Deteco de Taninos, Flavonides Totais e Terpenides em folhas de Tontelea micrantha (Mart. ex. Schult) A. C. Sm.

(Hippocrateoideae Celastraceae) - Sarah Barbosa Reis, Maria Olvia

Mercadante- Simes, Cntia Sorandra Oliveira Mendes, Lays Arajo Nery, Hellen Cssia Mazzottini- dos-Santos, Luiz Henrique Henrique Silveira (sarah.reis@yahoo.com.br)

Introduo
Tontelea micrantha est distribuda por grande parte do sudeste brasileiro [1] explorada no norte de Minas Gerais por populaes tradicionais que extraem o leo de suas sementes para a utilizao como medicinal e comercializao em feiras livres, contribuindo para o aumento da renda familiar [2]. Tendo em vistas a procura por novos frmacos na contemporaneidade, muitas plantas com potencial medicial tm sido investigadas. A famlia Celastraceae apresenta espcies com princpios ativos importantes, como compostos terpnicos e fenlicos, extrados para a produo de medicamentos anti-ulcerognico, anti-tumorgeno e antiinflamatrio, como Maytenus [3], Salacia [4], Cheiloclinium [5], Peritassa [6] e Hippocratea [7]. Esse trabalho objetivou, atravs de testes cromatogrficos, detectar a presena de grupos de compostos qumicos de interesse medicinal em folhas de T. micrantha.

Material e mtodos
A. Preparao do extrato hidro-alcolico O material vegetal constituiu-se de folhas de T. micrantha, coletadas em rea de cerrado s margens do km 22, da rodovia BR 365 secas sombra, temperatura ambiente e pulverizadas em moinho de facas tipo Willey e conservado a -10C. A partir do material pulverizado foi elaborado um extrato hidro-alcolico que foi filtrado, seco em estufa de circulao forada de ar a 60C, e armazenado a -10C, para posterior elaborao de cromatografia de camada delgada (CCD) para deteco de taninos, flavonides e terpenides. B. Deteco de Taninos atravs de CCD Foi preparada a soluo com 0,05g do extrato obtido dissolvido em 1 mL de etanol que foi a seguir aplicado com tubo capilar dez gotas em placas de slica gel 60G com 0,25 mm de espessura. Foram usados como padres 1 gota de cido glico e cido tnico e como fase mvel, soluo de butanol, cido actico e gua (BAW) na proporo de 12:3:15, sendo as placas reveladas atravs de pulverizao com soluo alcolica de cloreto frrico 1%. C. Deteco de Flavonides atravs de CCD Preparou-se a diluio de 30 mg do extrato obtido em 10 mL de etanol 50% que foi lavado por trs vezes em hexano, para a retirada da clorofila e armazenado a -10C. Esse extrato foi aplicado juntamente com o padro para flavonides, a quercetina, em placas de vidro com slica gel F254, de espessura de 0,25 mm. A fase mvel utilizada foi (BAW), na proporo de 15:3:2. As placas foram observadas sob luz UV com comprimento de onda de 365nm, para visualizao de fluorescncia ou reveladas com soluo etanlica de cloreto de alumnio 15%, para a observao do aparecimento de colorao amarela, indicativo de presena de flavonides. D. Deteco de Flavonides atravs de teste fitoqumico Foi realizado teste fitoqumico com cloreto de alumnio, em tubo de ensaio, para confirmao da presena de flavonides totais. E. Preparao do Hidrolato
________________ Apoio financeiro: FAPEMIG.

Cinqenta gramas de p das folhas de T. micrantha foram diludas em 1 L de gua e colocadas em aparelho de Clevenger para a extrao de leo essencial por hidrodestilao, durante 6 horas. Ao fim da extrao o hidrolato foi coletado para as avaliaes cromatogrficas para compostos terpnicos. F. Deteco de Terpenides atravs de CCD O hidrolato obtido foi aplicado em placa com slica gel 60G de espessura de 0,25 mm utilizando-se como fase mvel soluo de hexano e gua, na proporo 8:2 e como revelador vanilina sulfrica 1%.

Resultados e discusso
A. Taninos Os padres utilizados, cido glico e cido tnico, ambos taninos hidrolisveis, apresentaram Rf de 0,78 e 0,88, respectivamente e os extrato de folhas de T. micrantha apresenta Rf de 0,92 e 0,67 (Fig. 1C), podendo-se inferir que se trata de taninos hidrolisveis. A mistura de substncias presentes num extrato vegetal pode interferir na equivalncia das corridas. Foi revelado no extrato, atravs da asperso com FeCl3 1%, a presena de taninos condensados, de colorao verde, bem como confirmada a natureza dos taninos hidrolisveis, pela colorao azul. B. Flavonides No foi observada fluorescncia sob luz UV na amostra e na soluo padro (quercetina), mas foi separada uma substncia de Rf equivalente ao padro quercetina. Essa metodologia deve ser empregada em fraes mais puras, por que no extrato alcolico esto presentes outras substncias que aliadas aos flavonides podem formar complexos que podem interferir na corrida do extrato pela fase mvel bem como na sua separao. O teste fitoqumico com cloreto de alumnio foi positivo, indicando a presena de flavonides totais no extrato (Fig. 1D). Flavonides detectados em Maytenus aquifolium atravs de CLAE reforam a presena de desses compostos em Maytenus [3]. C. Terpenides A CCD do hidrolato para terpenides separou duas substncias, como pode-se observar na Figura 1A. Espcies da famlia Celastraceae so conhecidas pelos seus compostos triterpnicos, isoterpnicos e sesquiterpnicos [6,8,9], de importncia na indstria farmacutica para a confeco de medicamentos anti-cncer [8], anti-ulcerognicos [3], antiinflamatrios [5] e no controle da diabetes [4].

Concluso
Existem duas substncias tnicas diferentes na folha de T. micrantha. As folhas de T. micrantha possuem flavonides que se comparam ao padro utilizado. Os flavonides presentes no apresentam fluorescncia sendo revelados pelo cloreto de alumnio 15%. A cromatografia de camada delgada revelou duas substncias terpnicas.

Agradecimentos
Fundao de Amparo a Pesquisa de Minas Gerais (FAPEMIG) e Pr-Reitoria de Pesquisa pela concesso de bolsas de Iniciao Cientfica e ao auxlio tcnico do Laboratrio de Mtodos Analticos em Biologia UNIMONTES.

Referncias
[1] [2] [3] WANDERLEY, M. D. G; SHEPHERD, G.J.; GIULLIETTI, A. M.; MELLEM, T. S. 2003. Flora Fanerogmica do Estado de So Paulo. Vol 3. Rima, So Paulo. P. 367. CARVALHO, I. S. H. Potenciais e limitaes do uso sustentvel da biodiversidade do cerrado: um estudo de caso sobre a cooperativa Grande Serto no norte de Minas. 2007. 184f. Dissertao (Mestrado em Desenvolvimento Sustentvel) Centro de Desenvolvimento Sustentvel: Universidade de Braslia, Braslia. YARIWAKE, J. H.; LANAS, F. M.; CAPPELARO, E. A.; VASCONCELOS, E. C. D.; TIBERTI, L. A.; PEREIRA, A. M. S.; FRANCA, S. D. C. 2005. Variabilidade sazonal de constituintes qumicos (triterpenos, flavonides e polifenis) das folhas de Maytenus aquifolium Mart. (Celastraceae). Revista Brasileira de Farmacognosia, 15(2): 162-168. MATSUDA, H.; MURAKAMI, T.; YASHIRO, K.; YAMAHARA, J.; YOSHIKAWA, M. 1999. Antidiabetic principles of natural medicines. IV. Aldose reductase and -glucosidase inhibitors from the roots of Salacia oblonga Wall. (Celastraceae): structure of a new friedelane-type triterpene, kotalagenin 16-Acetate. Chemical & Pharmaceutical Bulletin. 47(2): 1725-1729. COSTA. E. A.; SANTOS, L. R.; PONTES. I. S.; MATOS, L. G.; SILVA, G. A.; LIO, L. M. 2007. Analgesic and anti-inflammatory effects of Cheiloclinium cognatum root barks. Revista Brasileira de Farmacognosia. 17(4): 508-513 LIO, L. M.; VIEIRA, A. P. C; RODRIGUES-FILHO, E.; FERNANDES, J. B.; SILVA, M. F. G. F. 2002. Isomeric triterpenides from Peritassa campestris. Verlag der Zeitschrift fur naturfordchung. Tubigen Notes. 403-406 REYES-CHILPA, R.; JIMNEZ-ESTRADA, M.; CRISTBAL-TELSFORO, E.; TORRES-COLN, L.; VILLAVICENCIO, M. A.; PREZ-ESCANDN, B. E.; MERCADO-GONZLES, R. 2003. Natural insecticides from Hippocrateae excelsa and Hippocrateae celastroides. Economic Botany. 57(1): 54-64. MUOZ-MARTEZ,, F.; LU, P. CORTZ-SELVA. F.; PREZ-VICTORIA, j.; JIMNEZ, I. A.; RAVELO, A. G.; SHAROM, F. J.; GAMARRO, F.; CASTANYS, S. 2004. Celastraceae Sesquiterpenes as a New Class of Modulators That Bind Specifically to Human P-Glycoprotein and Reverse Cellular Multidrug Resistance. Cancer Research 64, 71307138. SPIVEY, A. C.; WESTON, M.; WOODHEAD, S. 2002. Celastraceae sesquiterpenoids: biological activity and synthesis. Chem. Soc. Rev., 31, 4359

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Figura 1 Cromatografia de Camada Delgada para (A) Terpenides, evidenciando duas substncias diferentes (B) Flavonides, no extrato ( esquerda) e o padro quercetina ( direita) (C) Taninos, mostrando da esquerda para a direita, trs substancias no extrato, sendo duas com Rfs semelhantes aos dos padres, cido glico e cido tnico, e uma substncia que no se encontra no padro (D) Teste fitoqumico para identificao de flavonides totais com cloreto de alumnio; extrato amarelado direita evidenciado reao positiva; extrato da esquerda sem adio de Cloreto de Alumnio.