Prática Grupo Turma Data

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MARINGÁ

Departamento de Engenharia Civil
2542 Laboratório de Ciências do Ambiente 12
Aluno: Prática

Bacteriológico

Objetivo

Determinação de Coliformes Totais e E. coli – SM 9223B

Teorias Abordadas Materiais

▪ Parâmetros biológicos de ▪ Frascos de coleta
▪ Normas regulamentadoras do
qualidade das águas de ▪ Kit Colilert
padrão de qualidade de águas
abastecimento ▪ Estufa

Coliformes Totais e E. coli em água

Definições
A determinação de coliformes totais e E. coli é realizada por meio do uso do teste patenteado Colilert. Este faz uso da tecnologia do substrato
definido (DST, do inglês Defined substrate technology). Nestes dois indicadores, nutrientes, ONPG e MUG, são as principais fontes de
carbono. Ao serem metabolizados pela enzima dos coliformes totais β-galactosidase e da E. coli a β-glucuronidase, respectivamente ocorrem
alterações nos indicadores. No caso do ONPG, este é metabolizado pelos coliformes liberando uma molécula de o-nitrofenol que torna a
solução amarela. Já o MUG é metabolizado pela E. coli liberando uma molécula de 4-metil-umbeliferona que apresenta fluorescência sob luz
ultravioleta, indicando assim a presença destas bactérias. Este método é útil pois o mesmo é específico para estas bactérias.
Procedimento de Presença/Ausência (P/A) de coliformes totais e E. Verificação dos Resultados
coli Juntamente com cada lote de amostra, realizar a análise de um branco
1. Abrir o frasco contendo a amostra e deixar neste um volume de, (água destilada ou ultra pura) para avaliação e comparação com as
aproximadamente, 100 mL (menisco do frasco); amostras em caso de dúvidas sobre o resultado. Se forem feitas
2. Adicionar o conteúdo de uma embalagem de substrato de Colilert diluições de amostras, multiplique o valor de MPN pelo fator de
a amostra; diluição para obter o resultado quantitativo apropriado.
3. Fechar o recipiente e agitar;
4. Colocar os frascos na incubadora e incubar a 35 ± 0,5 ° C durante Observações
24 horas; 1. Utilize apenas água estéril, sem tampão, livre de oxidante para
5. Após esse período verificar os frascos, caso a amostra esteja diluições.
apresentando a coloração amarela, a mesma apresentou um 2. A amostra deve ser coleta em frascos estéreis contendo pastilha de
resultado positivo para a presença de coliformes totais; tiossulfato de sódio.
6. Neste caso, a amostra deve ser inserida no equipamento contendo 3. Em amostras com excesso de cloro, um flash azul pode ser visto ao
a luz ultravioleta; adicionar Colilert. Se isso for visto, considere a amostra inválida e
7. Verificar a voltagem correta e inserir o equipamento na tomada, interrompa o teste.
ligar a lâmpada e observar se há a ocorrência de fluorescência, o que 3. A técnica asséptica deve ser sempre seguida quando se utiliza
é sinal da presença de bactérias E. coli na amostra; Colilert.
8. Caso nenhuma coloração ou fluorescência seja observada a 4. Armazenar o substrato de Colilert a 2-30 ° C da luz;
amostra é tida como ausente para ambas as bactérias; 5. Observar a fluorescência com uma luz UV de 6-watt, 365-nm dentro
9. Registrar os resultados observados. de 5 polegadas da amostra em um ambiente escuro. Afastar a luz dos
olhos e da amostra;
Procedimento de determinação do número mais provável (MPN) 6. Os resultados do Colilert são definitivos até 24-28 horas. Além disso,
de E. coli * também são válidos os positivos para coliformes totais e E. coli
1. Adicionar o conteúdo de uma embalagem a uma amostra de 100 observados antes de 24 horas e negativos observados após 28 horas;
mL num recipiente estéril; 7. No entanto, se os resultados forem ambíguos para o analista com
2. Cubra o recipiente e agite até dissolver; base na leitura inicial, incubar até quatro horas adicionais (mas não
3. Colocar a mistura de amostra / reagente em uma cartela Quanti- exceder 28 horas no total) para permitir que a cor e / ou a
Tray, inserir a cartela na seladora; fluorescência se intensifiquem;
4. Colocar a cartela selada numa incubadora a 35 ± 0,5 ° C durante 8. Positivos tanto para coliformes totais quanto E. coli observados
24 horas; antes de 24 horas e negativos observados após 28 horas também são
5. Ler os resultados de acordo com a tabela de interpretação válidos.
fornecida pelo fabricante. Contar o número de poços positivos e
consultar a tabela MPN fornecida com as bandejas para obter um Verificação dos Resultados
número mais provável. Juntamente com cada lote de amostra, realizar a análise de um branco
(água destilada ou ultra pura) para avaliação e comparação com as
amostras em caso de dúvidas sobre o resultado. Se forem feitas
diluições de amostras, multiplique o valor de MPN pelo fator de
diluição para obter o resultado quantitativo apropriado.

23.09.2019
Resultados

Discussões
Explicar a diferença da identificação da presença de Coliformes totais na água e da bactéria E. Coli. Dê o significado sanitário da identificação
destas bactérias na água de abastecimento, bem como suas possíveis origens.
Indicar valores de aceitabilidade observados na literatura, os riscos associados e comparar os resultados obtidos com os valores requeridos
segundo o Anexo XX da Portaria de Consolidação no 5/2017.

Referências
HELLER, L.; PÁDUA, V.L. (Org). Abastecimento de água para consumo humano, 2. ed., V. 1. Belo Horizonte: UFMG, 2010.
LIBÂNIO, Marcelo. Fundamentos de Qualidade e Tratamento de Água, 3. ed. Campinas: Átomo, 2010.
APHA - AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, Standard Methods for the Examination for Water and Wastewater. 20. ed. Washington,
D.C.: APHA, 1998.
Manual de instruções do kit Colilert, IDEXX Laboratories, Inc.

23.09.2019