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Indicação de Utilização
Exclusivamente para diagnóstico in vitro.
Os Slides AST VITROS Chemistry Products são utilizados na medição quantitativa da atividade da aminotransferase do
aspartato (AST) em soro e plasma com os Sistemas Químicos VITROS 250/350/5,1 FS/4600/XT 3400 e os Sistemas
Integrados VITROS 5600/XT 7600.
Princípios do Procedimento
O Slide AST VITROS é constituído por um elemento analítico de múltiplas camadas revestido por um suporte de poliéster.
É adicionada uma gota da amostra do doente no slide, sendo esta uniformemente distribuída pela camada de difusão para
as camadas subjacentes. No ensaio para o aspartato aminotransferase, o grupo de aminas do L-aspartato é transferido
para o α-quetoglutarato na presença do piridoxal-5-fosfato (P-5-P) para produzir o glutamato e o oxaloacetato. O
oxaloacetato formado na deaminação do L-aspartato é convertido em piruvato e dióxido de carbono através da
descarboxilase do oxaloacetato. O piruvato é oxidado para acetilfosfato e peróxido de hidrogénio através da oxidase de
priruvato. Finalmente, o corante leuco é oxidado pelo peróxido de hidrogénio, sob efeito catalítico da peroxidase, para
formar um corante com cor. A taxa de oxidação do corante leuco é monitorizada pela espectrofotometria da reflectância. A
taxa de alteração da densidade da reflectância é proporcional à actividade enzimática na amostra. O filtro de corte por
valor baixo do comprimento de onda no suporte do slide minimiza os efeitos da taxa de branco da luz do incidente durante
o desenvolvimento do corante.
Esquema da Reacção
AST
aspartato + α-quetoglutarato piridoxal-5-fosfato
oxaloacetato + glutamato
decarboxialise de oxaloacetato
oxaloacetato piruvato + CO2
peroxidase
peróxido de hidrogénio + corante leuco corante
Advertências e Precauções
Apenas para diagnóstico in vitro.
Reagentes
Diagrama da Lâmina
Componentes da Lâmina 1. Camada superior do slide
2. Camada de difusão (BaSO4)
Ingredientes Reactivos por cm2 • α-quetoglutarato de sódio
• aspartato de sódio
Aspartato de sódio 0,27 mg; α-quetoglutarato de sódio 0,13 mg; 3. Camada de reagente
piridoxal-5-fosfato de sódio 11µg; fosfato de sódio 42µg; 2-(3,5- • tampão, pH 7,5
• corante leuco
dimetoxi-4-hidroxifenil)-4,5-bis(4-dimetilaminofenil) imidazol • fosfato de sódio
(corante leuco) 30µg; oxidase de piruvato (Aerococcus sp. ) 0,20 • oxidase de piruvato
• descarboxilase de
U; peroxidase (raiz de rábano) 0,50 U e oxalocetato oxaloacetato
descarboxilase (Pseudomonas sp.) 0,30 U. • peroxidase
• piridoxal-5-fosfato de sódio
Outros Ingredientes 4. Camada de suporte
5. Filtro: filtro de corte por valor
Co-factores enzimáticos, pigmento, ligantes, tampão, baixo do comprimento de
surfactantes, estabilizante, sequestrante, solvente do corante, onda
corantes do filtro e agente de ligação cruzada. 6. Camada inferior do slide
Manipulação do Reagente
Aviso: Não utilize cartuchos de slides provenientes de embalagens danificadas ou
inadequadamente seladas.
• Antes da utilização, inspeccione a embalagem relativamente a sinais de danos.
• Tome precauções ao abrir a embalagem exterior com um instrumento afiado, para evitar danificar a embalagem
individual do produto.
Preparação do Reagente
IMPORTANTE: O cartucho de slides deve atingir a temperatura ambiente, entre 18–28 °C, antes
de ser aberto e carregado no alimentador de slides.
Soro e Plasma
Colheita e Preparação da Amostra
• Proceda à colheita das amostras utilizando procedimentos laboratoriais padrão. 6 7
• Devido à reduzidíssima densidade de plaquetas, é importante centrifugar as amostras de plasma a um mínimo de
1000 x g durante um período mínimo de 10 minutos para evitar a contaminação do plasma com AST derivado das
plaquetas.
Observação: Para obter mais pormenores sobre os requisitos de volume de enchimento
mínimo, consulte as instruções de funcionamento do seu sistema.
Preparação do Doente
Não é necessária qualquer preparação especial do doente.
Precauções Especiais
• Evite agitar ou misturar as amostras de plasma após a centrifugação. A re-suspensão das plaquetas em plasma
previamente centrifugado pode conduzir a resultados de AST artificialmente elevados devido à elevada actividade de
AST nas plaquetas. 5
• Centrifugue as amostras e remova o soro ou plasma do material celular dentro de 3 dias após a colheita. 8
Armazenamento e Manipulação da Amostra
• Manipule e armazene as amostras em recipientes fechados para evitar a contaminação e a evaporação.
• Proceda à homogeneização das amostras mediante inversão suave e deixe atingir a temperatura ambiente, entre
18–28°C, antes da análise.
Procedimento do Teste
Material fornecido
Slides AST VITROS Chemistry Products
Instruções de Funcionamento
• Verifique os inventários do reagente diariamente para garantir que as quantidades deste são suficientes para a carga de
trabalho planeada.
• Para obter informações adicionais, consulte as instruções de funcionamento do seu sistema.
IMPORTANTE: Coloque todos os fluidos e amostras à temperatura ambiente, entre 18–28 °C,
antes da análise.
Diluição da Amostra
Soro e Plasma
Se as actividades de aspartato aminotransferase excederem o intervalo de medição (reportável ou dinâmico) do sistema:
Diluição da amostra no analisador (somente Sistemas Integrados VITROS 5600/XT 7600 e Sistemas Químicos VITROS
250/350, 5,1 FS/4600/XT 3400)
Consulte as instruções de funcionamento para obter mais informações sobre o procedimento de diluição no analisador.
Nos Sistemas Integrados VITROS 5600/XT 7600 e nos Sistemas Químicos VITROS 5,1 FS/4600, utilize a Embalagem de
Diluente 2 FS VITROS Chemistry Products para a diluição.
Nos Sistemas Químicos VITROS 250/350 e VITROS XT 3400, utilize a BSA a 7% VITROS para a diluição.
Observação: Um indicador DP ou TR indica o esgotamento do substrato. Esta situação pode
indicar uma elevada concentração de piruvato. Consulte “Limitações do
Procedimento.”
Diluição Manual da Amostra
Calibração
Calibradores Necessários
Kit de Calibrador 3 VITROS Chemistry Products
Procedimento de Calibração
Consulte as instruções de funcionamento do seu sistema.
Quando Calibrar
Calibre:
• Quando o número do lote do slide mudar.
• Quando forem substituídas partes críticas do analisador para reparação ou manutenção.
• Quando os regulamentos governamentais assim o exigirem.
Por exemplo, nos E.U.A., os regulamentos da CLIA exigem uma calibração ou confirmação da calibração pelo menos
uma vez em cada seis meses.
O teste AST VITROS também pode necessitar de ser calibrado:
• Se os resultados do controlo de qualidade estiverem consistentemente fora do intervalo aceitável.
• Depois de terem sido efectuados determinados procedimentos de reparação.
Para obter informações adicionais, consulte as instruções de funcionamento do seu sistema.
Cálculos
A taxa de variação da reflectância é determinada com base nas leituras sequenciais da reflectância do slide a um
comprimento de onda de 670 nm registadas durante o período de incubação definido. Esta taxa é utilizada no modelo de
calibração cinética de pontos múltiplos existente no software para calcular a actividade enzimática. Após a execução de
uma calibração para cada lote de slides, a actividade de aspartato aminotransferase pode ser determinada em amostras
desconhecidas, a partir da taxa de variação da reflectância medida para cada slide de teste desconhecido.
(nos Sistemas Integrados VITROS 5600/XT 7600 e nos Sistemas VITROS 5,1 FS/4600/XT 3400, consulte o ecrã Review
Assay Data [Rever dados do ensaio]). O não cumprimento de qualquer um dos parâmetros de qualidade predefinidos irá
dar origem a uma calibração falhada. O relatório da calibração deverá ser utilizado em conjunto com os resultados do
controlo de qualidade para determinar a validade de uma calibração.
Intervalo de Medição (Reportável ou Dinâmico)
Rastreabilidade da Calibração
Os valores atribuídos ao Kit de Calibrador 3 VITROS Chemistry Products para o aspartato aminotransferase são
rastreáveis ao método de aspartato aminotransferase recomendado pela Federação Internacional de Química Clínica
(International Federation of Clinical Chemistry (IFCC)), 9 adaptado a um analisador de centrifugação a uma temperatura de
37 °C.
Controlo de Qualidade
Selecção do Material de Controlo de Qualidade
IMPORTANTE: Os Verificadores de Desempenho VITROS são recomendados para utilização
com o Sistema Químico VITROS e Sistema Integrado VITROS. Avalie o
desempenho de outros fluidos de controlo disponíveis no mercado relativamente
à sua compatibilidade com este teste antes de os utilizar para controlo de
qualidade.
• Materiais de controlo diferentes dos Verificadores de Desempenho VITROS podem apresentar diferenças quando
comparados com outros métodos de aspartato aminotransferase, caso:
– Sejam diferentes de uma matriz humana verdadeira.
– Apresentem concentrações elevadas de conservantes, estabilizantes ou outros aditivos não fisiológicos.
• A actividade enzimática pode também variar de acordo com as fontes enzimáticas, a temperatura do diluente e o tempo
de activação durante a reconstituição.
• Não utilize materiais de controlo estabilizados com etilenoglicol.
Resultados
Unidades Reportáveis e Conversão de Unidades
O Sistema Químico VITROS e Sistema Integrado VITROS podem ser programados para apresentar os resultados de AST
em unidades convencionais, SI ou alternativas.
Limitações do Procedimento
Interferências Conhecidas
Soro e Plasma
O método do Slide AST VITROS foi verificado quanto à existência de substâncias interferentes em conformidade com o
protocolo EP7 11 do NCCLS. As substâncias listadas na tabela, quando testadas às concentrações indicadas, deram
origem ao desvio apresentado.
No que concerne as substâncias que foram testadas e que se verificou não interferirem, consulte a secção
“Especificidade.”
Outras Limitações
• Elevados níveis de piruvato desencadearão os indicadores de TR ou DP. Tais amostras necessitam ser repetidas após
a diluição.
• Sabe-se que alguns fármacos e estados clínicos alteraram a actividade de aspartato aminotransferase in vivo. Para
obter informações adicionais, consulte um dos resumos publicados. 12 13
Valores Esperados
Intervalo de Referência
Estes intervalos de referência constituem os principais 95% dos resultados de um estudo interno de 189 adultos
aparentemente saudáveis de uma população activa (90 mulheres e 99 homens).
Características de Desempenho
Comparação entre Métodos
Os gráficos e a tabela apresentam os resultados de uma comparação de amostras de soro analisadas no Sistema VITROS
750 com as analisadas utilizando o método comparativo da IFCC, 9 adaptado a um analisador de centrifugação a uma
temperatura 37 °C. Os testes foram efectuados em conformidade com o protocolo EP9 do NCCLS. 14
A tabela seguinte também apresenta os resultados das comparações das amostras de soro processadas nos Sistemas
VITROS 250 e 950 com as processadas no Sistema VITROS 750, e as comparações entre o Sistema VITROS 5,1 FS e o
Sistema VITROS 950.
Além disso, a tabela também apresenta os resultados de uma comparação com as amostras de soro e plasma
processadas no Sistema Integrado VITROS 5600 e no Sistema Químico VITROS 5,1 FS. O teste foi efectuado em
conformidade com o Protocolo EP9 do NCCLS. 15
Método Comparativo: Modificado pela IFCC para uma temperatura de 37 °C Método Comparativo: Modificado pela IFCC para uma temperatura de 37 °C
(U/L) (μkat/L)
Unidades Convencionais e
Unidades SI Unidades Alternativas
(U/L) (µkat/L)
Coeficiente Intervalo de Intervalo de
De‐ de Actividade das Intercep‐ Eixo Actividade das Intercep‐ Eixo
n clive Correlação Amostras ção x Amostras ção x
750 vs. método
comparativo 227 1,00 0,996 11–724 +1,64 20,69 0,18–12,1 +0,03 0,35
250 vs. 750 60 1,03 0,999 15–644 -6,54 4,02 0,3–10,8 -0,11 0,07
950 vs. 750 113 1,00 0,999 12–735 +0,09 3,43 0,2–12,3 +0,00 0,06
5,1 FS† vs. 950 126 1,02 0,999 4–734 -2,61 11,06 0,1–12,3 -0,04 0,18
5600†† vs. 5,1 FS† 110 1,01 0,999 13–730 -1,19 7,97 0,22–12,2 -0,02 0,13
† As características de desempenho do Sistema VITROS 5,1 FS são aplicáveis ao Sistema VITROS 4600.
†† As características de desempenho do Sistema VITROS 5600 são aplicáveis aos Sistemas VITROS XT 3400 e XT 7600.
Precisão
A precisão foi avaliada com materiais de controlo de qualidade nos Sistemas VITROS 250 e 5,1 FS, de acordo com o
protocolo EP5 do NCCLS. 16 A precisão foi também avaliada com materiais de controlo de qualidade no Sistema Integrado
VITROS 5600, de acordo com o protocolo EP5 do NCCLS. 17
Os dados apresentados são representativos do desempenho do teste e são fornecidos apenas como orientação.
Variáveis, tais como a manipulação e armazenamento da amostra, manipulação e armazenamento do reagente, ambiente
do laboratório e manutenção do sistema, podem influenciar a reprodutibilidade dos resultados do teste.
Unidades Convencionais e
Unidades SI (U/L) Unidades Alternativas (µkat/L) % do CV
DP Intra- DP Intra- Intra-
Actividade laborato‐ Actividade laborato‐ laborato‐ N.º N.º de
Média DP Diário* rial** Média DP Diário* rial** rial** Observ. Dias
250 29 0,5 0,7 0,5 0,01 0,01 2,4 238 31
254 3,1 4,3 4,2 0,05 0,07 1,7 234 31
827 27,9 28,8 13,8 0,47 0,48 3,5 236 31
37 0,4 0,7 0,6 0,01 0,01 1,8 88 22
5,1 FS† 194 1,5 3,7 3,2 0,02 0,06 1,9 88 22
5600†† 42 0,4 0,6 0,7 0,01 0,01 1,4 88 22
200 1,4 2,8 3,3 0,02 0,05 1,4 88 22
* A precisão diária foi determinada utilizando dois ensaios/dia com dois a três replicados.
** A precisão intra-laboratório foi determinada utilizando um único lote de slides e uma calibração semanal.
† As características de desempenho do Sistema VITROS 5,1 FS são aplicáveis ao Sistema VITROS 4600.
†† As características de desempenho do Sistema VITROS 5600 são aplicáveis aos Sistemas VITROS XT 3400 e XT 7600.
Especificidade
Substâncias Que Não Interferem
As substâncias listadas na tabela foram testadas com os Slides AST VITROS em conformidade com o Protocolo EP7 do
NCCLS 11, tendo-se verificado não interferirem, com um desvio <5,4 U/L, à concentração apresentada.
Composto Concentração Composto Concentração
Acetoacetato 20 mg/dL 2 mmol/L Gliburida 0,64 mg/dL 13 µmol/L
Acetaminofeno 20 mg/dL 1 mmol/L Hidroclorotiazida 2 mg/dL 67 µmol/L
Acetona 60 mg/dL 10 mmol/L Hidroxicloroquina 1 mg/dL 30 µmol/L
Acetilsalicilato 35 mg/dL 2 mmol/L Hypaque 500 mg/dL 8 mmol/L
Aciclovir 10 mg/dL 444 µmol/L Ibuprofeno 50 mg/dL 2 mmol/L
Sulfato de albuterol 1,84 µg/mL 4 µmol/L Intralípido 800 mg/dL 8 g/L
Ferro (sob a forma de
Alopurinol 5 mg/dL 367 µmol/L gluconato de ferro) 200 mg/dL 36 mmol/L
Alprazolam 0,02 mg/dL 6 µmol/L Isoniazida 7 mg/dL 500 µmol/L
Amicacina 40 mg/dL 683 µmol/L Keflina 100 mg/dL 3 mmol/L
Anfotericina B 3,5 mg/dL 35 µmol/L Lidocaína 6 mg/dL 256 µmol/L
Ampicilina 200 mg/dL 6 mmol/L Lovastatina 0,06 mg/dL 1 µmol/L
Amitriptilina (HCl) 2,5 µg/mL 9 µmol/L Manitol 400 mg/dL 22 mmol/L
Ascorbato 6 mg/dL 341 µmol/L Metadona 1 mg/dL 32 µmol/L
Azatioprina 1 mg/dL 36 µmol/L Metronidazole 25 mg/dL 1 mmol/L
Azidotimidina 30 mg/dL 1 mmol/L Morfina 2 mg/dL 70 µmol/L
Bilirrubina 40 mg/dL 684 µmol/L Naproxeno 120 mg/dL 5 mmol/L
Cafeína 35 mg/dL 2 mmol/L Neomicina 12 mg/dL 195 µmol/L
Captopril 2 mg/dL 92 µmol/L Nifedipina 0,2 mg/dL 6 µmol/L
Carbamazepina 12 mg/dL 508 µmol/L Penicilamina (D) 4 mg/dL 268 µmol/L
Cefazolina 400 mg/dL 9 mmol/L Fenobarbital 25 mg/dL 1 mmol/L
Ceftriaxona 250 mg/dL 5 mmol/L Fenilpropanolamina 1,8 µg/mL 12 µmol/L
Cloranfenicol 25 mg/dL 774 µmol/L Fenitoína 10 mg/dL 396 µmol/L
Clorodiazepóxido 2 mg/dL 67 µmol/L Fosfato (Na) 1,5 mmol/L 1,5 mmol/L
Clorpromazina 10 µg/mL 31 µmol/L Fosfolípidos 500 mg/dL 5 g/L
Colesterol 340 mg/dL 9 mmol/L Prednisolona 0,1 mg/dL 3 µmol/L
Cimetidina 10 mg/dL 396 µmol/L Procainamida 10 mg/dL 425 µmol/L
Clindamicina 20 mg/dL 0,5 µmol/L Prometazina (HCl) 1 mg/dL 35 µmol/L
Clonidina (HCl) 0,2 µg/mL 1 µmol/L Propranolol (HCl) 0,5 mg/dL 19 µmol/L
Codeína 3 mg/dL 100 µmol/L Pseudoefedrina 0,7 mg/dL 42 µmol/L
Flurazepam 0,23 mg/dL 6 µmol/L Quinidina 5 mg/dL 154 µmol/L
Ciclosporina 4 µg/mL 333 nmol/L Ranitidina (HCl) 20 mg/dL 638 µmol/L
Dexametazona 1,35 µg/mL 3 µmol/L Salicilato 50 mg/dL 4 mmol/L
Diazepam 2 mg/dL 70 µmol/L Estreptocinase 50 000 U/mL 50 000 U/mL
Digoxina 4 ng/mL 5 nmol/L Suramina 500 mg/dL 4 mmol/L
Diltiazem 0,2 mg/dL 5 µmol/L Teofilina 25 mg/dL 1 mmol/L
Difenidramina 7 mg/dL 273 µmol/L Tioridazina (HCl) 2 mg/dL 54 µmol/L
Dipirona 50 mg/dL 2 mmol/L Proteínas Totais 4 g/dL 40 g/L
Dopamina (HCl) 3 µg/mL 20 µmol/L Proteínas Totais 8,4 g/dL 84 g/L
Eritromicina 20 mg/dL 273 µmol/L Tricloroetanol 10 mg/dL 669 µmol/L
Etanol 394 mg/dL 86 mmol/L Triglicéridos 535 mg/dL 6 mmol/L
Flurazepam 15 mg/dL 387 µmol/L Trimetoprim 25 mg/dL 1 mmol/L
Furosemida 10 mg/dL 302 µmol/L Nitrogénio ureico 500 mg/dL 178 mmol/L
Dissulfato de geneticina 50 mg/dL 1 mmol/L Ácido valpróico 50 mg/dL 4 mmol/L
Gentamicina 12 mg/dL 256 µmol/L Varfarina 10 mg/dL 324 µmol/L
Ácido gentísico 50 mg/dL 3 mmol/L
Referências
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19087-1898 USA; 2004.
Glossário de Símbolos
Historial de Revisões
Data da Revisão Versão Descrição das Alterações Técnicas*
2019-09-06 13.0 • Informações adicionadas relativas ao Sistema Químico VITROS XT 3400
• Glossário de Símbolos: atualizado
• Endereço atualizado do Representante da CE
• Diagrama da Lâmina: Fosfato de sódio adicionado à camada de reagente
* As barras de alteração indicam a posição de uma emenda técnica ao texto, relativamente à versão anterior do documento.
Quando estas Instruções de Utilização forem substituídas, assine e date por baixo, e guarde em conformidade com os
regulamentos locais ou políticas do laboratório, conforme adequado.