FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS DE RIBEIRO PRETO - USP DEPARTAMENTO DE FSICA E QUMICA DISCIPLINA DE BIOQUMICA

CURSO DE ODONTOLOGIA

Prticas de Bioqumica Conceitos Gerais

Elaborao:
Profa. Dra. Yara Maria Lucisano Valim (Coordenao) Profa. Dra. Ana Isabel de Assis Pandochi Prof. Dr. Augusto Csar C. Spadaro Profa. Dra. Carem Gledes Vargas Rechia Prof. Dr. Carlos Curti Dra. Luciana Mariko Kabeya Dra. Daniela Trinca Bertazzi

2008

UNIVERSIDADE DE SO PAULO FACULDADE DE RIBEIRO PRETO CINCIAS FARMACUTICAS DE

Reitora: Profa. Dra. Suely Vilela Vice-Reitor: Prof. Dr. Franco Maria Lajolo Diretor: Prof. Dr. Augusto Csar C. Spadaro Vice-Diretor: Prof. Dr. Jairo Kenupp Bastos

DEPARTAMENTO DE FSICA E QUMICA

Chefe do Departamento: Profa. Dra. Pierina Sueli Bonato Suplente do Chefe do Departamento: Profa. Dra. Glria Emlia Petto de Souza Endereo: Faculdade de Cincias Farmacuticas de Ribeiro Preto USP Departamento de Fsica e Qumica Disciplina de Bioqumica Via do Caf, S/N 14.040-903 - Ribeiro Preto - S.P. - Brasil Fone: (16) 3602-4179 Fax: (16) 3602-4880

SUMRIO
5 INTRODUO AO LABORATRIO .......................................................... I. Recomendaes gerais ............................................................... 5 II. Antes do experimento ............................................................... 6 6 III. Durante o experimento .............................................................. III.A. manuseio dos reagentes ...................................................... 6 III.B. preparo de solues ......................................................... 6 III.C. medida do volume de lquidos ................................ 7 III.D. aquecimento de lquidos em tubo de ensaio e chama de bico Bunsen ................................................................ 7 IV. Depois do experimento .............................................................. 7 8 V. Acidentes mais comuns em laboratrio e primeiros socorros .......................... 9 VI. Principais vidrarias e materiais utilizados nas aulas prticas ..................... PREPARO DE SOLUES ................................................................ 11 I. Introduo ................................................................ 11 II. Formas de expressar a concentrao das solues ................................ 11 II.A. Molaridade ................................................................ 11 II.B. Concentrao da soluo expressa em porcentagem .............................. 12 II.C. Partes por milho (ppm) ...................................................... 13 III. Informaes sobre o reagente ....................................................... 14 III.A. Porcentagem de pureza do reagente ................................ 14 III.B. Densidade ................................................................ 15 IV. Diluio de solues ............................................................... 15 IV.A. Frmula geral ................................................................ 15 IV.B. Diferena entre diluio A:B e mistura na proporo A:B ...................... 16 V. Medida do volume de solues ....................................................... 18 VI. Procedimento geral para uso de pipetas ................................ 19 TITULAO .......................................................................... 21 I. Definio de termos ................................................................ 21 II. Preparo do titulante ............................................................... 21 III. Titulao cido-base ............................................................... 22 CAPACIDADE TAMPONANTE .............................................................. 26 I. Dissociao da gua ................................................................ 26 II. Relao entre [H+] e [OH-] em solues aquosas e o valor do pH ...................... 26 III. Teoria de Brnsted-Lowry para cidos e bases ................................ 28 IV. Dissociao de cidos fracos ....................................................... 29 V. Soluo tampo ................................................................ 30 V.A. Aspectos gerais ............................................................... 30 V.B.. Como funciona uma soluo tampo ................................ 31 V.C. A equao de Henderson-Hasselbach ................................ 33 VI. Capacidade tamponante .............................................................. 33 VI.A. Aspectos gerais .............................................................. 33 VI.B. Capacidade tamponante da saliva ................................ 34 VI.C. Clculo da capacidade tamponante ................................ 34 VII. Resumo ................................................................ 35 VII.A. Itens levados em considerao na elaborao de uma soluo 35 tampo ................................................................

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VII.B. Principias equaes citadas neste captulo ................................ 35 VII.C. Regras matemticas envolvendo logartmos ................................ 35 VIII. Exemplo de preparo de uma soluo tampo ................................ 36 38 PROTENAS .......................................................................... I. Introduo ................................................................ 38 II. Reaes para aminocidos ........................................................... 39 III. Reaes para identificao de protenas ................................ 39 IV. Separao de protenas por precipitao ................................ 40 IV.A. Precipitao pelos reagentes de alcalides ................................ 40 IV.B. Precipitao fracionada por solues salinas concentradas .................... 41 GLICDEOS .......................................................................... 42 I. Introduo ................................................................ 42 II. Parte experimental ................................................................ 44 II.A.Preparao da soluo de amido ................................ 44 II.B.Pesquisa de amido na soluo preparada ................................ 44 II.C.Obteno de glicose a partir da soluo de amido preparada .................... 45 II.D. Caracterizao qumica dos glicdeos ................................ 45 II.D.1.Reao com alfa-naftol (teste de Molisch) ............................... 45 II.D.2.Pesquisa de sacardeos redutores (reao de Benedict) ................... 46 LIPDEOS ........................................................................... 48 I. Introduo ................................................................ 48 II. cidos graxos ................................................................ 48 III. Propriedades gerais ................................................................ 50 III.A. Solubilidade ................................................................ 50 III.B. Saponificao ............................................................... 50 III.C. Propriedade dos sabes ...................................................... 50 SALIVA ............................................................................. 52 I. Introduo ................................................................ 52 II. Estudo da atividade da amilase salivar ................................ 53 II.A.Fatores que influenciam na atividade enzimtica ............................... 53 II.A.1.pH ................................................................ 54 II.A.2.Temperatura ............................................................. 54 II.A.3.Concentrao de substrato ................................ 54 II.A.4.Concentrao de enzima .................................................. 55 II.A.5.Presena dos cofatores e/ou coenzimas ................................ 55

INTRODUO AO LABORATRIO
O laboratrio um lugar privilegiado para a realizao de experimentos, possuindo instalaes de gua, luz e gs de fcil acesso em todas as bancadas. Possui ainda local especial para manipulao das substncias txicas, denominado capela, que dispe de sistema prprio de exausto de gases. O laboratrio um local onde h um grande nmero de substncias que possuem os mais variados nveis de toxicidade e periculosidade. Este um local bastante vulnervel a acidentes, caso no se trabalhe com as devidas precaues. As regras gerais de segurana em laboratrio resultam de vrios anos de esforos de pessoas preocupadas em tornar o trabalho no laboratrio uma atividade segura, minimizando os riscos de acidentes. Para tirar o mximo de proveito delas, necessrio que todos os usurios as conheam e as pratiquem, desde o primeiro instante em que pretenderem permanecer em um laboratrio. So regras simples, fceis de memorizar e de seguir. I. RECOMENDAES GERAIS 1. Tendo qualquer dvida solicite aos professores os devidos esclarecimentos. 2. Comparea s aulas nos dias e nos laboratrios designados para sua turma. 3. Lembre-se que o laboratrio um lugar para trabalhos srios e no para experimentos ao acaso; portanto, evite brincadeiras que dispersem a sua ateno e a de seus colegas. 4. Realize somente os experimentos indicados na aula. Nada, alm disso. Voc no sabe avaliar o perigo e a abrangncia do procedimento inocente que pretende fazer. 5. Vestimenta Recomendada Avental longo (at os joelhos) Cala comprida Sapato fechado culos de segurana Luvas de material adequado Cabelo comprido preso No recomendada Bermuda ou short Calado aberto (sandlia, chinelo) Uso de lente de contato Uso de braceletes, correntes ou outros adereos Cabelo comprido solto

6. No permitido no Laboratrio: Fumar, comer e beber Sentar no cho, sentar ou debruar na bancada Correr 7. No deixar livros, blusas, etc., jogados nas bancadas; coloque-os longe do local do experimento. 8. Quando houver quebra ou danos nos materiais ou aparelhos, comunique aos professores. 9. Certifique-se da localizao dos itens de emergncia, principalmente: chuveiro de emergncia, lava-olhos, extintores de incndio, sadas de emergncia.

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II. ANTES DO EXPERIMENTO 1. Leia as prticas com antecedncia para obter melhor aproveitamento das aulas. 2. Vista o avental (guarda-p, bata). 3. Organize o seu campo de trabalho. 4. Verifique se o material est em condio adequada para uso (no utilize material de vidro trincado ou quebrado). III. DURANTE O EXPERIMENTO III.A. Manuseio dos reagentes 1. No troque os reagentes de uma bancada para outra. 2. Leia duas vezes o rtulo dos frascos de reativos, antes de utilizlos. Nunca utilize um reagente que no esteja identificado ou rotulado. 3. No manuseie slidos e lquidos desconhecidos apenas por curiosidade. 4. Identifique imediatamente qualquer reagente ou soluo preparada. 5. Para evitar contaminao das solues: - Antes de introduzir pipetas nas solues, certifique-se de que esto limpas; - Use sempre uma pipeta para cada reagente; - No troque as rolhas ou tampas dos frascos dos reagentes; - Nunca devolva a soluo para o frasco estoque; - No use a mesma vidraria para medir substncias ou solues diferentes. 6. Nunca teste amostras ou reagentes pelo sabor. No leve boca qualquer reagente, nem mesmo o mais diludo. 7. Para verificar o odor da substncia, nunca leve o rosto diretamente sobre o frasco. Os vapores devem ser abanados com uma das mos em direo ao nariz, enquanto se segura o frasco com a outra mo. 8. No leve a mo boca ou aos olhos enquanto estiver manuseando produtos qumicos ou biolgicos. 9. Reagentes volteis ou txicos devem ser manuseados na capela. 10.Nunca deixe ou abra frascos de lquidos inflamveis (ter, lcool, acetona, benzeno, etc.), nas proximidades de chamas. 11.Para medir substncias corrosivas ou txicas, obturar a extremidade superior da pipeta com um pouco de algodo, ou usar uma bureta, que mais seguro. 12.Quando pipetar sangue, cido concentrado ou solues alcalinas concentradas lavar imediatamente com gua o material utilizado. 13.No pipetar solues ou amostras com a boca, use pipetador ou pra de suco. III.B. Preparo de solues 1. Solues cidas: para preparar solues de cidos fortes (sulfrico, clordrico, ntrico, etc), verter sempre o cido sobre a gua, nunca a gua sobre o cido, porque provoca reao exotrmica violenta. 2. Solues alcalinas (NaOH, KOH, etc.): tome bastante precauo pois a reao exotrmica e corrosiva. Mantenha o frasco em banho de gelo

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para evitar quebras. No aspirar os vapores capela). Acondicionar em frascos plsticos. desprendidos, usar a

3. Solues alcolicas: o lcool e a gua devem ser medidos separadamente e depois reunidos, porque h diminuio do volume total.

III.C. Medida do volume de lquidos 1. O lquido no interior da vidraria forma menisco. A leitura deve ser feita na parte inferior do menisco, e na altura da linha dos olhos. 2. O material volumtrico vem calibrado com gua destilada a uma dada o temperatura, conforme vem registrado (15, 20, 25 C). 3. As pipetas volumtricas tm maior preciso que as graduadas, sendo utilizadas para preparo de solues padres e molares. 4. Para uso das pipetas graduadas, observar o quadro abaixo: para medir volumes entre 0 e 1 1 e 2 2 e 5 5 e 10 mL mL mL mL usar pipeta de 1 mL (graduada ao centsimo) 2 mL (graduada ao centsimo) 5 mL (graduada ao dcimo) 10 mL (graduada ao dcimo)

Acima de 10 mL recomenda-se o uso de proveta ou bureta.

III.D. Aquecimento de lquidos em tubo de ensaio e chama de bico de Bnsen 1. Para aquecer o tubo de ensaio na chama direta, no bico de Bnsen, observe se o tubo est externamente seco, caso contrrio, seque o mesmo antes de efetuar a operao. 2. Segure o tubo com o auxlio de pina adequada, de madeira ou metal, e mantenha-o em constante agitao, em cima da chama e fora dela, para que o aquecimento seja uniforme. 3. Dirigir a boca do tubo para o lado oposto ao seu, nunca em direo a si mesmo ou ao colega, pois poder ocorrer um esguicho e com isto atingi-lo. 4. Aquecer lentamente, sem permitir que a chama aquea o vidro na parte sem lquido, para evitar o superaquecimento e a quebra do tubo. 5. Espere sempre que o vidro quente volte a esfriar antes de peg-lo. Lembre-se, o vidro quente parece sempre estar frio. 6. Terminado o uso do bico de Bnsen, verifique se as torneiras do gs esto bem fechadas, evitando assim exploses e intoxicaes. IV. DEPOIS DO EXPERIMENTO Descartar os reagentes conforme recomendado em cada aula. Passe gua de torneira nos tubos e outros materiais utilizados e deix-los em bacia na pia. As pipetas devem ser colocadas dentro das cubas.

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V. ACIDENTES MAIS COMUNS EM LABORATRIOS E PRIMEIROS SOCORROS CORTES - Lavar o ferimento em gua corrente abundante e em seguida comprimir com ajuda de algodo/gaze. - Sempre que possvel, elevar a parte ferida acima do nvel do corpo. QUEIMADURAS Superficiais: quando atingem algumas camadas da pele. Profundas: quando h destruio total da pele.

A)QUEIMADURAS TRMICAS - causadas por calor seco (objetos aquecidos ou chama) A1) Tratamento para queimaduras leves - pomada picrato de butesina, paraqueimol, furacim soluo, etc. A2) Tratamento para queimaduras graves - elas devem ser cobertas com gaze esterilizada umedecida com soluo aquosa de bicarbonato de sdio a 1%, ou soro fisiolgico, encaminhar logo assistncia mdica. B) QUEIMADURAS QUMICAS - causadas por cidos, lcalis, fenol, etc. B1) Por cidos: lavar imediatamente o local com gua em abundncia. Em seguida, lavar com soluo de bicarbonato de sdio a 1% e, novamente com gua. (ATENO: no caso de contato da pele com cido sulfrico concentrado, primeiramente enxugue a regio com papel absorvente, para somente depois lav-la com gua). B2) Por lcalis: lavar a regio atingida imediatamente com gua. Tratar com soluo de cido actico a 1% e, novamente com gua; B3) Por fenol: lavar com lcool absoluto e, depois com sabo e gua; ATENO: No retire corpos estranhos ou graxas das leses. No fure as bolhas existentes. No toque com as mos a rea atingida. Procure atendimento mdico com brevidade. C) QUEIMADURAS NOS OLHOS Lavar os olhos com gua em abundncia ou, se possvel, com soro fisiolgico, durante vrios minutos, e em seguida aplicar gaze esterilizada embebida com soro fisiolgico, mantendo a compressa, at atendimento mdico. ENVENENAMENTO POR VIA ORAL A droga no chegou a ser engolida: Deve-se cuspir imediatamente e lavar a boca com muita gua. Levar o acidentado para respirar ar puro. B) A droga chegou a ser engolida: Deve-se chamar um mdico imediatamente. Dar por via oral um antdoto, de acordo com a natureza do veneno. A) INTOXICAO POR VIA RESPIRATRIA Retirar o acidentado para um ambiente arejado, deixando-o descansar. Dar gua fresca. Se recomendado, dar o antdoto adequado.

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"A CALMA E O BOM SENSO SO AS MELHORES PROTEES CONTRA ACIDENTES NO

LABORATRIO"

VI. Principais vidrarias e materiais utilizados nas aulas prticas

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Exemplos de utilizao dos materiais de laboratrio

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PREPARO DE SOLUES
I. INTRODUO Soluo podem ser uma mistura gasosas homognea, ou constituda As mais por dois ou mais as

componentes por exemplo: gua salgada, gasolina, vinagre, ar. As solues slidas, lquidas. empregadas so solues lquidas aquosas (ou simplesmente solues aquosas), nas quais o solvente a gua. Uma soluo lquida consiste de duas partes: o material que foi dissolvido (soluto) e um material lquido no qual este foi dissolvido (solvente). Se dissolvssemos 1 g de cloreto de sdio e de acar em 100 g de gua, referir-nos-amos gua como solvente e ao NaCl e acar como soluto. Pode-se pensar no solvente como o componente no qual as partculas do soluto encontram-se dispersas ao acaso. Dois outros termos bastante empregados quando se refere a solues so: concentrado e diludo. So termos relativos e geralmente usados para dar uma indicao qualitativa da concentrao de um soluto em uma soluo. Assim, uma soluo concentrada de NaCl tem uma proporo maior de NaCl do que uma soluo diluda de NaCl. A palavra concentrado tambm soluo massa. A quantidade de soluto (em massa ou moles) contida no volume da soluo, so: ou seja, g/mL, a concentrao %(m/v). da soluo, pode ser expressa de por diferentes unidades de concentrao. As mais utilizadas em Bioqumica mol/L, ppm, Essas unidades descrevem forma quantitativa a composio de uma soluo. empregada que para especificar pelos certas solues fabricantes disponveis de produtos comercialmente. Por exemplo, cido sulfrico concentrado se refere fornecida laboratrios qumicos, constituda de cerca de 95% de cido sulfrico e 5% de gua, em

II. FORMAS DE EXPRESSAR A CONCENTRAO DAS SOLUES II.A. Molaridade Molaridade (M) o nmero de moles do soluto (n) dissolvido por litro de soluo. Ela calculada tomando-se a relao do nmero de moles do soluto pelo volume da soluo em litros, e expressa em mol/L. M (mol/L) = n V (litros) sendo que n = massa (gramas) massa molecular (g/mol)

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Exemplo 1: Um aluno dissolveu 8,70 g de NaCl (M.M. = 58 g/mol, pureza = 100%) em gua destilada suficiente para preparar 100 mL de soluo. Qual a molaridade da soluo? a. Calcular o nmero de moles. n = m = 8,70 g = M.M. 58 g/mol b. Converter o volume para litros. V = 100 mL = 0,1 L 0,15 moles

c. Calcular a molaridade. M = n = 0,15 moles = 1,5 mol/L V 0,1 L II.B. Concentrao da soluo expressa em porcentagem Porcentagem em massa por volume (%m/v): indica a massa do soluto (em gramas) presente em cada 100 mL de soluo. A unidade utilizada o smbolo de porcentagem (%), que pode ser seguido pela notao m/v (massa/volume). % em massa/volume = massa do soluto (g) volume da soluo (mL) X 100

Exemplos: - soluo de dextrose a 5%(m/v) contm 5 g de dextrose em cada 100 mL de soluo.

- concentrao do soro fisiolgico: NaCl 0,9% ou NaCl 0,9%(m/v) [cada 100 mL de soluo contm 0,9 g de NaCl]

Porcentagem em massa (%m/m): indica a massa de soluto (em gramas) presente em 100 g de soluo. % em massa = massa do soluto (g) massa da soluo (g) X 100

Exemplo: uma soluo de cido ntrico a 70%(m/m) contm 70 g de cido ntrico em cada 100 g de soluo.

Porcentagem em volume (%v/v): indica o volume do soluto (em mL) presente em cada 100 mL de soluo. usada para expressar a concentrao de uma soluo que consiste de lquidos apenas. % em volume = volume do soluto (mL) volume da soluo (mL) X 100

Exemplo: uma soluo de formol a 10%(v/v) contm 10 mL de formol em cada 100 mL de soluo. Quando no houver anotao aps o smbolo de %, entende-se por (massa / volume).

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II.C. Partes por milho (ppm) Uma unidade empregada para expressar baixas concentraes ppm (partes por milho). Mais recentemente, tem-se adotado a notao microgramas por mililitro (g/mL). Uma parte por milho equivalente a 1 mg/L ou 1 g/KL. (ver converso de unidades no quadro 2, pgina 16) Exemplo 2: Um frasco contm 200 mL de soluo de NaF a 0,5 mol/L. Qual a concentrao da soluo de NaF em %(m/v) e em ppm? E qual a concentrao do on Fluoreto em %(m/v) e em ppm? (massas atmicas: Na = 23; F = 19). * Concentrao da soluo: refere-se concentrao do sal (Na+F-) a. Massa molecular do NaF. M.M. = 23 + 19 = 42 g/mol b. Nmero de moles de NaF contidos em 200 mL de soluo. 0,5 mol/L ____ 0,5 mol de NaF ___ 1000 mL de soluo x ___ 200 mL de soluo x = 0,1 mol de NaF c. Massa do NaF em 200 mL de soluo. 1 mol NaF ___ 42 g 0,1 mol NaF ___ Y y = 0,42 g de NaF d. Concentrao em %(m/v): massa 0,42 g de NaF ___ z ___ z = (g) em 200 mL 100 mL 0,21 g 100 mL de soluo. de soluo de soluo de NaF

Portanto, a concentrao da soluo de NaF de 0,21% (m/v).

e. Concentrao em ppm (g/mL). 0,42 g de NaF ___ 200 mL de soluo z ___ 1 mL de soluo z = 0,0021 g de NaF 1 g ___ 0,0021g ___ W = 1000000 g w 2100 g

Portanto, a concentrao da soluo de NaF 2100 g/mL ou 2100 ppm.

*Concentrao de flor: refere-se apenas concentrao do on F-. a. Massa molecular do NaF. M.M. = 23 + 19 = 42 g/mol b. Nmero de moles de NaF contidos em 200 mL de soluo. 0,5 mol/L ____ 0,5 mol de NaF ___ 1000 mL de soluo x ___ 200 mL de soluo x = 0,1 mol de NaF c. Massa do F em 200 mL de soluo. 1 mol NaF ___ 19 g de F 0,1 mol NaF ___ y y = 0,19 g de F

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d. Concentrao em %(m/v): massa (g) em 100 mL de soluo. 0,19 g de F ___ 200 mL de soluo Z ___ 100 mL de soluo Z = 0,095 g de F Portanto, a concentrao de F na soluo de 0,095% (m/v). e. Concentrao em ppm (g/mL). 0,19 g de F ___ 200 mL de soluo Z ___ 1 mL de soluo Z = 0,00095 g de F 1 g ___ 0,00095g ___ W = 1000000 g w 950 g

Portanto, a concentrao de F na soluo de 950 g/mL ou 950 ppm.

III. INFORMAES SOBRE O REAGENTE III.A. Porcentagem de pureza do reagente comum encontrar, no laboratrio, reagentes que no so 100% puros contendo percentuais variados de outros componentes (geralmente indicado no rtulo do frasco). A porcentagem de pureza de um reagente X, seja ele slido ou lquido, refere-se massa do composto X (em gramas) contida em 100 gramas do reagente. Exemplos de reagentes slidos: fluoreto de sdio, cloreto de clcio, hidrxido de sdio, cido ctrico, glucose. Exemplos de reagentes lquidos: cido sulfrico, cido clordrico, dimetilsulfxido, dimetilformamida.
REAGENTE Pureza do reagente NaCl igual a 95% significa que cada 100 g do reagente contm 95 g de NaCl 5g de impurezas

NaCl
pureza: 95%

NaCl impurezas

Exemplo 3: Suponha que o reagente NaCl utilizado pelo aluno, no exemplo 1, era de pureza igual a 80%. Qual a molaridade da soluo preparada? a. Calcular a massa de NaCl contida no 80% de pureza: 100 g do reagente 8,70 g do reagente x b. Calcular o nmero de mols n = m = 6,96 g M.M. 58 g/mol c. Converter o volume para litros V = 100 mL = d. Calcular a molaridade M = n = V reagente pesado ____ 80 g de NaCl ____ x = 6,96 g de NaCl = 0,12 mols

0,1 L = 1,2 mol/L

0,12 mols 0,1 L

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III.B. Densidade Uma das propriedades que servem para caracterizar uma substncia a sua densidade. Ela expressa a quantidade de matria contida em uma dada unidade de volume. Empregando unidades mtricas, as densidades dos slidos so comumente expressas em unidades de gramas por centmetro cbico (g/cm3), as dos gases em gramas por litro (g/L), e as dos lquidos em gramas por mililitro (g/mL) ou quilogramas por litro (Kg/L). Para os reagentes lquidos, a densidade indica a razo entre a massa da soluo e o seu volume. d = m V Os reagentes lquidos geralmente no podem ser pesados. Assim, para preparar solues a partir de um reagente lquido fundamental conhecer o valor da sua densidade, pois a partir dele obtm-se o valor do volume do reagente a ser medido. Exemplo 4: Preparar 1 L de soluo de cido actico a 0,1 mol/L. (d = 1,058 g/mL; M.M. = 60,05; pureza = 90%). a. Calcular a massa terica de cido actico 1 mol de cido actico ____ 60,05 g 0,1 mol de cido actico ____ y y = 6,0 g b. Calcular a massa real de cido actico a ser utilizada no preparo da soluo, considerando a porcentagem de pureza do reagente. 90% de pureza: 100 g do reagente ____ 90 g de cido actico z ____ 6,0 g de cido actico z = 6,7 g do reagente 6,3 mL

c. Calcular o volume do reagente a ser medido d = m ou V = m = 6,7 g = V d 1,058 g/mL

d. Importante: seqncia de passos para preparar a soluo

1. Colocar no balo volumtrico cerca de 500 mL de gua destilada 2. Adicione o volume de cido calculado (6,3 mL) 3. Completar o volume para 1 litro com gua destilada

IV. DILUIO DE SOLUES IV.A. Frmula geral Solues aquosas so freqentemente preparadas por diluio, ou seja, pela adio de gua a uma soluo mais concentrada, cuja concentrao conhecida. Quando dilumos uma soluo, evitamos o ato de pesar e dissolver a quantidade necessria de soluto. Visto que a quantidade de soluto no se altera, uma equao simples permite calcular a nova concentrao: C1 x V1 = C2 x V2

C1 e V1 so os valores iniciais de molaridade e volume C2 e V2 so os valores finais de molaridade e volume

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Ateno: as unidades de C1 e de C2 devem ser as unidades de V1 e V2 tambm devem ser as mesmas. mesmas, e as

Exemplo 5: qual o volume de H2SO4 18 mol/L necessrio para preparar 500 mL de uma soluo a 0,15 mol/L? C1 x V1 = C2 x V2 18 mol/L x V1 = 0,15 mol/L x 500 mL V1 = 0,15 x 500 18 V1 = 4,2 mL - Procedimento para diluio: em um frasco volumtrico de 500 mL, colocar um pouco de gua, pipetar 4,2 mL de H2SO4 18 mol/L e completar para um volume final de 500 mL. IV.B. Diferena entre diluio A:B e mistura na proporo A:B Para descrever o procedimento de obteno de uma soluo de uma determinada concentrao a partir da diluio de uma soluo de concentrao maior, duas expresses comumente usadas so diluio A:B e mistura na proporo A:B. Ambas tm a mesma representao grfica (A:B), o que causa uma certa confuso, mas significado qumico diferente (veja abaixo). Por isso, deve-se prestar bastante ateno na palavra que antecede a notao A:B. * Diluio A:B - Pegar um volume A e adicionar o solvente para obter o volume final B - Volume final = B * Mistura A:B - Pegar um volume A e adicionar um volume B - Volume final = A + B

Exemplo 6:

Uma aluna est no laboratrio preparando solues para avaliar a atividade de enzimas salivares. Ela precisa de soluo aquosa de NaCl na concentrao de 0,9%. Entretanto, ela no dispe do sal na forma slida, apenas de solues de NaCl mais concentradas. Os rtulos dos frascos contm informaes para diluio. Qual o procedimento de obteno da soluo a 0,9%?

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Soluo A: Concentrao: NaCl 3,6 %(m/v) Instruo do rtulo: diluir 1:4 com gua para obter NaCl 0,9% Procedimento para diluio: - Pipetar 1 mL da soluo de NaCl 3,6% - Transferir para uma proveta ou balo volumtrico - Adicionar gua destilada at obter o volume de 4 mL - Volume final: 4 mL Soluo B: Concentrao: NaCl 4,5 %(m/v) Instruo do rtulo: misturar com gua na proporo 1:4 para obter NaCl 0,9% Procedimento para diluio: - Pipetar 1 mL da soluo de NaCl 4,5% - Transferir para uma proveta - Adicionar 4 mL de gua destilada - Volume final: 5 mL Exemplo 7: Considerando o exemplo 6: A aluna estava distrada, e inverteu os procedimentos para preparar as solues. Quais as concentraes finais das solues preparadas? soluo A: NaCl 3,6 %(m/v) - ao invs de diluir 1:4 com gua, Maria misturou com gua na proporo 1:4 CA x VA = CB x VB 3,6% x 1 mL = CB x 5 mL CB = 0,72% soluo B: NaCl 4,5%(m/v) - ao invs de misturar com gua na proporo 1:4, Maria diluiu 1:4 com gua CA x VA = CB x VB 4,5% x 1 mL = CB x 4 mL CB = 1,13% Exemplo 8: O volume de soluo preparado pela aluna no exemplo 6 foi insuficiente para o ensaio. Ela precisa preparar mais 100 mL de NaCl 0,9%, partindo das solues A e B. Como ela deve proceder? Soluo A: Concentrao: NaCl 3,6 %(m/v) Instruo do rtulo: diluir 1:4 com gua para obter NaCl 0,9% C1 = 3,6% C2 = 0,9% V2 = 100 mL V1 = ?

Resoluo 1 C1 x V1 = C2 x V2 3,6% x V1 = 0,9% x 100 mL V1 = 25 mL

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Resoluo 2 Diluir 1:4 ___

1 mL NaCl __ 4 mL soluo x __ 100 mL soluo x = 25 mL NaCl

Procedimento para diluio: - Medir 25 mL da soluo de NaCl 3,6% em pipeta ou proveta - Transferir para uma proveta ou balo volumtrico - Adicionar gua destilada at obter o volume de 100 mL

Soluo B: Concentrao: NaCl 4,5 %(m/v) Instruo do rtulo: misturar com gua na proporo 1:4 para obter NaCl 0,9% C1 = 4,5% C2 = 0,9% V2 = 100 mL V1 = ?

Resoluo 1 C1 x V1 = C2 x V2 4,5% x V1 = 0,9% x 100 mL V1 = 20 mL Resoluo 2 Misturar na proporo 1:4 ___ 1 mL NaCl __ 5 mL soluo x __ 100 mL soluo x = 20 mL NaCl

Procedimento para diluio: - Medir 20 mL da soluo de NaCl 4,5% em pipeta ou proveta - Transferir para uma proveta ou balo volumtrico - Adicionar gua destilada at obter o volume de 100 mL

V. MEDIDA DO VOLUME DE SOLUES Quando adicionamos solues aquosas em provetas, buretas e pipetas, observamos que: a superfcie de separao entre o lquido e o ar no plana, mas geralmente tem formato cncavo. Essa superfcie denominada menisco. O mesmo pode tambm ser observado na poro alongada de um balo volumtrico, quando completamos o volume da soluo. A leitura do volume em tais vidrarias deve ser realizada na parte inferior do menisco.

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VI. PROCEDIMENTO GERAL PARA USO DE PIPETAS Quando usar uma pipeta (graduada ou volumtrica), coloque um pipetador adequado na parte superior do tubo de suco. Nunca use a boca para encher as pipetas, e jamais coloque uma pipeta nos lbios, seja qual for o lquido que esteja sendo medido. 1. Antes de medir o volume do lquido, lave a pipeta com uma pequena quantidade do lquido. 2. Encha a pipeta com o lquido, levando-o at 1 a 2 cm acima da marca da graduao. 3. Remova o pipetador, e coloque o dedo indicador para fechar a extremidade superior da pipeta. 4. Com o auxlio de um papel absorvente, remova todo o lquido que aderiu parte externa da haste inferior. 5. Mantenha a pipeta na posio vertical e a marca no nvel do seus olhos. 6. Deixe o lquido escorrer lentamente at que a parte inferior do menisco fique na posio correta. 7. Encoste a ponta da pipeta na parte interna do recipiente de trabalho (proveta ou balo volumtrico), remova o dedo da parte superior e deixe o lquido escoar. 8. Remova a pipeta e lave-a sob gua corrente ou conforme recomendaes especficas.
Quadro 1. Resumo dos conceitos relacionados ao preparo de solues Para uma soluo X concentrao em molaridade: n. de mols do composto X / volume em litros concentrao expressa em % % massa/volume: massa em g do composto X em 100 mL de soluo % massa: massa em g do composto X em 100 g de soluo % volume: volume em mL do composto X em 100 mL de soluo concentrao em ppm: 1 ppm = 1 g/mL = 1 mg/L = 1g/1000 L

Para um reagente Y % de pureza do reagente Y (slido ou lquido): massa em g do composto Y em cada 100 g de reagente densidade (lquido): massa em g do composto Y / volume em mL

Diluio de solues frmula geral: C1 x V1 = C2 x V2 (C1 e V1: valores iniciais; C2 e V2: valores finais) diluio (A:B) : V1 = A ; V2 = B mistura na proporo (A:B) : V1 = A ; V2 = A + B

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Quadro 2. Resumo de converses mtricas
Converses de massa 1 g = 1 g = 1 g = 1 mg = 1 mg = 1 mg = 1 g = 1 g = 1 g = 0,001 Kg 1000 mg 1000000 g 0,000001 Kg 0,001 g 1000 g 0,000000001 Kg 0,000001 g 0,001 mg = 1 x 10-3 Kg = 1 x 103 mg = 1 x 106 g = 1 x 10-6 Kg = 1 x 10-3 g = 1 x 103 g = 1 x 10-9 Kg = 1 x 10-6 g = 1 x 10-3 mg Converses de volume 1 L = 1 L = 1 L = 1 mL = 1 mL = 1 mL = 1 L = 1 L = 1 L = 0,001 KL 1000 ml 1000000 L 0,000001 KL 0,001 L 1000 L 0,000000001 KL 0,000001 L 0,001 mL = 1 x 10-3 KL = 1 x 103 mL = 1 x 106 L = 1 x 10-6 KL = 1 x 10-3 L = 1 x 103 L = 1 x 10-9 KL = 1 x 10-6 L = 1 x 10-3 mL

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TITULAO
I. DEFINIO DE TERMOS Anlise titrimtrica: anlise qumica em que se determina o volume de uma substncia de concentrao exatamente conhecida necessrio para reagir com um volume definido de uma amostra. Anteriormente, era denominada anlise volumtrica. Titulante: soluo cuja concentrao exatamente conhecida, sendo tambm chamada de soluo padro ou soluo padronizada. adicionado com o auxlio da bureta. Titulado: amostra (soluo de concentrao desconhecida). Titulao: o nome da operao de adio do titulante ao titulado at que a reao se complete. Ponto estequiomtrico ou ponto de equivalncia: o volume exato do titulante necessrio para reagir com toda a amostra. Ponto final da titulao ou ponto de viragem: o momento em que o titulante acabou de reagir com toda a amostra. Indicador: um reagente auxiliar que permite identificar o ponto final da titulao, geralmente por mudana de cor. adicionado na amostra, antes do incio do procedimento.
bureta

titulante (soluo padronizada) titulado (amostra) + indicador

garra suporte universal erlenmeyer

Figura 1. Esquema ilustrativo dos componentes de uma anlise titrimtrica. II. PREPARO DO TITULANTE Quando se dispe de um reagente com alto grau de pureza, fcil de obter, purificar e secar, que no absorva umidade da atmosfera ou perca umidade facilmente, a soluo do titulante pode ser preparada pesando-se uma massa conhecida, dissolvendo o material em um solvente apropriado (geralmente gua) e completando com solvente at um volume conhecido. O titulante obtido por este procedimento tambm denominado soluo padro primria ou padro primrio.

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Algumas de substncias adequadas ao preparo de solues padres

primrias: carbonato de sdio, hidrogenoftalato de potssio, tetraborato sdio, hidrogenoiodato de potssio, oxalato de sdio, nitrato de prata, cloreto de sdio, cloreto de potssio, iodato de potssio, iodo, bromato de potssio, nitrato de chumbo, iodato de potssio. Quando o reagente no est disponvel em pureza suficiente, como ocorre com a e maior vrias parte dos hidrxidos bsicos, (que alguns cidos umidade inorgnicos substncias higroscpicas absorvem

atmosfrica) ou deliqescentes (que perdem umidade facilmente), preparase inicialmente uma soluo de molaridade prxima desejada. Em seguida, esta soluo padronizada, isto , o valor exato da sua molaridade determinado por titulao com um padro primrio. O titulante obtido por este mtodo secundrio. Emprega-se potssio, este mtodo de indireto, por exemplo, de na preparao de solues da maior parte dos cidos, hidrxido de sdio, hidrxido de hidrxido brio, permanganato potssio, amnia, tiocianato de potssio, tiossulfato de sdio. tambm denominado soluo padro secundria ou padro

III. TITULAO CIDO-BASE

A titulao cido-base envolve reaes de neutralizao, onde um cido e uma base reagem, formando sal e gua. Este procedimento utilizado para determinar a concentrao de uma soluo cida ou bsica. HCl + NaOH NaCl + H2O A determinao da concentrao de uma soluo bsica atravs da adio de um cido padro denominada acidimetria. O oposto, ou seja, a determinao da concentrao de uma soluo cida atravs da adio de uma base chamada alcalimetria. Na titulao de uma soluo de um cido de concentrao desconhecida, um volume medido do cido adicionado a um erlenmeyer e uma soluo de concentrao conhecida de base, adicionado com o auxlio de uma bureta at que o ponto de equivalncia seja atingido. Este o ponto no qual todos os ons H+ provenientes do cido foram neutralizados pelos ons OH- provenientes da base, formando gua. No procedimento mais simples, o ponto de equivalncia indicado pela mudana de cor de um indicador adicionado antes do incio da

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titulao. Normalmente, o pH no ponto de equivalncia muda bruscamente com a adio de volumes muito pequenos de titulante. Assim, uma ntida mudana de cor fornece uma indicao clara do ponto de equivalncia. Um indicador de pH um par conjugado de cido e base de BrnstedLowry cujo cido apresenta uma colorao e a base outra. A maioria dos indicadores complexas. so molculas orgnicas
-

com

estruturas a

relativamente HIn para

Portanto,

usaremos

simplesmente

abreviao

representar a forma cida e In Assim, em soluo aquosa, Indicador

a forma bsica conjugada de um indicador.

HIn (forma cida) pH cido incolor

+ H2O

In(forma bsica) pH bsico rosa

+ H3 O+

Fenolftalena

Como pode ser observado nesse equilbrio, o indicador existe na forma cida em solues mais cidas e na forma bsica em solues menos cidas, ou mais bsicas. Em titulaes cido-base, o ponto de equivalncia no ocorre necessariamente em pH 7,0. Isto significa que deve ser escolhido um indicador adequado antes de ser iniciado o procedimento. Normalmente, o pH aproximado no ponto de equivalncia pode ser previsto, desta forma o problema se resume em escolher um indicador adequado para este pH. Tabela 1. Exemplos de indicadores de pH e suas mudanas de colorao.
Indicador pK indicador intervalo de pH aproximado para mudana de cor azul de bromofenol vermelho de clorofenol Fenolftalena Timolftalena 3,8 6,0 9,4 10,0 3,0 4,6 5,2 6,8 8,0 10,0 9,4 10,6 amarelo para azul amarelo para vermelho incolor para rosa incolor para azul mudana de cor correspondente

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NaOH

soluo do cido + fenolftalena

incio da titulao (incolor)

final da titulao (rosa)

Figura 2. Titulao de um cido com uma base, empregando fenolftalena como indicador.

Figura 3. Exemplos de curvas de titulao. A: cido forte-base forte (HCl/NaOH). B: cido fraco-base forte (CH3COOH/NaOH).

EXEMPLO: Suponha que voc queira determinar a concentrao de cido actico numa amostra de vinagre atravs de titulao. O procedimento experimental geral o seguinte: 1. Enchemos uma bureta com uma soluo de base de concentrao conhecida, digamos NaOH 0,5 mol/L. A bureta nos permite dispensar precisamente volumes variveis de soluo. 2. Em um erlenmeyer, colocamos um volume medido de vinagre, por exemplo: 10 mL, e adicionamos algumas gotas de soluo de um indicador de pH apropriado,tal como fenolftalena.

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3. Depois adicionamos lentamente o titulante, contido na bureta, sobre a amostra (vinagre) at que o indicador mude de cor. No se esquea de manter a amostra sob agitao. 4. Assim que o indicador mudar de cor, fechamos a torneira da bureta. Podemos ento ler o volume de base que foi adicionado. Suponha que foram necessrios 17,1 mL de NaOH 0,5 mol/L para neutralizar o cido actico do vinagre. 5. O clculo da concentrao de cido baseado na razo molar de cido para base. Escrevemos a equao da reao: CH3COOH + NaOH CH3COO- + H+ + Na+ + OH- CH3COONa + H2O CH3COO-Na+ + H2O

Resoluo 1: a. Inicialmente, calculamos o nmero de 17,1 mL. NaOH 0,5 mol/L __ 0,5 mol de NaOH ____ x ____ x =

mols de NaOH contidos em 1000 mL de soluo 17,1 mL de soluo 0,00855 mol de NaOH

b. Pela equao da reao, verificamos que cada mol de NaOH reage com um mol de cido. A partir dessa relao, podemos calcular o nmero de mols de cido actico contidos no volume titulado (10 mL). 1 mol de NaOH ____ 1 moL de CH3COOH 0,00855 mol de NaOH ____ Y y = 0,00855 mol de CH3COOH
c. No final, calculamos a concentrao do cido actico em mol/L. 0,00855 mol de CH3COOH ____ 10 mL de amostra z ____ 1000 mL z = 0,855 mol de CH3COOH d. Portanto, a concentrao de cido actico na amostra de vinagre 0,855 mol/L. Resoluo 2:

a. Como a reao envolve nmeros iguais de moles de cido e base, podemos tambm obter a concentrao do cido actico no vinagre de modo direto, utilizando a relao:
CA x VA = CB x VB sendo: CA e VA - concentrao e volume do cido CB e VB - concentrao e volume da base CA x VA = CB x VB CA x 10 mL = 0,5 mol/L x 17,1 mL CA = 0,855 mol/L b. Portanto, a concentrao de cido actico na amostra de vinagre 0,855 mol/L.

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CAPACIDADE TAMPONANTE
I.DISSOCIAO DA GUA A gua pura apresenta uma condutividade eltrica definida, como conseqncia de sua habilidade de sofrer autodissociao. A dissociao da gua pode ser escrita como: H2 O ou como: H2O + H2O H+ H3 O+ + + OHOH-

Para esta dissociao, a condio de equilbrio pode ser escrita como [H+].[OH-] [H2O] ou como: = K K

[H3O+].[OH-] = [H2O]2

Em qualquer um dos casos, como a concentrao de molculas de H2O essencialmente constante, [H+].[OH-] = [H2O] . K = Kw ou: [H3O+].[OH-] = [H2O]2 . K = Kw

O valor de Kw 1,0 x 10-14 a 25C. Kw a constante de dissociao da gua, tambm chamada de produto inico da gua.

II. RELAO ENTRE [H+] e [OH-] EM SOLUES AQUOSAS E O VALOR DO pH A equao [H+].[OH-] = Kw = 1 x 10-14 (a 25C) aplica-se no somente gua pura, mas tambm s solues aquosas, nas quais as [H+] e de [OH-] podem ser diferentes. Podemos afirmar, ento, que o produto da concentrao de ons hidrognio e ons hidrxido em soluo aquosa uma constante, e que temperatura ambiente (25C, usual em laboratrio) igual aproximadamente 1 x 10-14. Se a [H+] ou a [OH-] for conhecida, a outra poder ser calculada. Exemplo 1: Suponha que voc tem uma soluo de HCl 0,01 mol/L, que est completamente dissociado em H+ e Cl-. Determinar a concentrao de H+ e OH- na soluo. HCl H+ + ClConsiderando-se que o cido est totalmente dissociado, ento [H+] = [HCl] = 0,01 mol/L ou 1 x 10-2 mol/Le a [OH-] na soluo ser: [H+].[OH-] = 1 x 10-14 1 x 10-2+.[OH-] = 1 x 10-14 [OH-] = 1 x 10-12 mol/L

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Exemplo 2: Para uma soluo de NaOH 0,0001 mol/L, que est completamente dissociado, qual a concentrao de H+ e OH- na soluo? NaOH Na+ + OH-

Considerando-se que a base est totalmente dissociada, ento [OH-] = [NaOH] = 0,0001 mol/L ou 1 x 10-4 mol/L. [H+].[OH-] = 1 x 10-14 [H ].1 x 10-4 = 1 x 10-14 [H+] = 1 x 10-10 mol/L
+

Pode-se observar que existe uma relao inversa entre [H+] e [OH-] em solues. Quando uma delas aumenta, a outra diminui. Geralmente, expressa-se o valor de [H+], e no de [OH-]. A concentrao total do on hidrognio em uma soluo, ou [H+], expresso pelo valor do pH. Matematicamente, o pH definido como o valor negativo do logaritmo (log) da concentrao do on hidrognio: pH = - log[H+] ou pH = log 1/[H+]

Deve-se lembrar que os valores de pH so funes logartmicas das concentraes reais de ons H+. Portanto, uma diferena de pH de uma unidade representa uma diferena de 10 vezes na concentrao real de H+. Exemplos: pH = 3 [H+] = 0,001 mol/L pH = 4 [H+] = 0,0001 mol/L A acidez ou a alcalinidade de uma soluo determinada pelas propores de H+ e OH- presentes. Assim, soluo neutra: soluo cida: soluo alcalina: [H+] = [OH-] [H+] > [OH-] [H+] < [OH-] pH = 7 pH < 7 pH > 7

Por que o pH de uma soluo neutra igual a 7? Em uma soluo neutra [H+]=[OH-]. Assim, a concentrao hidrogeninica, [H+], em uma soluo neutra Kw = [H+].[OH-] = 1,0 x 10-14 como [H+]=[OH-]: [H+].[H+] = 1,0 x 10-14 [H+]2 = 1,0 x 10-14 [H+]= 1,0 x 10-7 mol/L pH = -log [H+] = - log 1,0 x 10-7 = -(-7) = 7

O pH de uma soluo contendo 1 mol/L de H+ zero e uma contendo 1 mol/L de OH- 14. A escala de pH de 0-14 cobre a faixa de acidez e alcalinidade das solues normalmente encontradas.

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Tomando-se o logaritmo negativo da equao: [H+][OH-] = Kw = 1 x 10-14 Tem-se: -log[H+] -log[OH-] = -logKw = 14 Como: -log[H+] = pH; -log[OH-] = pOH, -logKw = pKw Pode-se escrever: pH + pOH = pKw = 14

III. TEORIA DE BRNSTED-LOWRY PARA CIDOS E BASES Brnsted, Lowry e colaboradores desenvolveram um conceito amplo de cidos e bases que muito til. cido qualquer substncia que doa prtons (ons H+) e base qualquer substncia que combina com prtons. Em outras palavras, cidos so doadores de prtons e bases so aceptores de prtons. Exemplos: base cido HCl H+ + ClHCN CH3COOH H2CO3 HCO3H2SO4 HSO4NH4+ NH3 HOH H3O+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H
+

+ + + + + + + + + +

CNCH3COOHCO3CO32HSO4SO42NH3 NH2OHH2 O

H+ H+

De acordo com essa viso, um cido se dissocia em um prton e uma base, enquanto a base combina com um prton para formar um cido. Um doador de prton e o seu correspondente aceptor de prtons formam um par cido-base conjugado. Assim HCN produz H+ e CN-, onde HCN o cido e CN a base conjugada. A base conjugada correspondente ao cido actico (CH3COOH) o on acetato (CH3COO-). HSO4- a base produzida por dissociao de H2SO4; entretanto, HSO4- tambm o cido correspondente base SO42-. HCN cido (fraco) HCl cido (forte) H+ + CNbase conjugada (forte) Clbase conjugada (fraca)

H+

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De acordo com a teoria de Brnsted-Lowry, o cido mais fraco tem a base conjugada mais forte, e o cido mais forte tem a base conjugada mais fraca. Assim, HCN um cido fraco porque sua base conjugada forte, CN-, combina-se firmemente com prtons, enquanto que HCl um cido forte porque sua base conjugada, Cl-, combina-se fracamente com prtons. Uma substncia que atua tanto como cido quanto como base chamada anfotrica ou anftero. Exemplos: gua, hidrxido de zinco, amnia, aminocidos. NH3 + H+ NH4+ NH3 H2 O H2O + H+ H+ H+ H3 O+ + + NH2OH-

IV.DISSOCIAO DE CIDOS FRACOS cidos e bases fortes esto completamente ionizados (dissociados) em solues aquosas diludas. Os cidos e as bases fracas no se ionizam completamente quando dissolvidos em gua. Os ltimos so mais comuns em sistemas biolgicos e desempenham importantes funes no metabolismo e sua regulao. Exemplo 3: Considere as solues de CH3COOH 0,2 mol/L (1% dissociado) e de HCl 0,2 mol/L. Calcular o pH de cada uma delas. a) HCl um cido forte, portanto est completamente dissociado em soluo. Isso significa que a concentrao de H+ igual a concentrao de HCl. HCl 0,2 mol/L H+ + 0,2 mol/L Cl-

pH = -log [H+] = -log 0,2 = 0,7 b) CH3COOH um cido fraco, portanto, no est completamente dissociado em soluo. A porcentagem de dissociao informada, correspondente a 1%, significa que a concentrao de H+ igual a 1% ou 0,01 da concentrao de CH3COOH. CH3COOH 0,2 mol/L CH3COO
-

H+ 0,2 x 0,01 = 0,002 mol/L

pH = -log [H+] = -log 0,002 = 2,7 A dissociao de cidos fracos ocorre de acordo com a lei de ao das massas. As equaes de equilbrio podem ser formuladas para sua dissociao. Tais equaes no se aplicam para dissociao de cidos fortes. Considerando que a frmula geral para qualquer cido fraco monobsico HA, sua equao de dissociao : HA H+ + A-

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De acordo com a lei de ao das massas, o equilbrio pode ser expresso matematicamente como: [H+][A-]= Ka [HA] Onde Ka chamada de constante de dissociao do cido. As constantes de dissociao de cidos e bases fracas podem ser calculadas a partir dos dados obtidos pela medida da condutividade eltrica de suas solues ou pela determinao do valor do pH de suas solues. O valor de Kw da gua geralmente calculado a partir da medida de condutividade. Quanto maior o valor de Ka, mais ionizado est o cido e, portanto, maior a sua fora relativa. Freqentemente, encontramos os valores de pKa, ao invs dos valores de Ka. pKa = - log Ka ou pKa = log 1/Ka Por exemplo, no caso do cido actico, temos: [H+][CH3COO-] = Ka = 1,86 x 10-5 = 0,0000186 [CH3COOH] Para o cido ciandrico: [H+][CN-] = Ka = 7,20 x 10-10 = 0,00000000072 [HCN] (pKa = 4,73)

(pKa = 7,14)

O valor do Ka para CH3COOH (1,86 x 10-5) milhares de vezes maior que o valor do Ka para HCN (7,20 x 10-10); em contrapartida, o valor de pKa do cido actico (4,73) menor que o pKa do cido ciandrico (7,14). Dessa forma, podemos determinar a fora relativa de cidos atravs da consulta de uma tabela de Ka ou pKa. Assim, quanto mais forte um cido, maior a sua tendncia de dissociar um prton. Portanto maior a sua constante de dissociao (Ka) e menor o seu pKa. Os cidos polibsicos, que contm mais de um hidrognio ionizvel, dissociam-se em estgios, e h uma equao de equilbrio e uma constante de dissociao para cada estgio. Isto pode ser ilustrado pelo caso do cido fosfrico: H+ + H2PO4H3PO4 H2PO4HPO42H+ + H+ + HPO42PO43-

As equaes de equilbrio para cada estgio de dissociao so: [H+][ H2PO4-] [H3PO4] [H+][ HPO42-] [H2PO4-] [H+][ PO43-] [HPO42-] = K1 = = K2 = = K3 = 1,1 x 10-2 2,0 x 10-7 3,6 x 10-13 primeira, segunda e terceira

Onde K1, K2 e K3 so designadas constantes de dissociao do cido.

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V. SOLUO TAMPO V.A.Aspectos gerais O pH da gua pura (uma soluo neutra) 7,0. Se um cido adicionado gua, o seu pH diminui; se uma base adicionada gua, o pH aumenta para mais que 7,0. O quanto o pH se afastar de 7,0, em cada caso, depender da quantidade de cido ou de base adicionados e de suas foras. Contudo, quando pequenas quantidades de cido ou base so adicionadas a uma soluo tampo, o seu pH no varia apreciavelmente. Uma soluo tampo definida como uma soluo que resiste s variaes de pH, quando ocorre a adio de pequenas quantidades tanto de cidos como de bases. As solues tampo usualmente so constitudas de: Um cido fraco (HA) e um sal correspondente a esse cido (A-). ex: cido actico e acetato de sdio CH3COOH CH3COO- + H+ CH3COONa CH3COO+ Na+

Um sal de carter cido e um sal de carter bsico ex: di-hidrogenofosfato de sdio e mono-hidrogenofosfato de sdio. NaH2PO4 Na+ + H2PO4Na2HPO4 2Na+ + HPO42-

Uma base fraca (B) e um sal correspondente a essa base (BH+). ex: hidrxido de amnia e cloreto de amnia NH4OH NH4+ + OHNH4Cl NH4+ + Cl-

V.B. Como funciona uma soluo tampo Em uma soluo contendo cido actico e acetato de sdio, exemplo, tm-se as seguintes equaes de dissociao: CH3COO- + H+ CH3COOH CH3COONa CH3COO+ Na+

por

Os ons acetato provenientes da dissociao do cido so poucos em comparao com as molculas do cido no dissociado. Por outro lado, o nmero de ons acetato provenientes do acetato de sdio igual ao nmero de molculas do sal dissolvido, devido ionizao. O mecanismo qumico pelo qual os tampes funcionam podem ser ilustrados pelas modificaes provocadas pela adio de NaOH e HCl ao tampo cido actico/acetato de sdio. Adio de NaOH: O doador de prton, o cido actico (HAc), contm uma reserva de H+ ligado, que pode ser liberada para neutralizar uma adio de OH- ao sistema, formando H2O; em conseqncia, a concentrao de CH3COOH no tampo diminui e a concentrao de CH3COONa aumenta. Adio de HCl: a base conjugada, o on acetato (Ac-), pode reagir com ions H+ adicionados ao sistema, formando CH3COOH; em conseqncia, a concentrao de CH3COONa no tampo diminui e a de CH3COOH aumenta.

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Kw = [H+] [OH-] OHH2O

cido actico (CH3COOH)

HAc

Ac-

Acetato (CH3COO-)

H+ Ka = [H+] [Ac-] [HAc]

Figura 1. Esquema simplificado do mecanismo de ao do tampo cido actico/acetato de sdio, frente adio de cidos (H+) e bases (OH-).

Portanto, o sistema capaz de absorver tanto H+ quanto OH- devido reversibilidade da dissociao do cido actico. A ao tamponante simplesmente a conseqncia de duas reaes reversveis ocorrendo simultaneamente e alcanando seus pontos de equilbrio conforme expresso por suas constantes de equilbrio Ka e Kw. Cada par cido-base conjugado tem uma zona de pH caracterstico na qual efetiva como tampo: pH = pKa 1. Por exemplo, o par H2PO4-/HPO42tem um pKa de 6,86 e serve como tampo efetivo entre aproximadamente pH 5,9 epH 7,9; o par NH4+/NH3, com um pKa de 9,25, atua como tampo entre aproximadamente pH 8,3 e pH 10,3.

Figura 2. Curvas de titulao ilustrando as zonas de tamponamento de diferentes pares cido-base conjugados.

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V.C. A equao de Henderson-Hasselbach A equao de Henderson-Hasselbach derivada da expresso constante de dissociao de um cido, conforme descrito abaixo. Escreve-se a equao de dissociao de um cido fraco: HA H+ + AA respectiva constante de dissociao: Ka = [H+].[A-] [HA] Isola-se o termo [H+]: [H+] = Ka .[HA] [A-] Tira-se o logaritmo negativo de ambos os lados: -log[H+] = -logKa -log[HA] [A-] Substitui-se -log[H+] por pH e logKa por pKa: pH = pKa -log[HA] [A-] Inverte-se termo -log[HA]/[A-], para obter a equao de HendersonHasselbach: pH = pKa + log[A-] ou: pH = pKa + log [base conjugada] [HA] [cido conjugado]

da

A equao de Henderson-Hasselbach descreve o formato da curva de titulao de qualquer cido fraco e permite deduzir diversas relaes quantitativas importantes. Por exemplo, possvel verificar por que o pKa de um cido fraco igual ao pH da soluo no ponto mdio de sua titulao, neste ponto [HA]=[A-], ento: pH = pKa + log[A-] = pKa + log[A-] = pKa + log 1,0 [HA] [A-] pH = pKa = pKa + 0

A equao permite calcular: O pKa, quando o pH e a razo molar entre o doador e o aceptor de prtons so conhecidos; o pH, quando o pKa e a razo molar entre o doador e o aceptor de prtons so conhecidos; a razo molar entre o doador e o aceptor de prtons, quando o pKa e o pH so conhecidos.

VI. CAPACIDADE TAMPONANTE VI.A. Aspectos gerais As solues tampo, ou simplesmente tampes, so encontrados em todos os fluidos corporais (sangue, saliva, lgrimas, urina, etc.) e so responsveis pela manuteno do pH apropriado desses fluidos. Dois termos importantes que se referem a essas solues:

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Efeito tampo: a propriedade de uma soluo de resistir a mudanas de pH (concentrao de ons hidrognio) ao se adicionar pequenas quantidades de cido ou base. Capacidade tamponante: o quanto uma soluo tampo resiste s mudanas de pH, quando se adiciona pequenas quantidades de cido ou base.

A capacidade tamponante de uma soluo indicada pela alterao de pH provocada pela adio de cido ou base. Quanto menor a alterao de pH causada pela adio de uma dada quantidade de cido ou base, maior a capacidade tamponante da soluo, ou vice-versa.

VI.B. Capacidade tamponante da saliva

A saliva constitui um dos sistemas de defesa natural da cavidade oral contra o desenvolvimento de cries dentrias. Estas ocorrem devido desmineralizao do esmalte e da dentina causada pelos cidos produzidos pelo metabolismo bacteriano de acares. A saliva desempenha um importante papel contra a desmineralizao, porque ajuda a repor clcio e fosfato na superfcie do dente. Em pH 7, a saliva est supersaturada com esses dois minerais, o que favorece a deposio de clcio nas reas desmineralizadas. A crie ocorre quando a remoo de minerais dentrios maior que a reposio. O pH da saliva depende dos tipos de cidos e bases secretados pelas glndulas salivares. O pH da saliva pode variar de 5,6 na saliva noestimulada at 7,8 quando o fluxo salivar alto, como na saliva estimulada. Outra importante funo da saliva o tamponamento dos cidos produzidos, por meio de diversos sistemas tampes. O sistema fosfato de menor importncia na saliva estimulada, devido sua baixa concentrao, mas de maior importncia na saliva no estimulada. O sistema tampo mais importante na saliva estimulada o cido carbnico/bicarbonato. Alguns trabalhos indicam que uma boa capacidade tamponante da saliva, associada a um elevado fluxo salivar, contribuem para uma menor incidncia de cries.

VI.C. Clculo da capacidade tamponante A capacidade tamponante pode ser calculada com o uso da frmula: Cap. tamponante = onde: Ka [H+] [C] = 2,3 Ka [H ] [C] + 2 (Ka + [H ])
+

: : : :

constante de dissociao do cido concentrao hidrogninica do tampo concentrao do tampo nmero de mols/litro de H+ ou OH- necessrios para causar mudana de 1 unidade no valor do pH do tampo

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VII. RESUMO VII.A. Itens levados em considerao na elaborao de uma soluo tampo: * O par cido-base conjugado. Os elementos do par podem ser usados separadamente, ou haver a formao de um a partir do outro. + Ex.: HA H + A cido base * O pKa do cido do item acima. * A regio de tamponamento desejada: pKa + 1 * Os clculos de concentrao e de pH, utilizando as equaes: a)Henderson-Hasselbach pH = pKa + log [base conjugada] [cido conjugado] b) [tampo] = [cido conjugado] + [base conjugada]

VII.B. Principais equaes citadas neste captulo HA H+ + A-

Ka = [H+][A-] [HA] pKa = log 1/Ka = -logKa pH = log 1/[H+]= -log[H+] [H+] = 10-pH [H+].[OH-] = Kw = 1 x 10-14 (a 25C) pH + pOH = pKw = 14 pH = pKa + log [base conjugada] [cido conjugado] [tampo] = [cido conjugado] + [base conjugada] Capacidade tamponante = = 2,3 Ka [H ] [C] + 2 (Ka + [H ])
+

VII.C.Regras matemticas envolvendo logaritmos Log a.b Log a/b Log 1/a log ab log 1 = = = = = loga + logb loga logb - loga b.loga 0

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VIII. EXEMPLO DE PREPARO DE UMA SOLUO TAMPO Preparar 500 mL de tampo fosfato 0,8 mol/L pH 7,4, empregando Na2HPO4 (M.M.=142,0) e NaH2PO4 (M.M.=120,0). pKa = 6,9. a. Montar as equaes de dissociao dos sais, para identificar o e a base conjugada que compem o sistema tampo. NaH2PO4 Na2HPO4 Na+ + H2PO4HPO42cido

2Na+ +

cido conjugado (doador de prton): NaH2PO4 Base conjugada (aceptor de prton): Na2HPO4

b. Calcular as concentraes de cido e base conjugados

b1. pH = pKa + log [base conjugada] [cido conjugado] 7,4 = 6,9 + log [base conjugada] [cido conjugado] log [base conjugada] = [cido conjugado] 0,5

[base conjugada] = 100,5 = 3,162 [cido conjugado] [base conjugada] = 3,162 x [cido conjugado] b2. (equao 1)

[tampo] = [cido conjugado] + [base conjugada] 0,8 = [cido conjugado] + 3,162 x [cido conjugado] 0,8 = 4,16 x [cido conjugado] [cido conjugado] = 0,192 mol/L Voltando na equao 1: [base conjugada] = 3,16 x [cido conjugado] [base conjugada] = 3,16 x 0,192 [base conjugada] = 0,608 mol/L

b3.

Portanto, as concentraes de NaH2PO4 e de Na2HPO4 na soluo tampo so, respectivamente 0,192 mol/l e 0,608 mol/L. b. Calcular a massa de cada sal necessria para o preparo do volume desejado de tampo (500 mL) c. para o NaH2PO4: para o Na2HPO4:
0,192 mol ____ 1000 mL tampo x ____ 500 mL tampo x = 0,096 mol 1 mol ____ 120 g 0,096 mol ____ Y = 11,52 g y 0,608 mol ____ 1000 mL tampo x ____ 500 mL tampo x = 0,304 mol 1 mol ____ 142 g 0,304 mol ____ y y = 43,17 g

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d. Preparo da soluo:
Pesar os sais de acordo com as quantidades calculadas Dissolver em bquer, com aproximadamente 400 mL de gua destilada Medir o pH Ajustar o pH se necessrio Transferir a soluo para um frasco volumtrico Completar o volume para 500 mL com gua destilada

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PROTENAS
I. INTRODUO
As protenas so macromolculas complexas, compostas de aminocidos, e necessrias para os processos qumicos que ocorrem nos organismos vivos. So os constituintes bsicos da vida. Tanto que seu nome deriva da palavra grega "proteios", que significa "em primeiro lugar". A importncia das protenas, entretanto, est relacionada com suas funes no organismo, e no com sua quantidade. Os aminocidos possuem um tomo de carbono assimtrico, ao qual esto ligados um grupo amino livre, um grupo carboxila livre, um tomo de hidrognio e uma cadeia lateral. Esta ltima diferente para cada aminocido.

Figura 1. Frmula estrutural geral dos aminocidos. Nas molculas proticas, os resduos de aminocidos ligam-se covalentemente, formando longos polmeros no-ramificados. As ligaes peptdicas, que unem um aminocido a outro, so formadas pela reao entre o grupo amino de um aminocido e o grupo carboxlico do aminocido subseqente, eliminando molculas de gua.

Figura 2. Reao geral da formao de uma ligao peptdica.

Figura 3. Exemplo de peptdeo, formado por cinco aminocidos.

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II. REAES PARA AMINOCIDOS As reaes orgnicas caractersticas dos aminocidos so aquelas de seus grupamentos funcionais, isto , os grupos carboxlicos, os grupos amino, e os grupos funcionais presentes nas diversas cadeias laterais. Essas reaes permitem, por exemplo, a identificao de aminocidos nos hidrolisados proticos, identificao da seqncia de aminocidos de uma protena, identificao de aminocidos essenciais para a atividade de uma enzima. Uma reao bastante utilizada para verificar a presena de aminocidos em pequenas amostras a Reao da Ninidrina, devido sua elevada sensibilidade. Princpio da reao da ninidrina: pelo aquecimento, o grupo -amino de um aminocido reage com duas molculas de ninidrina, produzindo um complexo de cor azul, denominado Prpura de Ruhemann. A cor azul obtida na reao da ninidrina para todos os aminocidos que apresentam um grupo -amino livre. Enquanto que a prolina e a hidroxiprolina, em que o grupo -amino est substitudo, produzem derivados com uma cor amarela caracterstica.

aminocido ninidrina Prpura de Ruhemann

(Complexo azul, formado pela reao de 2 molculas de ninidrina com o N)

Figura 4. Reao da ninidrina.

III. REAES PARA IDENTIFICAO DE PROTENAS Na literatura, podem ser encontrados vrios mtodos para identificao e/ou quantificao de protenas. Eles so baseados em alguma caracterstica da molcula de protena, tal como a presena das ligaes peptdicas, o contedo de aminocidos aromticos ou de grupos R fenlicos. Uma reao bastante utilizada para verificar a presena de protenas a Reao do Biureto, devido sua alta sensibilidade. Princpio da Reao do Biureto: em meio moderadamente alcalino, os ons Cu2+ do reagente de Biureto interagem com tomos de nitrognio das ligaes peptdicas das protenas, formando complexos de cor violeta. Para a formao do complexo so necessrias quatro ligaes peptdicas para cada on Cu2+, conforme ilustrado na figura abaixo.

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A Reao do Biureto pode ser empregado tambm para determinar a concentrao de protenas em uma amostra, pois a intensidade da cor diretamente proporcional concentrao de protenas.

Figura 5. Esquema da reao do Biureto.

IV. SEPARAO DE PROTENAS POR PRECIPITAO As protenas consistem em cadeias longas, nas quais os aminocidos ocorrem em seqncias lineares especficas para cada tipo de protena. Os tipos de aminocidos (polares ou apolares) e as seqncias em que eles se encontram direcionam o enovelamento da cadeia polipeptdica, levando a uma conformao tridimensional especfica, que indispensvel para sua funo biolgica. Devido s diferenas nessas caractersticas estruturais, as protenas possuem diferentes propriedades fsico-qumicas, tais como: tamanho, massa molecular, carga eltrica e solubilidade. Essas propriedades, por sua vez, permitem que as protenas contidas em uma mistura sejam separadas umas das outras. Um mtodo bastante utilizado para separao de protenas de uma amostra a precipitao, que pode ser realizada de diferentes maneiras. Duas delas sero utilizadas nesta aula, e esto descritas a seguir. IV.A. Precipitao pelos reagentes de alcalides Os reagentes cidos utilizados para identificao de alcalides, uma classe de compostos naturais, tais como: o cido tricloroactico (TCA), combinam-se com partes positivas de protenas, formando complexos insolveis, que precipitam na soluo. Esses reagentes tambm tm ao desnaturante, ou seja, provocam a perda da conformao tridimensional da protena de forma irreversvel. Conseqentemente, a protena separada por esse mtodo perde a sua funo. Esse mtodo bastante utilizado para remover protenas de amostras de soro, plasma e leite, quando se deseja analisar a presena de minerais, tais como clcio e magnsio, ou a contaminao por metais pesados, tais como chumbo e nquel.

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IV.B. Precipitao fracionada por solues salinas concentradas Os sais neutros tm efeitos pronunciados na solubilidade das protenas globulares, podendo tanto aumentar quanto diminuir a solubilidade da protena na soluo. A capacidade desses sais de influenciar a solubilidade das protenas uma funo de sua fora inica, que depende tanto de sua concentrao como do nmero de cargas eltricas dos ctions e nions que formam o sal. Entretanto, o efeito do aumento ou da reduo da fora inica na solubilidade pode ser diferente para cada tipo de protena, o que permite que elas sejam separadas de uma mistura apenas variando-se a concentrao de sal na soluo.

SALTING-IN
Em concentraes reduzidas, os sais aumentam a solubilidade de muitas protenas, um fenmeno denominado solubilizao por salificao ou "salting-in". Os sais de ons divalentes, tais como MgCl2 e o (NH4)2SO4, so mais eficientes na solubilizao por salificao do que os sais de ons monovalentes como NaCl e KCl. Os efeitos da salificao na solubilidade so ocasionados por alteraes na tendncia ionizao dos grupos R (cadeias laterais dos aminocidos) dissociveis da protena.

SALTING-OUT
Por outro lado, medida que a concentrao do sal aumentada, a solubilidade da protena se reduz gradativamente. Em foras inicas suficientemente elevadas, uma protena pode ser quase completamente precipitada de sua soluo, um efeito denominado precipitao por salificao ou salting out. Um dos fatores que a concentrao elevada de sais pode remover a gua de hidratao das molculas de protena, reduzindo, dessa maneira, sua solubilidade; porm outros fatores podem estar envolvidos. Os precipitados proticos resultantes da precipitao por salificao mantm sua conformao nativa e podem ser dissolvidos novamente, em geral sem haver desnaturao. Conseqentemente, a funo da protena pode ser recuperada aps o trmino do processo e remoo do sal. Tabela 1. Perfil de precipitao das protenas plasmticas em funo da concentrao de (NH4)2SO4. Frao Eletrofortica Albuminas 1- globulinas 2- globulinas - globulinas - globulinas Fibrinognio % de saturao de (NH4)2SO4 para precipitao 100 46 46 40 33 20

42 GLICDEOS
I.INTRODUO Os carboidratos, ou sacardeos, so mais simplesmente definidos como poliidroxialdedos ou cetonas e seus derivados. Muitos possuem a frmula emprica [CH2O]n, que originalmente sugere hidratos de carbono. Os monossacardeos, tambm chamados de acares simples, consistem numa s unidade poliidroxialdedica ou cetnica, de frmula emprica [CH2O]n, onde n = 3 ou um nmero maior. O esqueleto de carbono dos monossacardeos comuns no-ramificado e cada tomo de carbono, exceto um, possui um grupo hidroxlico no tomo de carbono remanescente, h um oxignio carbonlico. Se o grupo carbonlico estiver na extremidade da cadeia, o monossacardeo um aldedo derivado, denominado aldose; se estiver em qualquer outra posio, o monossacardeo uma cetona derivada, denominada cetose. (figura 1).

D-glucose

D-frutose

Figura 1. Exemplos de aldose (D-glucose) e cetose (D-frutose) com seis tomos de carbono, mostradas em frmulas estruturais de cadeia aberta. A partir de vrias consideraes qumicas, deduziu-se que os monossacardeos (aldoses e cetoses) com cinco ou mais tomos de carbono no so estruturas de cadeia aberta, mas estruturas cclicas. No caso da D-glucose, formam-se estruturas cclicas de seis elementos, pela reao do grupo hidroxlico alcolico do tomo de carbono 5 com o tomo de carbono aldedico 1, conforme ilustrado na figura 2. As formas isomricas dos monossacardeos, que diferem entre si apenas na configurao ao redor do tomo de carbono carbonlico, so denominadas anmeras ou anomricas, e o tomo de carbono carbonlico denominado carbono anomrico. O monossacardeo mais abundante o acar de seis carbonos Dglucose, de onde muitos outros so derivados. A D-glucose o principal combustvel para a maioria dos organismos, e faz parte da composio de dissacardeos comuns, como maltose, lactose e sacarose, e de polissacardeos abundantes na natureza, tais como o amido e a celulose. As unidades de monossacardeos so unidas por ligaes glicosdicas, as quais so formadas pela reao do carbono anomrico de um monossacardeo com um grupamento hidroxlico de outro monossacardeo (figura 3). Dessa forma, os dissacardeos consistem em dois monossacardeos unidos por uma ligao glicosdica, e os oligossacardeos e polissacardeos so cadeias de monossacardeos unidos por ligaes glicosdicas.

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carbono carbonlico D-glucose

carbono anomrico

-D-glucopiranose

carbono anomrico

-D-glucopiranose

Figura 2. Reao de ciclizao da molcula de glucose, produzindo as formas anomricas e . A reao envolve o grupo hidroxila ligado ao carbono 5 e o tomo de carbono carbonlico 1, formando molculas cclicas com 6 tomos de carbono.

hemiacetal

lcool
hidrlise condensao

acetal

hemiacetal

-(1 -D-glucopiranosil D

4) -D-glucopiranose 4)-D D

Figura 3. Exemplo da formao de uma ligao glicosdica entre duas molculas de glucose, produzindo maltose. A ligao glicosdica formada pela reao do carbono anomrico de um monossacardeo com um grupamento hidroxlico de outro monossacardeo.

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II. PARTE EXPERIMENTAL II.A. Preparao da soluo de amido O amido encontrado nas clulas de vegetais (gros, frutas e tubrculos) na forma de grnulos de gro. Com o aquecimento em gua, os grnulos so rompidos, liberando o amido. Este, por sua vez, sofre intensa hidratao, e a soluo adquire aspecto transparente ou translcido, e torna-se levemente viscosa.

II.B. Pesquisa de amido na soluo preparada Na maioria dos vegetais, o amido a principal forma de armazenamento de combustvel. Ele constitudo de dois componentes principais: amilose e amilopectina (geralmente na proporo de 1:3). A amilose um polmero de glicose sem ramificaes, no qual todas as unidades de D-glucose esto ligadas por ligaes (14). J a amilopectina um polmero de glicose muito ramificado, no qual as ligaes do esqueleto glicosdico so do tipo (14), mas os pontos de ramificao so ligaes (16); possui uma massa molecular cerca de 20 vezes maior que a amilose. O glicognio o principal polissacardeo de reserva das clulas animais, assim como o amido o nas clulas vegetais. Semelhante amilopectina, o glicognio um polissacardeo de D-glucose em ligao (14). Contudo, uma molcula mais altamente ramificada e mais compacta do que a amilopectina; as ramificaes ocorrem aps oito a doze resduos de glicose. Nas ramificaes, as ligaes so (16). Tanto no amido como no glicognio, a cadeia polissacardica assume a forma helicoidal, em decorrncia do grande nmero de unidades de glucose ligadas por ligaes do tipo (14). Devido a essa caracterstica estrutural, ambos os polissacardeos formam complexos de coordenao com o iodeto, presente na soluo de lugol. Entretanto, a cor do complexo formado geralmente azul para o amido e avermelhada para o glicognio. A cor varia de acordo com a quantidade de polissacardeo que assume, quando em soluo, a conformao de hlice.
amido glicognio + + lugol lugol Complexo azul Complexo avermelhado

Quando se aquece a soluo de amido, a estrutura helicoidal se desfaz, conseqentemente, no mais possvel a formao do complexo entre o amido e o iodeto. Ao resfriar a soluo, o amido recupera a sua forma helicoidal.

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I3

LUGOL

I 33

AQUECER
I3
I3

RESFRIAR

I 33

Amido ( incolor )

amido + iodeto ( azul )

amido ( incolor )

amido + iodeto ( azul )

II.C. Obteno de glicose a partir da soluo de amido preparada O aquecimento de uma soluo de amido com cidos fortes provoca a quebra das ligaes glicosdicas, liberando unidades de monossacardeos. De modo semelhante ao que se observa para uma reao enzimtica, a hidrlise qumica do amido ocorre de forma gradual, ou seja, a quantidade de substrato (amido) degradado depende do tempo de reao.

H+ Calor

Amido

n n Glicose glucose

II.D. Caracterizao qumica dos glicdeos II.D.1. Reao com alfa-naftol (Teste de Molisch) H um grande nmero de reaes colorimtricas para caracterizao de carboidratos. A maioria delas emprega solues de cidos fortes, que hidrolisa os polissacardeos, produzindo monossacardeos, e causam a desidratao dos acares, produzindo furfurais. Esses furfurais so aldedos derivados do furano, que tm a capacidade de reagir com fenis, como orcinol e -naftol, produzindo compostos coloridos caractersticos. Assim, essa reao detecta a presena de acares de um modo geral, sejam eles monossacardeos, dissacardeos ou polissacardeos.
+ O

OH CHO HOH2C OH H C CH HO CH HC OH

H - 3H2O + H2 4 SO HOH2C O C O - 2 H2O + H2 4 SO + -naftol HIDROXIMETILFURFURAL HO3S OH COMPOSTO COLORIDO HOH2 C O C

HEXOSE

SO3H

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II.D.2. Pesquisa de sacardeos redutores (Reao de Benedict) Os sacardeos cujo grupo hidroxila ligado ao carbono anomrico est livre (ou seja, no est envolvido em ligaes qumicas), possuem a capacidade de reduzir ons metlicos, tais com: Cu2+, Ag+ ou ferricianeto, em meio alcalino. Os acares capazes de reduzir tais agentes so denominados acares redutores. De modo geral, os monossacardeos so acares redutores, enquanto que os sacardeos de cadeia maior nem sempre apresentam essa propriedade. O dissacardeo lactose encontrado no leite, no tendo outra ocorrncia na natureza e sua hidrlise produz galactose e glucose. A lactose um dissacardeo redutor, uma vez que possui um carbono anomrico livre na unidade de glucose. A sacarose, ou acar de cana, um dissacardeo de glucose e frutose, sendo extremamente abundante no reino vegetal e conhecida como acar de mesa. Em contraste com a maioria dos dissacardeos e oligossacardeos, a sacarose no possui tomos de carbono anomrico livres, uma vez que os tomos de carbono anomricos de ambos os monossacardeos esto ligados entre si e no podem sofrer oxidao. Por esta razo, a sacarose no age como acar redutor.

glucose

lactose

frutose

sacarose

Grupamento redutor

Carbono anomrico

O amido e a sacarose so acares no-redutores, cujas ligaes glicosdicas so hidrolisadas pelo tratamento com cidos fortes quente, produzindo monossacardeos. Estes produtos, por sua vez, so acares redutores, pois possuem uma hidroxila livre no carbono anomrico. A comprovao da hidrlise cida do amido e da sacarose se d pela positividade da reao de Benedict.

amido

H+ calor H+ calor

glucose

sacarose

glucose + frutose

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REAO DE BENEDICT A ao redutora de acares em meio alcalino bastante utilizada para a determinao quantitativa e qualitativa de acares. Nesta aula, utilizaremos o Reagente de Benedict, que contm ons Cu2+ ligados a agentes complexantes, em meio alcalino. Com o aquecimento do acar com grupamento redutor, em presena dos ons Cu2+ e OH-, o Cu2+ reduzido a Cu+ e o acar oxidado, e ocorre a formao de precipitados de Cu2O (xido cuproso). A cor do precipitado depende do contedo de acar redutor. Precipitado esverdeado -------- traos Precipitado amarelado --------- 10 g/L Precipitado vermelho -----------20 g/L

Cu++

OH+ acar redutor Cu2O + acar oxidado

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LIPDEOS
I.INTRODUO Lipdeos so biomolculas orgnicas insolveis na gua que podem ser extradas de clulas e tecidos por solventes no polares, como, por exemplo, clorofrmio, ter ou benzeno. Podem ser de origem animal ou vegetal e possuem importantes funes biolgicas. Eles so componentes estruturais de membranas, atuam como forma de armazenamento e transporte de combustvel metablico. So precursores para biossntese de algumas vitaminas, hormnios e mediadores inflamatrios, funcionam como isolante trmico em animais como a foca. A classificao dos lipdeos pode ser baseada na estrutura de seus esqueletos. Os lipdeos simples no contm cidos graxos (ex: esterides, prostaglandinas) enquanto que os lipdeos complexos so constitudos de cidos graxos e diferem na estrutura dos esqueletos aos quais esses cidos esto covalentemente ligados. Por exemplo: Triacilgliceris ou triglicerdeos: cidos graxos ligados ao glicerol, na forma de ster. Fosfolipdeos ou Fosfoglicerdeos: cidos graxos ligados ao glicerol-3-fosfato, com diferentes grupos ligados ao grupo fosfato. Os diferentes tipos de fosfolipdeos so denominados de acordo com o grupo ligado sua cabea polar. Ex: cardiolipina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol. Ceras: cidos graxos ligados a lcoois de cadeia longa, na forma de ster. Esfingolipdeos: cidos graxos de cadeia longa ligados a esfingosina (aminolcool de cadeia longa). Ex:esfingomielina, cerebrosdeos.

II. CIDOS GRAXOS Os cidos graxos possuem uma longa cadeia hidrocarbonada (cauda apolar) e um grupo carboxlico terminal (cabea polar) (figura 1). Eles ocorrem apenas em pequenas quantidades na forma livre; a quase totalidade dos cidos graxos encontra-se ligada a diferentes compostos, geralmente na forma de steres, conforme citado acima (figura 2). A cadeia hidrocarbonada pode ser saturada, isto , com tomos de carbono unidos apenas por ligaes simples; ou insaturada contendo uma ou mais ligaes duplas ou triplas. Os cidos graxos diferem um do outro primariamente no comprimento da cadeia e no nmero e posio de suas ligaes insaturadas.

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Grupo carboxlico (cabea polar)

insaturao

Cadeia hidrocarbonada (cauda apolar)

cido graxo insaturado

cido graxo saturado

Figura 1.Estrutura simplificada de cidos graxos livres, saturados e insaturados.

CH 2 CH CH2

O O C R1 O O C R2 O O C R3

Figura 2. Frmula estrutural e representao simplificada da estrutura de um triacilglicerol.

O nmero relativo de ligaes duplas em uma dada amostra de cidos graxos ou lipdeos pode ser determinado empregando-se compostos halogenados, como iodo, cloro e bromo. Esses halognios adicionam-se s duplas ligaes, sendo que a cada lado da dupla ligao se adiciona um tomo de halognio. A quantidade de halognio absorvido , portanto, proporcional ao nmero total de duplas ligaes. Quando se empregam solues de iodo em clorofrmio, observa-se que quanto maior o grau de insaturao do lipdeo, mais rpido ocorre o desaparecimento da cor da soluo (figura 3).

O R CH2 CH CH CH 2 C OH

I2

CH 2 CH CH CH 2 C

OH

Figura 3. Reao de adio de iodo em duplas ligaes de cidos graxos insaturados.

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III. PROPRIEDADES GERAIS III.A. Solubilidade Os glicerdeos de cidos graxos inferiores (menores), como o cido butrico, so ligeiramente solveis em gua, enquanto os de cidos graxos superiores so insolveis. Todos so solveis em ter, clorofrmio e benzeno. So pouco solveis em etanol a frio, mas a solubilidade aumenta muito em etanol quente. Os lipdeos, por definio, so molculas de baixa polaridade, portanto praticamente insolveis em solventes polares, como a gua. Desse modo, a ordem de solubilidade esperada para o leo vegetal : ter> lcool > gua. III.B. Saponificao Os cidos graxos complexos so tambm denominados lipdeos saponificveis, uma vez que produzem sabes, sais de cidos graxos, sob hidrlise alcalina. Os triglicerdeos, cidos graxos esterificados com glicerol, decompem-se facilmente em glicerol e sais de cido graxo (sabes) por ebulio em bases fortes como NaOH ou KOH. Como os lipdeos so insolveis em gua, o processo facilitado adicionando-se soluo alcolica da base. Ao acidificar o meio de reao, o sal de cido graxo, que solvel em gua, convertido em cido graxo. Este, por sua vez, no solvel em gua, e separa-se do meio de reao. Alm disso, o cido graxo fica na superfcie da soluo, pois menos denso que a gua, e o glicerol permanece dissolvido na fase aquosa, devido sua natureza polar. O cido graxo separado pode novamente ser convertido em sabo, pela adio de uma base forte e sob aquecimento. Por esta razo, ao se agitar o tubo contendo gua quente, soluo de NaOH 1 mol/L e o cido graxo (insolvel), ocorre formao de espuma, que indicativa da presena do sabo. III.C. Propriedades dos sabes Os sabes de metais alcalinos particularmente de Na e K so solveis em gua. Os sabes de massa molecular mais alto so menos solveis. Os de Ca2+ e Mg2+ so muito insolveis em gua e precipitam. Os sais de Pb dos cidos graxos saturados possuem solubilidade limitada em gua enquanto que os dos cidos graxos insaturados so muito mais solveis (Isto pode servir para separar cidos graxos saturados de cidos graxos insaturados). Quando acrescentamos soluo saturada de cloreto de sdio no sabo, este precipita o sabo por seqestrar a gua que envolve as molculas deste, de modo semelhante ao fenmeno de precipitao de protenas por soluo saturada de sulfato de amnio. Os detergentes so estveis em gua dura (com Ca2+ e Mg2+) bem como em solues cidas, o que no ocorre com o sabo. R-COOH + 2H2 RCH2OH + H2O R-CH2-O-SO2ONa

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O CH2 O C R1 O CH O C R2 O CH2 O C R3 TRIGLICERDEO

KOH CH2 CH CH2 OH OH OH O K O

+ -

C O C O C

R1 SAPONIFICAO R2 R3

K O
+

K O

GLICEROL

SABO (sais de cidos graxos) HCl

CH2 KCl

OH OH OH

O HO C O HO C O HO C R3 CIDOS GRAXOS (insolveis em gua) R2 R1 SEPARAO DOS CIDOS GRAXOS

CH CH2

GLICEROL (solvel em gua)

NaOH O Na O Na O Na O
+ + + -

C O C O C

R1 R2 R3

REDISSOLUO DOS CIDOS GRAXOS

SABO (sais de cidos graxos)

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SALIVA
I.INTRODUO A saliva refere-se a mistura de secrees presentes na cavidade bucal, e consiste de fluidos derivados das glndulas salivares principais: partida, submandibular e sublingual, das glndulas salivares acessrias da mucosa bucal e resduos do exsudato gengival. Este ltimo no uma secreo glandular sendo, portanto, proposto o termo "fluido bucal", que mais abrangente, em substituio a saliva. Este fluido constitudo de cerca de 99% de gua, sendo que o restante constitui-se de diversos compostos orgnicos e eletrlitos (tabela 1). As principais funes da saliva esto listadas na tabela 2. Tabela 1. Principais constituintes da saliva.
Componentes Orgnicos Protenas Acares Uria Aminocidos Lactato Lipdeos Mucinas mg/mL 2,8 3,0 0,009 0,13 0,22 0,0005 0,0214 traos traos Componentes Inorgnicos ClH2PO4HPO42SO4S2FHCO3-(CO2) Ca++ NH3+ Na+ K+ Mg++ mg % 0,5 50 30 10 9 0,2 90-180 3-7 10 78 98 0,5

Tabela 2. Principais funes da saliva.

Funo Lubrificao Preveno de cries dentrias Mecanismos envolvidos Lubrificao da cavidade oral. Facilitando mastigao e deglutio dos alimentos. a fala,

Promove o clearance oral. Tamponamento de cidos. Veculo para transporte de fluoreto e minerais para a superfcie dental, participando do processo de remineralizao. Protenas salivares previnem a precipitao de ons clcio, presentes em alta concentrao na saliva. Presena de imunoglobulinas, lactoferrina, lisozima, aglutininas e peroxidases, que tm propriedades antibacterianas. Slidos so solubilizados na saliva e transportados para as papilas gustativas. Atividade da amilase salivar inicia digesto do amido. Hidrlise da sacarose pela invertase.

Preveno de infeces orais Sensao gustativa Digesto

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II. ESTUDO DA ATIVIDADE DA AMILASE SALIVAR Dentre as diversas funes citadas na tabela 2, nesta aula ser estudada a atividade da amilase salivar na digesto do amido. A amilase salivar uma alfa-amilase, a qual catalisa a hidrlise das ligaes alfa-1,4-glicosdicas do amido, de forma casual, produzindo uma mistura de glucose e maltose. De forma diversa das protenas ricas em prolina, a amilase no tem alta afinidade pela superfcie dentria. A finalidade desta enzima parece ser estritamente a catlise da digesto do amido. Na maior parte das vezes, o contato do alimento com a amilase se d por breve espao de tempo. No entanto, esta enzima est em alta concentrao na saliva, tornando provvel que ao menos uma parte do amido seja digerida na cavidade bucal. II.A. Fatores que influenciam na atividade enzimtica A parte da enzimologia que estuda a velocidade das reaes enzimticas, e os fatores que influenciam nesta velocidade denominada cintica enzimtica. A cintica de uma reao catalisada por enzima estudada avaliando-se a quantidade de produto formado ou a quantidade de substrato consumido por unidade de tempo de reao. Nesta aula, a atividade da amilase salivar ser monitorada pela medida do consumo do substrato (amido). O amido ser detectado atravs da reao com soluo de lugol, que se baseia na formao de um complexo azul, resultante da interao entre o iodeto (presente na soluo de lugol) e a estrutura helicoidal do amido.

SUBSTRATO

ENZIMA

PRODUTOS

I3

+ amilase

amido

maltose

glucose glicose

LUGOL

Estrutura do amido: monossacardeos unidos

I3

por ligaes -1,4 pontos de ramificao (ligaes -1,6)

Complexo de cor azul (amido + iodeto)

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De modo geral, a atividade de uma enzima, expressa pela velocidade de atuao da enzima sobre um determinado substrato, pode ser influenciada por diversos fatores, tais como: temperatura, pH, concentrao de substrato, concentrao de enzima, presena de cofatores e/ou coenzimas, presena de inibidores, concentrao do(s) produto(s) da reao e tempo de reao. Alguns deles sero estudados nesta aula. Esses fatores podem ser ajustados experimentalmente, de modo que se obtenham as condies timas para atuao da enzima. Uma condio tima (de pH, temperatura, concentrao de substrato, etc.) aquela em que a enzima atua com maior velocidade, ou seja, consome a maior quantidade de substrato (ou forma a maior quantidade de produto) por unidade de tempo. II.A.1. pH A maioria das enzimas apresenta um pH caracterstico em que a sua atividade mxima, denominado pH timo, Acima ou abaixo desse pH, a atividade se reduz. Ainda que os perfis de atividade em funo do pH de muitas enzimas tenham a forma em sino, eles podem variar consideravelmente em forma. A inter-relao da atividade enzimtica com o pH para qualquer enzima depende do comportamento cido-bsico da enzima e do substrato, bem como de outros fatores que so difceis de analisar quantitativamente. Sabe-se que o pH afeta o estado de ionizao dos resduos de aminocidos das protenas, levando a alteraes na distribuio de cargas eltricas e grupamentos qumicos da molcula da enzima, em especial do stio cataltico e tambm na conformao tridimensional da protena. Essas alteraes podem prejudicar a interao entre o stio ativo e o substrato, diminuindo a velocidade de atuao da enzima. Em valores extremos de pH, h ainda a possibilidade de ocorrer desnaturao da enzima. O pH timo de uma enzima no necessariamente idntico ao pH de seu meio intracelular normal, que pode estar situado na parte ascendente ou descendente do seu perfil de atividade em funo do pH. Isso sugere que a inter-relao pH-atividade enzimtica pode ser um fator de controle intracelular da atividade enzimtica. II.A.2. Temperatura Tal como ocorre para a maioria das reaes qumicas, a velocidade das reaes catalisadas por enzimas aumenta geralmente com a temperatura, dentro de certa faixa de temperatura na qual a enzima estvel e mantm atividade integral, at que se atinja a temperatura tima. A partir dessa temperatura, a atividade enzimtica diminui medida que a temperatura elevada, uma vez que as enzimas so desnaturadas pelo calor. Entretanto, uma vez que a desnaturao um processo dependente do tempo, o formato do grfico de atividade enzimtica X temperatura depender da quantidade de tempo que a enzima foi mantida em determinada temperatura. II.A.3. Concentrao de substrato A formao e ruptura de ligaes qumicas por uma enzima so precedidas pela formao de um complexo enzima-substrato. Em concentrao constante da enzima, a velocidade de reao aumenta com o aumento da concentrao de substrato at que a velocidade mxima alcanada. Em concentrao de substrato suficientemente alta, os centros catalticos esto cheios e assim a velocidade da reao alcana um mximo.

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II.A.4. Concentrao de enzima Dentro de limites bastante amplos, a velocidade de uma reao enzimtica proporcional concentrao de enzima. Este princpio pode ser aplicado a uma grande variedade de enzimas, desde que no haja interferentes na reao e a concentrao de substrato seja mantida constante. II.A.5. Presena dos cofatores e/ou coenzimas Algumas enzimas no requerem nenhum grupo qumico, alm de seus resduos de aminocidos para sua ao outras requerem um componente qumico adicional chamado de cofator, os quais so ons inorgnicos como: Fe2+, Mg2+, Mn2+ ou Zn2+, Cl-; chamado de coenzima se for uma molcula orgnica complexa ou uma molcula metalorgnica. Algumas enzimas requerem ambos a coenzima e o cofator para sua atividade.

Atividade Enzimtica Relativa

Atividade Enzimtica Relativa

10 20 30 40 50 60 70

Atividade Enzimtica Relativa

10

Concentrao de Substrato

pH

temperatura (C)

Atividade Enzimtica Relativa

Atividade Enzimtica Relativa

E
Com NaCl Sem NaCl

Concentrao da Enzima

Tempo

Quadro 1. Exemplos da influncia de diferentes fatores na atividade da amilase salivar. A: pH. B: temperatura. C: concentrao de substrato. D: concentrao de enzima. E: presena do cofator.

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BIBLIOGRAFIA
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