O estudo presente no artigo referenciado acima, foi realizado com objetivo de
desenvolver um teste que tivesse sensibilidade e especificidade suficiente para detectar genes mutantes em animais sensíveis, ou acometidos com a síndrome suína PSS (Porcina stress síndrome) em sua fase aguda. Embora o gene da PSS tenha sido identificada em diferentes raças de suínos, apresenta maior incidência em magros, Duroc, Lar-ge Branco, Pietrain e em Landrasce. A PSS trata-se de uma síndrome hipermetabólica (Herdável como alteração autossômica recessiva) que está associada a uma disfunção na homeostase do cálcio em fibras musculares, causando hipertermia, rigidez muscular e perturbação autonômica. Sabe-se que a mutação C1843T no ponto Arg615Cys está no gene RYR1 (Sus scrofa), seu alelo susceptível é o T e o não susceptível selvagem é o C. Após serem desenvolvidos e realizados um número considerável de testes laboratoriais, o que mais atendeu as necessidades do experimento foi o Real-time PRC utilizando sondas de hibridização marcadas com fluoresceína. Foram utilizados três PSS susceptíveis e não susceptíveis (Suínos de raças mestiças) na análise: Pietrain X Landrace Belga, Pietrain X Large White and Pietrain X Duroc. Realizaram-se as coletas de amostras do musculo e a biópsia das mesmas. Feito isto, submeteram-nas a halothano-cafeína em testes de contratura in vitro de acordo com o protocolo do Grupo de Hipertermia Maligna Norte Americano. A tipagem genética foi feita usando um sistema baseado em PCR em tempo real (LightCycler, Roche, e Mannheim, Alemanha) com sondas de hibridação específicas para o RYR1 C1843T SNP. Adicionando as amostras individuais que representam a relação C / genótipos C, C / T ou T / T analisadas por PCR em tempo real, foram também genotipados por sequenciação de DNA e técnicas de polimorfismo de comprimento de fragmentos de UBERLÂNDIA – MG SETEMBRO DE 2019 2º SEMESTRE/2019 restrição com a enzima HhaI (Invitrogen). Os resultados de genotipagem foram interpretados de acordo com a curva de fusão derivada {-d (f2 % F1) % dt}, representada graficamente em função da temperatura. Com os testes pode-se detectar os diferentes genótipos de RYR1, e estes revelaram a substituição de pb C para T em genes mutantes. Os testes em in vitro e em vivo apresentaram uma homologia de 100%, mostrando, com isso, a especificidade do teste de PCR em tempo real com sonda de hibridização (com marcadores de fluoresceína). Por se tratar de um teste rápido e com alta precisão, esta ferramenta pode auxiliar significativamente na seleção e no melhoramento genético de animais.