Yndyra Nayan Teixeira Carvalho Castelo Branco, Marlon de Araújo Castelo Branco

Micherlene da Silva Carneiro Lustosa, Isolda Márcia Rocha do Nascimento, Deyse Naira
Mascarenhas Costa, Felipe Pereira da Silva Barçante, Jefferson Hallisson Lustosa da Silva, José
Adalmir Torres de Souza
____________________________________________________________________________

AVALIAÇÃO FUNCIONAL E OXIDATIVA DE SÊMEN

CRIOPRESERVADO DE TOUROS

FUNCTIONAL AND OXIDATIVE EVALUATION OF

CRYOPRESERVED BULL SÊMEN

EVALUACIÓN FUNCIONAL Y OXIDATIVA DEL SEMEN DE

TORO CRIOCONSERVADO

Yndyra Nayan Teixeira Carvalho Castelo Branco1

Marlon de Araújo Castelo Branco2
Micherlene da Silva Carneiro Lustosa3
Isolda Márcia Rocha do Nascimento4
Deyse Naira Mascarenhas Costa5
Felipe Pereira da Silva Barçante6
Jefferson Hallisson Lustosa da Silva7
José Adalmir Torres de Souza8

DOI: 10.54751/revistafoco.v17n3-044
Received: February 2nd , 2024
Accepted: February 20th, 2024

RESUMO
Objetivou-se avaliar as características morfofuncionais de sêmen criopreservado das
raças de touros, Nelore e Curraleiro Pé Duro. Foram utilizados vinte ejaculados de
quatro touros Curraleiro Pé-Duro, e vinte ejaculados de quatro touros Nelore. O sêmen
foi diluído em TRIS- Gema e criopreservado em máquina TK 3000®, e armazenado em
botijão criogênico. Após o descongelamento foram avaliados quanto à cinética
espermática, integridade da membrana plasmática e acrossoma, estresse oxidativo, e
fertilização in vitro. A análise estatística foi realizada utilizando o SAS 2013, e as
diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05. As amostras da raça
Curraleiro Pé Duro exibiram maior frequência de batimento cruzada (10,92 ± 1.52; 8,92

1
Doutora em Ciência Animal pela Universidade Federal do Piauí. Universidade Federal do Maranhão. Rodovia BR 222,
KM 04, S/N, Boa Vista. Chapadinha – MA. E-mail: yndyra.nayan@ufpi.br
2
Doutor em Biotecnologia pela Universidade Federal do Piauí. Centro de Controle de Zoonoses de Teresina. Rua Minas
Gerais, 909, B. Acarape, Teresina – PI. E-mail: marlon704@gmail.com
3
Doutora em Ciência Animal pela Universidade Federal do Piauí. Instituto de Ensino Superior Múltiplo. Av. Boa Vista,
700, B. Boa Vista, Timon – MA. E-mail: micherlene100@hotmail.com
4
Doutora em Ciência Animal pela Universidade Federal do Piauí. Universidade Federal do Piauí. Rua Dirce de Oliveira,
S/N, B. Ininga, Teresina – PI. E-mail: isoldamarcia@ufpi.edu.br
5
Doutora em Ciência Animal pela Universidade Federal do Piauí. Universidade Federal do Piauí. Rua Dirce de Oliveira,
S/N, B.Ininga, Teresina – PI. E-mail: deysevet2008@gmail.com
6
Doutor em Ciência Animal pela Universidade Federal do Piauí. Serviço Nacional de Aprendizagem Rural. Av. Homero
Castelo Branco, 620, B. São Cristovão. Teresina – PI. E-mail: felipebarcantevet@gmail.com
7
Doutor em Ciência Animal pela Universidade Federal do Piauí. Serviço Nacional de Aprendizagem Rural. Rua Humberto
de Campos, 185, B. Centro. São Luís – MA. E-mail: jeffersonlsilva11@hotmail.com
8
Doutor em Clínica Cirúrgica Veterinária pela Universidade de São Paulo. Universidade Federal do Piauí. Rua Dirce de
Oliveira, S/N, B.Ininga, Teresina- PI. E-mail: adalmir@ufpi.edu.br

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± 2.56) que na raça Nelore, mas não diferiu para os demais parâmetros (p>0,05). As
alterações morfológicas de peça intermediária (2,90 ± 2.65; 1,30 ± 1.17) e o estresse
oxidativo, foram menores na raça Curraleiro Pé Duro. A porcentagem de embriões
clivados (65,6% ± 38,5%) foi maior utilizando sêmen Nelore. Em conclusão, o sêmen
criopreservado da raça Curraleiro Pé Duro apresentou menores alterações morfológicas
de peça intermediária e reduzido estresse oxidativo.

Palavras-chave: Curraleiro pé-duro; nelore; morfologia espermática; espécies reativas

ao oxigênio.

ABSTRACT
The aim was to evaluate the morphofunctional characteristics of cryopreserved semen
from the Nelore and Curraleiro Pé Duro bull breeds. Twenty ejaculates from four
Curraleiro Pé-Duro bulls and twenty ejaculates from four Nelore bulls were used. The
semen was diluted in TRIS-Gema and cryopreserved in a TK 3000® machine and stored
in a cryogenic cylinder. After thawing, sperm kinetics, plasma membrane and acrosome
integrity, oxidative stress and in vitro fertilization were assessed. Statistical analysis was
carried out using SAS 2013, and differences were considered significant when p<0.05.
The samples from the Curraleiro Pé Duro breed exhibited a higher frequency of cross-
beating (10.92 ± 1.52; 8.92 ± 2.56) than the Nelore breed, but did not differ for the other
parameters (p>0.05). Morphological changes in the intermediate part (2.90 ± 2.65; 1.30
± 1.17) and oxidative stress were lower in the Curraleiro Pé Duro breed. The percentage
of cleaved embryos (65.6% ± 38.5%) was higher using Nelore semen. In conclusion,
cryopreserved semen from the Curraleiro Pé Duro breed showed fewer morphological
changes in the midpiece and reduced oxidative stress.

Keywords: Curraleiro pé-duro; nelore; sperm morphology; reactive oxygen species.

RESUMEN
El objetivo fue evaluar las características morfofuncionales del semen crioconservado
de toros de las razas Nelore y Curraleiro Pé Duro. Se utilizaron veinte eyaculados de
cuatro toros Curraleiro Pé-Duro y veinte eyaculados de cuatro toros Nelore. El semen
se diluyó en TRIS-Gema y se crioconservó en una máquina TK 3000® y se almacenó
en un cilindro criogénico. Tras la descongelación, se evaluó la cinética espermática, la
integridad de la membrana plasmática y del acrosoma, el estrés oxidativo y la
fecundación in vitro. El análisis estadístico se llevó a cabo utilizando SAS 2013, y las
diferencias se consideraron significativas cuando p<0,05. Las muestras de la raza
Curraleiro Pé Duro presentaron una mayor frecuencia de batido cruzado (10,92 ± 1,52;
8,92 ± 2,56) que las de la raza Nelore, pero no difirieron en los demás parámetros
(p>0,05). Las alteraciones morfológicas de la parte intermedia (2,90 ± 2,65; 1,30 ± 1,17)
y el estrés oxidativo fueron menores en la raza Curraleiro Pé Duro. El porcentaje de
embriones escindidos (65,6% ± 38,5%) fue mayor utilizando semen Nelore. En
conclusión, el semen crioconservado de la raza Curraleiro Pé Duro mostró menos
cambios morfológicos en la pieza media y un menor estrés oxidativo.

Palabras clave: Curraleiro pé-duro; nelore; morfología espermática; especies reactivas

de oxígeno.

1. Introdução
A difusão de técnicas reprodutivas como a inseminação artificial (IA), a

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conservação de material genético através da criopreservação se tornou mais

real, podendo ser empregada mais facilmente. Contudo, alguns entraves
puderam ser identificados no uso de sêmen criopreservado, como o menor
potencial de fertilização de espermatozoides descongelados (Miller, 2008;
Abavisani et al., 2013), resultando no decréscimo irreversível da motilidade
espermática, na redução da taxa de glicólise, respiração celular e frutólise,
aumento da degeneração do ácido desoxirribonucleico e liberação de material
intracelular (Watson, 2000).
A manipulação adequada do sêmen é essencial para manter o
desempenho reprodutivo ideal (Sharlip et al., 2002). A avaliação da fertilidade
animal in vitro e in vivo pressupõe um conjunto de análises, que, integradas, são
suficientes para estimar a potencial fertilidade do macho, a partir da
funcionalidade, integridade e viabilidade espermática para seu emprego em
programas de IA (Ntemka et al., 2016; Kuçuk et al., 2014).
Testes como o de termorresistência estimam ao longo de sua avaliação o
decréscimo na curva linear nos valores de motilidade e vigor (Barros et al., 2013).
A análise espermática assistida por computador (CASA) por sua vez, apresenta
formas mais objetivas e rápidas utilizando o sistema automatizado para
visualizar, digitalizar e analisar imagens sucessivas dos espermatozoides,
através de parâmetros como, velocidade do percurso curvilinear (VCL),
velocidade do percurso médio (VAP), velocidade em linha reta (VSL),
retilinearidade (STR), linearidade (LIN), oscilação (WOB), freqüência de
batimento cruzado (BCF), e deslocamento lateral da cabeça (ALH) (Verstegen
et al., 2002; Amann e Katz, 2004).
A avaliação da peroxidação dos lipídios da membrana plasmática dos
espermatozoides, induzido pelo estresse sofrido pela célula, possivelmente pelo
processo de criopreservação, e o potencial de fertilização de uma amostra de
sêmen são métodos de avaliação da fertilidade espermática (Buege e Aust,
1978; Nascimento et al., 2015).
Dentro desta perspectiva, o avanço nos sistemas de produção e o estudo
sobre as espécies bovinas e suas condições reprodutivas, são fatores que

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interferem na determinação dos aspectos qualitativos do sêmen, que constitui

um processo crítico na tomada de decisões para a seleção de reprodutores
(Rodrigues, 2009). Deste modo, o presente estudo teve por objetivo avaliar as
características morfofuncionais de sêmen criopreservado das raças de touros,
Nelore e Curraleiro Pé Duro (CPD).

2. Material e Métodos
2.1 Animais
Foram utilizados quatro touros da raça Curraleiro Pé-Duro (CPD), e quatro
touros da raça Nelore. Os touros foram mantidos sob regime extensivo, em
pastejo de gramíneas nativas, com água e sal mineral ad libitum e avaliados
quanto à normalidade dos parâmetros andrológicos antes do estudo, de acordo
com as recomendações do Colégio Brasileiro de Reprodução Animal (motilidade
em massa: ≥ 3; motilidade espermática: ≥ 60 %; concentração: 350 milhões de
espermatozoides / mL; número total de espermatozoides no ejaculado: 3 a 5
bilhões; espermatozoides morfologicamente normais: > 70%; defeitos maiores
de espermatozoides: < 10%; defeitos menores de espermatozoides: < 20%)
(CBRA, 2013).

2.2 Coleta de Sêmen

Foram coletados cinco ejaculado por touro, com um eletroejaculador
(Biocon ® Soluções para Biotecnologia, Uberaba, Brasil), totalizando 40
ejaculados. Após a coleta, cada ejaculado foi diluído com Tris-Gema (3,605 g de
Tris; 2,024 g de ácido cítrico; 1,488g de frutose; 25 MG de gentamicina; 50.000
UI de penicilina; 100 ml de água destilada; 20% de gema de ovo e 5% de glicerol,
com osmolaridade de 350 mOsm/kg e pH 6,8).

2.3 Criopreservação do Sêmen

Após a coleta e processamento, as amostras de sêmen foram envasadas
em palhetas de 0,25 mL, à temperatura ambiente, para uma concentração final
de 20 ×106 espermatozoides viáveis / palheta, e foram congeladas em máquina
TK 3000®, ajustada para uma taxa de resfriamento de -0,5 ° C / min da

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temperatura ambiente (25 ° C) até que a temperatura de 5 ° C fosse atingida.

Após estabilização a 5 ° C por 1 hora, o congelamento foi realizado a -20 ° C /
min até atingir uma temperatura de -120 ° C, quando as palhetas foram
submersas em nitrogênio líquido (-196 ° C), e armazenadas para posterior
análise. O descongelamento ocorreu em banho-maria a 37ºC por 30 segundos,
para avaliação quanto à motilidade total e vigor no teste de termo resistência
(TTR), cinética espermática, integridade da membrana plasmática e acrossomal,
quantificação da lipoperoxidação da membrana espermática, e determinação da
concentração de glutationa reduzida.

2.4 Cinética Espermática

A cinemática espermática foi avaliada por meio do Sistema de Análises
de espermatozoide Computadorizado (CASA - Classe ™ software (Microptics,
SL, versão 3.2.0, Barcelona, Espanha). As variáveis avaliadas foram: motilidade
progressiva (MOP-- μm/s), velocidade curvilinear (VCL - μm/s), velocidade em
linha reta (VSL- μm/s), velocidade média do percurso (VAP-μm/s), linearidade
(LIN - %), retilinearidade (STR-%), deslocamento lateral de cabeça (ALH - μm),
oscilação (WOB - %) e frequência de batimento cruzado (BCF-Hz), para cada
espermatozoide analisado.

2.5 Avaliação Morfológica

A morfologia foi estimada em cada amostra de sêmen descongelado, pelo
método de câmara úmida, avaliados 200 espermatozoides por observação
microscópica (1000x), na qual a porcentagem das diversas alterações
morfológicas foi agrupada e classificada em espermatozoides normais,
espermatozoides com defeitos de cabeça, espermatozoides com defeitos de
peça intermediária e espermatozoides com defeitos de cauda (Marques e
Mendes, 2017).

2.6 Quantificação da Lipoperoxidação da Membrana Espermática

A taxa de peroxidação lipídica dos espermatozoides foi estimada pela

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medida do nível de malonaldeído (MDA), utilizando o ácido tiobarbitúrico (TBA),

baseado no método descrito por Buege e Aust (1978). Os níveis de malonaldeído
foram medidos após a suplementação de 500 μL de sêmen pós-criopreservado,
mais Tampão Tris-ácido cítrico, pH 7,4, adicionado a 1mL do reagente TBA e 1%
(v/v) de BHT 50mM. A mistura foi tratada em água fervente (100 °C) durante 15
min. Posteriormente as amostras foram resfriadas, e centrifugadas a 1.200g por
15 min. O sobrenadante foi removido e a absorbância foi medida a 532 nm em
espectrofotômetro UV-VIS (Perkin Elmer - Lambda). A concentração de MDA foi
determinada pela curva de calibração feita diariamente com malonaldeído (MDA)
como padrão, nas concentrações de 1 a 20mmol. O MDA produzido foi expresso
em µmol de TBARS/mL de diluidor.

2.7 Método da Determinação dos Níveis de Glutationa Reduzida (GSH)

A determinação da concentração de GSH foi baseada na reação de
Ellman (5,5’-ditiobis (ácido 2-nitrobenzoico), conforme algumas modificações da
técnica descrita por Khan et al (2011). Em um tubo contendo tampão EDTA pH
5,4, foram adicionados 400 μL de sêmen, acrescidos de 320 μL de água
destilada, mais 80 μL de ácido tricloroacético a 50%. O material foi agitado e
centrifugado a 3000 rpm por 15 minutos. Em seguida, foram recolhidos 400 μL
do sobrenadante e acrescido de 800 μL de tampão Tris-HCl 0,4 M, pH 8,9 e mais
20 μL de DTNB 0,01 M; após 1 minuto de reação, foi feita a leitura em
espectrofotômetro em 412 nm. A concentração foi expressa em µM/mL. Para a
curva padrão da glutationa foram feitas soluções de glutationa a 6,66; 13,33;
26,66; 40; 53,33 e 66 µM.

2.8 Teste de Fertilidade in Vitro

Os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram coletados por aspiração
folicular de ovários obtidos de matadouro local. Foram considerados adequados
para o cultivo in vitro os oócitos classificados em grau I e II (Leibfried e First,
1979). Os CCOs selecionados foram submetidos à maturação in vitro em meio
TCM-199 acrescido de 2,4 mM de NaHCO3; 2,2 mg/mL de piruvato de sódio; 5
µg/mL de LH; 5 µg/mL de FSH; 100 ng/µl de eGF; 1 µg/mL de estradiol; 50 µM

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de cisteína; 10% de SFB e 1% de gentamicina, por 24 horas, em estufa

incubadora à 38,5°C com 5% de CO2 e 95% de umidade. Após a maturação,
todos os oócitos foram fertilizados com sêmen criopreservado, das duas
diferentes raças, em meio base TRIS, preparado segundo a técnica de gradiente
de Percoll.
A fertilização in vitro foi realizada em gotas de 100µl de meio Fert-Talp
acrescido de 10µg/ml de heparina, cobertas com óleo mineral, com concentração
espermática de 1 × 106 espermatozoides vivos/ml, co-incubados em atmosfera
de 5% de CO2, a 38,5 ºC por 22 horas. Para a avaliação da taxa de fertilidade,
os presumíveis zigotos foram submetidos ao cultivo in vitro em estufa com
atmosfera de 5% de CO2, a 38,5 ºC. Após 48 horas de cultivo os presumíveis
zigotos foram avaliados quanto a taxa de clivagem.

2.9 Delineamento e Análise Estatística

O delineamento experimental foi em bloco ao acaso, com duas raças,
Nelore e Curraleiro Pé-Duro, oito blocos (animais), cinco repetições (coletas). As
variáveis de cinética espermática, morfologia espermática, foram submetidas a
análise de variância (ANOVA) utilizando-se o procedimento modelos lineares
gerais (Proc GLM) e para comparação de média foi utilizado o teste Tukey, na
probabilidade de 5%. As análises foram executadas através do programa
Statistical Analysis System (SAS Institute Inc, 2013). A taxa de clivagem foi
avaliada pelo teste de Qui-quadrado a 5% de probabilidade de erro. A
quantificação da glutationa reduzida e de malonaldeído foi submetida a Análise
de Variância (ANOVA), seguido de Tukey como post hoc teste, na probabilidade
de 5%. As análises foram realizadas por meio do software GraphPad Prism 6.01
(GraphPad Software, EUA, 2012).

3. Resultados
Os parâmetros cinéticos pós-descongelação de espermatozoides
criopreservados das raças Nelore e Curraleiro Pé-Duro estão apresentados na
Tabela 1. Verificando-se que após a descongelação a 37ºC, o BCF (frequência

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de batimento da cauda) foi significativamente (p<0,05) maior para a raça

Curraleiro Pé-Duro quando comparado a raça Nelore, não diferindo
estatisticamente (p>0,05) para os parâmetros de MT, MP, VCL, CSL, VAP, LIN,
STR, WOB e ALH.
Para os resultados de morfologia espermática (Tabela 2), observou-se
que a porcentagem de espermatozoides com defeitos de peça intermediária
diferiu significativamente (p<0,05) entre as raças, apresentando-se maior para a
raça Nelore.
Neste estudo, observou-se que houve diferença significativa (p<0,05)
para a determinação de malonaldeído entre as raças, verificando-se um aumento
na produção de malonaldeído para a Nelore, quando comparada à Curraleiro Pé
Duro. O mesmo não pode se observar para a quantificação de glutationa
reduzida - GSH, que não demonstrou diferença significativa (p>0,05) entre as
duas raças.
Na Figura 2 são apresentados os dados de fertilização in vitro utilizando
sêmen criopreservado das raças Nelore e Curraleiro Pé Duro. Com base na taxa
de clivagem observou- se que a fertilização in vitro foi maior na raça Nelore,
diferindo estatisticamente (p<0,05) da raça Curraleiro Pé Duro, o qual
apresentou menores resultados.

4. Discussão
A avaliação da cinética espermática realizada através do CASA tem
permitido maior objetividade e precisão nas avaliações, desta forma é
caracterizada como importante análise na determinação da qualidade seminal,
realizando avaliações múltiplas e repetidas, e seus efeitos estão relacionados a
fertilidade espermática (Guardieiro, 2013). O presente estudo observou para os
dados de cinética espermática diferença estatística (p<0,05) quanto ao
parâmetro de BCF, apresentando-se maior na raça Curraleiro Pé Duro, em
comparação a Nelore.
Em estudos realizados em touro Angus, em que as características
seminais foram analisadas por meio do CASA, observou-se que os parâmetros
de motilidade total e progressiva, BCF (após 2 horas de incubação térmica do

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sêmen) e porcentagem de células em movimento rápido, foram importantes

parâmetros para estimar a fertilidade dos touros (Oliveira et al., 2013).
Farrell et al. (1998), verificaram que a motilidade associada a velocidade
está altamente correlacionada com a fertilidade de touros. Ntemka et al. (2016)
ao comparar as características espermática entre cinco raças, observaram que
as características cinéticas, como LIN, STR e WOB, foram significativamente
menores nas raças Azul Belga (BB), e Blonde d'Aquitaine (BA).
Os parâmetros de VAP, VSL, BCF, STR e LIN, em touros, são indicadores
de uma alta correlação com a fertilidade in vivo (Farrell et al., 1998). No entanto
neste estudo, ao se avaliar a fertilização através da taxa de clivagem de
embriões bovinos, observou que o BCF sozinho não foi parâmetro suficiente para
aumentar as taxas de fertilização in vitro da raça Curraleiro Pé Duro,
correlacionando - se negativamente, uma vez que os demais parâmetros não
diferiram entre as raças em estudo.
Ntemka et al (2016) estudando as características espermática entre cinco
raças observou um maior percentual de espermatozoides normais na raça
Holandesa, em comparação a menores percentuais nas raças Limousin e Azul
Belga. Para os defeitos de cabeça a raça Azul Belga apresentou maiores
porcentagem de defeitos, e para cauda a raça Holandesa apresentou menores
taxas.
As alterações morfologias do sêmen são importantes indicadores da
redução da fertilidade nas diversas espécies animais (Saacke, 2008), sendo
facilmente correlacionável ao aumento na taxa de espermatozoides defeituosos
com uma alta produção de ROS. Neste estudou observou-se um aumento na
porcentagem de espermatozoides com defeitos de peça intermediária para a
raça Nelore em relação a Curraleiro Pé Duro.
O aumento na porcentagem de defeitos de peça intermediária pode ser
resultado do processo de criopreservação e da alta produção de MDA,
observado na raça Nelore, o que levou a modificações patofisiológicas nos
espermatozoides. Os danos provocados pelas ROS podem induzir a alterações
na integridade da membrana mitocondrial ocorrendo a depleção do ATP

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intracelular e insuficiente fosforilação da proteína do axonema. Mas mesmo

diante desta sequência de possíveis eventos, a taxa de fertilização in vitro na
raça Nelore foi maior que a do Curraleiro Pé Duro, não apresentando uma
correlação entre estes parâmetros.
A criopreservação através das alterações térmicas e osmóticas, atua
sobre as células espermáticas induzindo a geração de espécies reativas ao
oxigênio (ROS), resultando em danos morfológicos e funcionais das membranas
espermática, e comprometendo a motilidade dos espermatozoides, a integridade
da membrana e o potencial de fertilização (Hu et al., 2010).
O sistema antioxidante do sêmen compreende diferentes substâncias
como taurina, glutationa em forma reduzida, glutationa peroxidase, catalase e
superóxido dismutase para prevenir danos oxidativos. No entanto o
espermatozoide devido ao tamanho do seu citoplasma, apresenta capacidade
antioxidante reduzida (Sariözkan et al., 2009). O equilíbrio entre a atividade
antioxidante e geração de substâncias oxidativas é fundamental para eventos,
como a capacitação e reação acrossômica dos espermatozoides (O'Flaherty et
al., 1999).
Neste estudo observou-se que os espermatozoides criopreservados da
raça Nelore produziram mais MDA, quando comparados aos da raça Curraleiro
Pé Duro. A presença ou a adição de ácidos graxos poliinsaturados ao diluidor
podem melhorar os parâmetros de motilidade total e progressiva e a viabilidade
do sêmen pós-descongelação, em animais Bos taurus, como foi observado na
raça Pardo Suíço (Monique, 2013). Assim, acredita-se que a raça Curraleiro Pé
Duro possua no plasma seminal um sistema redox equilibrado, com
concentrações de ácidos graxos poliinsaturados nos espermatozoides, em níveis
necessários para manter a taxa de peroxidação lipídica baixa. Alguns autores
verificaram que o efeito positivo, representado pela baixa produção de MDA,
ocorra devido a maiores porcentagens de ácido docosahexaenóico (DHA, n-3) e
da proporção de n-3/n-6 nos espermatozoides, antes e após a criopreservação.
Técnicas como a cromatografia gasosa, podem ser úteis na determinação das
concentrações de ácidos graxos na célula.
A diferença estatística observada no teste de TBARS neste estudo, deve-

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se também a interação de frutose, fonte de energia do espermatozóide bovino e

presente na solução crioprotetora, com o ácido tiobarbitúrico (TBA) diminuindo
as concentrações de MDA no sêmen da raça Curraleiro Pé Duro, quando
comparado ao Nelore (Rodrigues, 2009).
Rodrigues et al. (2008) ao estudarem os níveis de MDA em amostras
seminais frescas (espontâneo) e criopreservadas (induzido) colhidas de bovinos
da raça Simental e Nelore durante o verão, observaram um aumento no nível de
peroxidação lipídica nas amostras frescas nos touros simentais (845 ng/10 6
espermatozóides VS 497 ng/106 espermatozóides, p< 0,05).
Se a composição lipídica da membrana plasmática é a maior determinante
da motilidade, sensibilidade à criopreservação, viabilidade espermática e a
capacidade de fusão dos gametas, induzindo modificações da taxa de fertilidade,
desta forma alterações nas concentrações destes podem induzir peroxidação
lipídica, com consequente aumento na produção de MDA. Isso demonstra que
os antioxidantes podem ser utilizados para exercer efeito de proteção na
membrana dos espermatozoides criopreservados, reduzindo a suscetibilidade à
oxidação, preservando a atividade metabólica e viabilidade celular (Monique,
2013).
A capacidade de fertilização do sêmen neste estudo foi observada através
dos dados de clivagem, utilizando-se sêmen das raças Nelore e Curraleiro Pé
Duro, para fertilização de oócitos de fêmeas mestiças zebuínas, fator que pode
ter influenciado nos resultados obtidos, uma vez que alguns trabalhos
evidenciam que a raça da fêmea e do touro influenciam nas taxas de clivagem e
de blastocisto na produção in vitro (PIV) de embriões bovinos (Blondin, et al.,
2009).
Alguns estudos sugerem que as taxas de clivagem e de blastocisto de
fêmeas Bos taurus são comparáveis às taxas obtidas com fêmeas Bos indicus,
relacionando os resultados mais à qualidade oocitária, do que ao fator racial
(Pontes et al., 2010), contrário ao observado nesta pesquisa, que verificou uma
diferença significativa na taxa de fertilização in vitro em função das raças, com
um aumento desta taxa no grupo fertilizado com sêmen Nelore.

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TOUROS
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Nabhan et al. (2011), ao avaliarem a produção in vitro de embriões em

diferentes combinações, raça da doadora de oócitos x raça do touro, observaram
que nos embriões Holandês x Gir, a taxa de clivagem foi inferior à das demais
combinações estudadas, e a combinação Nelore x Nelore proporcionou os
melhores resultados.
Nascimento et al.(2015), ao estudarem o efeito do sêmen sexado e
convencional na fertilização in vitro de touros 5/8 girolando, observaram o efeito
inerente ao touro, no sêmen, sobre a fertilização in vitro de oócitos bovinos, que
apresentou diferenças significativas entre touros da mesma raça e em partidas
do mesmo touro, tanto na taxa de fertilização in vitro quanto na taxa de
sobrevivência embrionária, reafirmando que o fator touro tem importância
determinante quanto à capacidade de fertilização, bem como quanto à
capacidade de crescimento dos embriões clivados até mórula e seu posterior
desenvolvimento até o estádio de blastocisto.
Ward et al. (2001) em seus estudos observaram que o sêmen é o
componente da fertilização in vitro, determinante das primeiras clivagens,
demonstrando que o sêmen é indispensável para o desenvolvimento do embrião.
Este efeito foi demonstrado a partir da cinética do início do desenvolvimento
embrionário medido pelo tempo da primeira clivagem que variou entre diferentes
touros, e essas diferenças poderão ser usadas para discriminar touros de alta e
baixa fertilidade.

5. Conclusão
O sêmen criopreservado da raça Curraleiro Pé Duro apresentou menores
alterações morfológicas de peça intermediária e reduzido estresse oxidativo.

COMITÊ DE ÉTICA

O estudo foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA) da

EMBRAPA MEIO NORTE, sob o protocolo de 001/2016. 80.

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Mascarenhas Costa, Felipe Pereira da Silva Barçante, Jefferson Hallisson Lustosa da Silva, José
Adalmir Torres de Souza
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ANEXOS

Tabela 1 - Parâmetros cinéticos do sêmen descongelado, avaliados pelo Sistema de Análise

Computadorizada (CASA), das raças Nelore e Curraleiro Pé-Duro
Parâmetros de motilidade N Nelore Curralero Pé-Duro
MT 40 33,48 ± 14.32 38.70 ± 22.72
MP 40 19,04 ± 7.93 24.44 ± 13.75
VCL 40 57,99 ± 17.06 61,35 ± 15.57
VSL 40 23,84 ± 7.95 26,19 ± 8.11
VAP 40 33,08 ± 9.34 35,57 ± 9.51
LIN 40 40,82 ± 5.56 42,21 ± 3.83
STR 40 70,91 ± 6.81 72,87 ± 4.41
WOB 40 57,48 ± 4.52 57,83 ± 2.23
ALH 40 3,63 ± 0.85 3,69 ± 0.44
BCF 40 8,92 ± 2.56b 10,92 ± 1.52a
HIPER 40 4,57 ± 4.36 5,45 ± 6.68
Os valores são expressos como média ± desvio padrão (DP).
MP - Motilidade progressiva; VCL – velocidade curvilínea; VSL - velocidade em linha reta; VAP
– velocidade média de percurso; LIN - linearidade; STR - retilinearidade; WOB – Oscilação;
ALH - Amplitude de deslocamento lateral da cabeça e BCF - frequência de batimentos de
cauda. Valores de média com letras diferentes na mesma linha indicam diferenças
significativas (p<0,05) pelo teste de Tukey.
Fonte: Autoria própria

Tabela 2 - Avaliação da morfologia espermática (%) de sêmen criopreservado em diluidor

TRIS-gema, de duas diferentes raças
Defeitos
Raças N Normais Defeito de Defeito de peça Defeito de cauda
cabeça intermediária (%) (%)
(%)
Nelore 40 85,00 ± 10.96 0,95 ± 1.14 2,90 ± 2.65a 11,20 ± 9.66
Curraleiro
Pé Duro 40 86,40 ± 6.99 2,20 ± 4.16 1,30 ± 1.17b 10,10 ± 6.28
Os valores são expressos como média ± desvio padrão (DP).
Valores de média com letras diferentes na mesma coluna indicam diferenças significativas (P
<0,05) pelo teste de Tukey.
Fonte: Autoria própria

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Figura 1 - Quantificação de MDA e GSH em sêmen pós-criopreservado de touros, de duas

diferentes raças. MDA: Malonaldeído. GSH: Glutationa reduzida. CN CPD: Controle Curraleiro
Pé-Duro. CN Nelore: Controle Nelore. Os valores representam a média ± D.P.M. As diferenças
entre os grupos foram determinadas por Análise de Variância (ANOVA two-way), seguido de
Sidak como post hoc teste, (p<0,05).

Fonte: Autoria própria

Figura 2 – Taxa de fertilização in vitro de oócitos bovinos utilizando o sêmen criopreservado

das raças Nelore e Curraleiro Pé Duro.

Fonte: Autoria própria

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