Clonagem de Clulas

Centro Universitrio Nove de Julho Curso: Biomedicina Turma: A1 Professora: Silvana Gaiba Aluno: Leonardo Barboza Bacellar

Sumario:
Definio clonagem...................................................................................... Tcnica clonagem........................................................................................ Processo de clonagem reprodutiva................................................................... Clonagem de clulas estaminais renova esperana para a cura de doenas.. A tcnica de clonagem teraputica para obteno de clulas tronco................ A tcnica de clonagem teraputica para obteno de clulas tronco............... Um pouco sobre a histria da engenharia Gentica......................................... de de

A era da manipulao gentica.......................................................................... A introduo do DNA nas clulas.......................................................................

O que clonagem
Podemos definir a clonagem como um mtodo cientfico artificial de reproduo que utiliza clulas somticas (aquelas que formam rgos, pele e ossos ) no lugar do vulo e do espermatozide. Vale lembrar que um mtodo artificial, pois, como sabemos, na natureza, os seres vivos se reproduzem atravs de clulas sexuais e no por clulas somticas. As excees deste tipo de reproduo so os vrus, as bactrias e diversos seres unicelulares. A primeira experincia com clonagem de animais ocorreu no ano de 1996, na Esccia, no Instituto de Embriologia Roslin. O embriologista responsvel foi o doutor Ian Wilmut. Ele conseguiu clonar uma ovelha, batizada de Dolly. Aps esta experincia, vrios animais foram clonados, como por exemplo, bois, cavalos, ratos e porcos

Clonagem de clulas estaminais renova esperana para a cura de doenas

Um grupo de cientistas sul-coreano isolou, pela primeira vez, linhas de clulas estaminais embrionrias compatveis com os doentes. Este passo pode representar um grande avano em termos do transplante deste tipo de clulas em humanos, o que ajudar a combater doenas degenerativas e incurveis, como a doena de Parkinson e a diabetes.

A notcia foi avanada esta sexta-feira pela revista Science que, apresentando um relatrio de cientistas da Universidade de Seul, afirma que isto poder ajudar tambm ao estudo em laboratrio das doenas que afectam os seres humanos. O grupo de cientistas, liderado pelo veterinrio Woo Suk Hwang, professor de Citologia, e pelo ginecologista Shin Yong Moon, refere que a experincia foi feita com a colaborao de 18 mulheres, que doaram 185 vulos para este fim. De entre estes vulos, 125 eram provenientes de 10 mulheres com menos de 30 anos de idade e foram considerados os mais eficazes. Numa segunda fase foram obtidas clulas somticas de 11 dadores, de ambos os sexos, com idades compreendidas entre os 2 e os 56 anos. Entre as amostras recolhidas constavam clulas somticas de pessoas com diabetes juvenil, leses da medla espinal e deficincia imunolgica gentica (doenas imunitrias). De acordo com Woo Suk Hwang, as clulas obtidas so normais, isto , com capacidade de auto-renovao e pluripotentes, ou seja, podem transformar-se noutro tipo de clulas com funes definidas. Deste modo, os investigadores conseguiram criar 11 novas linhas de clulas estaminais, usando a transferncia de material gentico de uma clula no reprodutiva a um vulo, cujo ncleo foi retirado. Atravs deste mtodo, designado "transferncia nuclear", os vulos com o material gentico do paciente cresceram e transformaram-se em blastcitos, ou seja, voltaram etapa inicial do desenvolvimento embrionrio. O resultado da criao desta minscula "bola", composta por uma centena de clulas, foi a formao de clulas estaminais embrionrias, as mesmas que do origem s clulas de um organismo adulto. Esta no a primeira vez que a equipa sul coreana notcia na rea da investigao. H um ano atrs os mesmos cientistas anunciaram ter conseguido criar uma cultura de clulas estaminais. A diferena entre a experincia anterior e a agora relatada reside no facto de h um ano atrs terem sido necessrias 200 tentativas, ao passo que agora o processo foi mais eficiente, uma vez que por cada 20 tentativas conseguiram produzir uma linhagem celular. De acordo com Geral Shatten, bilogo norte-americano, que tambm um dos autores do artigo agora publicado, este " um feito que s se julgava possvel daqui a umas dcadas". O mesmo afirma ainda Reuters que o estudo "demonstra que se pode fazer com que as clulas estaminais sejam especficas para cada paciente, no importa o seu sexo e idade, e que estas clulas so cpias genticas iguais s do dador". Se estas clulas puderem vir a ser usadas em transplantes, muitas das doenas que afectam o ser humano podem ser tratadas de uma forma mais eficaz e quem sabe ser at curadas, acredita o mesmo. Mas ainda antes do transplante deste tipo de clulas, resta uma ltima etapa aos investigadores que corresponde avaliao, em laboratrio, da compatibilidade entre as linhas de clulas estaminais embrionrias criadas e as clulas do paciente. Tem que se determinar a tolerncia imunolgica, a

eficcia teraputica e a segurana deste mtodo e destas clulas que, de acordo com as experincias iniciais j efectuadas, parecem estar a priori garantidas.

A tcnica da clonagem
A clonagem ainda no foi entendida por completo pelos mdicos e cientista, no que se refere aos conhecimentos tericos. Na teoria seria impossvel fazer clulas somticas atuarem como sexuais, pois nas somticas quase todos os genes esto desligados. Mas, a ovelha Dolly, foi gerada de clulas somticas mamrias retiradas de um animal adulto. A parte nuclear das clulas, onde encontramos genes, foram armazenadas. Na fase seguinte, os ncleos das clulas somticas foram introduzidos dentro dos vulos de uma outra ovelha, de onde haviam sido retirados os ncleos. Desta forma, formaram-se clulas artificiais. Atravs de um choque eltrico, as clulas foram estimuladas, aps um estado em que ficaram "dormindo". Os genes passaram a agir novamente e formaram novos embries, que introduzidos no tero de uma ovelha acabou por gerar a ovelha Dolly. A ovelha Dolly morreu alguns anos depois da experincia e apresentou caractersticas de envelhecimento precoce. O telmero (parte do cromossomo responsvel pela diviso celular) pode ter sido a causa do envelhecimento precoce do animal. Por isso, o telmero tem sido alvo de pesquisas no mundo cientfico. Os dados esto sendo at hoje analisados, com o objetivo de se identificar os problemas ocorridos no processo de clonagem. A embriologia e a engenharia gentica tem feito pesquisas tambm com clulastronco e na produo de rgos animais atravs de mtodos parecidos com a clonagem.

O processo de clonagem reprodutiva

A grande notcia da Dolly foi justamente a descoberta que uma clula somtica de mamfero, j diferenciada, poderia ser reprogramada ao estgio inicial e voltar a ser totipotente. Isto foi conseguido atravs da transferncia do ncleo de uma clula somtica da glndula mamria da ovelha que originou a Dolly para um vulo enucleado . Surpreendentemente, este comeou a comportar-se como um vulo recm fecundado por um espermatozide . Isto provavelmente ocorreu porque o vulo quando fecundado tem mecanismos, para ns ainda desconhecidos, para reprogramar o DNA de modo a tornar todos os seus genes novamente ativos, o que ocorre no processo normal de fertilizao. Para obteno de um clone , este vulo enucleado no qual foi transferido o ncleo da clula somtica, foi inserido em um tero de uma outra ovelha. No caso da clonagem humana reprodutiva, a proposta seria retirar-se o ncleo de uma clula somtica, que teoricamente poderia ser de qualquer tecido de uma criana ou adulto, inserir este ncleo em um vulo e implant-lo em um tero ( que funcionaria como uma barriga de aluguel). Se este vulo se desenvolver teremos um novo ser

com as mesmas caractersticas fsicas da criana ou adulto de quem foi retirada a clula somtica. Seria como um gmeo idntico nascido posteriormente. J sabemos que no um processo fcil. Dolly s nasceu depois de 276 tentativas que fracassaram. Alm disso, dentre as 277 clulas "da me de Dolly " que foram inseridas em um vulo sem ncleo, 90% no alcanaram nem o estgio de blastocisto. A tentativa posterior de clonar outros mamferos tais como camundongos, porcos , bezerros , um cavalo e um veado tambm tem mostrado uma eficincia muito baixa e uma proporo muito grande de abortos e embries malformados. Penta, a primeira bezerra brasileira clonada a partir de uma clula somtica adulta , em 2002, morreu com um pouco mais de um ms. Ainda em 2002, foi anunciado a clonagem do " copycat" o primeiro gato de estimao clonado a partir de uma clula somtica adulta. Para isto foram utilizados 188 vulos que geraram 87 embries e apenas um animal vivo. Na realidade , experincias recentes, com diferentes modelos animais tm mostrado que esta reprogramao dos genes , para o estgio embrionrio, o processo que originou Dolly, extremamente difcil. O grupo liderado por Ian Wilmut, o cientista escocs que se tornou famoso por esta experincia afirma que praticamente todos os animais que foram clonados nos ltimos anos a partir de clulas no embrionrias esto com problemas (Rhind , 2003). Entre os diferentes defeitos observados nos pouqussimos animais que nasceram vivos aps inmeras tentativas, observa-se: placentas anormais , gigantismo em ovelhas

A tcnica de clonagem teraputica para obteno de clulas tronco

Se pegarmos este mesmo vulo cujo ncleo foi substitudo por um de uma clula somtica e ao invs de inser-lo em um tero deixarmos que ele se divida no laboratrio teremos a possibilidade de usar estas clulas , que na fase de blastocisto so pluripotentes para fabricar diferentes tecidos. Isto abrir perspectivas fantsticas para futuros tratamentos porque hoje s se consegue cultivar em laboratrio clulas com as mesmas caractersticas do tecido onde foram retiradas. importante que as pessoas entendam que na clonagem para fins teraputicos sero gerados s tecidos, em laboratrio , sem implantao no tero. No se trata de clonar um feto at alguns meses dentro do tero para depois retirar-lhe os rgos como alguns acreditam. Tambm no h porque chamar esse vulo aps a transferncia de ncleo de embrio porque ele nunca ter esse destino. Uma pesquisa publicada na revista Sciences por um grupo de cientistas coreanos (Hwang e col, 2004) confirmou a possibilidade de obter-se clulas-tronco pluripotentes , a partir da tcnica de clonagem teraputica ou transferncia de ncleos (TN). O trabalho foi feito graas a participao de 16 mulheres voluntrias que doaram ao todo 242 vulos e clulas "cumulus" (clulas que ficam ao redor dos vulos) para contribuir com pesquisas visando a clonagem teraputica. As clulas cumulus, que j so clulas diferenciadas, foram transferidas para os vulos dos quais haviam sido retirados os prprios ncleos. Dentre esses 25% conseguiram se dividir e chegar ao estgio de blastocisto e portanto capazes de produzir linhagens de clulas-tronco pluripotentes.

A clonagem teraputica teria a vantagem de evitar rejeio se o doador fosse a prpria pessoa. Seria o caso por exemplo de reconstituir a medula em algum que se tornou paraplgico aps um acidente ou para substituir o tecido cardaco em uma pessoa que sofreu um infarto. Entretanto esta tcnica tem suas limitaes. O doador no poderia ser a prpria pessoa no caso de afetados por doenas genticas pois a mutao patognica causadora da doena est presente em todas as clulas. No caso de usar-se linhagens de clulas tronco embrionrias de outra pessoa ter-se-ia tambm o problema da compatibilidade entre o doador e o receptor. Seria o caso por exemplo de um afetado por distrofia muscular progressiva que necessita substituir seu tecido muscular. Ele no poderia utilizar-se de suas prprias clulas tronco mas de um doador compatvel que poderia ser eventualmente um parente prximo. Alm disso, no sabemos se no caso de clulas obtidas de uma pessoa idosa , por exemplo com doena de Alzheimer, se as clulas clonadas teriam a mesma idade do doador ou seriam clulas jovens. Uma outra questo em aberto seria a reprogramao dos genes que poderiam inviabilizar o processo dependendo do tecido ou do rgo a ser substitudo. Em resumo, por mais que sejamos favorveis a clonagem teraputica, trata-se de uma tecnologia que necessita de muita pesquisa antes de ser aplicada no tratamento clnico . Por este motivo, a grande esperana , a mais curto prazo, para terapia celular, vem da utilizao de clulas tronco de outras fontes.

Um pouco sobre a histria da engenharia Gentica

Os pesquisadores norte-americanos George W. Beadle e Edward L. Tatum , na dcada de 1930, demonstraram a regulao pelos genes da produo de protenas e enzimas e a consequente interveno nas reaes dos organismos dos animais. A partir destas pesquisas, teve incio o progresso de descoberta da estrutura gentica humana. Oswald T. Avery em 1944, pesquisando a cadeia molecular do cido desoxirribonuclico ( ADN),ou ( DNA), descobriu que este o componente cromossmico que transmite informaes genticas. Em 1953 os ingleses Francis H. C. Crick , Maurice Wilkins e o norte-americano James D. Watson conseguiram mapear boa parte da estrutura da molcula do DNA . Em 1961 os franceses Franois Jacob e Jacques Monod pesquisaram o processo de sntese de protenas nas clulas bacterianas. Descobriram que o principal responsvel pela sntese o DNA, que passou ento a ser o elemento central das pesquisas de engenharia gentica. Em 1972, na Universidade de Stanford , na Califrnia , o norte-americano Paul Berg ligou duas cadeias de DNA. Uma era de origem animal, a outra bacteriana. Esta foi a primeira experincia bem sucedida onde foram ligadas duas cadeias genticas diferentes, e que considerada por muitos autores o incio da criao sinttica de produtos de engenharia gentica.

Montagem da Cadeia ADN

A era da manipulao gentica

Iniciou-se ento a era da manipulao de mensagens genticas expressas em fragmentos de seqncias que compem o cdigo hereditrio, os nucleotdeos.

Insero de informao gentica A partir deste momento a engenharia gentica passou a cortar ou modificar as molculas de DNA, utilizando enzimas especficas. As ligases, enzimas que agem

para unir a cadeia fragmentada comearam a ser descobertas e sintetizadas para manipulao gentica.

A introduo do DNA nas clulas

A introduo de fragmentos de DNA contendo genes de interesse numa clula, s culminar na reproduo da mensagem gentica de tal gene, se este estiver contido num vetor de clonagem apropriado. Tais vetores contm sequncias de regulao importantes para que a maquinaria celular possa "ler" e "ler corretamente" a informao contida no gene. Os vetores que so responsveis por este processo, podem ser plasmdios , vrus e outros, tambm manipulados geneticamente. Como os plasmdios so sequncias circulares de DNA, que se reproduzem de forma autnoma e so elementos genticos extracromossmicos, tornaram-se portanto, ideais para a transmisso de informao gentica.

Concluso
Na realidade o maior problema tico atual o enorme risco biolgico associado a clonagem reprodutiva. No meu entender seria a mesma coisa que discutir os prs e os contras em relao a liberao de uma medicao nova, cujos efeitos so devastadores e ainda totalmente incontrolveis. Apesar de todos estes argumentos contra a clonagem humana reprodutiva, experincias com animais clonados tem nos ensinado muito acerca do funcionamento celular. Por outro lado, a tecnologia de transferncia de ncleo para fins teraputicos, a chamada clonagem teraputica poder ser extremamente til para obteno de clulas tronco.

Refrencias Bibliogrficas
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Rhind SM, Taylor JE, De Sousa PA, King TUI, McGarry M, Wilmut I (2003): Human Cloning: can it be made safe? Nature reviews 4:855-864

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