C o n s e lh o N a c io n a l d e D e s e n v o lv im e n to

C i e n t í fi c o e T e c n o l ó g i c o

Relatório Técnico- Científico

IDENTIFICAÇÃO
PROCESSO 141868/2006-6
TÍTULO: Citogenética comparativa das variedades selvagens de acará-disco
(Symphysodon spp., Cichlidae, Perciformes, Pisces) endêmicos da
Amazônia: uma abordagem clássica e molecular dos cromossomos
mitóticos e meióticos
ALUNA: MARIA CLAUDIA GROSS
CURSO: GENÉTICA, CONSERVAÇÃO E BIOLOGIA EVOLUTIVA - INPA
ORIENTADORA ELIANA FELDBERG - INPA
CO- CESAR MARTINS – UNESP-BOTUCATU
ORIENTADOR
VIGÊNCIA DA 07/2006 a 06/2009 – 36 meses
TAXA DE
BANCADA
VALOR R$ 14.184,00
LIBERADO NO
PERÍODO:
Motivo do Aprovação em concurso público para Professor Assistente Nível I –
cancelamento da Citogenética-Genética – Universidade Federal do Amazonas
bolsa
 Contexto

Os acarás-disco (gênero Symphysodon) são peixes ciclídeos endêmicos da

Amazônia, que se destacam na aquariofilia mundial devido à ampla variação de
coloração (discos verdes, azuis, marrons e heckel). Além de ser bastante apreciado por
aquaristas, o gênero Symphysodon têm despertado também o interesse dos
citogeneticistas, uma vez que os discos não possuem sua taxonomia bem estabelecida,
suas espécies apresentam número diplóide igual a 60 cromossomos (maior número
diplóide da família Cichlidae), variabilidade cariotípica intraespecífica, regiões
organizadoras de nucléolo múltiplas e grandes blocos de heterocromatina
pericentromérica, características estas consideradas derivadas para os ciclídeos. Além
disso, interessantemente uma das espécies de acarás-disco apresenta uma cadeia
cromossômica nas células profásicas da meiose. Desta forma, o presente projeto visou
incrementar as informações citogenéticas dos acarás-disco através da realização de
estudos de citogenética molecular e complexo sinaptonêmico, ferramentas estas que
permitiram uma melhor compreensão da estrutura cromossômica e dos rearranjos
envolvidos na carioevolução deste grupo de peixes. Este projeto foi desenvolvido no
Laboratório de Genética Animal – INPA (Manaus, AM) e no Laboratório de Genômica
Integrativa – UNESP (Botucatu , SP).

Objetivos

Geral
Analisar os cromossomos mitóticos e compreender o comportamento
cromossômico meiótico de Symphysodon aequifasciatus (disco verde), Symphysodon
discus (disco Heckel) e Symphysodon haraldi (disco marrom/azul) selvagens,
procurando verificar se existe diferença citogenética entre os indivíduos das colorações
selvagens encontrados na bacia amazônica e inferir sobre eventos que propiciaram a
formação da cadeia cromossômica encontrada em S. aequifasciatus, S. haraldi e não em
S. discus.

Específicos
a) Determinar o cariótipo dos acarás-disco selvagens, de colorações verde, azul/
marrom e heckel, verificando se existe diferença citogenéticas entre eles.
 b) Caracterizar o comportamento dos cromossomos nos diversos estágios da
meiose de machos e fêmeas destas espécies, para cada padrão de coloração.
c) Estabelecer o padrão de distribuição da heterocromatina constitutiva e das
regiões organizadoras de nucléolo (com a impregnação por prata e FISH) nos
cromossomos mitóticos e/ou meióticos.
d) Identificar o complexo sinaptonêmico dos cromossomos formadores da cadeia
cromossômica de S. aequifasciatus e S. haraldi.

Resultados alcançados
Symphysodon aequifasciatus (disco verde) apresentou 50m-sm+6st-a+4mi, S.
discus (disco heckel) 50m-sm+10st-a e S. haraldi (disco azul e marrom) 52m-sm+4st-
a+4mi. Cadeia cromossômica multivalente, com número variável de elementos e até 20
bivalentes, foi observada no diplóteno/diacinese de espermatócitos e oócitos de S.
aequifasciatus e S. haraldi. Em S. discus, 30 bivalentes foram detectados. Análise do
complexo sinaptonêmico sugere homologia entre elementos formadores da cadeia,
sendo verificada a presença de quiasmas ao longo de sua extensão. As três espécies
possuem região organizadora de nucléolo múltipla, que variaram inter e
intraespecíficamente, porém nunca mais que duas marcações foram evidenciadas por
célula metafásica. Variabilidade, intra/ interespecífica, também foi evidenciada nos
sítios ribossomais DNAr18S, sendo observados de 2 a 5 por metáfase: Symphysodon
aequifasciatus apresentou dois padrões de distribuição, S. discus e S. haraldi quatro
padrões. Sítios de DNAr18S também estiveram presentes, algumas vezes, na cadeia
meiótica das duas espécies portadoras. O DNAr5S foi identificado no par 10 de S.
aequifasciatus, enquanto que em S. discus e S. haraldi este sítio foi evidenciado no par
18. Nos cromossomos meióticos das três espécies, os sítios de DNAr5S foram
localizados em bivalentes típicos. Com relação à localização do elemento Rex3, as três
espécies apresentaram um padrão de distribuição compartimentalizada em alguns
cromossomos e com sinais tênues de hibridização na região centromérica da maioria dos
cromossomos. Estes sinais quase sempre foram coincidentes com a heterocromatina. A
somatória destes dados indica a ocorrência de inúmeros rearranjos cromossômicos,
acúmulo e movimentação de elementos repetitivos, bem como heterocromatinização na
carioevolução do gênero Symphysodon. A variabilidade dos sítios de DNAr18S pode
estar refletindo a existência de translocações envolvendo regiões heterocromáticas ricas
em elementos transponíveis, as quais teriam ocorrido independentemente em
populações/espécies ancestrais de Symphysodon. Em algum momento estas
populações/espécies teriam formado híbridos, que para efetuar um ajustamento
sináptico entre os segmentos cromossômicos homólogos das espécies parentais
formaram a cadeia cromossômica meiótica. Estes híbridos seriam o que hoje
reconhecemos como S. aequifasciatus e S. haraldi, enquanto que S. discus seria uma
espécie pura.

Aplicação dos recursos

O benefício concedido foi utilizado para aquisição de materiais de escritório, de

informática e reagentes necessários para o desenvolvimento da parte prática da
pesquisa, bem como para despesas de deslocamento e permanência em outras
instituições onde foi realizada a pesquisa. Além disso, subsidiaram a inscrição em
eventos e a apresentação de banners em congressos e simpósios, além de viabilizaram a
publicação de artigos referentes ao projeto.

Produção científica referente ao projeto

Tese: Citogenética comparativa das variedades selvagens de acará-disco (Symphysodon

spp., Cichlidae, Perciformes, Pisces) endêmicos da Amazônia: uma abordagem clássica
e molecular dos cromossomos mitóticos e meióticos – está em fase de finalização.

Artigo publicado
Gross, MC; Feldberg, E; Cella, DM; Schneider, MC; Schneider, CH; Porto, JIR;
Martins, C. 2009. Intriguing evidence of translocations in Discus fish
(Symphysodon, Cichlidae) and a report of the largest meiotic chromosomal chain
observed in vertebrates. Heredity 102: 435-441.

Artigos enviados para publicação

Gross, MC; Schneider, CH; Valente, GT; Porto, JIR; Martins, C; Feldberg, E; 2009.
Comparative cytogenetic analysis of ornamental Discus fish species
 (Symphysodon, Cichlidae, Perciformes): retrotransposons and ribosomal DNA.
Cytogenetic and Genome Research. Enviado em 13/07/2009
Gross, MC; Feldberg, E; Schneider, CH; Valente, GT; Martins, C. 2009. NOR
polymorphism and variability of 18S rDNA locus in karyotype of an Amazon
Cichlid genus. Journal Fish Biology. Enviado 09/06/2009.

Resumos em eventos
Gross, M.C.; Schneider, M. C; Cella, D.M.; Feldberg, E. 2006. Acará-disco é sinônimo
de confusão citogenética?. In: I International Congress of Fish Genetics e XI
Brazilian Symposium on Fish Cytogenetics and Genetics. São Carlos - SP. CD
do I International Congress of Fish Genetics. Ribeirão Preto: SBG, 2006. p. 32-
32.
Gross, M.C.; Schneider, CH; Valente, GT; Martins, C; Feldberg, E. 2008. Localização
cromossômica do gene RNAr 5S e do retrotransposons Rex3 em acarás-disco
selvagens. XII Simpósio de Citogenética e Genética de Peixes. Uberlândia, MG.
Gross, M.C.; Schneider, C.H.; Martins, C.; Feldberg, E. 2009. Mapeamento físico
cromossômico do gene RNAr 18S em acarás-disco (Symphysodon, Perciformes)
revelando polimorfismo inter e intraespecífico. 61 Reunião Anual da SBPC.
Manaus, AM.

Participação em eventos como palestrante

Gross, MC; Almeida-Matiello, MC; Portella-Castro, AL. 2008. Mesa-redonda:
Importância da análise meiótica na elucidação de problemas citogenéticos em
peixes. XII Simpósio de Citogenética e Genética de Peixes. Uberlândia, MG.
Data 16 de outubro de 2008.

Gross, MC; Schneider, CH; Ribeiro, LB; Amaral, RA. 2008. Mini-curso: A
citogenética na elucidação de problemas taxonômicos. II Semana da Biologia-
CEFET/AM. Data: 05 a 07 de novembro de 2008. Manaus, AM.

Textos em revistas
Gross, M.C.; Feldberg, E. 2006. Acará-disco: Uma abordagem citogenética. Boletim
Sociedade Brasileira de Ictiologia 83: 6.