Universidade Tecnológica Federal do Paraná

Curso de Engenharia Química

Disciplina
QUI034 Engenharia Bioquímica

CAPÍTULO 2.
CINÉTICA DE PROCESSOS ENZIMÁTICOS
PARTE 1
Profa Dra Michele Di Domenico – DAENG
micheled@utfpr.edu.br

Francisco Beltrão – PR
CINÉTICA DE PROCESSOS ENZIMÁTICOS

SUMÁRIO

1. Introdução
a) Definição de Enzima
b) Nomenclatura e Classificação
2. Cinética Enzimática
a) Objetivos
b) Definições
c) Mecanismo e Catálise da Enzima
3. Medida deVelocidade
4. Efeito das Concentrações de Enzima e Substrato
a) Efeito da CE
b) Efeito da CS

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1. INTRODUÇÃO
(a) Definição de Enzima

“Enzimas (én: na + zymos: levedura) são biomoléculas de

natureza predominantemente proteica, cuja função é
catalisar reações termodinamicamente possíveis.”

✓ Ex.:
❖ Pepsina (Spallanzani L.,1836):
hidrólise de proteínas no
estômago.
❖ Tripsina (Kune W.F., 1876):
hidrólise de proteínas no
intestino delgado.
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1. INTRODUÇÃO
(a) Definição de Enzima

“As Enzimas podem ser obtidas a partir

de células animais, vegetais e de
microrganismos.”

✓ São secretadas pelas células ou isoladas das mesmas.

✓ A grande maioria das enzimas industriais é obtida de bactérias, fungos
filamentosos e leveduras.
✓ Sua atividade catalítica pode ser mantida sob condições adequadas: usadas
como biocatalisadores fora das células.

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1. INTRODUÇÃO
(a) Definição de Enzima

❖ Com exceção de um pequeno grupo de moléculas

de RNA com propriedades catalíticas (Ribozimas),
todas as enzimas são Proteínas.
❖ Proteínas: longas cadeias de aminoácidos.
❖ Função: viabilizar a atividade das células, quebrando
moléculas ou juntando-as para formar novos
compostos.
❖ O peso molecular das enzimas varia de 12.000 a
mais de 1.000.000 u (Da ou g/mol).

Catalisadores biológicos!

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1. INTRODUÇÃO
(b) Nomenclatura e Classificação

✓ Grupo de macromoléculas extenso... Substrato + “ase”.

✓ Poucas enzimas não seguem esta regra (ex. renina, pepsina, etc).
✓ Pelo tipo de reação que catalisa:
❖ Amilase: hidrólise do amido
❖ Protease: hidrólise de proteína
❖ Celulase: hidrólise da celulose
❖ Lipase: hidrólise de lipídeos

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✓ Divididas em 6 grupos pelo IUBMB - International Union of Biochemistry and Molecular

Biology, de acordo com o tipo de reação que catalisam (http://iubmb.org/biochemical-
nomenclature/, acesso em Out/2019).

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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(a) Objetivos

✓ Medir as velocidades de reação: V.

✓ Estudar o efeito das variáveis na V: CS, CE, T e pH.
✓ Correlacionar estas variáveis com as V por meio de pH T …
modelos empíricos ou matemáticos.
✓ Calcular o tempo de reação, o rendimento e as condições
ótimas do processo.
✓ Otimizar e estabelecer critérios de controle.
✓ Projetar o biorreator → VOLUME.

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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(b) Definições

✓ Uma RQ pode ser analisada quanto à:

Cinética
Termodinâmica
Química

Viabilidade e reversibilidade Velocidade das

das transformações transformações
✓ Pode ser termod. viável (ER>EP) mas ocorrer em velocidades quase nulas!

Reação Espontânea, mas muito lenta!

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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(b) Definições

“Cinética Química é a ciência que estuda a velocidade

das RQ e os fatores que a influenciam como por ex.
T, [reagentes], área de contato e uso de catalisadores.”

Catalisadores
✓ Atuam na cinética mas não na termodinâmica.
✓ Modificam o mecanismo reativo mas não modificam o valor de Keq.
✓ ↓ a barreira de energia para que ocorra a transformação química: ↓Ea.
✓ Voltam a sua forma original no final da reação.

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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(b) Definições

“Catalisadores são CRIAM UM NOVO CAMINHO DE REAÇÃO!

compostos capazes de ↑ a V
da reação sem alterar a
proporção final entre R e P
e sem serem consumidos
no processo.”
𝑚𝑜𝑙 1 𝑚𝑜𝑙
𝑉 =𝑘 ∙ 𝐶𝐴 ( )
Lembrando! 𝐿.𝑠 𝑠 𝐿

✓ Velocidade V tem unidade de concentração por tempo:

❖ [ ]/t → mol/(L·s)
✓ Para a reação 𝐴 → 𝐵, a lei de velocidade de ordem 1 é: 𝑉 = 𝑘 ∙ 𝐶𝐴
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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(b) Definições

✓ Grande parte das reações nos organismos envolvem ao menos 3

moléculas ≠ e são reversíveis.
✓ A V é explicada pela teoria das colisões: moléculas adquirem energia
para atingir o estado de transição.
✓ Como aumentar V?

1. ↑ C ou N dos reagentes.
2. ↑ Choques entre as moléculas (↑ k → ↑ T).
3. ↓ Energia de ativação.

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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(b) Definições

Energia de ativação (Ea)

Energia mínima necessária para que

os reagentes se transformem em Como ↓ essa barreira ↑ V?
produtos... Catalisadores!!!

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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(b) Definições

✓ Enzimas são catalisadores poderosos (↑ eficiência catalítica): especializadas em

acelerar reações biológicas, em até bilhões de ×.
✓ Sintetizadas na própria célula ondem atuam e sua concentração é controlada.
✓ São produtos naturais biológicos (não são tóxicas, reações seguras), operam em
condições amenas de T e pH (compatível à vida) e são muito específicas
(substrato e ao produto).
✓ A CATÁLISE DAS REAÇÕES BIOLÓGICAS é fundamental na conservação e
reprodução dos seres vivos. Ex.: respiração celular.

𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂𝒔
𝑪𝟔 𝑯𝟏𝟐 𝑶𝟔 + 𝟔𝑶𝟐 𝟔𝑪𝑶𝟐 + 𝟔𝑯𝟐 𝑶 + 𝑬𝒏𝒆𝒓𝒈𝒊𝒂

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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(c) Mecanismo e Catálise da Enzima

✓ Moléculas das enzimas >> substratos!

✓ Ex.: MMUrease>500.000u, MMUréia=60u
e MMágua=18 u

“Sítio ativo ou catalítico é o local da enzima onde

ocorre a transformação, i.e., região da molécula que
reage com o(s) substrato(s) para gerar o(s) produto(s)”

✓ O sítio ativo da enzima depende dos aminoácidos ali

presentes: ocorrem interações do sítio com o
substrato específico.
✓ Sua estrutura tridimensional e seus sítios catalíticos
conferem sua atividade biológica!
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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(c) Mecanismo e Catálise da Enzima

Mecanismo Chave-Fechadura (Emil Fischer, 1894)

✓ Alto grau de especificidade das enzimas.

✓ A enzima possui sítio ativo complementar à molécula do substrato:
❖ Tamanho, forma e natureza química, i.e., uma cavidade geometricamente
rígida!

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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(c) Mecanismo e Catálise da Enzima

Mecanismo Encaixe Induzido (Koshland, 1958)

✓ Enzima e substrato sofrem conformação para o encaixe.

✓ Interação é mais dinâmica.
✓ O substrato é distorcido para conformação exata do estado de transição.

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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(c) Mecanismo e Catálise da Enzima

Cinética Mono-Substrato: Reação simples → 1 substrato e 1 produto

✓ Etapas do mecanismo:
1. A enzima E se liga ao substrato S.
2. Forma-se o complexo E·S.
3. A E interage com ligações do S, alterando grupos funcionais e formando
o produto P → LIGAÇÃO QUÍMICA.
4. Ocorre a regeneração das ligações da E e o P é liberado.
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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(c) Mecanismo e Catálise da Enzima

“Cinética Enzimática é o estudo da velocidade de uma reação

química que ocorre na presença de uma enzima.”

✓ Mecanismo pelo qual a E se liga

ao S e o transforma em P.
✓ A atividade da enzima é estudada in
vitro: tipos de reações, tipos de
substratos, alterações na
atividade, etc.
✓ Objetivo: dados experimentais de Efeito do uso da
V de reação da enzima. enzima na V da
reação.
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2. CINÉTICA ENZIMÁTICA
(c) Mecanismo e Catálise da Enzima

Catálise Enzimática
❖ As quantidades de S e P são as mesmas em relação à reação não catalisada,
i.e., o equilíbrio da reação não muda!
❖ ≠ → As enzimas se saturam: quanto ↑CS, ↑no sítios ocupados e ↑eficiência
da reação.
❖ Quando todos os sítios forem ocupados é atingido ponto de saturação da
enzima!
As propriedades
cinéticas mais
importantes da enzima são:
TEMPO e PONTO MÁXIMO
DE SATURAÇÃO
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3. MEDIDA DE VELOCIDADE

LABORATÓRIO Não se dispõe de

Enzimas são produzidas por
células que produzem inúmeras
enzimas distintas e inúmeros
outros compostos.
DAENG
enzimas puras, mas de
preparados enzimáticos
com múltiplas
atividades.
✓ A ATIVIDADE DA ENZIMA é determinada
fazendo-a agir sobre o seu substrato, em
condições ótimas:
❖ Excesso de substrato.
❖ Valores fixos de pH e T.
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3. MEDIDA DE VELOCIDADE
✓ Considere a reação catalisada por uma enzima E em solução aquosa.

Dados durante a reação:

CS e C P
A cinética é estudada
medindo sua V em
condições experimentais
conhecidas!!

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3. MEDIDA DE VELOCIDADE
✓ Cinética da reação: se pode determinar o consumo do substrato [S] ou o
surgimento do produto [P].
✓ IMPORTANTE! As concentrações e condições do sistema variam durante a reação:
❖ Prefere-se determinar a velocidade inicial: período de V constante e
máxima.
❖ V calculada considerando instante t=0: V0.

𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎çã𝑜 V0 para consumo de

𝑉0 =
𝑡𝑒𝑚𝑝𝑜 substrato ou formação de
produto

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3. MEDIDA DE VELOCIDADE
✓ Como V se comporta ao longo do tempo? V0 > V 3. Com ↑t e ↑CP:
Pode ocorrer a reação inversa P → S
2. Com ↑t ocorre a ↓CS:
↓V para a reação direta S → P
𝐶
𝑉0 =
𝑡
Para não afetar V:
Calcular V0
Considerar apenas
S→P
1. Início: Conhecer CS com
V é proporcional a CS. CP = 0

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4. EFEITO DAS CONCENTRAÇÕES DE ENZIMA E SUBSTRATO

(a) Efeito da CE

✓ Ex.: determinação experimental de V0 com 4 ensaios: ≠ CE,0 e CS,0 constante

Ensaio CE em t=0
1 E1 ↑ CE
2 2E1
↑ CP
3 4E1
4 8E1 ↑ V0

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4. EFEITO DAS CONCENTRAÇÕES DE ENZIMA E SUBSTRATO

(a) Efeito da CE

✓ Ex.: determinação experimental de V0 com 4 ensaios: ≠ CE,0 e CS,0 constante

Relação linear

Ensaio CE em t=0 V0
1 E1 V0
2 2E1 2V0
3 4E1 4V0
4 8E1 8V0

V0 é proporcional à CE!

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4. EFEITO DAS CONCENTRAÇÕES DE ENZIMA E SUBSTRATO

(b) Efeito da CS

✓ Ex.: determinação experimental de V0 com 4 ensaios: ≠ CS,0 e CE,0 constante

Ensaio CS em t=0
1 S1 ↑ CS
2 S2 ↑ CP
3 S3 ↑ V0
4 S4

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4. EFEITO DAS CONCENTRAÇÕES DE ENZIMA E SUBSTRATO

(b) Efeito da CS

✓ Ex.: determinação experimental de V0 com 4 ensaios: ≠ CS,0 e CE,0 constante

Saturação
Relação não linear
Ensaio CS em t=0 V0
1 S1 V0,1
2 S2 V0,2
3 S3 V0,3
4 S4 V0,4

V0 não é proporcional à CS!

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4. EFEITO DAS CONCENTRAÇÕES DE ENZIMA E SUBSTRATO

(b) Efeito da CS

✓ Reações catalisadas por enzimas são saturáveis.

✓ Sua V não apresenta resposta linear face ao aumento da CS.
✓ A V aumenta com CS até a enzima se saturar e V atingir o máximo: Vmáx ouVm.
Saturação
Cinética enzimática simples
I. Em baixas CS a reação é de 1ª
ordem;
𝑉 = 𝑘 ∙ 𝐶𝑆0 II. Conforme ↑ CS a ordem de
reação diminui de 1 até 0;
III. Em altas CS a reação é de ordem
zero (não depende de S).
𝑉 = 𝑘 ∙ 𝐶𝑆1

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Obrigada!

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