FUNDAÇÃO ESCOLA TÉCNICA SALZANO VIEIRA DA CUNHA CURSTO TÉCNICO DE QUÍMICA ANÁLISE QUIMÍCA

PRÁTICAS DE ESPECTROFOTOMETRIA

ANA KARINA DE BARROS CHRIST (03) TURMA 1411

Novo Hamburgo, 02 de agosto de 2011

do número e do arranjo dos elétrons nas moléculas ou íons absorventes.mol -1 na região ultravioleta.cal. A absorção da região visível e ultravioleta depende.2 As ondas eletromagnéticas As ondas eletromagnéticas que formam o espectro diferem-se uma das outras pela freqüência de propagação e pela forma como são produzidas. e 72 a 36 k.mol-1 para a região visível. 1. muitas vezes. e a região do visível entre 400 a 800 nm.1 O Espectro Eletromagnético A região ultravioleta do espectro é geralmente considerada na faixa de 200 a 400 nm. Como conseqüência. As energias correspondentes a essas regiões são ao redor de 150 a 72 k.1. o pico de absorção pode ser correlacionado com o tipo de ligação que existe na espécie que está sendo estudada. As freqüências . FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA 1. à diferença entre estados eletrônicos de muitas moléculas. em primeiro lugar.cal. Energias dessa magnitude correspondem.

1 Absorbância e transmitância Quando a radiação interage com um objeto. da mesma forma. entretanto.3 Princípios da Espectrofotometria A espectrofotometria visível e ultravioleta é um dos métodos analíticos mais usados nas determinações analíticas em diversas áreas. absorvida ou mesmo transmitida (no caso de objetos transparentes). Observe a figura seguinte: . enquanto que a capacidade de absorver energia radiante é indicada pela sua absorbância e. na identificação do princípio ativo de fármacos.3. como. Em geral a parte absorvida é transformada em calor ou em algum outro tipo de energia e a parte refletida se espalha pelo espaço. outras até em nível subatômico. pode ser refletida. Certamente um objeto escuro e opaco tem um valor baixo para a refletância. absorbância e a transmitância costumam ser expressas em percentagem (ou por um número entre 0 e 1). alto para a absorbância e nulo para a transmitância. A espectroscopia de absorção molecular é valiosa para a identificação dos grupos funcionais na molécula.são tão diferentes que algumas ondas não interagem com a matéria. Mais importante. 1. É aplicada para determinações de compostos orgânicos e inorgânicos. 1. A refletância. são as aplicações da espectroscopia de absorção visível/ ultravioleta para a determinação quantitativa de compostos contendo grupos absorventes. outras interagem a nível molecular. por exemplo. a capacidade de transmitir energia radiante é indicada pela sua transmitância. O fator que mede a capacidade de um objeto de refletir a energia radiante indica a sua refletância.

contudo. isso ocorre porque a amostra absorveu parte da energia. físico e astrônomo francês Johann Lambert (1728-1777). August Beer estudou a influência da concentração de soluções coloridas sobre a transmissão de luz. concluindo que a intensidade da radiação transmitida decresce exponencialmente quando a concentração do meio aumenta aritmeticamente.Ela representa uma intensidade de luz atingindo uma cubeta com amostra e outra intensidade saindo do recipiente. Sabe-se que quanto maior a concentração da amostra. frequentemente atribuída de forma errada ao matemático. desde que a espessura do meio seja mantida constante. Quase um século depois. só seja verdadeira se (Pλo) for pequeno e se a extensão de outros fenômenos como a dispersão da luz ou reações fotoquímicas for desprezível. geofísico e astrônomo francês Pierre Bouguer (1698-1758). A sua autoria é. Só 92 anos depois é que a lei foi modificada de forma a incluir a concentração da solução na fórmula de cálculo. Essa modificação foi da autoria do físico e matemático alemão August Beer (1825-1863). A absorção da região visível e ultravioleta depende principalmente do número e do arranjo dos elétrons nas moléculas ou íons absorventes. No seu trabalho em 1760. na realidade.L . Além da absorbância. Note que a intensidade inicial é maior. embora. Ao passar um feixe de luz de intensidade conhecida (Io) através de uma amostra e medir-se a intensidade da luz que emergiu. denominada transmitância. Este fato é conhecido como lei de Lambert.C. maior a absorção da luz. também conhecida como lei de Beer ou lei de Beer-Lambert-Bouguer. Como conseqüência.A transmitância (T) da amostra pode ser calculada conforme a seguinte relação: T = I t / Io 1. Lambert citou a descoberta de Bouguer e constatou que a fração de luz que é absorvida por uma amostra é independente da potência radiante incidente (Pλo). que relaciona associa a absorção de luz com as propriedades do material atravessado pela onda: A= Log (I0/ It) =E. o pico de absorção pode ser relacionado com o tipo de ligação que existe na espécie que está sendo estudada. pode-se também medir a capacidade de transmitir energia radiante.4 Lei de Lambert-Beer Esta lei foi descoberta pela primeira vez em 1729 pelo matemático. Assim foi possível construir a Lei de Lambert-Beer.

isto é. 1.  A radiação deve ser monocromática. são cada vez mais significativos. são necessários que estejam reunidos alguns pré-requisitos. pois alguns processos como. ser composta por apenas um de onda selecionado (normalmente. moléculas ou íons. nomeadamente:  As partículas (átomos.1 Curva de calibração A determinação de concentração de um soluto em uma solução-problema por espectrofotometria envolve a comparação da absorbância da solução-problema com uma solução de referência. como por exemplo.  atravessar a mesma distância durante a qual interage com as partículas existentes em solução. que .4.Onde: A= Absorbância I0= intensidade de luz incidente It= intensidade de luz transmitida E= constante de proporcionalidade (quando em mol/L é chamada de coeficiente de absorção molar) C = concentração da amostra L = espessura da solução atravessada ou caminho ótico Para a correta utilização e aplicação da lei de Lambert-Beer.  radiação. a dispersão da luz. na qual já se conhece a concentração do soluto. é utilizada uma solução-padrão com diferentes concentrações (pontos). Normalmente.  comprimento de onda para o qual a absorbância da espécie em estudo é O fluxo da radiação incidente não pode induzir processos que impliquem a desestabilização dos átomos. então se verificam desvios à referida lei. moléculas ou íons) presentes em solução devem O meio absorvente deve ser homogêneo (solução) e não dispersar a A radiação incidente deve estar colimada (raios paralelos entre si) e deve absorver a luz de forma independente entre si. Caso não estejam reunidas estas condições. pelo que não podem ser ignorados. correspondente ao comprimento máxima). excitação eletrônica que dê origem a fenômenos de fluorescência ou fosforescência. por exemplo. verificam-se desvios à lei para concentrações mais elevadas. Em geral.

Nesse caso. Com os valores de absorbância e de concentração conhecidos. variando apenas o comprimento de onda dessa luz. utiliza-se a zona em que a relação é linear.2 Formando um espectro Ao pegarmos uma amostra de certa concentração e nela aplicarmos uma quantidade de luz. Segue abaixo um exemplo de curva de calibração genérica: Muitas vezes o método só é linear até uma certa concentração da substância. sempre que necessário. 1. a reta. Nesse gráfico. Segue abaixo uma representação genérica deste: . diluindo a solução a medir. Com esses valores é possível criar um gráfico que relacione o comprimento da onda com a absorção realizada pela amostra. pode-se traçar um gráfico cujo perfil é conhecido como “curva-padrão”. de modo a que a absorbância resultante esteja contida no intervalo da reta de calibração. À esse gráfico deu-se o nome de espectrograma. Esses pontos são preparados diluindo-se a solução-padrão na proporção necessária para a obtenção das concentrações desejadas.tem sua absorbância determinada. descobrimos que para cada um dessas valores de comprimento tem-se um valor de absorção.4. indica a proporcionalidade entre o aumento da concentração e da absorbância e a porção linear correspondente ao limite de sensibilidade do método espectrofotométrico para o soluto em questão.

A característica mais importante dos espectrofotômetros é a seleção de radiações monocromáticas. sendo possível a identificação de uma espécie química por seu “espectro de absorção”. contêm cinco componentes principais: fontes de radiação. são necessários componentes óticos de quartzo e detectores altamente sensíveis capazes de detectar radiações nessa extensa faixa espectral em que atua o instrumento. Os espectrofotômetros. respectivamente. em geral. O espectro de absorção é característico para cada espécie química.5 Espectrofotômetros Espectrofotômetros são instrumentos capazes de registrar dados de absorbância ou transmitância em função do comprimento de onda. recipientes para conter as soluções. detectores e indicadores de sinal. o que possibilita inúmeras determinações quantitativas regidas pela Lei de Beer. segundo o dado registrado for de absorbância ou transmitância. Quando a região espectral usada é a ultravioleta/visível. Este registro é chamado de espectro de absorção ou de espectro de transmissão.1. monocromador. .

1 Objetivo Construção do gráfico da Variação da Transmitância em função do comprimento de onda.2. ferro II e níquel II. Os recipientes usados para se colocar a amostra são as cubetas. Espectrofotômetro utilizado: FENTO 600 plus . Os de feixe duplo são aqueles onde parte da radiação atinge a amostra e outra parte é desviada com espelhos a fim de atingir outro recipiente. Devem ser transparentes. feitas geralmente de vidro. e por causa disso.0 cm. possibilitando a construção do espectro da amostra.1 Objetivo Teve-se como objetivo nas práticas realizadas a familiarização com tipos de espectrofotômetros e fazer as leituras de absorbância e transmitância de soluções de permanganato de potássio. esses aparelhos necessitam de uma fonte de alimentação de alta sensibilidade. 2. Preparar outra cubeta com água destilada. 2.2 Procedimento Preparar duas soluções contendo.2 Prática 1 2. sílica fundida ou quartzo. PRÁTICAS 2. Sua função é eliminar variações de leituras em função da variação na fonte de alimentação. ou seja. que contém uma solução branco. ferro II e níquel II e colocar em cubetas de 1.Os espectrofotômetros podem ser de feixe simples ou de feixe duplo.2. a radiação monocromática atine totalmente a amostra. 2. absorverem pouco ou nada da radiação e devem também ter forma e tamanho específicos. assim como sua curva de calibração do permanganato de potássio e constatação da lei de Lambert-Beer. Colocar no equipamento espectrofotômetro e fazer as leituras de transmitância para valores de comprimentos de onda entre 440nm-750nm. respectivamente. dependendo da região de comprimento de onda que se deseja avaliar. Nos de feixe simples.

4 Resultados Nm 440 450 460 470 480 490 500 510 A 0.5 10.3 42.3.3 nm 680 690 700 710 720 730 740 750 A 99.7 67.2 9.5 66 69.2 80.1 A partir dos dados recolhidos foi possível criar o espectrograma das amostras: 2.2 0.5 Nm 520 530 540 550 560 570 580 590 A 0.9 7.2 61.2.8 63.7 B 26.5 19.2 7. 2.8 49.3.6 61.3 39.2.5 7.7 6 5.4 5.1 0 0 0 0 0 0 B 38 45.4 7.3 Prática 2 2.1 Nm 600 610 620 630 640 650 660 670 A 88.5 Discussão Com os resultados e dados coletados pudemos ver experimentalmente a relação entre os comprimentos de ondas e as transmitâncias de cada amostra.7 99.7 99.2 53.5 99.2.9 7.3 Dados recolhidos 2.1 97.2 5.6 54. Foi possível verificar que as curvas de transmissão são características de cada substância.8 100 100 100 100 100 100 B 6.7 98.7 14.4 93.1 68.8 59.9 7.8 23.3 96.9 B 64.2. 2.3 54.2 Procedimento .8 68.6 1.4 34.1 Objetivo Construção do gráfico Variação da Absorbância em função do comprimento de onda.2 99.1 5.

4 Resultados A partir dos dados recolhidos foi possível criar o espectrograma das amostras: 2.122 0.287 0.119 0. Em outra cubeta de 1.337 0.026 0.3.007 0.079 0.031 0.0002M em uma cubeta de 1.011 0.024 0.002 0.017 0.04 Nm 600 610 620 630 640 650 660 670 A 0.02 0.228 0.3 Dados recolhidos nm 440 450 460 470 480 490 500 510 A 0.Colocar uma solução de KMnO4 0.3.034 0.059 0.5 Discussão Com os resultados e dados coletados conseguimos ver experimentalmente a relação entre a concentração da amostra e sua concentração.34 Nm 520 530 540 550 560 570 580 590 A 0.015 nm 680 690 700 710 720 730 740 750 A 0.3.168 0.005 0. Espectrofotômetro utilizado: FEMTO 600 plus 2.357 0.329 0.225 0.001 0 2.004 0. .193 0. Colocar no equipamento espectrofotômetro e fazer as leituras de absorbância para valores de comprimentos de onda entre 440nm-750nm.0cm.0 cm colocar água destilada.045 0.022 0.009 0.029 0.

Determinação da concentração desconhecida de uma solução de KMnO4 a partir da curva de calibração.4117 2 0.4. 2.412 0.4.517 0.3 Dados recolhidos Soluções Concentração Absorbância 0.0001 0. a absorbância de 5 soluções padrão de KMnO4 e a absorbância da amostra cuja concentração é desconhecida.4 Resultados Com os resultados obtidos construiu-se a curva de calibração: Absorbâncias lidas 0.210 0.00025 0.1 Objetivo Construção da curva padrão da análise do permanganato de potássio.2093 1 0.210 0.411 0.991 0.00005 0.4 Prática 3 2.801 0.9927 5 0.516 0.412 0.0002 0.517 .2. Fluxograma: Espectrofotômetro utilizado: FEMTO 600 plus 2.796 0.996 0.2 Procedimento Medir.991 0.4.4.609 0.208 0.7987 4 0. em um espectrofotômetro.00015 0. Anotando os valores para posteriormente criar uma curva de calibração.609 0.799 0.609 3 0.609 0.5167 Amostra x 2.

Acesso em 21/06/2011. editora UFSM SOUZA. Polígrafo Espectrofotometria de Absorção Molecular nas Regiões do UV-Visível REED.018 x = 1.net/b.. 2.5 Cálculos y = ax + b y = 3907x + 0. J.cortez/aula-05espectrofotometria-uv-vis>. Maria Elisabeth do Canto. A concentração encontrada foi 1.018 0. WEYERS. Prentice Hall VINADÉ. HOLMES.Métodos espectroscópicos de analise quantitativa.2764x10-4M.2764x10-4 BIBLIOGRAFIA TARTARI. Disponível em <http://www.E a partir dela calculou-se a concentração da amostra.4. R. b=deslocamento da reta e x= concentração Média de absorbância da amostra (y) = 0. Bruno L.. Ed. Espectrofotometria UV-visível.5167 y = 3907x + 0. Leori. a= coeficiente angular.A.5167 = 3907x + 0. Practical Skills in Biomolecular Sciences.slideshare.J. Departamento de Engenharia Química. . & JONES. Cortez.018 a = tg α y= Absorbância. 1998. D.

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