TCNICAS HISTOLGICAS - CORTES MO LIVRE 1Fixao - consiste em matar o material, mantendo-o o mais semelhante possvel ao material vivo.

. Fixadores mais utilizados: etanol 70%; formalina; FAA; 2Verificar a orientao desejada - a partir do conhecimento morfolgico do rgo em questo, antes de cortar. Tipos de orientao: - transversal - longitudinal (radial ou tangencial) - paradrmico. 3Uso de suportes - para material pequeno ou escorregadio: cortia, medulas de embaba, sabugueiro, isopor. - Seccionar longitudinalmente ou perfurar um pedao de suporte, "escavando" a parte central, a fim de que o rgo a ser cortado se encaixe perfeitamente ao serem unidas as duas partes. 4O corte:

acorte de nivelamento: a superfcie dever ser nivelada antes da realizao dos cortes; para isso, poder ser utilizada uma lmina velha; bcortes histolgicos: realizados com lminas de barbear novas, da seguinte forma: - colocar uma gota de gua sobre o material e segurando a lmina entre os dedos polegar e indicador, cortar com movimentos para trs e para a direita. obs.: a lmina deve deslizar suavemente sobre o material; a fim de se obter cortes delgados. O material cortado dever ser depositado, com a ajuda de um pincel ou estilete, numa placa de Petri contendo gua destilada. c- Selecionar, com o auxlio da lupa, os melhores cortes (enrolam-se, ao serem tocados com o pincel). 5Clarificao mergulhar em hipoclorito de sdio (gua sanitria) 50%; terminado o processo, lavar com gua destilada (usando pipeta) at no haver mais odor. 6Dupla colorao: somente aps mergulhar os cortes em etanol 50%.

anuma placa pequena, mergulhar os cortes em um pouco de corante AZUL DE ALCIAN ou AZUL DE ASTRA; deixando por 30 -50 segundos (ou at ficar azul); bretirar o corante (com pipeta) e lavar com gua e depois em etanol (EtOH);

c- pingar algumas gotas de FUCSINA BSICA (em geral esse corante est muito forte; pode-se deixar um pouco de etanol, antes de adicion-lo) e deixar por 10-20 segundos; OBSERVAO: O TEMPO EXATO DE COLORAO VARIA DE ACORDO COM O MATERIAL BIOLGICO; S A EXPERINCIA PODE INDICAR O TEMPO EXATO PARA CADA UM. dlavar em etanol 50%, para retirar o excesso de corante; lavar em etanol 70% e 100%, por cerca de 1 minuto, para desidratao do material. 7Montagem da lmina histolgica:

alminas temporrias: o meio de montagem no permanente (ex.: glicerina) ou o corante no durvel (ex.: Cloreto de Zinco Iodado). So montadas durante os cursos de anatomia, da seguinte forma: - em uma lmina, pingar uma gota de glicerina a 50%, colocan do o corte j corado sobre a mesma, com auxlio de um pincel; - colocar a lamnula com cuidado e vedar com esmalte incolor, em toda a borda da lamnula (obs.: se houver glicerina em excesso, retirar com papel filtro antes de vedar). O PROCESSO UTILIZADO EM AULA. ESTE SER

blminas permanentes: o meio de montagem permanente (Blsamo do Canad; resina sinttica) e os corantes so durveis (dupla colorao). - desidratar o material gradativamente at lcool 100%; - passar em solvente Acetato de Butila ou Xilol (txico); - montar com blsamo do Canad ou Entelan (resina). c- lminas semi-permanentes: montadas em gelatina glicerinada (duram de 2 a 5 anos).

1Fixao - consiste em matar o material, mantendo-o o mais semelhante possvel ao material vivo. Fixadores mais utilizados: etanol 70%; formalina; FAA; 2Verificar a orientao desejada - a partir do conhecimento morfolgico do rgo em questo, antes de cortar. Tipos de orientao: - transversal - longitudinal (radial ou tangencial) - paradrmico. 3Uso de suportes - para material pequeno ou escorregadio: cortia, medulas de embaba, sabugueiro, isopor. - Seccionar longitudinalmente ou perfurar um pedao de suporte, "escavando" a parte central, a fim de que o rgo a ser cortado se encaixe perfeitamente ao serem unidas as duas partes. 4O corte: acorte de nivelamento: a superfcie dever ser nivelada antes da realizao dos cortes; para isso, poder ser utilizada uma lmina velha; bcortes histolgicos: realizados com lminas de barbear novas, da seguinte forma: colocar uma gota de gua sobre o material e segurando a lmina entre os dedos polegar e indicador, cortar com movimentos para trs e para a direita. obs.: a lmina deve deslizar suavemente sobre o material; a fim de se obter cortes delgados. O material cortado dever ser depositado, com a ajuda de um pincel ou estilete, numa placa de Petri ou vidro de relgio, contendo gua destilada. cSelecionar, com o auxlio da lupa, os melhores cortes (enrolam-se, ao serem tocados com o pincel). 5Clarificao - gua sanitria 50% ; terminado o processo, lavar com gua (usando pipeta) at no haver mais odor.

6Dupla colorao: aps mergulhar os cortes em etanol 50% anuma placa pequena, mergulhar os cortes em um pouco de corante AZUL DE ALCIAN ou AZUL DE ASTRA; deixando por 30 -50 segundos (ou at ficar azul); bretirar o corante (com pipeta) e lavar com gua e depois em etanol (EtOH); cpingar algumas gotas de FUCSINA BSICA (em geral esse corante est muito forte; pode-se deixar um pouco de etanol, antes de adicion-lo) e deixar por 10-20 segundos; dlavar em etanol 50%, para retirar o exesso de corante; lavar em etanol 70% e 100%, por cerca de 1 minuto, para desidratao do material 7Montagem da lmina histolgica: a- lminas temporrias: o meio de montagem no permanente (ex.: glicerina) ou o corante no durvel (ex.: Cloreto de Zinco Iodado). So montadas durante os cursos de anatomia, da seguinte forma: - em uma lmina, pingar uma gota de glicerina a 50%, colocando o corte j corado sobre a mesma, com auxlio de um pincel; - colocar a lamnula com cuidado e vedar com esmalte incolor (obs.: se houver glicerina em excesso, retirar com papel filtro antes de vedar). b- lminas permanentes: o meio de montagem permanente (Blsamo do Canad; resina sinttica) e os corantes so durveis (dupla colorao). - desidratar o material gradativamente at lcool 100%; - passar em solvente Acetato de Buxila ou Xilol (txico); - montar com blsamo do Canad. c- lminas semi-permanentes: montadas em gelatina glicerinada (duram de 2 a 5 anos).