FUNDAO ESCOLA TCNICA SALZANO VIEIRA DA CUNHA CURSTO TCNICO DE QUMICA ANLISE QUIMCA

PRTICAS DE ESPECTROFOTOMETRIA

ANA KARINA DE BARROS CHRIST (03) TURMA 1411

Novo Hamburgo, 02 de agosto de 2011

1. FUNDAMENTAO TERICA 1.1 O Espectro Eletromagntico A regio ultravioleta do espectro geralmente considerada na faixa de 200 a 400 nm, e a regio do visvel entre 400 a 800 nm. As energias correspondentes a essas regies so ao redor de 150 a 72 k.cal.mol -1 na regio ultravioleta, e 72 a 36 k.cal.mol-1 para a regio visvel. Energias dessa magnitude correspondem, muitas vezes, diferena entre estados eletrnicos de muitas molculas. A absoro da regio visvel e ultravioleta depende, em primeiro lugar, do nmero e do arranjo dos eltrons nas molculas ou ons absorventes. Como conseqncia, o pico de absoro pode ser correlacionado com o tipo de ligao que existe na espcie que est sendo estudada.

1.2 As ondas eletromagnticas As ondas eletromagnticas que formam o espectro diferem-se uma das outras pela freqncia de propagao e pela forma como so produzidas. As freqncias

so to diferentes que algumas ondas no interagem com a matria, outras interagem a nvel molecular, outras at em nvel subatmico. 1.3 Princpios da Espectrofotometria A espectrofotometria visvel e ultravioleta um dos mtodos analticos mais usados nas determinaes analticas em diversas reas. aplicada para determinaes de compostos orgnicos e inorgnicos, como, por exemplo, na identificao do princpio ativo de frmacos. A espectroscopia de absoro molecular valiosa para a identificao dos grupos funcionais na molcula. Mais importante, entretanto, so as aplicaes da espectroscopia de absoro visvel/ ultravioleta para a determinao quantitativa de compostos contendo grupos absorventes. 1.3.1 Absorbncia e transmitncia Quando a radiao interage com um objeto, pode ser refletida, absorvida ou mesmo transmitida (no caso de objetos transparentes). Em geral a parte absorvida transformada em calor ou em algum outro tipo de energia e a parte refletida se espalha pelo espao. O fator que mede a capacidade de um objeto de refletir a energia radiante indica a sua refletncia, enquanto que a capacidade de absorver energia radiante indicada pela sua absorbncia e, da mesma forma, a capacidade de transmitir energia radiante indicada pela sua transmitncia. Certamente um objeto escuro e opaco tem um valor baixo para a refletncia, alto para a absorbncia e nulo para a transmitncia. A refletncia, absorbncia e a transmitncia costumam ser expressas em percentagem (ou por um nmero entre 0 e 1). Observe a figura seguinte:

Ela representa uma intensidade de luz atingindo uma cubeta com amostra e outra intensidade saindo do recipiente. Note que a intensidade inicial maior, isso ocorre porque a amostra absorveu parte da energia. Sabe-se que quanto maior a concentrao da amostra, maior a absoro da luz. A absoro da regio visvel e ultravioleta depende principalmente do nmero e do arranjo dos eltrons nas molculas ou ons absorventes. Como conseqncia, o pico de absoro pode ser relacionado com o tipo de ligao que existe na espcie que est sendo estudada. Alm da absorbncia, pode-se tambm medir a capacidade de transmitir energia radiante, denominada transmitncia. Ao passar um feixe de luz de intensidade conhecida (Io) atravs de uma amostra e medir-se a intensidade da luz que emergiu.A transmitncia (T) da amostra pode ser calculada conforme a seguinte relao: T = I t / Io 1.4 Lei de Lambert-Beer Esta lei foi descoberta pela primeira vez em 1729 pelo matemtico, geofsico e astrnomo francs Pierre Bouguer (1698-1758). A sua autoria , contudo, frequentemente atribuda de forma errada ao matemtico, fsico e astrnomo francs Johann Lambert (1728-1777). No seu trabalho em 1760, Lambert citou a descoberta de Bouguer e constatou que a frao de luz que absorvida por uma amostra independente da potncia radiante incidente (Po). Este fato conhecido como lei de Lambert, embora, na realidade, s seja verdadeira se (Po) for pequeno e se a extenso de outros fenmenos como a disperso da luz ou reaes fotoqumicas for desprezvel. S 92 anos depois que a lei foi modificada de forma a incluir a concentrao da soluo na frmula de clculo. Essa modificao foi da autoria do fsico e matemtico alemo August Beer (1825-1863). Quase um sculo depois, August Beer estudou a influncia da concentrao de solues coloridas sobre a transmisso de luz, concluindo que a intensidade da radiao transmitida decresce exponencialmente quando a concentrao do meio aumenta aritmeticamente, desde que a espessura do meio seja mantida constante. Assim foi possvel construir a Lei de Lambert-Beer, tambm conhecida como lei de Beer ou lei de Beer-Lambert-Bouguer, que relaciona associa a absoro de luz com as propriedades do material atravessado pela onda: A= Log (I0/ It) =E.C.L

Onde: A= Absorbncia I0= intensidade de luz incidente It= intensidade de luz transmitida E= constante de proporcionalidade (quando em mol/L chamada de coeficiente de absoro molar) C = concentrao da amostra L = espessura da soluo atravessada ou caminho tico Para a correta utilizao e aplicao da lei de Lambert-Beer, so necessrios que estejam reunidos alguns pr-requisitos, nomeadamente:

As partculas (tomos, molculas ou ons) presentes em soluo devem O meio absorvente deve ser homogneo (soluo) e no dispersar a A radiao incidente deve estar colimada (raios paralelos entre si) e deve

absorver a luz de forma independente entre si;

radiao;

atravessar a mesma distncia durante a qual interage com as partculas existentes em soluo;

A radiao deve ser monocromtica, isto , ser composta por apenas um de onda selecionado (normalmente, correspondente ao

comprimento mxima);

comprimento de onda para o qual a absorbncia da espcie em estudo O fluxo da radiao incidente no pode induzir processos que impliquem a

desestabilizao dos tomos, molculas ou ons, como por exemplo, excitao eletrnica que d origem a fenmenos de fluorescncia ou fosforescncia. Caso no estejam reunidas estas condies, ento se verificam desvios referida lei. Normalmente, verificam-se desvios lei para concentraes mais elevadas, pois alguns processos como, por exemplo, a disperso da luz, so cada vez mais significativos, pelo que no podem ser ignorados. 1.4.1 Curva de calibrao A determinao de concentrao de um soluto em uma soluo-problema por espectrofotometria envolve a comparao da absorbncia da soluo-problema com uma soluo de referncia, na qual j se conhece a concentrao do soluto. Em geral, utilizada uma soluo-padro com diferentes concentraes (pontos), que

tem sua absorbncia determinada. Esses pontos so preparados diluindo-se a soluo-padro na proporo necessria para a obteno das concentraes desejadas. Com os valores de absorbncia e de concentrao conhecidos, pode-se traar um grfico cujo perfil conhecido como curva-padro. Nesse grfico, a reta, indica a proporcionalidade entre o aumento da concentrao e da absorbncia e a poro linear correspondente ao limite de sensibilidade do mtodo espectrofotomtrico para o soluto em questo. Segue abaixo um exemplo de curva de calibrao genrica:

Muitas vezes o mtodo s linear at uma certa concentrao da substncia. Nesse caso, utiliza-se a zona em que a relao linear, diluindo a soluo a medir, sempre que necessrio, de modo a que a absorbncia resultante esteja contida no intervalo da reta de calibrao. 1.4.2 Formando um espectro Ao pegarmos uma amostra de certa concentrao e nela aplicarmos uma quantidade de luz, variando apenas o comprimento de onda dessa luz, descobrimos que para cada um dessas valores de comprimento tem-se um valor de absoro. Com esses valores possvel criar um grfico que relacione o comprimento da onda com a absoro realizada pela amostra. esse grfico deu-se o nome de espectrograma. Segue abaixo uma representao genrica deste:

1.5 Espectrofotmetros Espectrofotmetros so instrumentos capazes de registrar dados de absorbncia ou transmitncia em funo do comprimento de onda. Este registro chamado de espectro de absoro ou de espectro de transmisso, segundo o dado registrado for de absorbncia ou transmitncia, respectivamente. O espectro de absoro caracterstico para cada espcie qumica, sendo possvel a identificao de uma espcie qumica por seu espectro de absoro. A caracterstica mais importante dos espectrofotmetros a seleo de radiaes monocromticas, o que possibilita inmeras determinaes quantitativas regidas pela Lei de Beer. Quando a regio espectral usada a ultravioleta/visvel, so necessrios componentes ticos de quartzo e detectores altamente sensveis capazes de detectar radiaes nessa extensa faixa espectral em que atua o instrumento. Os espectrofotmetros, em geral, contm cinco componentes principais: fontes de radiao, monocromador, recipientes para conter as solues, detectores e indicadores de sinal.

Os espectrofotmetros podem ser de feixe simples ou de feixe duplo. Nos de feixe simples, a radiao monocromtica atine totalmente a amostra, e por causa disso, esses aparelhos necessitam de uma fonte de alimentao de alta sensibilidade. Os de feixe duplo so aqueles onde parte da radiao atinge a amostra e outra parte desviada com espelhos a fim de atingir outro recipiente, que contm uma soluo branco. Sua funo eliminar variaes de leituras em funo da variao na fonte de alimentao. Os recipientes usados para se colocar a amostra so as cubetas, feitas geralmente de vidro, slica fundida ou quartzo, dependendo da regio de comprimento de onda que se deseja avaliar. Devem ser transparentes, ou seja, absorverem pouco ou nada da radiao e devem tambm ter forma e tamanho especficos. 2. PRTICAS 2.1 Objetivo Teve-se como objetivo nas prticas realizadas a familiarizao com tipos de espectrofotmetros e fazer as leituras de absorbncia e transmitncia de solues de permanganato de potssio, ferro II e nquel II, possibilitando a construo do espectro da amostra, assim como sua curva de calibrao do permanganato de potssio e constatao da lei de Lambert-Beer. 2.2 Prtica 1 2.2.1 Objetivo Construo do grfico da Variao da Transmitncia em funo do comprimento de onda. 2.2.2 Procedimento Preparar duas solues contendo, respectivamente, ferro II e nquel II e colocar em cubetas de 1,0 cm. Preparar outra cubeta com gua destilada. Colocar no equipamento espectrofotmetro e fazer as leituras de transmitncia para valores de comprimentos de onda entre 440nm-750nm. Espectrofotmetro utilizado: FENTO 600 plus

2.2.3 Dados recolhidos 2.2.4 Resultados

Nm 440 450 460 470 480 490 500 510 A 0,2 0,1 0 0 0 0 0 0 B 38 45,2 53,6 61,5 66 69,1 68,7 67,5 Nm 520 530 540 550 560 570 580 590 A 0,6 1,9 7,8 23,3 39,6 54,8 68,2 80,9 B 64,8 63,2 61,8 59,3 54,8 49,3 42,4 34,1 Nm 600 610 620 630 640 650 660 670 A 88,4 93,3 96,1 97,7 98,7 99,2 99,5 99,7 B 26,5 19,7 14,5 10,5 7,9 7,2 7,4 7,3 nm 680 690 700 710 720 730 740 750 A 99,7 99,8 100 100 100 100 100 100 B 6,7 6 5,4 5,1 5,2 5,9 7,2 9,1

A partir dos dados recolhidos foi possvel criar o espectrograma das amostras:

2.2.5 Discusso Com os resultados e dados coletados pudemos ver experimentalmente a relao entre os comprimentos de ondas e as transmitncias de cada amostra. Foi possvel verificar que as curvas de transmisso so caractersticas de cada substncia. 2.3 Prtica 2 2.3.1 Objetivo Construo do grfico Variao da Absorbncia em funo do comprimento de onda. 2.3.2 Procedimento

Colocar uma soluo de KMnO4 0,0002M em uma cubeta de 1,0cm. Em outra cubeta de 1,0 cm colocar gua destilada. Colocar no equipamento espectrofotmetro e fazer as leituras de absorbncia para valores de comprimentos de onda entre 440nm-750nm. Espectrofotmetro utilizado: FEMTO 600 plus 2.3.3 Dados recolhidos
nm 440 450 460 470 480 490 500 510 A 0,022 0,045 0,079 0,119 0,168 0,225 0,287 0,34 Nm 520 530 540 550 560 570 580 590 A 0,357 0,337 0,329 0,228 0,193 0,122 0,059 0,04 Nm 600 610 620 630 640 650 660 670 A 0,034 0,031 0,029 0,026 0,024 0,02 0,017 0,015 nm 680 690 700 710 720 730 740 750 A 0,011 0,009 0,007 0,005 0,004 0,002 0,001 0

2.3.4 Resultados A partir dos dados recolhidos foi possvel criar o espectrograma das amostras:

2.3.5 Discusso Com os resultados e dados coletados conseguimos ver experimentalmente a relao entre a concentrao da amostra e sua concentrao.

2.4 Prtica 3 2.4.1 Objetivo Construo da curva padro da anlise do permanganato de potssio. Determinao da concentrao desconhecida de uma soluo de KMnO4 a partir da curva de calibrao. 2.4.2 Procedimento Medir, em um espectrofotmetro, a absorbncia de 5 solues padro de KMnO4 e a absorbncia da amostra cuja concentrao desconhecida. Anotando os valores para posteriormente criar uma curva de calibrao. Fluxograma:

Espectrofotmetro utilizado: FEMTO 600 plus 2.4.3 Dados recolhidos Solues Concentrao Absorbncia 0,2093 1 0,00005 0,4117 2 0,0001 0,609 3 0,00015 0,7987 4 0,0002 0,9927 5 0,00025 0,5167 Amostra x 2.4.4 Resultados Com os resultados obtidos construiu-se a curva de calibrao: Absorbncias lidas 0,210 0,210 0,208 0,412 0,411 0,412 0,609 0,609 0,609 0,801 0,799 0,796 0,991 0,996 0,991 0,517 0,516 0,517

E a partir dela calculou-se a concentrao da amostra. A concentrao encontrada foi 1,2764x10-4M. 2.4.5 Clculos y = ax + b y = 3907x + 0,018 a = tg y= Absorbncia, a= coeficiente angular, b=deslocamento da reta e x= concentrao Mdia de absorbncia da amostra (y) = 0,5167 y = 3907x + 0,018 0,5167 = 3907x + 0,018 x = 1,2764x10-4

BIBLIOGRAFIA TARTARI, Leori. Polgrafo Espectrofotometria de Absoro Molecular nas Regies do UV-Visvel REED, R., HOLMES, D., WEYERS, J. & JONES,A.J. 1998. Practical Skills in Biomolecular Sciences. Ed. Prentice Hall VINAD, Maria Elisabeth do Canto- Mtodos espectroscpicos de analise quantitativa, editora UFSM SOUZA, Bruno L. Cortez. Espectrofotometria UV-visvel. Departamento de Engenharia Qumica. Disponvel em <http://www.slideshare.net/b.cortez/aula-05espectrofotometria-uv-vis>. Acesso em 21/06/2011.

ESPECTROFOTOMETRIA. SCRIBD em 21/06/11

Richard

T.

Cusak.

Disponvel

em

: em:

http://plato.if.usp.br/~fap0181d/espectrofotometria.html Acesso em 21/06/11 Disponvel http://pt.scribd.com/doc/51607191/37/Espectroscopia-de-absorcao-molecular Acesso