleóstea, onde Os NMDARs
contribuem para o feedback recíproco dos RBCs.
Figura 2 | As AMPARs permeáveis ao cálcio desencadeiam a libertação de GABA das células
A17. --

Os AMPARs permeáveis ao cálcio podem contribuir para a libertação de GABA pela

despolarização de dendrites A17 para ativar VGCCs e/ou fornecendo cálcio directamente. Para
distinguir entre estas possibilidades, as gravações foram feitas a partir de acoplamentos
sinápticos,Pares de células RBC-A17 (Fig. 3A, B). A despolarização da RBC provocou um EPSC na
célula A17 e o feedback quântico IPSCs na RBC (Fig. 3A), mas a despolarização da célula A17
não evocou nenhum IPSC detectável na RBC (n ¼ 7; Fig. 3B), indicando que a despolarização
da membrana provoca a libertação das RBC, mas não das células A17. Além disso, o cádmio
bloqueador de VGCC (Cd, 200 mM) reduziu a corrente de VGCC nas RBC e aboliu as vIPSCs(Fig.
3C, I), mas não afetaram as PCDIPs (Fig. 3D, I).

Efeitos semelhantes sobre as PCDIPs foram obtidos com nimodipina (10 mM; P ¼ 0,09; Fig. 3I)
ou kurtoxina (350 nM; Fig. 3I), que juntas inibem alterações conformacionais voltage activated
na maioria dos subtipos do canal de cálcio. Nimodipina sozinha bloqueou as correntes de
cálcio evocadas por etapas de 260 a 210 mV em RBCs ( Fig. 3I). Libertação de GABA de células
A17 não requer influxo de cálcio, pois as gIPSCs foram reduzidas quando o cálcio extracelular
foi reduzido de 2,5 mM para 0,5 mM (Fig. 3E, I) e foram abolidos quando o cálcio era
removido completamente Fig. 3I). As gIPSCs também foram reduzidas após a aplicação do
banho de quelante de cálcio membrana-permeante BAPTA-AM (Fig. 3F, I). Esses resultados
indicam que os AMPARs, não as VGCCs, medeiam o influxo de cálcio necessário para a
libertação de GABA de células A17. Em contraste, as gIPSCs glicinérgicas nas RBC foram
abolidos pelo Cd (ver Fig. 3 suplementar), indicando que os outros células amacrinas usam
VGCCs para acionar a libertação do transmissor.

As gIPSCs podem parecer insensíveis ao bloqueio de VGCC se forem AMPARs exógenos

ativados por glutamato tão fortemente que o cálcio consequente influxo saturado das
máquinas de lançamento, tornando os VGCCs desnecessários.

No entanto, Cd não reduziu os gIPSCs mesmo na presença de baixo cálcio extracelular (Fig. 3E),
indicando que os VGCCs não contribuem mesmo quando a máquina de libertação GABA não é
ativada ao máximo. Além disso, IPSCs eliciados por puffs de fluido cerebrospinal artificial
(ACSF) contendo 110 mM de potássio (kIPSCs), que despolarizariam processos RBC e A17,
foram abolidos pela NBQX (Fig. 3G, I). Se a libertação de GABA fosse evocada pela
despolarização da membrana, as kIPSCs teriam sido parcialmente resistentes ao bloqueio
AMPAR.
Finalmente, a despolarização direta de células A17 amputadas por tensão falhou em provocar
IPSCs em RBC sinapticamente acopladas (Fig. 3B). EPSCs registados em células A17 foram
revertidas com potenciais de retenção positivos (Fig. 2f), indicando que um elétrodo de
correção num soma de células A17 pode despolarizar o potencial de membrana pós-sináptica
o suficiente para activar os VGCCs, se estivessem presentes nos locais de lançamento do A17
GABA.

Evidências anteriores indicam que a liberação de GABA de células A17 é vesicular: Os

processos pós-sinápticos em células A17 contêm pequenas partículas transparentes vesículas
sinápticas 9,24, processos pós-sinápticos acumulados com indoleamina (tipo A17) na retina do
coelho contêm vesícula sináptica. As proteínas e as vIPSCs nas RBC´s apresentam componentes
quânticos4-6 (Fig. 3A). Além disso, as PCDIPs foram reduzidas significativamente quando
ATPases translacionadoras de protoes vacuolares (e, portanto, ATPases vesiculares
enchimento) foram inibidos pela aplicação em banho de concanamicina A(CmA, 10 mM; P ¼
0,004; Fig. 3H, I)26. Absorção invertida não contribui substancialmente para a libertação l do
GABA, já que o GABA neuronalbloqueador do transportador NO-711 (10 mM) reduziu apenas
ligeiramente as vIPSCs(P ¼ 0.02; Fig. 3I) e gIPSCs aprimorados (P ¼ 0.0008; Fig. 3I). Este último
efeito provavelmente refletiu a lenta remoção da libertação sináptica GABA, uma vez que o
NO-711 melhorou as respostas do RBC ao GABA exógeno a um extensão similar (135 ^ 21%, n
¼ 5, P ¼ 0,02; dados não mostrados)

Figura 3 | Nem despolarização da membrana nem ativação de VGCC

desencadeia a libertação de GABA a partir de células A17.

Os nossosresultados revelam uma sinapse rápida na qual as AMPARs fornecem influxo de

cálcio para desencadear a libertação de neurotransmissores, e em que ocorre
independentemente da despolarização da membrana. No máximo sinapses, VGCCs acoplam
potencial de membrana pré-sináptica e libertação de neurotransmissores. Em muitas células, a
despolarização pós-sináptica recruta VGCCs para mediar interações associativas entre o soma
e a arborização dendrítica ou, no bolbo olfativo, para acionar a libertação recíproca de GABA.
Embora os papéis fisiológicos específicos para as CCGV , as células A17 permanecem obscuras,
podendo reabastecer o cálcio intracelular ou desencadear a libertação de outros
neurotransmissores.

Se a liberação de GABA de células A17 foi desencadeada por VGCCs, a propagação da

despolarização através dos dendritos A17 poderia contribuir para rodear a inibição,
provocando a libertação em zonas electrotonicamente adjacentes de sinapses. Usando
AMPARs permeáveis ao cálcio em vez de VGCCs para acionar a libertação de GABA, no
entanto, dendrites A17 podem compartimentar o feedback recíproco para manter a
especificidade da sinapse.

Noutras sinapses recíprocas no bolbo olfativo e na retina do goldfish, ativação NMDAR

desencadeia feedback GABAergic que é muito mais lento do que o observado aqui. O feedback
em células A17 pode requerer AMPARs permeáveis ao cálcio, que mostram uma cinética mais
rápida do que os NMDAR, para conferir transiŒncia ao sinal visual e para prevenir o rápido
esgotamento da piscina vesicular readily-releasable nos terminais eritrocitários.