ANALÍTICA AVANÇADA – 2S 2011

Aula 6
Espectrofotometria no UV
UV--Vis
FLUORESCÊNCIA MOLECULAR

Prof. Rafael Sousa

Departamento de Química - ICE

rafael.arromba@ufjf.edu.br

Notas de aula: www.ufjf.br/baccan

Luminescência x Fluorescência Molecular

Sal cozinha

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Espectro de emissão obtido para uma amostra de “sal de cozinha”
 Perfil dos espectros de emissão
Espécies atômicas
Espectro de linhas
(gasoso)

Hg

Ne

Espécies moleculares Espectro de bandas

(líquido, sólido ou gasoso)

Um espectro de emissão contínuas de bandas é constituído por muitas linhas

próximas que são muito difíceis de serem resolvidas

Um espectro de emissão (que pode ser de fluorescência) está

intimamente relacionado com a composição da amostra
(desde que as espécies emitam) 3
Perfil dos espectros de emissão
SÓLIDOS AQUECIDOS DÃO ORIGEM A
ESPECTROS DE EMISSÃO CONTÍNUOS:

Fenômeno radiativo
do “corpo negro”

As emissões observadas devem-

devem-se mais à temperatura aplicada do que
à composição dos materiais
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Característica dos espectros de emissão
POTÊNCIA DA RADIAÇÃO EMITIDA É PROPORCIONAL À
CONCENTRAÇÃO DAS ESPÉCIES QUE EMITEM

Princípio da
P = kC
análise quantitativa

Tinta branca com 0,2 % m/v

de branqueador óptico

Tinta branca com 0,4 % m/v

de branqueador óptico

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TIPOS DE Luminescência Molecular

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 Sistemas Luminescentes
• Fotoluminescência
Fluorescência e a fosforescência: processos
de excitação similares (absorção de fótons)
MAS com decaimentos diferentes

• Quimiluminescência
Emissão de luz formada no decorrer de uma
reação química
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 ENTENDENDO a Fotoluminescência
Absorção: 10-14 a 10-15 s
Fluorescência: 10-5 a 10-8 s
Fosforescência: 10-4 a 10 s

Fluorescência Fosforescência

Estado Estado Excitado

Estado Excitado Singleto
Fundamental Tripleto

Transições eletrônicas “permitidas”
Regras de seleção (Quântica) 8

 A molécula pode voltar ao seu estado
fundamental por uma combinação de várias
etapas (processos de desativação):

Processos radiativos
• Fluorescência  RELEVÂNCIA ANALÍTICA
• Fosforescência

Processos não radiativos (aumento T do solvente)

• Relaxação vibracional
• Conversão interna
• Conversão externa (colisões)
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 DETALHANDO a Fotoluminescência
• Pode ocorrer em sistemas químicos gasosos, líquidos e sólidos
 TIPOS:
• Fluorescência de ressonância:

λemis = λabs
(mais observada mais para espécies atômicas que moleculares)

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 DETALHANDO a Fotoluminescência
• Fluorescência com deslocamento Stokes:
Stokes: λ emis > λ abs (fóton absorvido
perde energia por inúmeras vibrações microscópicas)

Existem semelhanças
entre os espectros de
excitação e o de absorção
(“imagens especulares”)

Ex.: Quinina, tanto a absorção em 250 nm quanto em 350 nm resultam na

Ex.:
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emissão em 450 nm
FOTOLUMINESCÊNCIA EM DIAGRAMAS DE
ENERGIA (Diagrama de Jablonski):

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Diagrama de Jablonski Simplificado

- “Overlap” de níveis eletrônicos

- Não há mudança de spin

- “Overlap” de níveis eletrônicos

- Há mudança de spin

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Outro ex
ex.. (emissão
(emissão não ressonante
ressonante):
):

Fenantreno: T1
S0 lenta 10-5 -10 s (fosforescência)

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 DETALHANDO a Fotoluminescência
Fatores que afetam a fluorescência

• Estrutura molecular
– conjugação, rigidez, ...
• Ambiente químico
– Concentração, pH, viscosidade, presença de O2
• Temperatura

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 Ex.: Fluorescência e Estrutura
• A substituição em anéis aromáticos afeta a
intensidade relativa de fluorescência e os valores
dos λmax de absorção/emissão

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 Ex.: Fluorescência e Estrutura
• Empiricamente, observa-se que a rigidez da
estrutura favorece a fluorescência.

Bifenil, Φ ≅ 0,2

Fluoreno, Φ ≅ 1 ΦZn-complexo >>> Φhidroxiquinolina

Rigidez
diminui a velocidade da relaxação não radiativa 17

 Ex.: Fluorescência e Estrutura

• Estruturas aromáticas condensadas e/ou com

alto grau de conjugação apresentam alta
eficiência quântica

Heterocíclicos: não
fluorescem

Heterocíclicos
condensados fluorescem
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 Sobre os outros farores que afetam:
• Solvente e Temperatura

– Aumento de T ou diminuição de viscosidade do solvente

levam a um aumento no número de colisões e portanto
aumenta a probabilidade de conversão externas (supressão
colisional), diminuindo a “eficiência” da fluorescência

• pH
– A fluorescência de compostos aromáticos com
funcionalidades ácidas ou básicas apresenta forte
dependência com o pH.
• Ex.: anilina/anilínio e fenol/fenolato

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 Sobre os outros farores que afetam:
• Oxigênio dissolvido
– Oxigênio e outras espécies paramagnéticas tendem a
diminuir a fluorescência pelo aumento do
cruzamento intersistemas (fosforescência)
– Também é possível a oxidação da espécie
fluorescente

• Outras moléculas em solução

– Moléculas com átomos pesados (tetrabrometo de
carbono e iodeto de etila) aumentam a velocidade de
inversão de spin 20
 Característica da Moléculas
Luminescêntes
 Rendimento quântico ou eficiência quântica Φ:

É a razão entre o número de moléculas luminescentes

e o número total de moléculas excitadas

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Intensidade de Fluorescência e Concentração
• A fluorescência é diretamente proporcional a
concentração da espécie fluorescente, desde
que em baixas concentrações (A < 0,05)
F = K.c
• Desvios da linearidade:

Altas concentrações
- Auto-supressão (quenching)
- Auto-absorção
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Intensidade de Fluorescência e Concentração

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 Fluorescência e Análise Química
diretos:
Métodos diretos:

ANALITO + COMPLEXANTE  COMPLEXO FLUORESCENTE

Métodos indiretos
diretos::

ANALITO fluorecente + REAGENTE  PRODUTO menos FLUORESCENTE

Aplicações para compostos orgânicos e inorgânicos:

inorgânicas:
Determinações inorgânicas:

COMPLEMENTA a espectrofotometria no UV UV--Vis pois a maioria dos metais de

transição geralmente não foram complexos fluorescentes (decaimento não
radiativo muito eficiente), enquanto os outros metais podem formar produtos
fluorescentes 24
Fluorescência e Análise Química
Alguns exemplos

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 Fluorescência e Análise Química
Aplicações:
orgânicas: PRINCIPAL APLICAÇÃO
Determinações orgânicas:

Ácidos nucleicos
nucleicos,, alcalóides, aminoácidos, coenzimas, esteróis,
fármacos,, flavonóides, metabólitos, porfirinas, proteínas,
fármacos
vitaminas, ...

Na detecção de cromatógrafos e equipamentos de eletroforese

capilar favorecendo a obtenção de LDs de 10-9 a 10-12 mol L-1 !

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 Instrumentação: Esquema Geral

• Os componentes dos instrumentos para medir a

fotoluminescência são similares aos encontrados nos
fotômetros e espectrofotômetros UV/Vis

• MAS a fonte de radiação necessita ser mais intensa que

aquelas utilizadas na absorção molecular
– arco de mercúrio
– arco de xenônio-
xenônio-mercúrio
– lasers

• A maioria dos equipamentos emprega a ótica de duplo feixe

para compensar flutuações na potência da fonte

Espectrofluorímetros corrigidos
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Instrumentação: Esquema Geral

• Componentes similares a um
UV
UV--Vis

• “Detector” a 90 o em relação
ao feixe incidente

• Observa
Observa--se ambos os
espectros de excitação e
emissão

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 Componentes da Instrumentação
• Fontes de radiação - Lâmpadas
- “Lasers” (sensibilidade)

• Xenônio
Xenônio:: produz um
espectro continuo entre
250 e 600 nm tendo um
máximo a 470 nm

Espectro de emissão de uma lâmpada

de Xenônio

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Componentes da Instrumentação
Fontes de radiação
• Mercúrio
Mercúrio::

- Altas pressão
pressão:: máximos em 365,
365, 398 nm, …, 734 nm.
nm.

- Baixa pressão
pressão:: máximo em 254 nm.
nm.

Espectro de emissão de uma lâmpada de Mercúrio

de alta pressão 30
Componentes da Instrumentação
• Filtros e monocromadores

– Fluorímetros x Espectrofluorímetros

• Detectores (transdutores)

– Fotomultiplicadoras
– Arranjo de diodos...
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Metodologias: Absorção vs Emissão

Método Limite de detecção Custo Vantagem

(mol L-1)

UV-
UV-Vis 10-5 a 10-8 “universal”

Fluorescência 10-7 a 10-9 Gama seleta

de espécies

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 Para responder na aula
6.1) Que fatores físicos levam uma espécie química
(atômica ou molecular) emitir radiação?

6.2) Por que a fluorescência é mais utilizada na análise

química do que a fosforecência
fosforecência??

6.3) O comprimento de onda de fluorescência é, exceto

na emissão de ressonância, sempre maior que o de
excitação (ou de absorção)?

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Bibliografia consultada
 “Análise Instrumental”
F Cienfuegos, D Vaitsman; 2000

 “Vogel - Análise Química Quantitativa”

GH Jeffrey e col., 6a ed., Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 2002

 “Principles of Instrumental Analysis

Analysis””
DA Skoog, FL Holler, TA Nieman; 5th ed., 1998

 “Análise Química Quantitativa”

D. Harris; 7a ed., 2008

 Tutoriais de fabricantes de espectrofotômetros

 Slides didáticos fornecidos pelo Prof. Dr. Renato Rosseto (UFG)

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