FUNDAÇÃO ESCOLA TÉCNICA SALZANO VIEIRA DA CUNHA CURSTO TÉCNICO DE QUÍMICA ANÁLISE QUIMÍCA

PRÁTICAS DE ESPECTROFOTOMETRIA

ANA KARINA DE BARROS CHRIST (03) TURMA 1411

Novo Hamburgo, 02 de agosto de 2011

Energias dessa magnitude correspondem. As energias correspondentes a essas regiões são ao redor de 150 a 72 k.1 O Espectro Eletromagnético A região ultravioleta do espectro é geralmente considerada na faixa de 200 a 400 nm.mol -1 na região ultravioleta. A absorção da região visível e ultravioleta depende. o pico de absorção pode ser correlacionado com o tipo de ligação que existe na espécie que está sendo estudada. e 72 a 36 k. muitas vezes.cal. FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA 1. As freqüências .2 As ondas eletromagnéticas As ondas eletromagnéticas que formam o espectro diferem-se uma das outras pela freqüência de propagação e pela forma como são produzidas. em primeiro lugar. do número e do arranjo dos elétrons nas moléculas ou íons absorventes.cal. 1.1. e a região do visível entre 400 a 800 nm. Como conseqüência.mol-1 para a região visível. à diferença entre estados eletrônicos de muitas moléculas.

1. alto para a absorbância e nulo para a transmitância.são tão diferentes que algumas ondas não interagem com a matéria. absorbância e a transmitância costumam ser expressas em percentagem (ou por um número entre 0 e 1). entretanto.3.3 Princípios da Espectrofotometria A espectrofotometria visível e ultravioleta é um dos métodos analíticos mais usados nas determinações analíticas em diversas áreas. como.1 Absorbância e transmitância Quando a radiação interage com um objeto. Observe a figura seguinte: . Em geral a parte absorvida é transformada em calor ou em algum outro tipo de energia e a parte refletida se espalha pelo espaço. O fator que mede a capacidade de um objeto de refletir a energia radiante indica a sua refletância. A refletância. pode ser refletida. enquanto que a capacidade de absorver energia radiante é indicada pela sua absorbância e. A espectroscopia de absorção molecular é valiosa para a identificação dos grupos funcionais na molécula. a capacidade de transmitir energia radiante é indicada pela sua transmitância. É aplicada para determinações de compostos orgânicos e inorgânicos. da mesma forma. Certamente um objeto escuro e opaco tem um valor baixo para a refletância. Mais importante. na identificação do princípio ativo de fármacos. 1. outras até em nível subatômico. outras interagem a nível molecular. por exemplo. são as aplicações da espectroscopia de absorção visível/ ultravioleta para a determinação quantitativa de compostos contendo grupos absorventes. absorvida ou mesmo transmitida (no caso de objetos transparentes).

No seu trabalho em 1760. Note que a intensidade inicial é maior. Como conseqüência. Só 92 anos depois é que a lei foi modificada de forma a incluir a concentração da solução na fórmula de cálculo. Além da absorbância. frequentemente atribuída de forma errada ao matemático.L . o pico de absorção pode ser relacionado com o tipo de ligação que existe na espécie que está sendo estudada. Quase um século depois. Essa modificação foi da autoria do físico e matemático alemão August Beer (1825-1863). contudo. Lambert citou a descoberta de Bouguer e constatou que a fração de luz que é absorvida por uma amostra é independente da potência radiante incidente (Pλo). Sabe-se que quanto maior a concentração da amostra.Ela representa uma intensidade de luz atingindo uma cubeta com amostra e outra intensidade saindo do recipiente. Este fato é conhecido como lei de Lambert. A sua autoria é. denominada transmitância. August Beer estudou a influência da concentração de soluções coloridas sobre a transmissão de luz. desde que a espessura do meio seja mantida constante. só seja verdadeira se (Pλo) for pequeno e se a extensão de outros fenômenos como a dispersão da luz ou reações fotoquímicas for desprezível. A absorção da região visível e ultravioleta depende principalmente do número e do arranjo dos elétrons nas moléculas ou íons absorventes.C.4 Lei de Lambert-Beer Esta lei foi descoberta pela primeira vez em 1729 pelo matemático. também conhecida como lei de Beer ou lei de Beer-Lambert-Bouguer. pode-se também medir a capacidade de transmitir energia radiante. geofísico e astrônomo francês Pierre Bouguer (1698-1758).A transmitância (T) da amostra pode ser calculada conforme a seguinte relação: T = I t / Io 1. concluindo que a intensidade da radiação transmitida decresce exponencialmente quando a concentração do meio aumenta aritmeticamente. que relaciona associa a absorção de luz com as propriedades do material atravessado pela onda: A= Log (I0/ It) =E. físico e astrônomo francês Johann Lambert (1728-1777). isso ocorre porque a amostra absorveu parte da energia. Ao passar um feixe de luz de intensidade conhecida (Io) através de uma amostra e medir-se a intensidade da luz que emergiu. embora. maior a absorção da luz. Assim foi possível construir a Lei de Lambert-Beer. na realidade.

são necessários que estejam reunidos alguns pré-requisitos. são cada vez mais significativos. Caso não estejam reunidas estas condições.  A radiação deve ser monocromática. então se verificam desvios à referida lei. como por exemplo.  atravessar a mesma distância durante a qual interage com as partículas existentes em solução. moléculas ou íons) presentes em solução devem O meio absorvente deve ser homogêneo (solução) e não dispersar a A radiação incidente deve estar colimada (raios paralelos entre si) e deve absorver a luz de forma independente entre si. que . é utilizada uma solução-padrão com diferentes concentrações (pontos). por exemplo. ser composta por apenas um de onda selecionado (normalmente. moléculas ou íons.Onde: A= Absorbância I0= intensidade de luz incidente It= intensidade de luz transmitida E= constante de proporcionalidade (quando em mol/L é chamada de coeficiente de absorção molar) C = concentração da amostra L = espessura da solução atravessada ou caminho ótico Para a correta utilização e aplicação da lei de Lambert-Beer.4. Normalmente. pois alguns processos como. excitação eletrônica que dê origem a fenômenos de fluorescência ou fosforescência. verificam-se desvios à lei para concentrações mais elevadas. Em geral. na qual já se conhece a concentração do soluto. pelo que não podem ser ignorados.  comprimento de onda para o qual a absorbância da espécie em estudo é O fluxo da radiação incidente não pode induzir processos que impliquem a desestabilização dos átomos.1 Curva de calibração A determinação de concentração de um soluto em uma solução-problema por espectrofotometria envolve a comparação da absorbância da solução-problema com uma solução de referência. isto é. correspondente ao comprimento máxima). 1. a dispersão da luz.  radiação. nomeadamente:  As partículas (átomos.

1. Nesse gráfico. sempre que necessário. Com os valores de absorbância e de concentração conhecidos.4.2 Formando um espectro Ao pegarmos uma amostra de certa concentração e nela aplicarmos uma quantidade de luz. utiliza-se a zona em que a relação é linear. de modo a que a absorbância resultante esteja contida no intervalo da reta de calibração. descobrimos que para cada um dessas valores de comprimento tem-se um valor de absorção. indica a proporcionalidade entre o aumento da concentração e da absorbância e a porção linear correspondente ao limite de sensibilidade do método espectrofotométrico para o soluto em questão. variando apenas o comprimento de onda dessa luz. Com esses valores é possível criar um gráfico que relacione o comprimento da onda com a absorção realizada pela amostra. Nesse caso. diluindo a solução a medir. Segue abaixo um exemplo de curva de calibração genérica: Muitas vezes o método só é linear até uma certa concentração da substância. Segue abaixo uma representação genérica deste: . pode-se traçar um gráfico cujo perfil é conhecido como “curva-padrão”. a reta. À esse gráfico deu-se o nome de espectrograma.tem sua absorbância determinada. Esses pontos são preparados diluindo-se a solução-padrão na proporção necessária para a obtenção das concentrações desejadas.

monocromador. o que possibilita inúmeras determinações quantitativas regidas pela Lei de Beer. segundo o dado registrado for de absorbância ou transmitância. Os espectrofotômetros.5 Espectrofotômetros Espectrofotômetros são instrumentos capazes de registrar dados de absorbância ou transmitância em função do comprimento de onda. recipientes para conter as soluções. A característica mais importante dos espectrofotômetros é a seleção de radiações monocromáticas. O espectro de absorção é característico para cada espécie química. detectores e indicadores de sinal. Quando a região espectral usada é a ultravioleta/visível. em geral. respectivamente.1. contêm cinco componentes principais: fontes de radiação. Este registro é chamado de espectro de absorção ou de espectro de transmissão. sendo possível a identificação de uma espécie química por seu “espectro de absorção”. . são necessários componentes óticos de quartzo e detectores altamente sensíveis capazes de detectar radiações nessa extensa faixa espectral em que atua o instrumento.

que contém uma solução branco. 2. ferro II e níquel II. dependendo da região de comprimento de onda que se deseja avaliar. ferro II e níquel II e colocar em cubetas de 1. Sua função é eliminar variações de leituras em função da variação na fonte de alimentação. Nos de feixe simples. respectivamente.2. esses aparelhos necessitam de uma fonte de alimentação de alta sensibilidade. 2. Preparar outra cubeta com água destilada.1 Objetivo Teve-se como objetivo nas práticas realizadas a familiarização com tipos de espectrofotômetros e fazer as leituras de absorbância e transmitância de soluções de permanganato de potássio. PRÁTICAS 2. feitas geralmente de vidro.Os espectrofotômetros podem ser de feixe simples ou de feixe duplo.2 Procedimento Preparar duas soluções contendo. ou seja. 2. absorverem pouco ou nada da radiação e devem também ter forma e tamanho específicos. Devem ser transparentes.2 Prática 1 2. sílica fundida ou quartzo.2. Colocar no equipamento espectrofotômetro e fazer as leituras de transmitância para valores de comprimentos de onda entre 440nm-750nm. a radiação monocromática atine totalmente a amostra. Os recipientes usados para se colocar a amostra são as cubetas. Os de feixe duplo são aqueles onde parte da radiação atinge a amostra e outra parte é desviada com espelhos a fim de atingir outro recipiente. possibilitando a construção do espectro da amostra. Espectrofotômetro utilizado: FENTO 600 plus .0 cm.1 Objetivo Construção do gráfico da Variação da Transmitância em função do comprimento de onda. e por causa disso. assim como sua curva de calibração do permanganato de potássio e constatação da lei de Lambert-Beer.

7 B 26.1 Nm 600 610 620 630 640 650 660 670 A 88.5 Nm 520 530 540 550 560 570 580 590 A 0. Foi possível verificar que as curvas de transmissão são características de cada substância.2 5.3 nm 680 690 700 710 720 730 740 750 A 99.3.3 Dados recolhidos 2.5 7.1 Objetivo Construção do gráfico Variação da Absorbância em função do comprimento de onda.2 Procedimento .4 5.9 7.7 67.2 80.5 66 69.4 Resultados Nm 440 450 460 470 480 490 500 510 A 0.2.1 68.6 1.8 59.7 99.2 53. 2.3 54.4 93.2 99.1 0 0 0 0 0 0 B 38 45.2 61.8 100 100 100 100 100 100 B 6.7 14.4 7.3.5 Discussão Com os resultados e dados coletados pudemos ver experimentalmente a relação entre os comprimentos de ondas e as transmitâncias de cada amostra.1 5.8 68.5 19.9 7.9 B 64.2 9.8 63.5 10.6 61.7 98.2.1 A partir dos dados recolhidos foi possível criar o espectrograma das amostras: 2.2 7.1 97.9 7.4 34.2.3 39.2 0.6 54.8 23.3 96.5 99.7 6 5.3 42.3 Prática 2 2.7 99. 2.8 49.2.

004 0.34 Nm 520 530 540 550 560 570 580 590 A 0.168 0.4 Resultados A partir dos dados recolhidos foi possível criar o espectrograma das amostras: 2.3.3.122 0.0cm.001 0 2.228 0.011 0.007 0. Em outra cubeta de 1.119 0.0002M em uma cubeta de 1.017 0.Colocar uma solução de KMnO4 0.026 0.193 0.045 0.009 0.034 0.031 0.225 0.022 0. Espectrofotômetro utilizado: FEMTO 600 plus 2.3. .015 nm 680 690 700 710 720 730 740 750 A 0.029 0. Colocar no equipamento espectrofotômetro e fazer as leituras de absorbância para valores de comprimentos de onda entre 440nm-750nm.059 0.3 Dados recolhidos nm 440 450 460 470 480 490 500 510 A 0.04 Nm 600 610 620 630 640 650 660 670 A 0.287 0.024 0.5 Discussão Com os resultados e dados coletados conseguimos ver experimentalmente a relação entre a concentração da amostra e sua concentração.079 0.02 0.329 0.002 0.337 0.357 0.005 0.0 cm colocar água destilada.

em um espectrofotômetro.517 0.517 .00025 0.2 Procedimento Medir.2093 1 0.996 0. a absorbância de 5 soluções padrão de KMnO4 e a absorbância da amostra cuja concentração é desconhecida.4.516 0.00005 0.609 0.210 0.1 Objetivo Construção da curva padrão da análise do permanganato de potássio.796 0.799 0.609 3 0.208 0.4.9927 5 0.7987 4 0. Determinação da concentração desconhecida de uma solução de KMnO4 a partir da curva de calibração.00015 0.5167 Amostra x 2.4117 2 0.3 Dados recolhidos Soluções Concentração Absorbância 0.0001 0.411 0.210 0.2.4 Prática 3 2.609 0. Fluxograma: Espectrofotômetro utilizado: FEMTO 600 plus 2.801 0.4.412 0.991 0.4.0002 0.412 0.991 0. 2. Anotando os valores para posteriormente criar uma curva de calibração.609 0.4 Resultados Com os resultados obtidos construiu-se a curva de calibração: Absorbâncias lidas 0.

& JONES.slideshare.5167 y = 3907x + 0..018 x = 1. WEYERS.018 0. Practical Skills in Biomolecular Sciences.018 a = tg α y= Absorbância. Ed. Cortez. Acesso em 21/06/2011.J.2764x10-4M. 1998.A..cortez/aula-05espectrofotometria-uv-vis>. Espectrofotometria UV-visível.Métodos espectroscópicos de analise quantitativa. Departamento de Engenharia Química. Disponível em <http://www. . D. A concentração encontrada foi 1. HOLMES. b=deslocamento da reta e x= concentração Média de absorbância da amostra (y) = 0. Prentice Hall VINADÉ.5 Cálculos y = ax + b y = 3907x + 0. Polígrafo Espectrofotometria de Absorção Molecular nas Regiões do UV-Visível REED. editora UFSM SOUZA. 2. a= coeficiente angular. Leori.2764x10-4 BIBLIOGRAFIA TARTARI.net/b. Maria Elisabeth do Canto. R. Bruno L.5167 = 3907x + 0.E a partir dela calculou-se a concentração da amostra. J.4.

usp.if.br/~fap0181d/espectrofotometria.com/doc/51607191/37/Espectroscopia-de-absorcao-molecular Acesso .scribd.ESPECTROFOTOMETRIA. Disponível em : em: http://plato. Cusak.html Acesso em 21/06/11 Disponível http://pt. SCRIBD em 21/06/11 Richard T.

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