UFU - UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLNDIA CURSO DE GRADUAO EM QUMICA INDUSTRIAL Bioqumica 1 GQB042

Ameliana Cristina Guirelli Silva 11011QID041 talo Caetano de Melo 11011QID009 Jehorgyelly Nunes Fernandes 11011QID042 Mariane Silvestre Borges 99241 Thalita Martins Pereira Pagoto 99249

Prtica 6 Propriedades fsicas e qumicas das protenas

Uberlndia/MG 2011

a) Composio elementar: As protenas so molculas grandes, presentes em todos os seres vivos e formadas por seqncias de aminocidos ligados por ligaes peptdicas apresentando, portanto, uma estrutura nica e tridimensional. Essa estrutura o que determinar sua funo no organismo dos seres vivos. Quando a protena est em sua condio mais estvel termodinamicamente, exercendo uma funo especfica biolgica, a mesma denominada nativa. Mas, as protenas podem sofrer um processo de desnaturao, ou seja, perder a sua conformao, j que as ligaes fracas responsveis pelas estruturas secundria, terciria e quaternria so rompidas (pontes dissulfeto e/ou ligaes de hidrognio e/ou interaes hidrofbicas e/ou pontes salinas), levando precipitao da protena, perda de sua conformao mais estvel e, conseqentemente, a perda de sua funo biolgica. Agentes fsicos e qumicos podem levar a tal situao, como: alteraes de temperatura, raio X, ultra-som, cidos e bases fortes, detergentes, uria e mercaptoetanol. importante realar que na desnaturao de protenas somente so rompidas as interaes fracas, e no as ligaes peptdicas, umas vez que essas tm carter de ligao dupla e s so rompidas por aes enzimticas catalticas ou em meio extremamente cido (H2SO4 ou HCl concentrados) associado a altas temperaturas. Para verificar a desnaturao das protenas atravs de alteraes de temperatura, inicialmente, em trs tubos de ensaio, limpos e secos, adicionou-se ao primeiro uma pequena quantidade de ovoalbumina (contida na clara de ovo de galinha), ao segundo a mesma quantidade de gelatina e ao terceiro uma pitada de glicina. Ao aquecer cada tubo gradualmente em chama fraca, observou-se o cheiro de cabelo queimado em todos eles, o que caracterstico de substncias nitrogenadas, como as protenas. O aumento da temperatura rompe interaes mais fracas por conta da agitao das molculas. Em seguida, em trs tubos de ensaio, adicionou-se ao primeiro uma pequena quantidade de soluo de ovoalbumina, ao segundo a mesma quantidade de gelatina e ao terceiro uma pitada de glicina. Assim, em cada um adicionou-se uma soluo saturada de NaOH, aqueceu-se cuidadosamente em uma chama fraca e ao colocar um papel indicador na boca dos tubos, observou-se uma mudana na colorao do indicador, sendo que para o primeiro tubo o pH foi igual a 14, para o segundo 12 e para o terceiro 9. O que acontece a liberao de amnia, pelo aquecimento, deixando o pH bsico. Posteriormente, adicionou-se em um tubo uma mecha de cabelo, ao segundo uma soluo de ovoalbumina e ao terceiro a mesma quantidade de gelatina. Depois, adicionou-se uma soluo de NaOH e uma soluo de acetato de chumbo (10%). Assim, ao aquecer cuidadosamente, observou-se a formao de um precipitado preto de PbS.

Esta reao serve para identificar aminocidos sulfurados. O aquecimento de protenas em meio alcalino resulta na liberao de enxofre da cistena, a qual forma as pontes dissulfeto ( uma das quatro foras que estabilizam as protenas), sob a forma de sulfato. O sulfato evidenciado pela adio de acetato de chumbo, dando precipitado preto de PbS. A soluo com protenas apresentou colorao escura, o mesmo no pode ser observado na gelatina, pois como esta no possui a cistena e, portanto, no possui a ponte dissulfeto, o acetato de chumbo no pode quebr-la e formar o precipitado preto de PbS. A seguir, na Figura 1 est representada a formao da ponte dissulfeto.

Figura 1: Formao da ponte dissulfeto entre dois resduos de cistena.

b) Pesquisa de ligao peptdica Reao do biureto: Inicialmente, em trs tubos de ensaio adicionou-se ao primeiro a soluo de ovoalbumina, no segundo a soluo de gelatina e ao terceiro a soluo de glicina a 1%. Assim, acrescentou-se a cada tubo uma soluo de NaOH. Em seguida, agitou-se os tubos e adicionou-se gota a gota soluo de sulfato de cobre a 0,5 %. Desta forma, observou-se a formao de uma colorao violeta, que caracterstica da ligao peptdica. O NaOH, presente em soluo, conduz a cadeia peptdica a um desarranjo em sua estrutura tridimensional. Os ons Cu2+ presentes em soluo, originados do sulfato de cobre, formam um complexo com os aminocidos, estabelecendo interaes com os tomos de nitrognio da cadeia peptdica. Esse complexo formado confere uma colorao violeta caracterstica a soluo, o qual est representado na Figura 2 a seguir:

Figura 2: Complexo violeta formado na reao do biureto.

O biureto uma substncia formada pela mistura de cobre, hidrxido de sdio e um complexo que estabiliza essa mistura. Dessa forma, quando em soluo que contenha protenas, essas formam um complexo violeta, em solues salina, uma vez que o on cuproso se liga ao nitrognio dos aminocidos. Posteriormente, em um tubo de ensaio colocou-se uma pitada de uria e aqueceu-se o tubo em chama direta at a fuso da uria. Deixou-se o tubo esfriar, dissolveu-se o resduo do tubo em NaOH e adicionou-se a soluo de sulfato de cobre como no experimento anterior. Com duas gotas a soluo j ficou com colorao violeta, pois forma o complexo como anteriormente, devido a presena dos grupos carbamnicos (-OC-NH2-). c) Reaes qualitativas para identificao de protenas: c.1) Reao de Millon: Inicialmente, adicionou-se em um tubo de ensaio uma soluo de ovoalbumina e adicionou-se o reativo de Millon. Observou-se a formao de um precipitado branco. E quando se aqueceu, gradualmente, chama observou-se a colorao levemente vermelha que o precipitado adquiriu. Esta reao devida a presena do grupo hidroxifenil (C6H5-OH), existente na no aminocido tirosina. Nesse teste, o grupamento fenlico da tirosina primeiramente sofre nitrao pelo cido ntrico em soluo. Esse produto formado reage com os ons mercrio (I) e (II), na soluo e formam um precipitado vermelho ou uma soluo vermelha, ambos so resultados positivos. As protenas que contm tirosina fornecem um resultado positivo. Entretanto, algumas protenas que contm tirosina formam inicialmente a um precipitado branco, que quando aquecidos tornam-se vermelhos imediatamente. Ambos os resultados so considerados positivos. Ao repetir o teste com uma soluo de fenol a 0,1% no lugar da ovoalbumina, observou-se que no houve formao de precipitado branco, pois a amostra no uma protena, mas a soluo ficou com colorao avermelhada, devido presena do grupo hidroxifenil. c.2) Reao Xantoprotica:
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Primeiramente, adicionou-se cido ntrico em um tubo de ensaio e colocou-se, cuidadosamente, uma soluo de ovoalbumina. Agitou-se e observou-se a formao de um precipitado branco. Com o aquecimento chama dissolveu-se o precipitado formado e, observou-se que a mistura se tornou amarela. E, com a adio de NaOH 40%, a colorao se intensificou e mudou para alaranjado. Alguns aminocidos contm grupamentos aromticos que so derivados do benzeno. Esses grupamentos submetem-se a reaes especficas do benzeno e seus derivados. Uma dessas reaes a nitrao do anel benznico pelo o cido ntrico. O aminocido fenilalanina contm um anel benznico, mas ele no ativado e no sofre nitrao. Essa reao de nitrao, quando usada para identificar presena de um anel benznico ativado, comumente conhecida como teste xantoprotico, porque o produto amarelo. A colorao desenvolvida em meio alcalino. Na Figura 3 pode ser observada a reao para a tirosina.

Figura 3: Reao de nitrao da tirosina no teste xantoprotico.

c.3) Reao com ninidrina:

Referncias Bibliogrficas 1. http://www2.ucg.br/cbb/professores/19/Nutricao/Bioquimica/Reacao%20de%20 Biureto.pdf Acesso em 14/11/11. 2. LEHNINGER, A. L. Principles of Biochemistry vol. I. 4th Edition. W H FREEMAN & Co., 2004. 1125p. 3. www.scribd.com/doc/29123981/calors Acesso em 14/11/11.
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