FACULDADE ITABIRANA DE DESENVOLVIMENTO DAS CINCIAS E TECNOLOGIAS

BACHARELADO EM SISTEMASDE INFORMAO Reconhecimento Renovado - Portaria 653 de 02/06/2010 BACHARELADO EM ENGENHARIA DE PRODUO Reconhecido - Portaria 599 de 17/03/2011 BACHARELADO EM ENGENHARIA AMBIENTAL Autorizado - Portaria 300 de 27/06/2006

Curso de Engenharia Ambiental

Prticas de Microbiologia Geral

Itabira 2010

PMG.1 TCNICAS DE CONTROLE MICROBIANO E PRODUO DE MEIO DE CULTURA

ASSUNTO: Produo de meio de cultura observando tcnicas de esterilizao, desinfeco e assepsia. INTRODUO: Definio de termos-chave relacionados ao controle do crescimento microbiano

Terminologia relacionada ao controle do crescimento microbiano

Definio e comentrios Esterilizao: Destruio de todas as formas de vida microbiana, incluindo os endsporos. Normalmente feito com vapor sob presso ou gs esterilizante como o xido de etileno. Esterilizao comercial: Tratamento de calor suficiente para matar os endsporos do Clostridium botulinum nos alimentos enlatados. Os endsporos mais resistentes das bactrias termfilas podem sobreviver, mas no iro germinar e crescer sob condies de armazenamento normais. Desinfeco: Destruio dos patgenos vegetativos. Pode fazer uso de mtodos fsicos ou qumicos. Anti-sepsia ou Assepsia: Destruio dos patgenos vegetativos em tecido vivo. O tratamento quase sempre por meio de antimicrobianos qumicos. Degerminao: Remoo dos micrbios de uma rea limitada, como o local em torno de uma injeo na pele. Basicamente uma remoo mecnica por um algodo embebido em lcool. Sanitizao: Tratamento destinado a reduzir as contagens microbianas nos utenslios alimentares at nveis seguros de sade pblica. Pode ser feita com lavagem com alta temperatura ou aplicando um desinfetante qumico. (Microbiologia TORTORA) MATERIAL:

- 30 g Batata in natura - 1 g Dextrose - 2 g gar

- 100 mL gua destilada - Erlenmeyer - Placa de Petri

- Rolhas de algodo - Balana - Autoclave

EXECUO: - Pesar todos os ingredientes do meio de cultura BDA Batata dextrose Agar e colocar em um Erlenmeyer limpo; - Colocar rolha de algodo na boca do Erlenmeyer, cobrir com papel e amarrar com barbante; - Levar o Erlenmeyer com meio de cultura para dentro da autoclave; - Ligar a autoclave e deixar o vapor fluir; - Fechar a vlvula da autoclave e esperar a temperatura chegar a 121o C; - Contar 20 min. desta temperatura para o meio na autoclave; - Desligar a autoclave e esperar a temperatura baixar para tirar o erlenmeyer de dentro; - Quando o meio estiver morno, verter ele em placas de Petri previamente esterilizadas.

OBSERVAES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________

PMG.2 UBIQUIDADE DE MICRORGANISMOS

ASSUNTO: Presena de bactrias e fungos no ambiente.

INTRODUO: Ubiqidade

Os microrganismos so os menores seres vivos existentes, encontrando-se em uma vasta diversidade de ambientes e desempenhando importantes papis na natureza. Este grupo caracteriza-se por ser completamente heterogneo, tendo com nica caracterstica comum o pequeno tamanho dos organismos. Acredita-se que cerca de metade da biomassa do planeta seja constituda pelos microrganismos, sendo os 50% restantes distribudos entre plantas (35%) e animais (15%). A ubiqidade dos microorganismos baseada em trs caractersticas principais: tamanho reduzido, que permite uma grande capacidade de disperso; variabilidade e flexibilidade metablica, que permite se adaptar e tolerar rapidamente s condies ambientais desfavorveis; e sua grande capacidade de transferncia horizontal de genes, que lhes permite recombinar e coletar caracteres positivos e persistir durante um longo tempo adaptando-se s condies ambientais instveis. Em termos de habitat, os microrganismos so encontrados em quase todos os ambientes, tanto na superfcie, como no mar e subsolo. Desta forma, podemos isolar microrganismos de fontes termais, com temperaturas atingindo at 130C, de regies polares, com temperaturas inferiores a -10C; de ambientes extremamente cidos (pH=1) ou bsicos (pH=13). Alguns sobrevivem em ambientes extremamente pobres em nutrientes, assemelhando-se gua destilada. Em termos metablicos, temos tambm os mais variados tipos, desde aqueles com vias metablicas semelhantes de eucariotos superiores, at outros que so capazes de produzir cido sulfrico, ou aqueles capazes de degradar compostos pouco usuais como o petrleo, a cnfora, os herbicidas, petrleo, entre outros. Uma vez que os microrganismos precederam o homem em bilhes de anos, podese dizer que ns evolumos em seu mundo e eles em nosso. Desta forma, no de se estranhar que a associao homem-microrganismo mostra-se com grande complexidade, com os microrganismos habitando nosso organismo, em locais tais como a pele, intestinos, cavidade oral, nariz, ouvidos e trato genito-urinrio. Embora a grande maioria destes microrganismos no cause qualquer dano, compondo a denominada microbiota normal, algumas vezes estes podem originar uma srie de doenas, com maior ou menor

gravidade. Nesta classe de organismos esto aqueles denominados patognicos e potencialmente patognicos. Sabe-se que em cerca de 1013 clulas de um ser humano podem ser encontradas, em mdia, cerca de 1014 clulas bacterianas. No homem, estas se encontram em vrias superfcies, especialmente na cavidade oral e trato intestinal. (Departamento de Microbiologia ICB / UFMG) MATERIAL:

- Cinco placas de Petri contendo BDA (gar Batata Dextrosado) por grupo. EXECUO:

- Identificar as placas quanto turma, mesa e data; - Numerar as placas de 1 a 4 e reservar uma para controle; - Escolher um local para verificar a presena dos microrganismos; - Deixar as placas 1 e 3 expostas ao ar por 5 e as placas 2 e 4 por 15; - Incubar as placas 1 e 2 a 37C e as placas 3 e 4 temperatura ambiente; - A placa controle dever ser tambm incubada a 37C; - Anotar as caractersticas do local onde as placas foram expostas; - As placas ficaro incubadas durante 7 dias e aps armazenadas em geladeira; - Anotar os resultados em uma tabela aps o perodo de incubao. OBSERVAES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________

PMG.3 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS

ASSUNTO: Isolamento e obteno de cultura pura de bactrias e fungos do ambiente.

INTRODUO: Obteno de Culturas Puras

Materiais infecciosos ou amostras de solo, gua, ar e alimentos apresentam uma grande variedade de microrganismos, principalmente bactrias e fungos. Quando colocamos ou expomos o meio de cultura a estas amostras, podero crescer uma infinidade de colnias de microrganismos, que teoricamente originaram-se de uma nica clula vegetativa deste microrganismo. Estes podem ser diferenciados enquanto crescem na placa com meio de cultura por possurem caractersticas morfolgicas de colnia diferentes, como cor, textura, borda, etc. Estudos laboratoriais em microbiologia geralmente trabalham com os

microrganismos isolados e em cultura pura, ou seja, primeiramente necessrio que o microrganismo estudado cresa unicamente sobre o meio de cultura, e depois, que ele tenha crescido de uma nica clula vegetativa. Para obteno de cultura pura, geralmente usado um mtodo chamado Mtodo de semeadura por esgotamento, que consiste em: a partir de uma ala de inoculao, com o microrganismo desejado, espalhar este microrganismo numa placa, de maneira que no final da semeadura tenha poucos microrganismos na placa com o meio e assim possam se originar colnias de microrganismos contendo somente um tipo de bactria, ou seja, uma cultura pura. (Microbiologia BLACK)

MATERIAL:

- Quatro placas de Petri contendo os microrganismos isolados do ambiente; - Uma placa de Petri com meio para crescimento de bactrias; - Uma placa de Petri com meio para crescimento de fungos; - Alas de inoculao; - Bico de Bunsen. EXECUO:

- Primeiramente se deve escolher uma colnia com caractersticas de bactria e uma com caracterstica de fungo para fazer o isolamento e cultura pura;

- Depois se deve observar e anotar as caractersticas morfolgicas da colnia selecionada, como: forma, tamanho, cor elevao e borda; - Tambm se deve observar e anotar se ocorreu formao de sedimentos, turvao homogenia do meio, ou pelcula superficial. - Esterilizar a ala de inoculao, toc-la na colnia escolhida e seme-la no meio de cultura; - Antes de cada arrastamento da colnia na placa, esterilizar a ala; - Identificar a placa com nome do grupo, turma e data e a letra F (fungo) e B (bactria); - As placas devero ser incubadas na temperatura em que as colnias originais estavam por 36 horas. CUIDADOS IMPORTANTES:

- Cuidado com as condies de assepsia; - Escolher uma colnia que esteja bem separada das outras; - Tocar a ala apenas em uma colnia; - Os movimentos da ala na superfcie do meio de cultura devem ser bem cuidadosos; - Somente abra as placas quando necessrio; - Trabalhe sempre atrs da chama do bico de Bunsen.

OBSERVAES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________

PMG.4 TCNICA DE COLORAO DE GRAM E MICROCULTIVO DE FUNGOS

ASSUNTO: Tcnica de colorao de Gram para bactrias e Microcultivo de fungos.

INTRODUO: Tcnica de Colorao de Gram

A tcnica de Gram uma colorao diferencial, isto , a capacidade entre vrias bactrias da reteno de alguns corantes. Na colorao de Gram algumas bactrias resistem descolorao por um maior perodo de tempo que outras. Na colorao de Gram o corante primrio, o violeta de genciana, aplicado a um esfregao bacteriano. Aplica-se em seguida o mordente, soluto de Lugol, uma substncia que intensifica a reao entre a clula e o corante. O diferenciador (soluo lcoolacetona) usado para descorar algumas clulas. As bactrias Gram-negativas descoram mais rapidamente que as Gram-positivas. O tempo de atuao do diferenciador essencial para a obteno de uma boa colorao. Aps lavagem com gua as bactrias que descoraram no passo anterior so coradas com o corante de contraste de cor rosa, fucsina de Ziehl diluda ou safranina. No final, as clulas coradas de roxo so designadas de Gram-positivo e as coradas de rosa, de Gramnegativo. A tcnica de Gram uma forma rpida e fcil de avaliar a estrutura da parede celular bacteriana. As paredes celulares das bactrias Gram-positivas so estruturalmente diferentes das de Gram-negativo. As clulas Gram-positivas apresentam uma camada de peptideoglicano mais espessa, enquanto que, nas bactrias Gram-negativas a camada mais fina e apresenta uma membrana externa. A natureza qumica da parede celular bacteriana o fator predominante do

resultado da colorao de Gram. Clulas velhas ou que tenham sido submetidas a fatores fsico ou qumicos que comprometam a integridade da parede celular afetam o resultado da colorao. (Faculdade de Farmcia da Universidade de Coimbra) MATERIAL: Gram - Placa de Petri contendo o microrganismo isolado do ambiente com caractersticas de bactria; - Lmina;

- Lamnula; - Alas de inoculao; - Violeta de Genciana; - Soluo de Lugol; - lcool-acetona; - Fucsina de Ziehl; - gua destilada; - Bico de Bunsen. Microcultivo - Placa de Petri contendo o microrganismo isolado do ambiente com caractersticas de fungo; - Lamnula estril; - Alas de inoculao; - Placa de Petri estril com lmina em suporte de madeira; - Algodo estril umedecido em gua destilada estril; - Placa com meio de cultura gar Batata; - Tubos de Duran; - Pina de ponta fina; - Bico de Bunsen.

EXECUO: Gram 1. 2. Preparar um esfregao bacteriano; Cobrir o esfregao com Violeta de Genciana e deixar atuar o corante durante 30

segundos; 3. 4. Eliminar o excesso de corante; Cobrir o esfregao com soluo de Lugol e deixar atuar o mordente durante 30

segundos; 5. 6. Dispensar o excesso de mordente; Inclinar a lmina e deixar cair GOTA a GOTA o diferenciador lcool-Acetona

durante 5 a 10 segundos; 7. 8. Lavar IMEDIATAMENTE com gua destilada; Cobrir o esfregao com Fucsina de Ziehl diluda e deixar atuar o corante durante 10

segundos;

9. 10.

Eliminar o excesso de corante; Lavar com gua destilada e secar o excesso de gua (com papel na parte de trs)

e chama muito rapidamente (para no partir); 11. Guardar a lmina para o observao no microscpio. Microcultivo 1. Cortar um pedao do meio de cultura gar Batata com auxlio da boca do Tubo

de Duran; 2. 3. Colocar um pedao de gar batata no centro da lmina do microcultivo; Com a ala, cortar pedaos bem pequenos da colnia do bolor, crescidos no gar e

colocar nos quatro lados do pedao de gar batata ; 4. 5. Cobrir com lamnula estril, pressionando levemente; Colocar o algodo com gua destilada estril e deixar a temperatura ambiente

repondo a gua estril, sempre que necessrio. 6. 7. Deixar por 10-15 dias, dependendo da velocidade do crescimento do fungo. Para montar, retirar a lamnula com pina estril. Fixar o fungo na lamnula

colocando 1 a 2 gotas de lcool e esperar secar. 8. 9. Montar essa lamnula em lmina limpa, com 1 gota de Lacto fenol azul-algodo. A lamnula pode ser vedada com esmalte de unha ou Entellan para conservar

por mais tempo. OBS: todos os passos acima devem ser feitos em condio estril, ou seja, perto da chama!!!

OBSERVAES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________

PMG.5 TCNICA DE MICROSCOPIA

ASSUNTO: Uso do microscpio para visualizao de lminas de Gram para bactrias e lminas de microcultivo de fungos.

INTRODUO: MICROSCOPIA

Inicialmente, examine o microscpio que lhe corresponde e observe os itens listados abaixo. Verifique as instrues do funcionamento e manuseio correto dos componentes listados. Os componentes do microscpio: a) Base b) Platina ou mesa c) Charriot d) Canho e) Revolver f) Objetiva g) Ocular h) Parafuso macro e micromtrico i) Condensador j) ris-diafragma k) Espelho ou lmpada

Cuidados no uso do microscpio: a) Nunca for-lo. Todas as conexes devem funcionar suavemente. Caso contrrio, chame o professor; b) As lentes da objetiva nunca devem tocar a lmina. Portanto, nunca focalizar abaixando o canho com o parafuso macromtrico olhando para a ocular; c) No tocar as lentes. Se estiverem sujas, limpe-as com algodo ou com pano que sero fornecidos; d) Limpar sempre a objetiva de imerso aps o uso. Se o leo est endurecido, pode aplicar um pouco de xilol sobre o algodo. Cuidado, pois um excesso de xilol pode dissolver o cimento das lentes; e) No esquecer a lmina no microscpio aps o uso; f) Manter a platina sempre limpa e seca. Limpa-la com o guardanapo apropriado.

g) No inclinar o microscpio, pois neste curso quase todas as tcnicas empregadas exigem que a lmina seja examinada sempre na posio horizontal; h) Quando o microscpio no estiver em uso, dever ser guardado coberto ou em sua caixa; i) Habitue-se no deixar a fonte de luz acesa quando no estiver utilizando o microscpio. (CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS UFSC DEPARTAMENTO DE FITOTECNIA DISCIPLINA: FITOPATOLOGIA Prof. Marciel J. Stadnik)

MATERIAL:

- Microscpio; - Lmina de Gram; - Lmina e lamnula do microcutivo; - Corante Azul de algodo; - leo de imerso; - lcool;

EXECUO:

a) Com a amostra a ser examinada sempre na parte superior, colocar a lmina sobre a platina, tomando o cuidado de que a parte a ser examinada esteja bem no centro; b) Ajustar a iluminao de forma a que passe maior quantidade possvel de luz atravs da amostra; c) Colocar a objetiva de menor aumento e abaixar o canho utilizando o parafuso micromtrico at que a lente esteja cerca de 0,5 cm da lmina. Nunca efetuar esta operao olhando pela ocular; d) Olhar pela ocular e levantar levemente o canho at obter uma focalizao grosseira. Se no conseguir, repetir a operao; e) Aps focalizar grosseiramente, utilizar o parafuso micromtrico para uma focalizao fina; f) Acertar a quantidade de luz, movimentando o diafragma. A iluminao deve ser adequada, nem fraca nem excessiva. Nunca movimentar o condensador para baixo para diminuir a quantidade de luz. O condensador deve estar sempre em posio elevada; g) Se necessrio um aumento maior, girar o revolver para utilizar a objetiva de aumento 45X. Reajustar a focalizao com o parafuso micromtrico e a iluminao com o diafragma.

h) Para utilizar a objetiva 100X, necessria a colocao de uma gota de leo sobre a lmina depois da perfeita focalizao com as objetivas de aumento 10X e 45X. Observando lateralmente, girar o revolver at encaixar a objetiva de aumento 100X, ficando esta imersa no leo e sem que a lente toque na lmina. A seguir, reajustar o foco com o parafuso micromtrico e a iluminao. Nunca tentar focalizar diretamente com as objetivas de maior aumento. OBSERVAES:

PMG.6 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS DO CORPO HUMANO

ASSUNTO: Isolamento de microrganismos presentes na microbiota normal do corpo humano.

INTRODUO:

No corpo humano h uma grande variedade de bactrias que so habitantes normais de determinados stios anatmicos, desempenhando funes benficas para o organismo. Estas bactrias so chamadas de bactrias da microbiota normal. Todo ser humano nasce sem microrganismos. A microbiota normal humana desenvolve-se por sucesses, desde o nascimento at as diversas fases da vida adulta, resultando em comunidades bacterianas estveis. As diversas partes do corpo humano apresentam condies ambientais diversas que oferecem certas vantagens e desvantagens para a vida microbiana. Diferentes espcies de microrganismos adaptam-se aos distintos ambientes do corpo. Os fatores que controlam a composio da microbiota em uma dada regio do corpo esto relacionados com a natureza do ambiente local, tais como temperatura, pH, gua, oxigenao, nutrientes e fatores mais complexos como a ao de componentes do sistema imunolgico. Estima-se que o corpo humano que contm cerca de 10 trilhes de clulas seja rotineiramente portador de aproximadamente 100 trilhes de bactrias. A composio da microbiota bacteriana humana relativamente estvel com gneros especficos ocupando as diversas regies do corpo durante perodos particulares na vida de um indivduo. A microbiota humana desempenha funes importantes na sade e na doena. Os microrganismos membros da microbiota humana podem existir como (1) mutualistas, quando protegem o hospedeiro competindo por micro-ambientes de forma mais eficiente que patgenos comuns (resistncia colonizao), produzindo nutrientes importantes e contribuindo para o desenvolvimento do sistema imunolgico; (2) comensais, quando mantm associaes aparentemente neutras sem benefcios ou malefcios detectveis e (3) oportunistas, quando causam doenas em indivduos imunocomprometidos devido infeco pelo vrus HIV, terapia imunossupressora de transplantados, radioterapia, perfuraes das mucosas. A microbiota humana constitui um dos mecanismos de defesa contra a patognese bacteriana, mas ainda que a maioria dos componentes da microbiota normal seja quimioterapia anticncer, queimaduras extensas ou

inofensiva a indivduos sadios, esta pode constituir um reservatrio de bactrias potencialmente patognicas. Muitas bactrias da microbiota normal podem agir como oportunistas. Nestas condies a microbiota residente pode ser incapaz de suprimir patgenos transitrios, ou mesmo, alguns membros da microbiota podem invadir os tecidos do hospedeiro causando doenas muitas vezes graves. Em indivduos sadios, algumas espcies de bactrias da microbiota oral causam cries em 80% da populao. Microrganismos essencialmente parasitas no so considerados como membros da microbiota normal uma vez que unicamente prejudicam o hospedeiro.

MICROBIOTA DA PELE A superfcie da pele apresenta diversos tipos de micro-ambientes, em reas mais secas ou mais midas, que apresentam populaes bacterianas mais esparsas ou mais densas, respectivamente. Nas regies mais midas, como axilas, virilhas, espao entre os dedos dos ps, genitlia e perneo, predominam organismos Gram-positivos como Staphylococcus aureus e Corinebacterium sp. Nessas reas, condies como umidade, maior temperatura corporal e maior concentrao de lipdios cutneos de superfcie favorecem o crescimento bacteriano. Nas reas secas predominam as bactrias Staphylococcus epidermidis e Propionibacterium acnes. De modo geral, organismos Gram-positivos so os membros predominantes da superfcie corporal. Um alto grau de especificidade est envolvido na aderncia de bactrias nas superfcies epiteliais. Nem todas as bactrias so capazes de se aderirem pele.

MICROBIOTA DA CONJUNTIVA Por causa de sua constante exposio ao meio externo, a conjuntiva est sujeita a intensa contaminao microbiana. Contudo, a conjuntiva apresenta um sistema de proteo bastante eficaz. A ao enxaguatria da lgrima atravs dos movimentos das plpebras remove a sujeira e os microrganismos que entram em contato com a conjuntiva. Em adio ao fato de a lgrima ser um meio de cultura pobre, na sua composio encontram-se imunoglobulinas, lactoferrina e lisozima. As imunoglobulinas (IgG) inativam inmeras bactrias, a lactoferrina atua como seqestrante de ferro que um nutriente mineral essencial para o metabolismo bacteriano e a lisozima uma enzima que impede a formao de paredes celulares bacterianas Quando algum fator rompe o equilbrio entre a microbiota residente e a transitria, pode haver o desenvolvimento de doenas. Dentre estes fatores encontram-se o

desequilbrio

imunolgico,

uso

indiscriminado

de

colrios

contendo

agentes

antimicrobianos ou corticides.

MICROBIOTA DA CAVIDADE ORAL As caractersticas ambientais da cavidade oral, tais como alta umidade, temperatura relativamente constante (34 a 36C), pH prximo da neutralidade e disponibilidade de nutrientes, permitem o estabelecimento de uma microbiota altamente complexa composta por cerca de 500 grupos bacterianos que habitam as diversas reas da boca. Muitas dessas bactrias esto associadas formao da placa bacteriana sobre a superfcie dos dentes com conseqente formao de cries e ocorrncia de doenas periodontais. A composio da microbiota oral varia com a idade, hbitos alimentares, hormnios, fluxo salivar, condies imunolgicas e outros fatores como higienizao e alcoolismo.

MICROBIOTA DA NASOFARINGE A faringe aprisiona a maioria das bactrias que so inaladas. O trato respiratrio superior a porta de entrada para a colonizao inicial por muitos patgenos, j o trato respiratrio inferior (brnquios e alvolos), so normalmente estreis porque partculas do tamanho de bactrias no os atingem prontamente.

MICROBIOTA DO ESFAGO O esfago sadio e anatomicamente normal um rgo praticamente estril e bactrias se presentes so apenas transitrias. Contudo, condies patolgicas podem alterar a anatomia do esfago e predispor o rgo ao estabelecimento de uma microbiota residente, constituda de microrganismos potencialmente patognicos.

MICROBIOTA DO ESTMAGO No estmago os microrganismos so geralmente transitrios e sua densidade populacional mantida baixa devido s severas condies ambientais. A quantidade de bactrias logo aps as refeies, estimada em cerca de 103 a 106 bactrias por grama de contedo estomacal, sendo praticamente indetectvel aps a digesto.

MICROBIOTA DO TRATO INTESTINAL A quantidade de bactrias e o nmero de espcies presentes em dado segmento do trato gastrointestinal so afetados pelo pH e tempo de reteno de seu contedo. O

baixo pH do contedo estomacal e o fluxo rpido de contedo do intestino delgado tende a inibir o crescimento de muitas bactrias. Por outro lado, o pH relativamente neutro e a prolongada reteno de contedo no intestino grosso permitem o desenvolvimento de comunidades microbianas complexas compostas por centenas de distintas espcies de bactrias. As bactrias residentes do trato gastrintestinal contribuem para a dieta fermentando carboidratos indigerveis como a celulose em cidos graxos que so fontes de energia para as clulas do epitlio intestinal e facilitam a absoro de sdio e gua, alm de sintetizarem protenas e vitaminas do complexo B.

MICROBIOTA DA VAGINA As comunidades bacterianas que colonizam a vagina consistem de uma mistura complexa, multi-especfica, de bactrias Gram-positivas e Gram-negativas, com predominncia de espcies anaerbicas. A composio da microbiota vaginal varia de pessoa a pessoa, com a idade, pH to trato vaginal e nveis hormonais. As maiores alteraes ocorrem nas infeces bacterianas da vagina. No primeiro ms de vida, bactrias do gnero Lactobacillus predominam, o que mantm o pH vaginal em torno de 5. A partir do primeiro ms at a puberdade predominam S. epidermidis, Streptococcus spp e E. coli e pH vaginal eleva-se em torno de 7. Entre a puberdade e a menopausa, devido ao do estrognio, ocorre secreo de glicognio no trato reprodutivo feminino e os membros predominantes da microbiota passam a ser membros dos gneros Lactobacillus, Corinebacterium, Staphylococcus, Streptococcus e Bacteroides. Devido prevalncia da espcie Lactobacillus acidophilus, o pH do trato vaginal decresce e se estabiliza em torno de 5. Aps a menopausa, com a diminuio da produo de estrognio, a secreo de glicognio diminui, o pH vaginal se eleva em torno de 7 e a composio da microbiota volta a ser aquela caracterstica da pr-puberdade.

EFEITO PROTETOR DA MICROBIOTA Microbiota das vias areas superiores As vias areas superiores so protegidos por uma microbiota residente que evita a colonizao destas reas por patgenos. Cocos Gram-positivos so componentes proeminentes, mas muitos outros tipos de bactrias so tambm encontrados nestes stios.

 Microbiota intestinal O trato intestinal protegido de patgenos de vrias formas. O ambiente cido do estmago, e as enzimas proteolticas secretadas pelas clulas gstricas matam muitas das bactrias que so ingeridas. A microbiota do clon um ecossistema complexo com a importante funo de controlar populaes de muitos microrganismos patognicos. Em humanos, a antibioticoterapia pode suprimir a microbiota residente e permitir que determinados anaerbios tornem-se predominantes e causem doenas. Apesar dessa funo protetora, muitos dos membros dessa microbiota podem causar doenas. Os anaerbios do trato intestinal so agentes primrios de abscessos intra-abdominais e peritonites. Perfuraes no intestino causadas por apendicites, cncer, cirurgias e ferimentos quase sempre contaminam a cavidade peritonial e rgos adjacentes. Microbiota vaginal Existem evidncias de que a microbiota bacteriana do trato vaginal reduz a probabilidade de que patgenos tais como bactrias, protozorios parasitas, leveduras ou vrus se estabeleam na vagina. Os lactobacilos vaginais produzem cidos lticos que mantm baixo o pH das secrees vaginais, inibindo o crescimento de muitas bactrias, competem por receptores de aderncia, no epitlio vaginal, produzem substncias antimicrobianas como perxido de hidrognio e bacteriocinas, se co-agregam com outras bactrias e estimulam o sistema imune vaginal superficial incrementando os mecanismos de defesa locais contra bactrias no-residentes. A importncia da microbiota vaginal normal na proteo contra patgenos pode ser evidenciada no fato de que a terapia com antibiticos pode predispor mulheres aquisio de infeces genito-urinrias, como as causadas por fungos do gnero Candida. (INSTITUTO DE CINCIAS BIOMDICAS USP DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA - DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA BSICA Profa. Elisabete J. Vicente)

MATERIAL:

- Swab; - Placas com meio gar sangue ou TSA; - lcool;

EXECUO:

1.

Coletar material da orofaringe ou outro stio anatmico mido do corpo humano,

utilizando um swab; 2. Esgotar o material coletado na superfcie do meio gar-sangue, ou gar TSA e

espalhar com a ala ou swab; 3. Incubar a as placas a 37C, por 24h.

RESULTADOS:

Anotar os resultados obtidos. No se esquea de anotar de qual stio foi recolhido o material. ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________