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IMUNOLOGIA CLÍNICA

PRÁTICA
TESTES RÁPIDOS

Verificar o correto manuseio de testes rápidos, bem como estudar a prática de

sua aplicação na detecção de antígeno/anticorpo de determinadas infecções.

1.1 MATERIAL

- Micropipetadoras: 100uL, 30 uL, 25 uL, 10 uL

- Ponteiras descartáveis
- Kits de testes rápidos disponíveis (dispositivos de imunocromatografia
de fluxo lateral) para detecção de: HBsAg, HCV, HIV, sífilis.
- Diluente para os kits
- Soro

1.2 PROCEDIMENTO

Em seguida, com o auxílio da micropipeta e ponteira, transferir os seguintes

volumes de sorono local indicado do teste, seguido da quantidade necessária de
diluente indicado pela bula (Tabela 1).

Tabela 1 – Relação volume de soro e diluente para cada teste rápido.

Teste rápido Volume de soro Número de gotas do
diluente
HIV 10 uL 3
HCV 30 uL 1
HBsAg 100 uL 0
Sífilis 50 uL 1
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Posteriormente, realizar a leituradentro do tempo máximo, conforme indicado na bula

(Tabela 2).

Tabela 2 – Relação tempo de leitura máximo para cada teste rápido.

Teste rápido Tempo máximo

HIV 15 minutos

HCV 15 minutos

HBsAg 20 minutos

Sífilis 15 minutos

Após análise de dois soros diferentes na bancada, obteve-se os seguintesresultados:

Soro 6

Sífilis HBsAg HCV HIV Não

Não reagente Não reagente Não reagente reagente
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Soro 1

Sífilis HBsAg HCV HIV Não

Reagente Reagente Teste inválido reagente

Após a leitura dos testes, o soro 6 apresentou resultado “não reagente” para os
testes HCV, HIV, HBsAg e sífilis. O soro 1 apresentou resultado “reagente” para sífilis
e HBsAg, “não reagente” para HIV e “teste inválido” para HCV. O teste para HCV
apresentou este resultado devido ao não aparecimento da região controle na fita,
invalidando o mesmo, portanto, deverá ser realizado exame laboratorial para
diagnóstico.

PRÁTICA

TESTE DE AGLUTINAÇÃO EM LÁTEX

O teste de aglutinação em látex é um teste simples e muito utilizado no

laboratório clínico podendo ser executado manualmente e em menos de 5 minutos já
pode ser observado a formação de grumos nas amostras positivas. O teste é aplicado
em uma grande escala para o diagnóstico de infecções bacterianas, marcadores
imunológicos, dosagens de hormônio e drogas.
Em estágio prático utilizamos a cartela da Wama Diagnóstica, o teste envolve
a utilização de partículas de látex poliestireno sensibilizadas com antígenos ou
anticorpos para detecção exata. A reação de aglutinação é realizada na plataforma de
fundo preto para melhor visualização do resultado. Um resultado positivo, isto é,
quando a aglutinação ocorre é visualizada por meio da formação de grumos. Já o
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resultado negativo é caracterizado pela não formação de grumos.

A seguir uma foto (Imagem 1) representando o local do controle positivo, onde
ocorre aglutinação positiva obrigatoriamente, o teste, em que será verificada
aglutinação positiva ou negativa, e o controle negativo, onde é obrigatório a não
formação de grumos.

Imagem 1 – Placa para realização do teste de aglutinação em látex

Controle positivo Teste Controle negativo

1.1 MATERIAL
- Micropipetadoras: 30uL.

- Ponteiras descartáveis

- Kits de testes em aglutinação em látex; ASLO

- Palito para homogeneização

- Soro

1.2 PROCEDIMENTO
Em seguida, com o auxílio da micropipeta e ponteira, transferir os
seguintes volumes de látexno local indicado do teste, seguido da quantidade
específica de soro e controle positivo e negativo. (Tabela 1).

Tabela 1 – Relação volume de soro, látex e controle positivo e negativo

C+ TESTE C-
25 uL de látex 25 uL de látex 25 uL de látex
25 uL de controle positivo 25 uL de soro 25 uL de controle negativo

Em seguida homogeneizar com a pazinha em movimentos rotatórios os

conteúdos de cada área da plataforma e aguardar dois minutos para validação
do teste de aglutinação, sempre movimentando a plataforma lentamente.
Posteriormente, realizar a leitura dentro do tempo.
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Imagem 2. Plataforma para realização do teste de aglutinação em látex

A aglutinação é caracterizada pela formação de grumos e diz respeito à

uma reação de aglutinação positiva. Já a não formação de grumos é quando a
reação de aglutinação não ocorreu, logo é aglutinação negativa.

PRÁTICA

TIPAGEM SANGUÍNEA ABO E RH

Para identificar o tipo sanguíneo de uma pessoa é realizado um exame

conhecido como tipagem sanguínea, que verifica qual é o tipo de sangue, seus
derivados e o fator Rh dela. O exame é realizado a partir de uma coleta
sanguínea. Os reagentes causam aglutinação direta mascroscópica das
hemácias que carregam os antígenos correspondentes . As hemácias que
possuem o antígeno B se aglutinam quando misturadas ao reagente Anti-B e as
hemácias que possuem antígeno A se aglutinam quando misturadas ao
reagente Anti-A.
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Os procedimentos para a tipagem sanguínea em lâmina foram realizados através da utilização

de 2 lâminas devidamente limpas, foi adicionado 1 gota (equivalente a 50 microlitros) de sangue
(obtido através de punção venosa e colocado em tubo contendo EDTA) em uma extremidade da
lâmina e outra na extremidade oposta. Em uma das gotas foi adicionado 1 gota de soro anti-A e na
segunda gota foi adicionado 1 gota de soro anti-B.
Obtivemos tanto na tipagem em lâmina quanto na tipagem em tubo, umaaglutinação das
hemácias somente com o soro anti-A, dessa forma, foi possível interpretar que ocorreu apenas a
ligação do aglutinogênio A com o anticorpo anti-A, originando o fenômeno da aglutinação, que pode
nesse caso ser interpretado como sendo um sangue do tipo “A”, com Rh “negativo”, devido a não
aglutinação das hemácias expostas ao anticorpo anti-D. Portanto, o resultado foi: “A negativo”.