FUNDAÇÃO ESCOLA TÉCNICA SALZANO VIEIRA DA CUNHA CURSTO TÉCNICO DE QUÍMICA ANÁLISE QUIMÍCA

PRÁTICAS DE ESPECTROFOTOMETRIA

ANA KARINA DE BARROS CHRIST (03) TURMA 1411

Novo Hamburgo, 02 de agosto de 2011

muitas vezes.cal. o pico de absorção pode ser correlacionado com o tipo de ligação que existe na espécie que está sendo estudada.1. e 72 a 36 k. FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA 1. As freqüências .mol -1 na região ultravioleta.1 O Espectro Eletromagnético A região ultravioleta do espectro é geralmente considerada na faixa de 200 a 400 nm. As energias correspondentes a essas regiões são ao redor de 150 a 72 k. 1. em primeiro lugar.2 As ondas eletromagnéticas As ondas eletromagnéticas que formam o espectro diferem-se uma das outras pela freqüência de propagação e pela forma como são produzidas. à diferença entre estados eletrônicos de muitas moléculas. do número e do arranjo dos elétrons nas moléculas ou íons absorventes. e a região do visível entre 400 a 800 nm. Energias dessa magnitude correspondem.mol-1 para a região visível. Como conseqüência.cal. A absorção da região visível e ultravioleta depende.

O fator que mede a capacidade de um objeto de refletir a energia radiante indica a sua refletância. Em geral a parte absorvida é transformada em calor ou em algum outro tipo de energia e a parte refletida se espalha pelo espaço. entretanto. outras interagem a nível molecular. Observe a figura seguinte: . alto para a absorbância e nulo para a transmitância.3 Princípios da Espectrofotometria A espectrofotometria visível e ultravioleta é um dos métodos analíticos mais usados nas determinações analíticas em diversas áreas. como. É aplicada para determinações de compostos orgânicos e inorgânicos. por exemplo. absorvida ou mesmo transmitida (no caso de objetos transparentes). a capacidade de transmitir energia radiante é indicada pela sua transmitância. A refletância. A espectroscopia de absorção molecular é valiosa para a identificação dos grupos funcionais na molécula. absorbância e a transmitância costumam ser expressas em percentagem (ou por um número entre 0 e 1). na identificação do princípio ativo de fármacos. outras até em nível subatômico.1 Absorbância e transmitância Quando a radiação interage com um objeto. Mais importante.são tão diferentes que algumas ondas não interagem com a matéria. enquanto que a capacidade de absorver energia radiante é indicada pela sua absorbância e. são as aplicações da espectroscopia de absorção visível/ ultravioleta para a determinação quantitativa de compostos contendo grupos absorventes. 1. Certamente um objeto escuro e opaco tem um valor baixo para a refletância. 1.3. pode ser refletida. da mesma forma.

embora.L . Só 92 anos depois é que a lei foi modificada de forma a incluir a concentração da solução na fórmula de cálculo. maior a absorção da luz.C. Sabe-se que quanto maior a concentração da amostra. contudo. Além da absorbância. No seu trabalho em 1760. Este fato é conhecido como lei de Lambert.Ela representa uma intensidade de luz atingindo uma cubeta com amostra e outra intensidade saindo do recipiente. A absorção da região visível e ultravioleta depende principalmente do número e do arranjo dos elétrons nas moléculas ou íons absorventes. Ao passar um feixe de luz de intensidade conhecida (Io) através de uma amostra e medir-se a intensidade da luz que emergiu. Quase um século depois. Note que a intensidade inicial é maior. frequentemente atribuída de forma errada ao matemático. também conhecida como lei de Beer ou lei de Beer-Lambert-Bouguer. Essa modificação foi da autoria do físico e matemático alemão August Beer (1825-1863). Assim foi possível construir a Lei de Lambert-Beer. pode-se também medir a capacidade de transmitir energia radiante. A sua autoria é. geofísico e astrônomo francês Pierre Bouguer (1698-1758). concluindo que a intensidade da radiação transmitida decresce exponencialmente quando a concentração do meio aumenta aritmeticamente.A transmitância (T) da amostra pode ser calculada conforme a seguinte relação: T = I t / Io 1. denominada transmitância. Como conseqüência. físico e astrônomo francês Johann Lambert (1728-1777). August Beer estudou a influência da concentração de soluções coloridas sobre a transmissão de luz. o pico de absorção pode ser relacionado com o tipo de ligação que existe na espécie que está sendo estudada.4 Lei de Lambert-Beer Esta lei foi descoberta pela primeira vez em 1729 pelo matemático. desde que a espessura do meio seja mantida constante. na realidade. isso ocorre porque a amostra absorveu parte da energia. Lambert citou a descoberta de Bouguer e constatou que a fração de luz que é absorvida por uma amostra é independente da potência radiante incidente (Pλo). que relaciona associa a absorção de luz com as propriedades do material atravessado pela onda: A= Log (I0/ It) =E. só seja verdadeira se (Pλo) for pequeno e se a extensão de outros fenômenos como a dispersão da luz ou reações fotoquímicas for desprezível.

são cada vez mais significativos. moléculas ou íons. como por exemplo. correspondente ao comprimento máxima). moléculas ou íons) presentes em solução devem O meio absorvente deve ser homogêneo (solução) e não dispersar a A radiação incidente deve estar colimada (raios paralelos entre si) e deve absorver a luz de forma independente entre si. isto é. a dispersão da luz. são necessários que estejam reunidos alguns pré-requisitos.  A radiação deve ser monocromática. pois alguns processos como.  radiação. Em geral. pelo que não podem ser ignorados. Normalmente. na qual já se conhece a concentração do soluto.  comprimento de onda para o qual a absorbância da espécie em estudo é O fluxo da radiação incidente não pode induzir processos que impliquem a desestabilização dos átomos. nomeadamente:  As partículas (átomos. por exemplo. verificam-se desvios à lei para concentrações mais elevadas. que . ser composta por apenas um de onda selecionado (normalmente.4. excitação eletrônica que dê origem a fenômenos de fluorescência ou fosforescência. Caso não estejam reunidas estas condições. então se verificam desvios à referida lei.  atravessar a mesma distância durante a qual interage com as partículas existentes em solução.Onde: A= Absorbância I0= intensidade de luz incidente It= intensidade de luz transmitida E= constante de proporcionalidade (quando em mol/L é chamada de coeficiente de absorção molar) C = concentração da amostra L = espessura da solução atravessada ou caminho ótico Para a correta utilização e aplicação da lei de Lambert-Beer. é utilizada uma solução-padrão com diferentes concentrações (pontos). 1.1 Curva de calibração A determinação de concentração de um soluto em uma solução-problema por espectrofotometria envolve a comparação da absorbância da solução-problema com uma solução de referência.

1. Nesse gráfico. indica a proporcionalidade entre o aumento da concentração e da absorbância e a porção linear correspondente ao limite de sensibilidade do método espectrofotométrico para o soluto em questão. Segue abaixo uma representação genérica deste: . pode-se traçar um gráfico cujo perfil é conhecido como “curva-padrão”. Esses pontos são preparados diluindo-se a solução-padrão na proporção necessária para a obtenção das concentrações desejadas.4. de modo a que a absorbância resultante esteja contida no intervalo da reta de calibração.2 Formando um espectro Ao pegarmos uma amostra de certa concentração e nela aplicarmos uma quantidade de luz. Segue abaixo um exemplo de curva de calibração genérica: Muitas vezes o método só é linear até uma certa concentração da substância.tem sua absorbância determinada. Com os valores de absorbância e de concentração conhecidos. variando apenas o comprimento de onda dessa luz. Com esses valores é possível criar um gráfico que relacione o comprimento da onda com a absorção realizada pela amostra. À esse gráfico deu-se o nome de espectrograma. a reta. descobrimos que para cada um dessas valores de comprimento tem-se um valor de absorção. diluindo a solução a medir. sempre que necessário. Nesse caso. utiliza-se a zona em que a relação é linear.

A característica mais importante dos espectrofotômetros é a seleção de radiações monocromáticas. Os espectrofotômetros. em geral. segundo o dado registrado for de absorbância ou transmitância. Este registro é chamado de espectro de absorção ou de espectro de transmissão. monocromador.5 Espectrofotômetros Espectrofotômetros são instrumentos capazes de registrar dados de absorbância ou transmitância em função do comprimento de onda. contêm cinco componentes principais: fontes de radiação. o que possibilita inúmeras determinações quantitativas regidas pela Lei de Beer. recipientes para conter as soluções. O espectro de absorção é característico para cada espécie química.1. são necessários componentes óticos de quartzo e detectores altamente sensíveis capazes de detectar radiações nessa extensa faixa espectral em que atua o instrumento. detectores e indicadores de sinal. respectivamente. . Quando a região espectral usada é a ultravioleta/visível. sendo possível a identificação de uma espécie química por seu “espectro de absorção”.

0 cm.1 Objetivo Construção do gráfico da Variação da Transmitância em função do comprimento de onda. Os recipientes usados para se colocar a amostra são as cubetas. 2. PRÁTICAS 2.Os espectrofotômetros podem ser de feixe simples ou de feixe duplo. Os de feixe duplo são aqueles onde parte da radiação atinge a amostra e outra parte é desviada com espelhos a fim de atingir outro recipiente. Espectrofotômetro utilizado: FENTO 600 plus . esses aparelhos necessitam de uma fonte de alimentação de alta sensibilidade. Nos de feixe simples. dependendo da região de comprimento de onda que se deseja avaliar. Sua função é eliminar variações de leituras em função da variação na fonte de alimentação. respectivamente.1 Objetivo Teve-se como objetivo nas práticas realizadas a familiarização com tipos de espectrofotômetros e fazer as leituras de absorbância e transmitância de soluções de permanganato de potássio. possibilitando a construção do espectro da amostra. a radiação monocromática atine totalmente a amostra. sílica fundida ou quartzo.2. 2. ferro II e níquel II e colocar em cubetas de 1. Preparar outra cubeta com água destilada. Colocar no equipamento espectrofotômetro e fazer as leituras de transmitância para valores de comprimentos de onda entre 440nm-750nm. feitas geralmente de vidro.2 Prática 1 2. que contém uma solução branco. e por causa disso. 2. Devem ser transparentes. assim como sua curva de calibração do permanganato de potássio e constatação da lei de Lambert-Beer.2. absorverem pouco ou nada da radiação e devem também ter forma e tamanho específicos. ferro II e níquel II. ou seja.2 Procedimento Preparar duas soluções contendo.

5 Discussão Com os resultados e dados coletados pudemos ver experimentalmente a relação entre os comprimentos de ondas e as transmitâncias de cada amostra.2. Foi possível verificar que as curvas de transmissão são características de cada substância.4 34.2.6 1.2 5.8 59.4 7.9 7.5 66 69.2 Procedimento .1 Objetivo Construção do gráfico Variação da Absorbância em função do comprimento de onda.1 5.1 Nm 600 610 620 630 640 650 660 670 A 88.2.9 B 64.7 98. 2.3 96.5 19.2 61.2.3.2 80.6 54.1 A partir dos dados recolhidos foi possível criar o espectrograma das amostras: 2.8 23.8 49.7 14.8 68.7 B 26.7 6 5.2 0.4 93.3 54.9 7.9 7.5 7.7 67.2 9.3 nm 680 690 700 710 720 730 740 750 A 99.3.1 97.6 61.3 Prática 2 2.3 Dados recolhidos 2.5 Nm 520 530 540 550 560 570 580 590 A 0.2 7. 2.7 99.8 100 100 100 100 100 100 B 6.7 99.3 39.2 53.5 10.2 99.5 99.8 63.3 42.1 0 0 0 0 0 0 B 38 45.1 68.4 Resultados Nm 440 450 460 470 480 490 500 510 A 0.4 5.

329 0. .0002M em uma cubeta de 1.001 0 2.5 Discussão Com os resultados e dados coletados conseguimos ver experimentalmente a relação entre a concentração da amostra e sua concentração.225 0.034 0.005 0.0cm. Em outra cubeta de 1.228 0.122 0.045 0.002 0.017 0.015 nm 680 690 700 710 720 730 740 750 A 0.3 Dados recolhidos nm 440 450 460 470 480 490 500 510 A 0.079 0. Colocar no equipamento espectrofotômetro e fazer as leituras de absorbância para valores de comprimentos de onda entre 440nm-750nm.119 0.029 0.3.026 0.287 0.059 0.004 0.0 cm colocar água destilada.011 0.4 Resultados A partir dos dados recolhidos foi possível criar o espectrograma das amostras: 2.04 Nm 600 610 620 630 640 650 660 670 A 0. Espectrofotômetro utilizado: FEMTO 600 plus 2.3.02 0.Colocar uma solução de KMnO4 0.193 0.34 Nm 520 530 540 550 560 570 580 590 A 0.357 0.031 0.3.024 0.168 0.009 0.337 0.007 0.022 0.

Determinação da concentração desconhecida de uma solução de KMnO4 a partir da curva de calibração.4 Resultados Com os resultados obtidos construiu-se a curva de calibração: Absorbâncias lidas 0.210 0.4.9927 5 0. Fluxograma: Espectrofotômetro utilizado: FEMTO 600 plus 2.1 Objetivo Construção da curva padrão da análise do permanganato de potássio.801 0.00005 0.517 0.4.2 Procedimento Medir. a absorbância de 5 soluções padrão de KMnO4 e a absorbância da amostra cuja concentração é desconhecida.412 0. em um espectrofotômetro.2093 1 0.609 0.609 0.991 0.5167 Amostra x 2.0001 0.4.609 0. 2.411 0.4 Prática 3 2.799 0.4.210 0.609 3 0. Anotando os valores para posteriormente criar uma curva de calibração.3 Dados recolhidos Soluções Concentração Absorbância 0.208 0.7987 4 0.00015 0.4117 2 0.996 0.517 .0002 0.00025 0.412 0.516 0.796 0.991 0.2.

HOLMES. J.018 x = 1. Espectrofotometria UV-visível. 2. b=deslocamento da reta e x= concentração Média de absorbância da amostra (y) = 0.net/b. R.5 Cálculos y = ax + b y = 3907x + 0.. editora UFSM SOUZA. D. & JONES. Cortez. A concentração encontrada foi 1.E a partir dela calculou-se a concentração da amostra.4. Maria Elisabeth do Canto.J.018 0. Acesso em 21/06/2011.. Disponível em <http://www. Polígrafo Espectrofotometria de Absorção Molecular nas Regiões do UV-Visível REED.5167 = 3907x + 0.018 a = tg α y= Absorbância. Departamento de Engenharia Química. 1998. Leori. Practical Skills in Biomolecular Sciences. Prentice Hall VINADÉ.2764x10-4 BIBLIOGRAFIA TARTARI.A. Bruno L.5167 y = 3907x + 0. Ed.cortez/aula-05espectrofotometria-uv-vis>.slideshare.Métodos espectroscópicos de analise quantitativa. a= coeficiente angular.2764x10-4M. . WEYERS.

Cusak.ESPECTROFOTOMETRIA.usp. SCRIBD em 21/06/11 Richard T.com/doc/51607191/37/Espectroscopia-de-absorcao-molecular Acesso .if. Disponível em : em: http://plato.html Acesso em 21/06/11 Disponível http://pt.br/~fap0181d/espectrofotometria.scribd.

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