Ressonância Magnética Nuclear (NMR)

Otto Stern, USA: Nobel Prize in Physics 1943, "for

his contribution to the development of molecular ray
method and his discovery of the magnetic moment
of the proton“

Isidor I. Rabi, USA: Nobel Prize in Physics 1944,

"for his resonance method for recording the
magnetic properties of atomic nuclei“

Felix Bloch, USA and Edward M. Purcell,

USA: Nobel Prize in Physics 1952, "for their
discovery of new methods for nuclear magnetic
precision measurements and discoveries in
connection therewith“

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear

Richard R. Ernst, Switzerland: Nobel Prize in Chemistry

1991, "for his contributions to the development of the
methodology of high resolution nuclear magnetic
resonance (NMR) spectroscopy

Geoffrey Bodenhausen

Kurt Wüthrich, Switzerland: Nobel Prize in Chemistry

2002, "for his development of nuclear magnetic resonance
spectroscopy for determining the three-dimensional
structure of biological macromolecules in solution“

Adriaan “Ad” Bax

Paul C. Lauterbur, USA and Peter Mansfield, United

Kingdom: Nobel Prize in Physiology or Medicine 2003,
"for their discoveries concerning magnetic resonance
imaging"

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear (NMR) Dipolo magnético

dipolo magnético

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear (NMR) Spin nuclear

dipolos magnéticos clássicos

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear (NMR) Spin nuclear

I: número quântico de spin nuclear


os dois a: momento angular de spin nuclear
estados têm a
az  h
mesma
a a I (I  1)
energia e
estão
2π
igualmente
populados, az
magnetização 2I+1 orientações mI possíveis.
total nula. h
az  mI
2π


μ : momento magnético de spin nuclear
 : constante magnetogírica (rad s−1 T −1)
 
μ a

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Interacção spin nuclear / campo magnético
PRODUTO VECTORIAL:
interacção entre o dipolo magnético nuclear m com o
campo magnético sentido pelo núcleo, B, gera um
torque (binário) que tende a alinhar m com B.

az
 da   τ  μB sin(θ )
  μB
dt
como μ nunca se pode alinhar
az
com B se I=1/2, devido à
 quantização de a, então
 μ θ nunca pode ser zero =>
a sen(θ) nunca pode ser zero =>
  nunca pode ser zero.
Assim, a rotação de a em torno de
B mantêm-se com a frequência ν.

     
dμ |
  B  μ    μ 
dt π
frequência
velocidade angular
de precessão
(radianos/segundo)
de Larmor
BF1 (LBQ) [MSA/JAP]
Ressonância Magnética Nuclear Interacção spin nuclear / campo magnético
PRODUTO ESCALAR:
 
E  μ  B  μB cos(θ )
como a interacção de B com a
componente de m a 90º é zero …

h energias de
E   az B   mI B
2π Zeeman

 1 h   1 h  B
E 1      B       B   h  h
I
2  2  2π   2  2π  2π


como    B
 condição de ressonância:
então 
2π transições ocorrem
quando a frequência da
radiação incidente é igual
à frequência de
precessão do núcleo (s–1)
BF1 (LBQ) [MSA/JAP]
Ressonância Magnética Nuclear Interacção spin nuclear / campo magnético

fracção dos núcleos (distr. de Boltzmann)

que geram a magnetização total M0:
(N1/2 – N-1/2) / N = E / (2 k T)

Se
B = 10 T e  1H
então
(N1/2 – N-1/2) / N = 0.0000343

maior B e/ou  => maior sensibilidade

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Propriedades magnéticas de núcleos

isótopo % I
 0 / B0 =  /(2p )
(107 rad s-1 T-1) (106 s-1 T-1 )
1H 99.98 1/2 26.75 42.58
2H 0.015 1 4.11 6.54
31P 100 1/2 10.84 17.25
15N 0.365 1/2 -2.712 3.08
13C 1.11 1/2 6.73 10.71
19F 100 1/2 25.18 40.08

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear (NMR)

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Desvio químico

os campos locais induzidos são

anisotrópicos mas ficam medianizados
pela rotação molecular em líquidos e
soluções e são proporcionais ao
campo exterior B0 aplicado

campo local Bblind

induzido por B0

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Desvio químico

Packard, 1951

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Obtenção do espectro de NMR

NMR de varrimento de campo com onda RF contínua de baixa potência - fora de uso

como a espectroscopia de NMR é relativamente insensível, um único varrimento (de

frequência ou de campo) implica usar amostras puras ou muito concentradas

aparecem artefactos (“ringing”) devido à interferência entre a radiação emitida e a

desmagnetização da amostra a campo variável

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Obtenção do espectro de NMR

a magnetização volta ao seu estado de

impulso muito curto (ms) com a
equilíbrio no eixo dos zz contendo
frequência de Larmor contém de facto
componentes que rodam com as várias
um intervalo de frequências muito
frequências dos vários núcleos
largo (excitação não selectiva)
este decaimento é detectado por um
solenoide junto à amostra, orientado
segundo o eixo dos yy, e é digitalizado

aos dados do decaimento da

magnetização chama-se
FID, “free induction decay”

x e y são eixos
do referencial após o impulso:

componente no eixo dos zz = 0

(populações igualadas)
frequências presentes no FID são
componente no plano xy ≠ 0
sinais detectados – 0,irradiação = desvios
(coerência de fase)
(MHz) (MHz) (Hz)
BF1 (LBQ) [MSA/JAP]
Ressonância Magnética Nuclear Obtenção do espectro de NMR

decaimento da magnetização no referencial rotativo com a frequência de Larmor

relaxação T1

T 2 < T1

relaxação T2

tempo

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Obtenção do espectro de NMR

transformada de
Fourier:
frequências
presentes no FID
são apresentadas
como bandas no
espectro com:

- intensidade
proporcional à
amplitude que têm
no FID

- largura
correspondente à
taxa de
decaimento no FID
(1/T2)

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Instrumentação

rotação da
amostra
(20 s-1)
anula
imperfeições
de B0 no
plano xy.

B0 é
homogenei-
zado para
cada
amostra com
a ajuda de
vários
electro-
magnetes x,
yez
(“shims”)

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Integração

a área sob cada sinal é proporcional

ao número de núcleos que lhe deu
origem

permite determinar as proporções

entre os tipos de núcleos dentro de
cada molécula

permite também fazer doseamentos

44/18 = 2.44 26/18 = 1.44 relativos entre moléculas em solução

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]
Ressonância Magnética Nuclear Desvio químico

referência

0 =  B0 / (2p) observado - referência

d (ppm) = 0
x 106
observado =  (B0 + Blocal) / (2p)
referência =  (B0 + Blocal ref) / (2p) Blocal - Blocal ref
d (ppm) = x 106
B0
como os campos locais de blindagem são criados por, e são proporcionais a, B0
os desvios químicos d são independentes do campo aplicado
BF1 (LBQ) [MSA/JAP]
Ressonância Magnética Nuclear Desvio químico

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Acoplamento escalar
o acoplamento escalar (J) é um
acoplamento entre os campos
magnéticos gerados pelos vários
núcleos numa molécula

propaga-se através dos electrões das

ligações químicas e depende da
geometria da molécula

é independente do campo B0 e da
rotação molecular

constantes J são de ordem entre 100

(1H-1H) a 102 s-1 (Hz) e diminuem com
o número de ligações entre os
núcleos equivalentes equivalentes
(mesmo d) (mesmo d)

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Seq. de impulsos 1D: DEPT

C quaternários só
aparecem no
espectro normal

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Seq. de impulsos 2D: COSY, TOCSY

os picos não diagonais COSY

1H-1H correlacionam núcleos com
acoplamento escalar homonuclear
até três ligações de distância

TOCSY = COSY mas

para mais ligações
(Js menores)
BF1 (LBQ) [MSA/JAP]
Ressonância Magnética Nuclear Seq. de impulsos 2D: NOESY

1H-1H

são detectados os acoplamentos

dipolares homonucleares espaciais
entre núcleos. Permite determinar
configuração e conformação molecular
BF1 (LBQ) [MSA/JAP]
Ressonância Magnética Nuclear Seq. de impulsos 2D: HSQC (HMQC)

correlaciona os
desvios químicos de
1H com os de outro

tipo de núcleo (13C,

15N) através de

acoplamento escalar
Heteronuclear Single Quantum Correlation heteronuclear
directo
1H-13C

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Seq. de impulsos 2D: HMBC

correlaciona os
desvios químicos
de 1H com os de
outro tipo de
núcleo (13C, 15N)
através de
acoplamento
escalar
Heteronuclear Multiple Bond Correlation heteronuclear de
longa distância
(Js menores)

1H-13C

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Elucidação estrutural

1: obtenção da fórmula molecular (espectrometria de massa, análise elementar).

2: determinação do grau de insaturação a partir da fórmula molecular: soma do

número de ligações duplas e de anéis. Para CaHbNcOdXe, onde X é um halogénio
monovalente, o número de graus de insaturação, GI, é dado por
GI = (2 + 2a - b + c - e) / 2

3: definição de fragmentos moleculares por interpretação (1) dos desvios químicos,

(2) das proporções entre os integrais e (3) dos dados sobre proximidade internuclear
via acoplamento escalar.

4: construção da molécula usando os fragmentos definidos.

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear NMR de proteínas em solução

proteína é sintetizada com aminoácidos enriquecidos em 15N e/ou 13C

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear NMR de proteínas em solução

identificação de locais e medida de interacção de fármacos e moléculas biológicas

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]
Ressonância Magnética Nuclear NMR de imagem

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear NMR de imagem

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear NMR de imagem

na MRI observa-se a ressonância dos núcleos de hidrogénio,

sobretudo da água e dos lípidos

 B
E 1  h  h

H 𝜈 = 4,257 × 107 𝐵
2π

 ν / B =  /(2p )
isótopo % I
(107 rad s-1 T-1) (106 s-1 T-1 )
1H 99.98 1/2 26.75 42.58
2H 0.015 1 4.11 6.54
31P 100 1/2 10.84 17.25
15N 0.365 1/2 -2.712 3.08
13C 1.11 1/2 6.73 10.71
19F 100 1/2 25.18 40.08

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear NMR de imagem

1H de água e lípidos

slice (z)

impulso selectivo irradia um intervalo muito

estreito de frequências (define espessura da
fatia)

gradiente de campo longitudinal (z) faz com que

só a fatia do objecto que ressona à frequência
emitida adquira magnetização transversal

𝜈 = 4,257 × 107 𝐵
largura de banda
𝐵 = 𝐵0 + 𝐺𝑆 𝑧 = 1,5 + −0,1 + 0,1𝑧 = 1,4 + 0,1𝑧 do pulso RF
necessária para
𝜈 = 5,96 × 107 + 4,26 × 106 𝑧 magnetizar fatias
de 1 mm

𝜈𝑧=1,0m = 6,39 × 107 s −1 ∆𝜈∆𝑧=1mm = 4,257 × 103 s −1

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]
Ressonância Magnética Nuclear NMR de imagem

Gy

 1H
 (B0  Gy )
2π
BF1 (LBQ) [MSA/JAP]
Ressonância Magnética Nuclear NMR de imagem

(y)

slice (z)
selecção de
fatia
phase (y)
selecção de
linha na fatia
frequency (x)
selecção de
ponto na linha

(x)

contraste é obtido pelas

diferentes intensidades do sinal Sinal corresponde à intensidade de
em cada voxel que dependem ressonância magnética do 1H em água e lípidos
da mobilidade e da quantidade numa unidade de volume, o voxel.
da água e lípidos

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear NMR de imagem

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Elucidação estrutural

1: obtenção da fórmula molecular (espectrometria de massa, análise elementar).

2: determinação do grau de insaturação a partir da fórmula molecular: soma do

número de ligações duplas e de anéis. Para CaHbNcOdXe, onde X é um halogénio
monovalente, o número de graus de insaturação, GI, é dado por
GI = (2 + 2a - b + c - e) / 2

3: definição de fragmentos moleculares por interpretação (1) dos desvios químicos,

(2) das proporções entre os integrais e (3) dos dados sobre proximidade internuclear
via acoplamento escalar.

4: construção da molécula usando os fragmentos definidos.

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Elucidação estrutural 1
C4H8O2
3 3

1H

solv
13C

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Elucidação estrutural 2
C8H8O2 1 1 2

1
1H

13C

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Elucidação estrutural 3
C4H7O2Br
3

2 2

1H

13C
Ressonância Magnética Nuclear Elucidação estrutural 4
C7H8O2 (em CDCl3)

3
1
CDCl3
1 1H

CDCl3

13C
Ressonância Magnética Nuclear Elucidação estrutural 5
C6H6O2 (em DMSO-d6)
1H

2 4
DEPT 90: só CH
DEPT 135: H2O
CH, CH3 positivo
CH2 negativo

solv solv

13C DEPT

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Elucidação estrutural 6.1
C10H10O2

1 2
1

2
1

1H

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Elucidação estrutural 6.2
C10H10O2

1H- 1H COSY

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]

Ressonância Magnética Nuclear Elucidação estrutural 6.3
C10H10O2
DEPT 90: só CH
DEPT 135:
CH, CH3 positivo
CH2 negativo

13C DEPT

BF1 (LBQ) [MSA/JAP]