Aula Prática I

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Parte I

Extração de DNA

O objetivo desta prática é demonstrar através de um método simplificado e “caseiro” como

podemos obter DNA para estudos. A extração de DNA de células eucariontes consta
fundamentalmente de três etapas:

a) ruptura das células para liberação dos núcleos;

b) desmembramento da cromatina em seus componentes básicos, DNA e proteínas;

c) separação do DNA dos demais componentes celulares.

Materiais para extração do DNA do tomate:

1. Um tomate maduro;

2. Colheres de sopa e de chá;

4. Detergente líquido,

5. Três beckers;

6. Funil e papel filtro;

7. Álcool etílico gelado;

8. Um litro de Água (se for possível conseguir água destilada é melhor);

10. Copo de café;

11. Faca ou bisturi;

12. Bastão de vidro;

13. Cloreto de sódio (sal de cozinha);

14. Citrato de sódio.

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Procedimento
1. Pese aproximadamente 9 gramas de cloreto de sódio e 44 g de citrato de sódio separadamente;

2. Misture em um litro de água mineral o cloreto de sódio e o citrato de sódio – esta vai ser nossa
solução de extração;

3. Corte o tomate maduro em quatro partes;

4. Peque uma das partes e corte em fatias bem finas;

5. Misture 2 colheres de sopa de solução de extração com meia colher de chá de detergente líquido
em um becker;

6. Adicione as fatias de tomate ao copo e amasse o tomate por aproximadamente 1 minuto;

7. Filtre a mistura para o segundo becker;

8. Pegue meia colher de sopa do segundo becker e passe para o terceiro becker;

9. Adicione meia colher de sopa de água para clarear um pouco a mistura;

10. Com cuidado, adicione 4 colheres de sopa de ácool gelado 95º g.l. – o álcool provavelmente irá
para cima da mistura, mas pode mexer o copo para dar uma misturada nas duas soluções;

11. Neste ponto você irá perceber que há duas soluções no copo: a de álcool em cima (chamada
sobrenadante) e a da mistura de tomate embaixo (o precipitado). No meio das duas soluções você irá
perceber uma fina camada branca, parecendo fios de algodão.

Materiais para isolamento de DNA genômico da mucosa bucal

a) Cloreto de sódio;
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b) Colher de chá;

c) Becker;

d) Água;

e) Tubo tipo Falcon (15 ml) ou becker;

f) Álcool 70% deixado previamente no congelador.

Procedimento:

a) Coloque duas colheres (chá) de sal em um becker com 200ml, mexendo bem até dissolver
completamente (solução salina);

b) Colocar dentro da boca 5ml da solução salina preparada e fazer movimentos de bochechos por
aproximadamente 5 minutos;

e) Passado esse tempo, despeje o líquido em um tubo Falcon de 15 ml ou um becker;

f) Adicionar ao obtido quantidade igual de álcool gelado (70%), deixando-o escorrer vagarosamente
pela borda. Imediatamente, formam-se duas fases, sendo que fios esbranquiçados, que são
aglomerados de moléculas de DNA, tornam-se visíveis na fase superior.

Parte II

Fases da Mitose
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A mitose é um processo que permite a um núcleo dividir-se em dois exactamente com a

mesma quantidade e informação genética. Consequentemente aos núcleos dividirem-se, dá-se um
estrangulamento do citoplasma dividindo a célula em duas, designando-se por citocinese.

A mitose faz parte de um ciclo celular que está dividido em duas partes:

- Interfase;

- Fase mitótica.

A interfase é o período de “descanso” da célula, em que se duplica tudo aquilo que tinha sido
dividido. É um período que vais desde o fim de uma divisão celular até ao início da divisão seguinte.
Também a interfase está dividida em três partes:

- G1 ou intervalo pós-mitótico em que existe uma intensa actividade de biossintese e

formação de mais organelos celulares, o que vai implicar o crescimento celular;

- Na fase S, que é um período de síntese, em vão ocorrer duplicações ao nível do DNA,

passando cada cromossoma a ter 2 cromatideos ligados por um centrómero. Um cromossoma é uma
longa sequência de DNA, que contém vários genes com funções especificas nas células dos seres
vivos;

- G2 ou período pré-mitótico, é quando há uma maior síntese de proteínas. È o período que

antecede uma nova divisão mitótica.

A fase mitótica divide-se em mitose e citocinese. A mitose, por sua vez tem 4 fases:

- Prófase, sendo por norma a etapa mais longa da mitose, dá-se quando os cromossomos se
enrolam, condensando-se e tornando-se mais pequenos. No final desta fase a membrana nuclear
desaparece.

- Metafase, os cromossomas apresentam a sua máxima condensação e dispõem-se no plano

equatorial da célula.

- Anafase, verifica-se a quebra o centrómero, separando assim os dois cromatideos. Os

cromossomas iniciam a ascensão polar. No final desta fase cada pólo da célula possui um conjunto de
cromossomas exactamente iguais.
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- Telofase, inicia-se a organização dos dois núcleos filhos, forma-se um invólucro nuclear em
torno dos cromossomas, este iniciam um processo de descondensação. A mitose termina e a célula
possui agora dois núcleos exactamente iguais.

A citocinese pode iniciar-se na anafase ou na telofase, e este é marcado pelo surgimento de

uma constrição da membrana citoplasmática na zona equatorial da célula.

Objetivo: observar ao microscópio as células de raiz de cebola em fase mitótica e identificar as

diferentes fases da mitose.

Atividades:

1. Prepara relatório sobre a extração do DNA, colocando Introdução, Material e Método,

Desenvolvimento e Conclusão. Na Introdução falar sobre a molécula de DNA e qual a
utilidade da extração do DNA.
2. Identificar as fases da mitose, explicando o que acontece em cada uma das fases.